Временные методические указания по определению остаточных количеств рубигана в воде, почве и растительном материале тонкослойной хроматографией

(утв. Минздравом СССР 27.11.1984 № 3155-84)

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ РУБИГАНА В ВОДЕ, ПОЧВЕ И РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ

1. Краткая характеристика препарата

Рубиган — (пиримидил-5)-(2-хлорофенил)-(4-хлорофенил)метанол.

      Cl

<pre class="legal-pre">       ___│    OH   ___
       ───     │    ───
     /     \ ──C──/     \──Cl                    Мол. масса 331,2.
     \\   //   │  \\   //
       ───    / \\  ───
             ││  │</pre>

         N\ //N

Рубиган выпускается в форме 12% к.э.

Точка плавления 117 — 119 °C; растворимость в воде 13,7 мг/л при 25 °C и pH 7.

Растворимость в органических растворителях: ацетоне — 250 мг/мл, хлороформе — 500 мг/мл, циклогексане — 500 мг/мл.

По данным фирмы, препарат малотоксичен для теплокровных животных. ЛД 50

12%  э.к.  орально  для самцов крыс - 3,140 мг/кг, для самок - 2,920 мг/кг.
ЛД   технического продукта орально для крыс - 2500 мг/кг.

50

Препарат рекомендуется для борьбы с мучнисторосяными грибами на различных культурах, эффективен против парши яблони.

2. Методика определения рубигана хроматографией в тонком слое

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Методика основана на извлечении рубигана из исследуемой пробы органическим растворителем, очистке экстракта и определении методом хроматографии в тонком слое.

2.1.2 Метрологическая характеристика метода

Метрологические параметры	Анализируемый объект
	вода	почва	огурцы	томаты
Число параллельных исследований Диапазон определяемых концентраций, мг/л, мг/кг Предел обнаружения, мг/л, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение Относительное стандартное отклонение	5 0,01 — 0,5 0,02 90,0 3,9 4,3	5 0,1 — 1,0 0,1 90,0 5,0 5,5	5 0,06 — 1,0 0,06 83,0 4,2 5,06	5 0,1 — 1,0 0,1 78,6 3,9 4,9

2.2. Реактивы и материалы

Ацетон хч, ГОСТ 2603-79.

Ацетонитрил ч, ТУ 6-09-3534-74.

Бензол чда, ГОСТ 5955-75.

н-Гексан хч, ТУ 6-09-3375-78.

Аммиак, ТУ 6-09-1709-77, хч.

Крахмал, ГОСТ 10163-76.

Калий марганцовокислый хч, ГОСТ 20490-75.

Калий иодистый осч, ТУ 6-09-3909-75.

Натрий сернокислый безводный чда, ГОСТ 4166-76.

Хлороформ хч, ТУ 6-09-4263-76.

Серебро азотнокислое хч, ГОСТ 1277-75.

Соляная кислота конц. хч, ГОСТ 3118-77.

Этиловый спирт хч, ТУ 6-09-1710-77.

Этилацетат хч, ГОСТ 22300-76.

Пластинки «Силуфол» UV-254.

Стандартный раствор рубигана в хлороформе или этиловом спирте 200 мкг/мл.

Проявляющие реагенты:

1. 0,5 г азотнокислого серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, добавляют 7 — 11 мл водного 25-процентного аммиака и разбавляют до 100 мл ацетоном;

2. А. 1% водный раствор иодистого калия.

Б. 3% раствор крахмала.

В. Этиловый спирт.

Перед опрыскиванием смешивают растворы «а», «б», «в» в соотношении 5:5:2.

Камера с хлором: смешивают равные части 1,5% раствора марганцовокислого калия и 10-процентной соляной кислоты.

2.3. Приборы и посуда

Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ-64-1-1081-73.

Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.

Воронки делительные, ГОСТ 8613-75.

Воронки химические, ГОСТ 8613-75.

Камера для хроматографирования, ГОСТ 10363-74.

Камера для опрыскивания, ГОСТ 11413-70.

Колбы плоскодонные емкостью 150 — 250 мл, ГОСТ 10091-72.

Колбы мерные на 50 — 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Лампа ртутно-кварцевая ПРК-4.

Микропипетки 0,1 мл, 0,2 мл, ГОСТ 20292-74.

Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-75.

Сито с отверстиями 0,1 мм и 1,0 мм.

Фильтры бумажные.

2.4. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР, № 2051-79, 21.08.1979.

2.5. Проведение определения

2.5.1 Экстракция

Вода. 100 мл воды помещают в делительную воронку, трижды встряхивают н-гексаном (по 50 мл). Объединенные экстракты осушают безводным сульфатом натрия и упаривают досуха на ротационном испарителе.

Почва. 25 — 50 г воздушно-сухой почвы (растертой и просеянной через сито) помещают в коническую колбу и после увлажнения водой приливают 50 мл ацетона и встряхивают 1 час. Водно-ацетоновый раствор фильтруют и упаривают ацетон. Затем к водному остатку добавляют 5 — 7 мл ацетонитрила и 30 мл дистиллированной воды и экстрагируют в делительной воронке рубиган трижды по 50 мг н-гексана. Объединенный растворитель сушат безводным сульфатом натрия и концентрируют на ротационном испарителе до объема 0,2 мл. Остаток растворителя удаляют в токе воздуха.

Растительный материал. 25 — 50 г измельченных огурцов и томатов и 10 г мелко разрезанных листьев помещают в коническую колбу и заливают 50 мл н-гексана. Колбу встряхивают на аппарате для встряхивания 1 час. Экстракцию повторяют трижды. Объединенные экстракты фильтруют через бумажный фильтр, сушат безводным сульфатом натрия. Упаривают растворитель на ротационном испарителе.

2.5.2 Очистка экстракта

К сухому остатку прибавляют дважды по 5 мл ацетонитрила, каждый раз сливая растворитель с остатком в другую посуду. К общему объему растворителя добавляют 40 — 50 мл дистиллированной воды. Затем дважды производят переэкстракцию рубигана в н-гексан (30 мл), встряхивая в течение 3 — 5 мин. Объединенный гексановый экстракт высушивают безводным сернокислым натрием и концентрируют на ротационном испарителе.

2.5.3 Хроматографирование

Сухой остаток растворяют в 0,2 — 0,3 мл н-гексана и наносят на расстоянии 2 см от нижнего края на пластинку «Силуфол», рядом наносят стандартный раствор рубигана в количестве 5 — 10 мкг. Пластинку хроматографируют в системе подвижных растворителей гексан — ацетон (7:3 по объему) или бензол — этилацетат (7:3). После того как фронт подвижного растворителя поднимется на высоту 10 см, хроматограмму вынимают из камеры, подсушивают на воздухе и опрыскивают одним из проявляющих реагентов. После проявления реагентом № 1 пластинку облучают УФ-светом до четкого проявления коричневых пятен на бежевом фоне пластинки. При проявлении реагентом № 2 пластинку предварительно помещают в камеру хлора на 5 мин. После проветривания пластинки ее опрыскивают. Рубиган проявляется темно-фиолетовым пятном на бледно-сиреневом фоне.

Величина R в системе гексан — ацетон составляет 0,33 +/- 0,03, в f

2.6. Обработка результатов анализа

Количественное определение производят путем сравнения площади пятна пробы с наиболее близкой к ней по величине площадью стандарта. Содержание препарата в анализируемой пробе, мг/кг, мг/л, рассчитывают по формуле:

                                  A

X = -, P

где:

A — количество препарата, найденное путем сравнения размеров и интенсивности окраски пятен пробы и стандартного раствора, мкг;

3. Требования безопасности

Соблюдать требования безопасности, обычно рекомендуемые для работы в химических лабораториях с органическими растворителями и УФ-светом.

---