Временные методические указания по определению микроколичеств лассо в почве и зеленой массе кукурузы методом хроматографии в тонком слое
(утв. Минздравом СССР 27.04.1984 № 2997-84)
27 апреля 1984 г. № 2997-84
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ЛАССО В ПОЧВЕ И ЗЕЛЕНОЙ
МАССЕ КУКУРУЗЫ МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИИ В ТОНКОМ СЛОЕ
1. Характеристика анализируемого гербицида
1.1. 2-Хлор-2',6'-диэтил-N-метоксиметил-ациланилид.
1.2 Структурная формула (не приводится).
1.3 Молекулярная масса — 269,77.
1.4 Синонимы — лассо, алахлор.
1.5. Химически чистое действующее вещество лассо представляет собой белый кристаллический порошок с температурой плавления 40 — 41 °C. Трудно растворим в воде, хорошо — в ацетоне, бензоле, спирте, хлороформе, этилацетате.
Разрушается в сильных кислотах и щелочах. Относится к малотоксичным соединениям. ЛД для крыс - 1200 мг/кг при оральном введении.
50
2. Методика определения лассо
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на выделении лассо из почвы в растения ацетоном, гидролитическом расщеплении сначала в кислой среде с отщеплением метоксиметильной группы, а затем в щелочной среде с выделением 2,6-диэтиланилина, который перегоняется с водяным паром из щелочной среды.
Количественное определение проводится методом хроматографии в тонком слое (ТСХ) с использованием реакции диазосочетания с 1-нафтолом.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
Минимально детектируемое количество — 1 мкг лассо.
Нижний предел обнаружения лассо в почве — 0,005 мг/кг, в зеленой массе кукурузы — 0,01 мг/кг.
Размах варьирования, R, %: в почве — 87 — 92%, растениях — 81 — 89%. _
Среднее значение определения, c, %: в почве — 89,5%; в растениях — 85%.
Стандартное отклонение, S, %: в почве и растениях соответственно 2,5 и 4%.
Доверительный интервал среднего при P = 0,95 и n = 5 в почве составляет 89,5 +/- 2,5%, в зеленой массе кукурузы — 85 +/- 4%.
2.1.3 Избирательность метода
2.2. Реактивы и растворы
Серная кислота ч, ГОСТ 4204-77.
Натрия гидроксид хч, ГОСТ 4328-77.
Натрия сульфат безводный чда, ГОСТ 4166-76.
Натрия нитрит хч, ТУ 38-10274-79.
Соляная кислота хч, ГОСТ 3118-77.
50% раствор натрия гидроксида.
Проявляющий реактив: № 1: в смеси 46 мл дистиллированной воды и 4 мл конц. соляной кислоты растворяют 1 г нитрита натрия.
№ 2: в 50 мл дистиллированной воды растворяют 2,8 г KOH и 0,1 г 1-нафтола.
Стандартный раствор 2,6-диэтиланилина — 100 мкг/мл в ацетоне.
Стандартный раствор лассо — 100 мкг/мл в ацетоне.
2.3. Приборы и посуда
Прибор для гидролиза и перегонки с водяным паром (рис. — не приводится).
Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.
Хроматографическая камера, ГОСТ 10565-74.
Камера для опрыскивания, ГОСТ 11413-70.
Микропипетки 0,1 — 0,2 мл, ГОСТ 1770-74.
Колбы конические на шлифах КШ-500 29/32 ТС, ГОСТ 10394-72.
Колбы грушевидные ОКТ 14/23 ТС, ГОСТ 10394-72.
Делительные воронки ВД 3-500, ГОСТ 8613-75.
2.4. Ход анализа
2.4.1 Отбор проб
Отбор проб почвы и зеленой массы кукурузы производят в соответствии с требованиями, изложенными в «Унифицированных правилах отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», М.: Минздрав СССР, 1980.
Для анализа отбирают среднюю пробу почвы (100 г) и зеленой массы кукурузы (50 г).
2.4.2. Анализируемые навески помещают в конические колбы емкостью 500 мл, заливают их 200 мл ацетона и помещают на аппарат для встряхивания на 2 часа. После встряхивания пробы отфильтровывают через бумажный складчатый фильтр, предварительно смоченный ацетоном. Остаток в колбах и на фильтре промывают дважды по 50 мл ацетона. Объединенный ацетоновый экстракт помещают в колбу и отгоняют ацетон на ротационном испарителе при температуре 40 °C и остаточном давлении — 1 кгс/кв. см до объема 2 — 3 мл.
2.4.3 Гидролитическое расщепление
Колбу с остатком ацетонового экстракта присоединяют к прибору для гидролиза и перегонки с водяным паром. В приемную колбу приливают 10 мл 12 н серной кислоты. Конец холодильника II должен быть опущен в кислоту. В воронку III приливают 25 мл 2 н серной кислоты. Включают воду через оба холодильника. Кислоту из воронки III медленно приливают в колбу с экстрактом. Затем включают нагрев и кипятят пробу в течение 30 мин.
По истечении времени кипячения нагрев отключают и охлаждают колбу при комнатной температуре в течение 20 — 30 мин. Прибавляют в колбу 50 мл 50% едкого натра, используя воронку III. Раствор щелочи прибавляют медленно, по каплям. После добавления всей щелочи пробу нагревают до кипения и выдерживают при этих условиях 30 мин.
По окончании нагрева отключают воду от холодильника I и перегоняют с водяным паром, собирая 50 мл дистиллята (общий объем 60 мл).
Дистиллят оставляют при комнатной температуре на 1 час, после чего экстрагируют трижды гексаном по 30 мл. Гексановый экстракт отбрасывают. Доводят pH дистиллята с помощью 50% едкого натра до щелочной реакции. Охлаждают щелочной дистиллят на льду в течение 15 мин. и оставляют при комнатной температуре еще на 15 мин. Охлажденный щелочной дистиллят экстрагируют трижды гексаном по 5 мл. Объединенный гексановый экстракт осушают над безводным сульфатом натрия и упаривают на ротационном испарителе до объема 0,1 — 0,2 мл.
2.4.4 Хроматографирование
Остаток после отгона гексана наносят на хроматографическую пластинку «Силуфол» на расстоянии 1,5 — 2 см от нижнего края. Стенки колбочки тщательно омывают несколькими каплями гексана и также наносят в то же стартовое пятно. Справа и слева от пятна пробы наносят стандартные растворы 2,6-диэтиланилина.
Хроматографирование проводят в системе подвижных растворителей гексан — ацетон (2:1).
После того как фронт подвижного растворителя поднимется на высоту 10 см, пластинку вынимают из камеры, подсушивают на воздухе и опрыскивают последовательно проявляющими реактивами № 1 и № 2. После обработки проявляющим реактивом № 1 пластинку подсушивают на воздухе и обрабатывают реактивом № 2 сухую пластинку.
Лассо (точнее продукт его гидролитического расщепления 2,6-диэтиланилин) проявляется в виде оранжево-красных пятен с R = 0,6.
f
2.5. Обработка результатов анализа
Количественное определение производят путем сравнения площадей пятен проб и стандартных растворов.
Содержание препарата в анализируемой пробе рассчитывают по формуле:
m x S
2
X = -------------- мг/кг, A x S x 0,553 1
X — искомое количество лассо в пробе, мг/кг;
m — количество стандартного раствора 2,6-диэтиланилина, мкг;
S — площадь пятна стандартного раствора, кв. мм; 1
S — площадь пятна пробы, кв. мм; 2
2.6. Требования безопасности
Необходимо соблюдать требования безопасности, принятые для работы в химических лабораториях.