Временные методические указания по определению микроколичеств лассо в рапсовом масле хроматографией в тонком слое

(утв. Минздравом СССР 22.05.1985 № 3878-85)

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ЛАССО В РАПСОВОМ МАСЛЕ ХРОМАТОГРАФИЕЙ В ТОНКОМ СЛОЕ

Настоящие Методические указания распространяются на определение микроколичеств лассо в рапсовом масле и являются дополнением к Временным методическим указаниям по определению микроколичеств лассо в почве и зеленой массе кукурузы № 2997 от 27 апреля 1984 г.

1. Характеристика анализируемого гербицида

1.1. 2-Хлор-2',6'-диэтил-N-метоксиметил-ацетанилид (алахлор).

1.2 Структурная формула (не приводится).

1.3 Молекулярная масса — 269,77.

1.4 Синонимы — лассо, алахлор.

1.5. Химически чистое действующее вещество представляет собой белый кристаллический порошок с температурой плавления 40 — 41 °C. Трудно растворим в воде, хорошо — в ацетоне, бензоле, спирте, хлороформе, этилацетате.

    Разрушается   в   кислотах   и   щелочах.   Относится  к  малотоксичным
соединениям. ЛД   для крыс 1200 мг/кг при оральном введении.

           50

Выпускается в виде гранулята и концентрата эмульсии.

ПДК и ДОК не установлены.

2. Методика определения лассо в рапсовом массе

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Метод основан на извлечении лассо из масла смесью ацетонитрил — вода и последующем гидролизе в кислой, а затем щелочной средах с отщеплением 2,6-диэтиланилина, который перегоняется с водяным паром из щелочной среды.

Количественное определение проводится методом тонкослойной хроматографии с использованием реакции диазосочетания с 1-нафтолом.

2.1.2 Метрологическая характеристика метода

Минимально детектируемое количество — 1 мкг лассо.

Нижний предел обнаружения в масле — 0,04 мг/кг.

Размах варьирования, P, в масле — 70 — 78%.

Доверительный интервал среднего при P = 0,95 и n = 5 в масле составляет 74,3 +/- 3,9%.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон хч, ГОСТ 2603-79.

Ацетонитрил ч, ТУ 6-09-3534-74.

Гексан ч, ТУ 6-09-3375-78.

Серная кислота ч, ГОСТ 4204-77.

Натрия гидроксид хч, ГОСТ 4328-77.

Натрия сульфат безводный чда, ГОСТ 4166-76.

Натрия нитрит хч, ТУ 38-10274-79.

1-Нафтол чда, ГОСТ 5838-79.

Соляная кислота хч, ГОСТ 3118-77.

12 н раствор серной кислоты.

2 н раствор серной кислоты.

50% раствор натрия гидроксида.

Проявляющие реактивы:

№ 1: 1 г нитрита натрия растворяют в смеси 46 мл дистиллированной воды и 4 мл концентрированной соляной кислоты.

№ 2: 2,8 г KOH и 0,1 г 1-нафтола растворяют в 50 мл дистиллированной воды.

Стандартный раствор 2,6-диэтиланилина — 100 мкг/мл в ацетоне.

Стандартный раствор лассо — 100 мкг/мл в ацетоне.

2.3. Приборы и посуда

Прибор для гидролиза и перегонки с водяным паром (рис. — не приводится).

Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.

Хроматографическая стеклянная камера, ГОСТ 10565-74.

Камера для опрыскивания, ГОСТ 11413-70.

Пульверизатор, ГОСТ 10391-74.

Микропипетки 0,1 — 0,2 мл, ГОСТ 1770-74.

Колбы конические на шлифах КШ-100 29/32 ТС, ГОСТ 10394-72.

Колбы грушевидные ОКТ 14/23 ТС, ГОСТ 10394-72.

Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.

Воронки делительные ВД 3-500, ГОСТ 8613-75.

2.4. Ход анализа

2.4.1 Отбор пробы масла

Отбор масла производят в соответствии с требованиями, изложенными в «Унифицированных правилах отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (М., 1980, Минздрав СССР).

Предварительная очистка масла проводится встряхиванием 100 г средней пробы в делительной воронке с 200 мл 10% раствора гидроксида натрия в течение 10 — 15 мин. После расслаивания нижний слой отделяется, а верхний центрифугируется при 10000 об./мин. в течение 20 — 30 мин. Отделившееся масло пригодно для дальнейшего анализа.

2.4.2 Экстракция лассо из масла

К 25 г масла добавить 75 мл смеси ацетонитрил — вода (9:1) и встряхивать в течение 10 — 15 мин. Количественно перенести содержимое колбы в центрифужную пробирку и центрифугировать в течение 20 — 30 мин. при 10000 об./мин. Отделить нижний слой в круглодонную колбу, а к верхнему добавить 50 мл смеси ацетонитрил — вода и повторить дважды вышеописанные операции экстракции. Объединенный экстракт упарить до небольшого объема на ротационном испарителе при температуре 40 °C и остаточном давлении — 1 кгс/кв. см.

2.4.3 Гидролитическое расщепление.

Колбу с остатком ацетонитрильно-водного экстракта присоединяют к прибору для гидролиза и перегонки с водяным паром. В приемную колбу прибавляют 10 мл 12 н серной кислоты. Конец холодильника II не должен быть опущен в кислоту. В воронку III приливают 25 мл 2 н серной кислоты. Включают воду через оба холодильника. Кислоту из воронки III медленно приливают в колбу с экстрактом. Затем включают нагрев и кипятят пробу в течение 30 мин.

По истечении времени кипячения отключают нагрев и охлаждают колбу при комнатной температуре в течение 20 — 30 мин. Прибавляют с помощью воронки III 50 мл 50% едкого натра. При добавлении щелочи раствор подавать постепенно, затем включить нагрев, довести до кипения и выдержать в этих условиях 30 мин.

Отключают воду от холодильника I и перегоняют с водяным паром, собирая 50 мл дистиллята (общий объем 60 мл).

Дистиллят охлаждают в течение 1 часа при комнатной температуре, а затем экстрагируют гексаном трижды по 30 мл. Гексановый экстракт отбрасывают. Доводят pH дистиллята с помощью 50% натрия гидроксида до щелочной реакции. Охлаждают смесь на льду в течение 15 мин. и выдерживают при комнатной температуре еще 15 мин. Из охлажденной смеси экстрагируют 2,6-диэтиланилин трижды по 5 мл гексана. Объединенный гексановый экстракт осушают над безводным сульфатом натрия и упаривают на ротационном испарителе до объема 0,1 — 0,3 мл.

2.4.4. Остаток после отгона гексана наносят на хроматографическую пластинку «Силуфол» на расстоянии 1,5 — 2 см от нижнего края. Стенки колбочки тщательно смывают несколькими каплями гексана и также наносят в то же стартовое пятно. Справа и слева от пятна пробы наносят стандартные растворы 2,6-диэтиланилина.

Хроматографирование проводят в системе подвижных растворителей гексан — ацетон (2:1).

После того как фронт подвижного растворителя поднимется на высоту 10 см, пластинку вынимают из камеры, подсушивают на воздухе и опрыскивают последовательно реактивом № 1, а после высушивания реактивом № 2.

    Лассо     (точнее     продукт    его    гидролитического    расщепления
2,6-диэтиланилин) проявляется в виде оранжево-красных пятен с R  = 0,6.

                                                           f

2.5. Обработка результатов анализа

Количественное определение производят путем сравнения площадей пятен проб и стандартных растворов.

Содержание препарата в анализируемой пробе рассчитывают по формуле:

                             m x S
                                  2

X = -------------- мг/кг, A x S x 0,553 1

где:

X — искомое количество лассо в пробе, мг/кг;

m — количество 2,6-диэтиланилина, нанесенного из стандартного раствора, мкг;

S — площадь пятна стандартного раствора, кв. мм; 1

S — площадь пятна пробы, кв. мм; 2

A — навеска пробы, г;

2.6. Требования безопасности

Необходимо соблюдать общие требования безопасной работы в химических лабораториях.