Методические указания по определению остаточных количеств ромуцида в воде, почве и растительном материале (огурцах, пшенице и сахарной свекле) методом тонкослойной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 27.11.1984 № 3163-84)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ РОМУЦИДА В ВОДЕ, ПОЧВЕ И РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ (ОГУРЦАХ, ПШЕНИЦЕ И САХАРНОЙ СВЕКЛЕ) МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

1. Краткая характеристика препарата

Синонимы и торговые названия: ромуцид, 20-ный эмульгирующийся концентрат.

Химически чистый препарат ромуцид представляет собой кристаллическое вещество желтого цвета, имеющее температуру плавления 73 — 74 °C (технический продукт, содержащий не ниже 93% ромуцида, имеет температуру плавления не ниже 63 °C).

Ромуцид плохо растворяется в воде, хорошо в этаноле, ацетоне, диоксане, бензоле, ксилоле, толуоле и хлороформе. Устойчив при 20 °C и влажности 80% длительное время в герметично закрытой посуде.

Под действием щелочей и сильных кислот гидролизуется.

Ромуцид малотоксичен — ЛД — 4400 (4000 — 4800) мг/кг на белых мышах 50 перорально.

Препарат предложен как высокоэффективный фунгицид для наземного опрыскивания посевов огурцов, сахарной свеклы и пшеницы против мучнистой росы. Проявляет заметную активность против ржавчины пшеницы. Привыкания микроорганизмов к препарату не зарегистрировано.

2. Методика определения ромуцида в воде, почве и растительном материале

2.1. Основные положения

2.1.2 Принцип метода

Метод основан на экстракции ромуцида из проб органическими растворителями, очистке экстрактов от мешающих веществ оксидом алюминия и определении содержания ромуцида с помощью тонкослойной хроматографии.

2.1.2 Метрологическая характеристика метода приводится в таблице 1.

Таблица 1

Метрологические параметры	Анализируемый объект
	вода	почва	огурцы	пшеница	свекла
Предел обнаружения в пробе, мкг	3	5	5	3	3
Диапазон определяемых	0,012 -	0,20 -	0,125 -	0,15 -	0,1 -
концентраций, мг/кг	800	800	1000	1500	1000
Среднее значение определения стандартных кол-в, %	99,4	78,0	82,8	84,7	89,0
Стандартное отклонение	12,40	4,8	11,3	6,20	5,04
Относительное стандартное отклонение, %	12,50	11,3	11,8	7,32	5,66
Доверительный интервал среднего, %	+/- 5,06	+/- 2,14	+/- 5,04	+/- 2,53	+/- 1,78
Количество повторностей, шт.	6	5	5	6	8

2.1.2 Избирательность метода

Определению не мешают препараты коллоидной серы, применяемые, как и ромуцид, против мучнистой росы.

2.2. Реактивы, растворы и материалы

Ромуцид чда, ТУ 88 УССР 192.030.83 (п. 4.2.3 «Примечание»).

Ромуцид технический, ТУ 88 УССР 192.030.83.

Ацетон ч, ГОСТ 2603-79.

н-Гексан ч, ТУ 6-09-3375-78.

Хлороформ хч, ТУ 6-09-4263-76.

Дистиллированная вода.

Гидроксид натрия чда, ГОСТ 4328-77.

Петролейный эфир хч, ГОСТ 11992-66.

Бензол чда, ГОСТ 5955-75.

Оксид алюминия (для хроматографии), ТУ 6-09-3916-75.

Сульфат натрия безводный чда, ГОСТ 4166-76.

Пропанол-2 (изо-пропиловый спирт) ч, ТУ 6-09-402-81.

Хроматографические пластинки типа «Силуфол» UV-254 (ЧССР).

Фильтры бумажные, ТУ 6-09-1706-77.

Этанол, ГОСТ 5962-67.

Проявляющий реагент: 6-процентный раствор гидроксида натрия в этаноле. 6 г гидроксида натрия растворяют в 5 мл дистиллированной воды и доводят 96% этанолом до 100 мл. Раствор хранят в холодильнике.

Стандартные растворы ромуцида: навески ромуцида 10 и 100 мг растворяют в 100 мл ацетона. Растворы стабильны в течение 2-х недель при хранении в холодильнике в герметично закрытой посуде.

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

Весы технические, ГОСТ 19491-74.

Весы аналитические ВЛР-200 г, ТУ 25.06.1131-75.

Делительные воронки на 1000 мл, ГОСТ 8613-75.

Мерные колбы на 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Конические колбы на 100 и 250 мл с пришлифованными пробками.

Микрошприцы на 10 мкл типа МШ-10.

Микропипетки, ГОСТ 20292-74.

Мерные цилиндры на 25 мл, 50 мл, ГОСТ 1770-74.

Кофемолка механическая.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 19391-65.

Сита почвенные, ТУ 46-47885-73.

Камера хроматографическая.

Эксикатор.

Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.

Водяная баня, ТУ 46-22-603-75.

Вакуумный водоструйный насос, ГОСТ 10696-75.

Компрессор мембранный.

Воронки Бюхнера, ГОСТ 9147-73.

2.4. Подготовка к определению

Хроматографические камеры за два часа до начала хроматографирования заполняют смесью подвижных растворителей для насыщения камеры парами подвижных растворителей. В качестве подвижных растворителей для проб воды, почвы, огурцов и свеклы используют смесь н-гексана и ацетона (4:1); для проб пшеницы — сначала петролейный эфир, а затем смесь н-гексана и ацетона (4:1). Объем подвижного растворителя в камере должен по высоте находиться не выше чем 0,7 — 1 см от уровня дна камеры.

2.5. Отбор проб

Отбор проб проводится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (Москва, 1980 г., № 2051-79 от 21.08.79). Отобранные пробы хранить в стеклянной или полиэтиленовой таре в прохладном месте.

2.6. Проведение определения

2.6.1 Экстракция и очистка

2.6.1.1 Вода

Пробу воды — 250 мл — помещают в делительную воронку на 1000 мл и экстрагируют ромуцид 50 мл хлороформа, энергично встряхивая в течение 3 — 5 минут. Эту операцию повторяют дважды. Объединенный экстракт фильтруют через бумажный фильтр, в воронку которого помещают 4 — 6 г сульфата натрия безводного и 2 — 3 г оксида алюминия. Растворитель упаривают на ротационном испарителе до сухого остатка.

2.6.1.2 Почва

25 г воздушно-сухой почвы, растертой и просеянной через сито с размером отверстий 1 мм, помещают в коническую колбу с пришлифованной пробкой на 250 мл, прибавляют 50 мл изо-пропанола и помещают на аппарат для встряхивания на 1 час. После отстаивания экстракт сливают в колбу через складчатый бумажный фильтр. Остаток в колбе промывают дважды порциями изо-пропанола по 25 мл, сливая растворитель после отстаивания через складчатый фильтр.

Для очистки фильтрат пропускают через оксид алюминия (8 — 10 г) и натрий сернокислый безводный (2 — 3 г), которые помещают в фильтрующую воронку со стеклянным фильтром. Содержимое воронки промывают растворителем два раза по 30 мл. Объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе до сухого остатка.

2.6.1.3 Огурцы

40 г мелко нарезанных огурцов помещают в коническую колбу на 250 мл с пришлифованной пробкой и приливают 100 мл хлороформа или бензола. Экстрагирование ромуцида проводят в течение 20 — 30 минут, периодически перемешивая гомогенат. По истечении времени экстракт очищают, пропуская его через слой молселекта-15 или 25 (12 — 15) и сульфата натрия безводного (20 г), помещенных в воронку со стеклянным фильтром. Операцию повторяют трижды. Объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе до сухого остатка.

2.6.1.4 Свекла

Пробу — 30 г измельченных корнеплодов сахарной свеклы — помещают в коническую колбу на 250 мл с пришлифованной пробкой и добавляют 100 мл хлороформа. Экстрагирование проводят в течение 30 минут, периодически перемешивая. Экстракт фильтруют через складчатый фильтр, в воронке которого находятся 3 — 5 г сульфата натрия безводного и 2 — 3 г оксида алюминия. Остаток свеклы промывают двумя порциями растворителя по 30 мл. Объединенный экстракт упаривают до сухого остатка на ротационном испарителе.

2.6.1.5 Пшеница

Пробу измельченного на кофемолке зерна пшеницы в количестве 20 г помещают в коническую колбу на 100 мл с пришлифованной пробкой, прибавляют 50 мл ацетона и экстрагируют 30 минут, постоянно перемешивая гомогенат. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр, содержащий 1 — 2 г сульфата натрия безводного и 6 — 8 г оксида алюминия. Остаток промывают двумя порциями ацетона по 40 мл. Объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе. После удаления растворителя в колбе находится остаток вязкой консистенции.

2.6.2 Хроматографирование и проявление ромуцида

После удаления растворителя остаток растворяют в 0,5 мл ацетона и упаривают до 0,1 — 0,15 мл током воздуха, количественно наносят на хроматографическую пластинку при помощи микрошприца или микропипетки. Рядом наносят 3, 5, 7 и 10 мкг ромуцида в ацетоне. После испарения растворителя пластинки помещают в хроматографические камеры с подвижным растворителем. После подъема растворителей на 10 см пластинку вынимают из хроматографической камеры и помещают в вытяжной шкаф на 5 — 10 минут для удаления следов подвижной фазы.

Проявление ромуцида проводят 6-процентным раствором гидроксида натрия в этаноле, опрыскивая пластинки с помощью стеклянного пульверизатора. Ромуцид

проявляется  в  виде  ярко-желтых пятен на белом фоне. Ввиду того что пятна
после  испарения  этанола  несколько бледнеют, их контуры обводят иглой. R

                                                                      f

для проб воды, почвы, огурцов и свеклы составляет 0,35 +/- 0,02, для проб пшеницы — 0,26 +/- 0,02.

Оценку содержания ромуцида в пробе проводят путем сравнения размера и интенсивности окраски пятен стандарта с пятнами пробы. При большом содержании препарата в пробе экстракты хроматографируют без упаривания.

2.7. Обработка результатов анализа

Содержание ромуцида в анализируемой пробе рассчитывают по формуле:

                                     5
                               B x 10

A = -------, a x C

где:

A — содержание ромуцида в пробе, мг/л или мг/кг;

B — количество ромуцида в пробе, найденное сравнением со стандартом, мг;

C — процент определения, найденный предварительно, %;

3. Требования безопасности

При работе с ромуцидом беречь глаза от попадания порошка, руки мыть с мылом, а также соблюдать требования безопасности, необходимые при работе с горючими, взрывоопасными, легковоспламеняющимися веществами, едкими щелочами.

---