---
title: "\"ГОСТ Р ИСО 20743-2012. Национальный стандарт Российской Федерации. Материалы текстильные. Определение антибактериальной активности изделий с антибактериальной обработкой\""
number: "ГОСТ Р ИСО 20743-2012"
issuer: "Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-iso-20743-2012"
---

## "ГОСТ Р ИСО 20743-2012. Национальный стандарт Российской Федерации. Материалы текстильные. Определение антибактериальной активности изделий с антибактериальной обработкой"

# "ГОСТ Р ИСО 20743-2012. Национальный стандарт Российской Федерации. Материалы текстильные. Определение антибактериальной активности изделий с антибактериальной обработкой"

(утв. и введен в действие Приказом Росстандарта от 29.11.2012 N 1538-ст)

> [!IMPORTANT]
> Документ [введен](#p100010) в действие с 01.01.2014.


<a id="p100001"></a>Утвержден и введен в действие
Приказом Федерального
агентства по техническому
регулированию и метрологии
от 29 ноября 2012 г. N 1538-ст

<a id="p100002"></a>**НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ**

<a id="p100003"></a>**МАТЕРИАЛЫ ТЕКСТИЛЬНЫЕ**

<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИБАКТЕРИАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ИЗДЕЛИЙ**
**С АНТИБАКТЕРИАЛЬНОЙ ОБРАБОТКОЙ**

<a id="p100005"></a>Textiles. Determination of antibacterial activity
of antibacterial finished products

<a id="p100006"></a>**ISO 20743:2007**
Textiles - Determination of antibacterial activity
of antibacterial finished products
**(IDT)**

<a id="p100007"></a>**ГОСТ Р ИСО 20743-2012**

<a id="p100008"></a>Группа М09

<a id="p100009"></a>ОКС 59.080.01
07.100.99

<a id="p100010"></a>Дата введения
1 января 2014 года


### <a id="p100011"></a>Предисловие


<a id="p100012"></a>1 ПОДГОТОВЛЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 442 "Хлопок", Открытым акционерным обществом "Центральный Научно-исследовательский текстильный институт" (ОАО "ЦНИТИ") на основе собственного аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в [пункте 4](#p100015)
<a id="p100013"></a>2 ВНЕСЕН Управлением технического регулирования и стандартизации Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
<a id="p100014"></a>3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. N 1538-ст
<a id="p100015"></a>4 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ИСО 20743:2007 "Материалы текстильные. Определение антибактериальной активности изделий с антибактериальной обработкой" (ISO 20743:2007 "Textiles - Determination of antibacterial activity of antibacterial finished products").
<a id="p100016"></a>При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им национальные стандарты Российской Федерации, сведения о которых приведены в дополнительном [приложении ДА](#p100751)
<a id="p100017"></a>**5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ**

<a id="p100018"></a>Правила применения настоящего стандарта установлены в ГОСТ Р 1.0-2012 (раздел 8). Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (gost.ru)


### <a id="p100019"></a>1 Область применения


<a id="p100020"></a>Настоящий стандарт устанавливает количественные методы испытаний по определению антибактериальной активности текстильных изделий, в том числе нетканых полотен, прошедших антибактериальную обработку.
<a id="p100021"></a>Настоящий стандарт применим ко всей текстильной продукции, включая одежду, материалы для набивки, нити и материалы для одежды, товары для дома и другие товары с любым используемым антибактериальным агентом (органическим, неорганическим, натуральным или искусственным), нанесенным любым методом (либо присутствующим по своей природе, либо после окончательной обработки, либо заражением).
<a id="p100022"></a>С учетом назначения применения, а также окружающей среды, в которой будет использоваться текстильное изделие, исследователь выбирает оптимальный метод испытаний из следующих трех методов определения антибактериальной активности:
<a id="p100023"></a>a) метод абсорбции (поглощения) (оценочный метод, в котором бактериальную суспензию для испытаний вносят непосредственно на образцы);
<a id="p100024"></a>b) метод переноса (оценочный метод, в котором используемые бактерии вносят в чашку Петри с агаровой средой, а затем переносят на образцы);
<a id="p100025"></a>c) метод отпечатков [оценочный метод, в котором бактерии, используемые в испытании, помещают на фильтре и затем переносят (отпечатывают) на образцы].
<a id="p100026"></a>Чашечный метод подсчета числа колоний и определения интенсивности АТФ (аденозин трифосфат) люминесценции бактерий также являются специфичными для подсчета численности бактерий.


### <a id="p100027"></a>2 Нормативные ссылки


<a id="p100028"></a>В настоящем стандарте использована нормативная ссылка на следующий международный стандарт:
<a id="p100029"></a>ИСО 6330 Материалы текстильные. Режимы домашней стирки и сушки для текстильных испытаний (ISO 6330, Textiles - Domestic washing and drying procedures for textile testing)


### <a id="p100030"></a>3 Термины и определения


<a id="p100031"></a>В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
<a id="p100032"></a>3.1 полотно текстильное (textile fabric): Общий термин для обозначения текстильных поверхностей, нетканых полотен, трикотажных полотен и т.д., образуемых посредством переплетений текстильных волокон и нитей, имеющих определенное сцепление (когезию), в основном используемых для одежды или мебельного применения.
<a id="p100033"></a>*Примечание* - Часто включает определенные виды нетканых полотен.

<a id="p100034"></a>3.2 контрольное полотно (control fabric): Полотно, используемое для подтверждения условий роста эталонных бактерий при испытаниях.
<a id="p100035"></a>*Примечание* - Испытывают тот же самый образец полотна, что и для испытаний, только без антибактериальной обработки. Если это невозможно, то берется 100% хлопковое полотно без флюоресцирующей отделки (без оптического отбеливателя) и другой обработки.

<a id="p100036"></a>3.3 антибактериальный агент (antibacterial agent): Продукт, предназначенный для предотвращения или замедления роста бактерий, для уменьшения числа бактерий или уничтожения бактерий.
<a id="p100037"></a>3.4 антибактериальная отделка (antibacterial finish): Обработка, специально разработанная для предотвращения или замедления роста бактерий, для уменьшения числа бактерий или уничтожения бактерий.
<a id="p100038"></a>3.5 антибактериальная активность (antibacterial activity): Активность антибактериальной отделки, служащая для предотвращения или замедления роста бактерий, для уменьшения числа бактерий или уничтожения бактерий.
<a id="p100039"></a>3.6 чашечный метод подсчета числа колоний (plate count method): Метод, в котором число бактерий после инкубации вычисляют подсчетом числа колоний в соответствии с методом десятикратных разведений.
<a id="p100040"></a>*Примечание* - Результаты выражаются в "КОЕ (колониеобразующая единица)".

<a id="p100041"></a>3.7 метод люминесценции (luminescence method): Метод, при котором измеряется количество АТФ, содержащееся в бактериальных клетках.
<a id="p100042"></a>3.8 нейтрализатор (neutralizer): Химические агенты, используемые для дезактивации, нейтрализации или подавления антибактериальных свойств антибактериальных агентов.


### <a id="p100043"></a>4 Меры предосторожности


<a id="p100044"></a>Данные методы испытаний проводятся с использованием бактерий.
<a id="p100045"></a>Поэтому испытания должны осуществляться обученным и подготовленным персоналом, владеющим микробиологическими методами.
<a id="p100046"></a>Приведенные меры предосторожности должны быть согласованы в соответствии с особенностями законодательства той страны, в которой проводятся испытания.


### <a id="p100047"></a>5 Оборудование


<a id="p100048"></a>Используют следующее стандартное лабораторное оборудование.
<a id="p100049"></a>5.1 Спектрофотометр с измерением длины волны в пределах 620 - 660 нм или нефелометр McFarland.
<a id="p100050"></a>5.2 Термостат, предназначенный для поддержания постоянной температуры (37 +/- 2) °C.
<a id="p100051"></a>5.3 Водяные бани, одна - для поддержания постоянной температуры (46 +/- 2) °C, другая - для поддержания температуры в диапазоне от 70 °C до 90 °C.

#### <a id="p100052"></a>5.4 Миксер, осуществляющий вихревое перемешивание.

<a id="p100053"></a>5.5 Гомогенизатор, функционирующий со скоростью 6 - 8 циклов/с, с соответствующими сменными контейнерами.

#### <a id="p100054"></a>5.6 Чистый стол для микробиологических испытаний.


#### <a id="p100055"></a>5.7 Стиральная машина, отвечающая требованиям ИСО 6330.

<a id="p100056"></a>5.8 Камера влажности: тропическая камера или другое устройство, способное поддерживать атмосферные условия с высокой влажностью.
<a id="p100057"></a>5.9 Люминесцентный фотометр, предназначенный для измерения концентраций АТФ (аденозин трифосфат) от 10-13 до 10-7 моль/л при длине волны в диапазоне от 300 до 650 нм с реагентом, используемым для измерения люминесценции.
<a id="p100058"></a>5.10 Аппарат для получения отпечатков, способный оказывать давление 4 Н на испытуемый кусок образца с возможностью вращения образца на 180° в одном направлении в течение 3 с.
<a id="p100059"></a>5.11 Холодильник, обеспечивающий поддержание температуры в диапазоне от 2 °C до 8 °C.
<a id="p100060"></a>5.12 Морозильные камеры, одна - для температуры ниже минус 70 °C, другая - для температуры ниже минус 20 °C.

#### <a id="p100061"></a>5.13 Весы точностью измерения до 0,01 г.

<a id="p100062"></a>5.14 Фильтровальный аппарат, состоящий из верхнего контейнера, снабженного мембранным фильтром, и нижнего контейнера с отверстием для откачивания.
<a id="p100063"></a>5.15 Пипетки соответствующих объемов для каждого испытания, с наконечниками из стекла или пластика и погрешностью от 0,5% и менее.
<a id="p100064"></a>5.16 Флаконы: 30-миллилитровые стеклянные колбы с откручивающейся крышкой из полипропилена, поликарбоната либо другого подобного материала, снабженные прокладкой из силикона или тефлона.
<a id="p100065"></a>5.17 Чашки Петри, стерилизованные, из стекла или пластика, диаметром 90 - 100 мм и 55 - 60 мм.

#### <a id="p100066"></a>5.18 Стеклянная палочка диаметром приблизительно 18 мм.

<a id="p100067"></a>5.19 Антиударные зерна (стеклянные бусы) диаметром приблизительно 3 - 4 мм.

#### <a id="p100068"></a>5.20 Колба Эрленмейера объемом 100 мл.

<a id="p100069"></a>5.21 Обрезное лекало, изготовленное из стерилизующегося материала (нержавеющая сталь или стекло) диаметром (3,8 +/- 0,1) см.
<a id="p100070"></a>5.22 Одноразовые пакеты из пластика, предназначенные для хранения пищевых продуктов, которые могут быть использованы для хранения образцов.
<a id="p100071"></a>5.23 Пинцеты, изготовленные из материала, который может быть подвергнут стерилизации.
<a id="p100072"></a>5.24 Цилиндр из нержавеющей стали, массой (<sub>200</sub> +/- 10) г и диаметром (3,5 +/- 0,1) см.

#### <a id="p100073"></a>5.25 Металлическая сетчатая корзина для автоклавирования.


#### <a id="p100074"></a>5.26 Алюминиевая фольга.



### <a id="p100075"></a>6 Реагенты и питательные среды


<a id="p100076"></a>Реагенты, используемые для испытаний, должны быть аналитической чистоты (ч. а.) и/или пригодными для микробиологических целей.
<a id="p100077"></a>Для приготовления питательных сред рекомендуется использовать сухие питательные среды, присутствующие на коммерческом рынке. При приготовлении этих сред необходимо строго следовать инструкциям изготовителя.


#### <a id="p100078"></a>6.1 Вода


<a id="p100079"></a>Вода, используемая для испытаний, должна быть аналитически чистой для микробиологических целей, свежей дистилляции и/или ионообменной, и/или ультрафильтрованной, и/или фильтрованной с помощью обратного осмоса. Вода не должна содержать токсических и каких-либо других веществ, задерживающих рост бактерий.


#### <a id="p100080"></a>6.2 Триптон-соевый бульон (TSB)


<a id="p100081"></a>Этот бульон должен быть использован для оживления лиофилизированных штаммов бактерий.


| <a id="p100082"></a>Триптон, панкреатический гидролизат казеина ........ | <a id="p100083"></a>15 г |
| --- | --- |
| <a id="p100084"></a>Соевый пептон, папаиновый гидролизат сои ........... | <a id="p100085"></a>5 г |
| <a id="p100086"></a>Хлористый натрий (NaCl) ......................................... | <a id="p100087"></a>5 г |
| <a id="p100088"></a>Вода .......................................................................... | <a id="p100089"></a>1000 мл (до полного объема) |
| <a id="p100090"></a>pH после стерилизации ............................................ | <a id="p100091"></a>7,2 +/- 0,2 |



#### <a id="p100092"></a>6.3 Триптон-соевый агар (TSA)



| <a id="p100093"></a>Триптон, панкреатический гидролизат казеина ....... | <a id="p100094"></a>15 г |
| --- | --- |
| <a id="p100095"></a>Соевый пептон, папаиновый гидролизат сои ........... | <a id="p100096"></a>5 г |
| <a id="p100097"></a>Хлористый натрий (NaCl) ......................................... | <a id="p100098"></a>5 г |
| <a id="p100099"></a>Агар .......................................................................... | <a id="p100100"></a>15 г |
| <a id="p100101"></a>Вода .......................................................................... | <a id="p100102"></a>1000 мл (до полного объема) |
| <a id="p100103"></a>pH после стерилизации ............................................ | <a id="p100104"></a>7,2 +/- 0,2 |



#### <a id="p100105"></a>6.4 Агар для переноса



| <a id="p100106"></a>Триптон, панкреатический гидролизат казеина ....... | <a id="p100107"></a>0,75 г |
| --- | --- |
| <a id="p100108"></a>Соевый пептон, папаиновый гидролизат сои ........... | <a id="p100109"></a>0,25 г |
| <a id="p100110"></a>Хлористый натрий (NaCl) ......................................... | <a id="p100111"></a>5 г |
| <a id="p100112"></a>Агар .......................................................................... | <a id="p100113"></a>15 г |
| <a id="p100114"></a>Вода .......................................................................... | <a id="p100115"></a>1000 мл (до полного объема) |
| <a id="p100116"></a>pH после стерилизации ............................................ | <a id="p100117"></a>7,2 +/- 0,2 |



#### <a id="p100118"></a>6.5 Питательный бульон (NB broth)



| <a id="p100119"></a>Мясной экстракт ...................................................... | <a id="p100120"></a>3 г |
| --- | --- |
| <a id="p100121"></a>Пептон ...................................................................... | <a id="p100122"></a>5 г |
| <a id="p100123"></a>Вода .......................................................................... | <a id="p100124"></a>1000 мл (до полного объема) |
| <a id="p100125"></a>pH после стерилизации ............................................ | <a id="p100126"></a>6,9 +/- 0,2 |



#### <a id="p100127"></a>6.6 Пептонно-солевой раствор



| <a id="p100128"></a>Триптон, панкреатический гидролизат казеина ....... | <a id="p100129"></a>1 г |
| --- | --- |
| <a id="p100130"></a>Натрий хлор (NaCl) ................................................... | <a id="p100131"></a>8,5 г |
| <a id="p100132"></a>Вода .......................................................................... | <a id="p100133"></a>1000 мл (до полного объема) |
| <a id="p100134"></a>pH после стерилизации ............................................ | <a id="p100135"></a>6,9 +/- 0,2 |



#### <a id="p100136"></a>6.7 Физиологический раствор



| <a id="p100137"></a>Натрий хлор (NaCl) .................................................. | <a id="p100138"></a>8,5 г |
| --- | --- |
| <a id="p100139"></a>Вода .......................................................................... | <a id="p100140"></a>1000 мл (до полного объема) |



#### <a id="p100141"></a>6.8 Среда SCDLP



| <a id="p100142"></a>Пептон, гидролизат казеина .................................... | <a id="p100143"></a>17 г |
| --- | --- |
| <a id="p100144"></a>Пептон, гидролизат соевых бобов .......................... | <a id="p100145"></a>3 г |
| <a id="p100146"></a>Хлористый натрий (NaCl) ........................................ | <a id="p100147"></a>5 г |
| <a id="p100148"></a>Калия дигидрофосфат ............................................. | <a id="p100149"></a>2,5 г |
| <a id="p100150"></a>Глюкоза ................................................................... | <a id="p100151"></a>2,5 г |
| <a id="p100152"></a>Лецитин ................................................................... | <a id="p100153"></a>1 г |
| <a id="p100154"></a>Твин 80 (Полисорбат 80) ........................................ | <a id="p100155"></a>7 г |
| <a id="p100156"></a>Вода ........................................................................ | <a id="p100157"></a>1000 мл (до полного объема) |
| <a id="p100158"></a>pH после стерилизации ........................................... | <a id="p100159"></a>7,2 +/- 0,2 |


<a id="p100160"></a>Если уровень нейтрализации недостаточен, содержание полисорбата 80 или лецитина может быть изменено или использован другой нейтрализирующий агент. Однако использование другого нейтрализатора должно быть отражено в протоколе испытаний вместе с данными о его концентрации.


#### <a id="p100161"></a>6.9 Буферный раствор для отмывания бактериальной взвеси


<a id="p100162"></a>Данный буферный раствор состоит из 0,005 моль/л дигидрофосфата натрия, содержащего 0,037% сахарозы.


| <a id="p100163"></a>pH ........................................................................... | <a id="p100164"></a>7,2 +/- 0,2 |
| --- | --- |



#### <a id="p100165"></a>6.10 Нейтрализующий раствор


<a id="p100166"></a>Состав стандартного нейтрализующего раствора должен быть следующим:


| <a id="p100167"></a>Твин 80 (Полисорбат 80) ......................................... | <a id="p100168"></a>30 г |
| --- | --- |
| <a id="p100169"></a>Лецитин яичного желтка ......................................... | <a id="p100170"></a>3 г |
| <a id="p100171"></a>Гистидин гидрохлорид ........................................... | <a id="p100172"></a>1 г |
| <a id="p100173"></a>Мясной или казеиновый пептон ............................. | <a id="p100174"></a>1 г |
| <a id="p100175"></a>Хлористый натрий (NaCl) ........................................ | <a id="p100176"></a>4,3 г |
| <a id="p100177"></a>Калия монофосфат .................................................. | <a id="p100178"></a>3,6 г |
| <a id="p100179"></a>Двунатриевый фосфат дигидрат ............................. | <a id="p100180"></a>7,2 г |
| <a id="p100181"></a>Вода ......................................................................... | <a id="p100182"></a>1000 мл (до полного объема) |


<a id="p100183"></a>Если эффективная нейтрализующая сила не может быть достигнута, содержание полисорбата 80 или лецитина может быть изменено или использован другой нейтрализирующий агент. Использование другого нейтрализатора должно быть отражено в протоколе испытаний с указанием его концентрации.


#### <a id="p100184"></a>6.11 Агар для подсчета колоний (EA)



| <a id="p100185"></a>Сухой экстракт дрожжей ........................................ | <a id="p100186"></a>2,5 г |
| --- | --- |
| <a id="p100187"></a>Казеиновый триптон ............................................... | <a id="p100188"></a>5,0 г |
| <a id="p100189"></a>Глюкоза ................................................................... | <a id="p100190"></a>1 г |
| <a id="p100191"></a>Агар ......................................................................... | <a id="p100192"></a>От 12 г до 18 г (в зависимости от крепости гелеобразного продукта) |
| <a id="p100193"></a>Вода ......................................................................... | <a id="p100194"></a>1000 мл (до полного объема) |
| <a id="p100195"></a>pH после стерилизации ........................................... | <a id="p100196"></a>7,2 +/- 0,2 |



#### <a id="p100197"></a>6.12 Агар для получения отпечатков



| <a id="p100198"></a>Агар .......................................................................... | <a id="p100199"></a>20 г |
| --- | --- |
| <a id="p100200"></a>Вода .......................................................................... | <a id="p100201"></a>1000 мл (до полного объема) |



#### <a id="p100202"></a>6.13 Раствор, защищающий бактерии определенных видов от низких температур


<a id="p100203"></a>Для замораживания бактерий используется раствор, защищающий от низких температур. Раствор содержит 150 г/л глицерина или 100 г/л диметилсульфооксида.
<a id="p100204"></a>Для растворов, содержащих глицерин, готовят питательный раствор, а затем добавляют 150 г глицерина на 1 л и затем раствор стерилизуют.
<a id="p100205"></a>Для растворов, содержащих диметилсульфооксид, стерилизацию диметилсульфооксида осуществляют пропусканием последнего через мембранный фильтр размерами пор 0,22 мкм. Затем готовят питательный раствор, стерилизуют его и добавляют пропущенный через мембранный фильтр диметилсульфооксид, добавляя 100 г препарата на 1 л питательного раствора.
<a id="p100206"></a>*Примечание* - Пригоден любой другой коммерчески разработанный способ, позволяющий сохранять штаммы, аналогично описанному выше методу, как с использованием раствора, защищающего от низких температур, так и предохраняющей системы, содержащей глицерин или диметилсульфооксид.

<a id="p100207"></a>Реагенты, используемые в данных испытаниях, должны быть аналитического качества и/или быть пригодными для микробиологических целей.


#### <a id="p100208"></a>6.14 Основной раствор стандартного реагента АТФ



| <a id="p100209"></a>5'трифосфат аденозин-двунатрия тригидрат ............ | <a id="p100210"></a>59,7 мг |
| --- | --- |
| <a id="p100211"></a>Вода ........................................................................... | <a id="p100212"></a>1000 мл (до полного объема) |


<a id="p100213"></a>После приготовления раствор должен быть помещен в плотно закрытый контейнер и храниться в криогенных условиях при температуре минус 20 °C и ниже. Раствор может быть использован не позднее чем через 6 мес после его приготовления.


#### <a id="p100214"></a>6.15 Буферный раствор для люминесцирующего реагента АТФ



| <a id="p100215"></a>Трис(гидроксиметил)аминометан ............................ | <a id="p100216"></a>760 мг |
| --- | --- |
| <a id="p100217"></a>Дигидрат тетраацетата двунатрия этилендиамина ..... | <a id="p100218"></a>370 мг |
| <a id="p100219"></a>Тетрагидрат ацетата магния ...................................... | <a id="p100220"></a>800 мг |
| <a id="p100221"></a>DL-дитиотреитол ....................................................... | <a id="p100222"></a>8 мг |
| <a id="p100223"></a>Вода ........................................................................... | <a id="p100224"></a>250 мл (до полного объема) |
| <a id="p100225"></a>pH ............................................................................... | <a id="p100226"></a>7,5 +/- 0,2 |


<a id="p100227"></a>Этот реагент должен быть использован не позднее чем через 8 ч после приготовления.


#### <a id="p100228"></a>6.16 Люминесцирующий реагент АТФ



| <a id="p100229"></a>Люцифераза (EC: 1.13.12.7) ...................................... | <a id="p100230"></a>10 мг |
| --- | --- |
| <a id="p100231"></a>D-люциферин ............................................................ | <a id="p100232"></a>15 мг |
| <a id="p100233"></a>Альбумин бычьей сыворотки .................................. | <a id="p100234"></a>60 мг |
| <a id="p100235"></a>Буферный раствор по [6.15](#p100214) ....................................... | <a id="p100236"></a>30 мл (до полного объема) |


<a id="p100237"></a>После растворения реагент должен храниться при комнатной температуре не менее 15 мин перед применением, а затем быть использован в течение 3 ч.


#### <a id="p100238"></a>6.17 АТФ реагент для экстракции



| <a id="p100239"></a>10%-ный водный раствор бензалкония хлорида ...... | <a id="p100240"></a>1 мл |
| --- | --- |
| <a id="p100241"></a>Вода ........................................................................... | <a id="p100242"></a>9 мл |


<a id="p100243"></a>Использование любого другого неспецифичного реагента для экстракции должно быть отражено в протоколе испытаний.


#### <a id="p100244"></a>6.18 АТФ элиминирующий агент


<a id="p100245"></a>Агент, который уменьшает концентрацию АТФ в питательном бульоне до уровня менее чем 10-13 моль/л в течение 15 мин.


| <a id="p100246"></a>Апираза (EC: 3.6.1.5) ................................................. | <a id="p100247"></a>5 международных единиц |
| --- | --- |
| <a id="p100248"></a>Аденозиндезаминаза (фермент) (EC: 3.5.1.4) ........... | <a id="p100249"></a>5 международных единиц |
| <a id="p100250"></a>Буферный раствор 0,005 моль/л<br>натрия фосфорнокислого 2-водного<br>с содержанием сахарозы ......................................... | <a id="p100251"></a>10 мл (до полного объема) |
| <a id="p100252"></a>pH ............................................................................ | <a id="p100253"></a>7,2 +/- 0,2 |


<a id="p100254"></a>Использование любого другого неспецифичного нейтрализующего реагента должно быть отражено в протоколе испытаний.


#### <a id="p100255"></a>6.19 SCDLP или другая среда для приготовления эталонного раствора АТФ



| <a id="p100256"></a>SCDLP по [п. 6.8](#p100141) или другая среда ........................... | <a id="p100257"></a>10 мл |
| --- | --- |
| <a id="p100258"></a>Элиминирующий агент АТФ по [6.18](#p100244) ....................... | <a id="p100259"></a>1 мл |


<a id="p100260"></a>После перемешивания помещают в термостат на 1 ч при температуре от 30 °C до 37 °C для предотвращения микробиологической контаминации.
<a id="p100261"></a>Затем переносят на 1 ч в горячую водяную баню при температуре от 70 °C до 90 °C и затем охлаждают до комнатной температуры.
<a id="p100262"></a>Хранят раствор в холодильнике и используют в течение 24 ч после приготовления.
<a id="p100263"></a>Эталонный раствор АТФ следует готовить в том случае, если добавление нейтрализующих агентов вызывает увеличение концентрации АТФ в отмывочном растворе более 10-11 моль/л.


### <a id="p100264"></a>7 Эталонные штаммы



#### <a id="p100265"></a>7.1 Штаммы


<a id="p100266"></a>Следующие штаммы должны использоваться во всех испытаниях антибактериальной активности:
- <a id="p100267"></a>Staphylococcus aureus ATCC 6538, CIP 4.83, DSM 799, NBRC 13276 или NCIMB 9518;
- <a id="p100268"></a>Klebsiella pneumoniae ATCC 4352, CIP 104216, DSM 789, NBRC 13277 или NCIMB 10341.
<a id="p100269"></a>*Примечание* - ATCC - обозначение Американской коллекции типовых культур (American Type Culture Collection) (США); CIP - обозначение коллекции культур Института Пастера (Франция); DSM - обозначение культур Германской коллекции микроорганизмов и клеточных культур (German Collection of Microorganism and Cell Cultures) (Германия); NBRC - обозначение культур Центра Nite Биологических ресурсов (Biological Resource Center) (Япония); NCIMB - обозначение культур Национальной коллекции промышленных бактерий (National Collection of Industrial Bacteria) (Великобритания).

<a id="p100270"></a>По согласованию всех заинтересованных сторон допускается использование эквивалентных штаммов бактерий вместо вышеприведенных штаммов, которые могут быть получены из Всемирной Федерации Коллекции Культур [World Federation of Culture Collection (WFCC)]. Штаммы, используемые в испытаниях, должны фигурировать в документах с обозначением как наименований используемых штаммов, так и источников их происхождения.


#### <a id="p100271"></a>7.2 Хранение штаммов



##### <a id="p100272"></a>7.2.1 Общие положения

<a id="p100273"></a>Штаммы необходимо хранить в соответствии с рекомендациями изготовителей или требованиями ЕН 12353.
<a id="p100274"></a>В документах должны быть приведены данные об идентификации и происхождении коллекции культур штаммов, а также о способе их хранения в лаборатории.

##### <a id="p100275"></a>7.2.2 Метод с использованием керамических гранул (бус)

<a id="p100276"></a>Получают образец с лиофилизированными бактериями определенного штамма, следуя инструкциям, прилагаемым к данному штамму. Ресуспендируют образец в 5 мл буферного раствора TSB (см. [6.2](#p100080)). Получают образец суспензии и вносят его в в чашку Петри (см. [5.17](#p100065)), содержащую TSA (см. [6.3](#p100092)). Инкубируют культуры в течение 18 - 24 ч при температуре (37 +/- 2) °C.
<a id="p100277"></a>После инкубации используют культуру, изолированную с чашки Петри, для проверки ее чистоты.
<a id="p100278"></a>После проверки готовят основную культуру.
<a id="p100279"></a>Берут 0,7 мл образца бульонной культуры и распределяют его по поверхности чашки Петри, содержащей TSA. Выращивают культуру на чашке Петри с TSA в течение 18 - 24 ч при определенных для данного штамма условиях.
<a id="p100280"></a>Добавляют 10 мл раствора, защищающего от низких температур (см. [6.13](#p100202)), на поверхность чашки Петри с TSA культурой и ресуспендируют клетки в растворе, используя стерильный стеклянный шпатель. Образец ресуспендированных клеток с поверхности агара разводят в 100 мл раствора, защищающего от низких температур, и инкубируют в течение 30 мин при температуре 20 °C.
<a id="p100281"></a>Используя пипетку (см. [5.15](#p100063)), 1 мл суспензии переносят в криогенную колбу (см. [5.16](#p100064)), содержащую бусы (см. [5.19](#p100067)). Колбу встряхивают таким образом, чтобы распределить клеточную бактериальную взвесь по бусам.
- <a id="p100282"></a>Если раствор, защищающий от низких температур, содержит диметилсульфооксид, не следует оставлять его более чем на 1 мин при комнатной температуре.
- <a id="p100283"></a>Раствор, защищающий от низких температур, содержащий глицерин, оставляют на 30 мин при температуре 20 °C.
- <a id="p100284"></a>Стерильной пипеткой удаляют излишки раствора, защищающего от низких температур. Помещают колбы в морозильную камеру (см. [5.12](#p100060)) температурой минус 70 °C или ниже.
<a id="p100285"></a>Используя метод последовательных (серийных) разведений, готовят разведения суспензии 10-6 и 10-7. По 1 мл образца каждого разведения вносят в отдельные чашки Петри. Добавляют 12 - 15 мл питательного раствора, охлажденного до температуры (45 +/- 1) °C. Инкубируют в течение 18 - 24 ч при условиях, установленных для данного штамма. Подсчитывают число бактерий на чашке Петри, чтобы удостовериться, что суспензия содержит менее чем 5·108 КОЕ/мл.
<a id="p100286"></a>Хранят криогенную колбу в морозильной камере при температуре ниже минус 70 °C.

##### <a id="p100287"></a>7.2.3 Метод суспензии с глицерином

<a id="p100288"></a>Инокулируют свежевыращенную изолированную колонию в пробирку объемом 15 мл, содержащую 5 мл соответствующей среды. Проводят инкубацию в термостате при температуре 37 °C до наступления поздней логарифмической или стационарной фазы (обычно от 5 ч инкубации и до инкубации в течение ночи).
<a id="p100289"></a>Для каждого из штаммов, который хранится при температуре ниже минус 70 °C, готовят стерильную, снабженную ярлыком пробирку для низких температур.
<a id="p100290"></a>В пробирку наливают 225 мкл стерильного 80%-ного глицерина. Затем в нее вносят 1,0 мл бактериальной культуры (замороженный образец должен содержать 15% глицерина). Тщательно перемешивают, используя миксер (см. [5.4](#p100052)). Культуру хранят в пробирке при температуре минус 70 °C и ниже.
<a id="p100291"></a>Для хранения любого из штаммов при температуре ниже минус 20 °C используют жидкий глицерин. В маркированную полипропиленовую пробирку для низких температур вносят равные объемы 80%-ного глицерина и бактериальной культуры. Для предотвращения образования ледяных кристаллов, уменьшающих жизнеспособность клеток бактерий, взвесь в пробирке тщательно перемешивают. Помещают пробирку в морозильную камеру при температуре минус 20 °C. Через 1 неделю, по возможности, проверяют жизнеспособность клеток бактерий.
<a id="p100292"></a>Для оживления штамма после хранения в глицерине при температуре минус 70 °C используют стерильную зубочистку, чтобы отделить частичку твердого вещества. Затем штрихом высевают клетки в соответствующую среду. Не следует замораживать данный образец вновь, так как каждый цикл замораживания/размораживания приводит к 50% потере жизнеспособности клеток (бактерий).
<a id="p100293"></a>Для получения ночной культуры из рабочего раствора, хранящегося при температуре минус 20 °C, вносят пипеткой 50 - 100 мкл стерильного 80%-ного глицерина в в 5 мл питательной среды.

##### <a id="p100294"></a>7.2.4 Идентификация штамма

<a id="p100295"></a>Для идентификации штамма проводят проверку в соответствии с общепринятыми методами идентификации.
<a id="p100296"></a>Для каждого бактериального штамма предусматривается запись следующей информации:
<a id="p100297"></a>a) наименование национальной коллекции культур, из которой были получены лиофилизированные штаммы;
<a id="p100298"></a>b) таксономическое наименование по классификации и соответствующий номер лиофилизированного штамма;
<a id="p100299"></a>c) номер партии лиофилизированного штамма, полученной из национальной коллекции культур;
<a id="p100300"></a>d) дата выращивания лиофилизированного штамма;
<a id="p100301"></a>e) дата приготовления культуры для хранения;
<a id="p100302"></a>f) лабораторный код сохраняющейся культуры.
<a id="p100303"></a>Должна быть сделана запись об использованных методах, применяемых для проверки чистоты и идентификации штамма, даты проведения и результаты таких проверок.


### <a id="p100304"></a>8 Количественные измерения



#### <a id="p100305"></a>8.1 Чашечный метод подсчета числа колоний


<a id="p100306"></a>8.1.1 Используя пипетку (см. [5.15](#p100063)), берут 1 мл суспензии и добавляют в пробирку, содержащую (9,0 +/- 0,1) мл питательного бульона (см. [6.5](#p100118)) или пептонно-солевого раствора (см. [6.6](#p100127)). Смесь тщательно встряхивают.
<a id="p100307"></a>8.1.2 Используя новую пипетку, переносят 1 мл полученного раствора в новую пробирку, содержащую (9,0 +/- 0,1) мл среды и вновь тщательно встряхивают. Последовательно повторяя процедуру, выполняют серию разведений таким образом, чтобы общее число разведений составляло 10. По 1 мл каждого разведения переносят пипеткой в две чашки Петри.
<a id="p100308"></a>8.1.3 На водяной бане (см. [5.3](#p100051)) подогревают примерно 15 мл агара для подсчета числа колоний (EA) (см. [6.11](#p100184)) до температуры от 45 °C до 46 °C и наливают в чашки Петри, тщательно перемешивая. Чашки выдерживают при комнатной температуре до затвердевания агаровой среды, затем их переворачивают и помещают в термостат при температуре (37 +/- 2) °C и проводят инкубацию в течение 24 - 48 ч.
<a id="p100309"></a>8.1.4 После инкубации подсчитывают число колоний на чашках Петри в тех разведениях, где можно сосчитать от 30 до 300 КОЕ, и вычисляют концентрацию бактерий в растворе по следующей формуле:

<a id="p100310"></a>cB = ZR,

<a id="p100311"></a>где cB - концентрация бактерий в колониеобразующих единицах на миллилитр, КОЕ/мл;
<a id="p100312"></a>Z - среднее число в колониеобразующих единицах КОЕ на двух чашках Петри;
<a id="p100313"></a>R - степень разведения.


#### <a id="p100314"></a>8.2 Метод люминесценции



##### <a id="p100315"></a>8.2.1 Формула для калибровочной кривой

<a id="p100316"></a>8.2.1.1 Берут стандартный препарат АТФ (см. [6.14](#p100208)), физиологический раствор (см. [6.7](#p100136)), среду SCDLP (см. [6.8](#p100141)) либо другую подходящую среду и готовят три отдельных раствора, содержащие до 2·10-8 моль/л, 2·10-9 моль/л и 2·10-10 моль/л АТФ соответственно.
<a id="p100317"></a>8.2.1.2 Наливают по 0,1 мл каждого раствора, приготовленных по [8.2.1.1](#p100316), в три отдельные испытательные пробирки. В каждую пробирку добавляют по 0,9 мл буферного раствора (см. [6.9](#p100161)) и тщательно взбалтывают. Наливают по 0,1 мл каждого раствора отдельно в три испытательные пробирки и обозначают их как образцы для измерения разведенного стандартного реагента.
<a id="p100318"></a>8.2.1.3 Наливают в пластиковую пробирку для испытаний 0,1 мл физиологического раствора (см. [6.7](#p100136)), SCDLP (см. [6.8](#p100141)) или другой подходящей среды, 0,8 мл буферного раствора (см. [6.9](#p100161)) и 0,1 мл АТФ нейтрализующего агента (см. [6.18](#p100244)). Тщательно взбалтывают, а затем наливают по 0,1 мл в три отдельные пробирки для испытаний. Выдерживают от 5 до 30 мин и обозначают как образцы для измерения.
<a id="p100319"></a>8.2.1.4 В испытательную пробирку, содержащую образец для измерения, добавляют 0,1 мл порции АТФ экстрагирующего реагента (см. [6.17](#p100238)) и встряхивают. Добавляют 0,1 мл АТФ люминесцирующего реагента (см. [6.16](#p100228)), снова взбалтывают и, немедленно используя люминесцентный фотометр (см. [5.9](#p100057)), определяют количество люминесценции.
<a id="p100320"></a>8.2.1.5 Добавляют к образцам для измерения разведенного стандартного реагента 0,1 мл АТФ экстрагирующего реагента (см. [6.16](#p100228)) по порядку, начиная с наименьшей концентрации, и встряхивают, а затем немедленно используют люминесцентный фотометр (см. [5.9](#p100057)), определяя количество люминесценции.
<a id="p100321"></a>8.2.1.6 Вычисляют концентрацию АТФ посредством среднего количества люминесценции, полученной при измерении различных разведений стандартного реагента (2·10-8 моль/л, 2·10-9 моль/л и 2·10-10 моль/л), и учета этих значений как среднего значения коэффициента A.
<a id="p100322"></a>8.2.1.7 Получают коэффициент B замещением коэффициента A, подставляя cАТФ = 0 в следующую формулу для калибровочной кривой:

<a id="p100323"></a>cАТФ = AX + B,

<a id="p100324"></a>где cАТФ - концентрация АТФ в моль на литр (моль/л);
<a id="p100325"></a>X - количество люминесценции в относительных единицах света.
<a id="p100326"></a>*Примечание* - Коэффициент корреляции между cАТФ и X равен R2 >= 0,9 и доверительный интервал > 0,95.


##### <a id="p100327"></a>8.2.2 Концентрация АТФ бактериальной суспензии

<a id="p100328"></a>8.2.2.1 Готовят одну пробирку для нейтрализации АТФ и три испытательные пробирки для измерений.
<a id="p100329"></a>8.2.2.2 Наливают 0,1 мл перемешанной бактериальной суспензии, 0,8 мл буферного раствора для разведений (см. [6.9](#p100161)) и 0,1 мл АТФ нейтрализующего агента (см. [6.18](#p100244)) в испытательную пробирку, предназначенную для элиминации (устранения) АТФ, и тщательно перемешивают. Наливают по 0,1 мл раствора в три испытательные пробирки, подготовленные для измерений, и выдерживают их от 5 до 30 мин.
<a id="p100330"></a>8.2.2.3 Добавляют 0,1 мл реагента для экстракции АТФ (см. [6.17](#p100238)) в каждую из пробирок и тщательно взбалтывают. Добавляют 0,1 мл АТФ люминесцирующего агента (см. [6.16](#p100228)), повторно взбалтывают и немедленно же используют люминесцентный фотометр (см. [5.9](#p100057)), определяя количество люминесценции.
<a id="p100331"></a>8.2.2.4 Вычисляют концентрацию АТФ cАТФ по формуле, приведенной в [8.2.1.7](#p100322), а затем рассчитывают концентрацию АТФ в отмытой бактериальной суспензии в соответствии со следующей формулой:

<a id="p100332"></a>cАТФ = cАТФ/1000,

<a id="p100333"></a>где cАТФ - концентрация АТФ, моль/л, в перемешанной бактериальной суспензии.


### <a id="p100334"></a>9 Метод перемешивания



#### <a id="p100335"></a>9.1 Перемешивание вихревым миксером


<a id="p100336"></a>Дно испытательной пробирки прижимают к резиновой пластине держателя вихревого миксера (см. [5.4](#p100052)) и перемешивают 5 раз по 5 с.


#### <a id="p100337"></a>9.2 Перемешивание вручную


<a id="p100338"></a>Берут испытательную пробирку или колбу в руку и встряхивают с амплитудой качания 30 см в течение 30 с.


#### <a id="p100339"></a>9.3 Перемешивание в гомогенизаторе Стомахер


<a id="p100340"></a>Помещают заранее подготовленный одноразовый пластиковый пакет (см. [5.22](#p100070)) в гомогенизатор Стомахер (см. [5.5](#p100053)) и включают устройство на 1 мин для каждой из сторон пакета.


### <a id="p100341"></a>10 Процедуры испытаний



#### <a id="p100342"></a>10.1 Метод абсорбции



##### <a id="p100343"></a>10.1.1 Инкубация и приготовление посевного материала для испытаний


###### <a id="p100344"></a>10.1.1.1 Инкубация A

<a id="p100345"></a>Проводят отбор бактерий, находящихся в контейнере для хранения, используя бактериальную петлю. Культуру бактерий высевают штрихом на чашку с агаром EA и инкубируют при температуре (37 +/- 2) °C в течение 24 - 48 ч.
<a id="p100346"></a>*Примечание* - Чашки хранятся при температуре 5 °C - 10 °C и должны использоваться не более чем через 1 неделю после приготовления.


###### <a id="p100347"></a>10.1.1.2 Инкубация B

<a id="p100348"></a>Наливают 20 мл питательного бульона (см. [6.5](#p100118)) или триптон соевого бульона (см. [6.2](#p100080)) TSB в коническую колбу Эрленмейера объемом 100 мл. С помощью бактериальной петли отбирают одну колонию после инкубации A, как описано в [10.1.1.1](#p100344), и засевают колонию в бульон. Инкубируют посевной материал в следующих условиях:
- <a id="p100349"></a>температура: (37 +/- 2) °C;
- <a id="p100350"></a>степень встряхивания: 110 мин-1 с амплитудой 3 см;
- <a id="p100351"></a>время инкубации: от 18 до 24 ч.

###### <a id="p100352"></a>10.1.1.3 Инкубация C

<a id="p100353"></a>Наливают 20 мл питательного бульона (см. [6.5](#p100118)) или триптон соевого бульона (см. [6.2](#p100080)) TSB в коническую колбу Эрленмейера объемом 100 мл. Добавляют 0,4 мл посевного материала из инкубации B, как описано в [10.1.1.2](#p100347), которая содержит в бульоне от 1·108 до 3·108 КОЕ/мл или АТФ в концентрации от 1·10-6 до 3·10-6 моль/л, и осуществляют инкубацию в следующих условиях:
- <a id="p100354"></a>температура: (37 +/- 2) °C;
- <a id="p100355"></a>степень встряхивания: 110 мин-1 с амплитудой 3 см;
- <a id="p100356"></a>время инкубации: (3 +/- 1) ч.
<a id="p100357"></a>Целью является получение концентрации КОЕ или АТФ после инкубации в значениях 107 КОЕ/мл или 10-7 моль/л АТФ соответственно.
<a id="p100358"></a>*Примечание* - Полученный посевной материал следует хранить на льду и использовать в течение 8 ч.


###### <a id="p100359"></a>10.1.1.4 Приготовление посевного материала

<a id="p100360"></a>Готовят концентрацию бактерий от 1·105 до 3·105 КОЕ/мл, используя спектрофотометр или нефелометр McFarland (см. [5.1](#p100049)), или устанавливают концентрацию АТФ от 1·10-9 до 3·10-9 моль/л люминесцентным методом, используя питательный бульон (см. [6.5](#p100118)), разведенный в 20 раз водой при комнатной температуре.
<a id="p100361"></a>*Примечание* - Полученный посевной материал следует хранить на льду и использовать в течение 4 ч.


##### <a id="p100362"></a>10.1.2 Приготовление образцов для испытаний


###### <a id="p100363"></a>10.1.2.1 Масса и форма образцов для испытаний

<a id="p100364"></a>Берут куски образцов массой по (0,40 +/- 0,05) г, обрезают их до размеров, удобных для проведения испытаний. Берут шесть тестовых образцов контрольного полотна и шесть образцов для испытаний с антибактериальной обработкой.
<a id="p100365"></a>*Примечание* - Для начала учета сразу после заражения используют три контрольных образца и три образца с антибактериальной обработкой. Оставшиеся образцы применяют только после инкубации в течение 18 - 24 ч.


###### <a id="p100366"></a>10.1.2.2 Установка испытательных образцов

<a id="p100367"></a>Помещают каждый из образцов для испытаний в отдельную емкость и, исходя из свойств образца, выбирают один из следующих методов:
<a id="p100368"></a>a) если испытуемый образец полотна легко распадается на нити, набивной или имеет подложку, на образец, находящийся в емкости, помещают стеклянные шарики (см. [5.18](#p100066)). Также можно обработать края испытуемого образца нитями во избежание роспуска;
<a id="p100369"></a>b) если испытуемым образцом является пряжа, то ее укладывают в емкость мотком и на моток сверху кладут стеклянные шарики;
<a id="p100370"></a>c) если испытуемым образцом является ковровая ткань или аналогичный материал, то обрезают ворс и также располагают в емкости поверх образца стеклянные шарики.
<a id="p100371"></a>Если требуется, то образцы для испытаний могут быть выстираны в соответствии с методом, изложенным в ИСО 6330, или другим подходящим методом. После завершения стирки образцы ополаскивают водой для нейтрализации моющих веществ. При использовании каких-либо нестандартных методов испытаний необходимо отметить это в протоколе испытаний.
<a id="p100372"></a>Если необходимо, то образец для испытаний проходит стерилизацию в автоклаве по следующей процедуре:
1) <a id="p100373"></a>накрывают верхнюю часть емкости, содержащей испытуемые образцы, алюминиевой фольгой (см. [5.26](#p100074));
2) <a id="p100374"></a>помещают покрытую алюминиевой фольгой емкость в металлическую сетчатую корзину (см. [5.25](#p100073)) для автоклавирования;
3) <a id="p100375"></a>заворачивают крышки емкостей в алюминиевую фольгу и помещают их в металлическую сетчатую корзину;
4) <a id="p100376"></a>стерилизуют крышки и емкости с испытуемыми образцами в автоклаве при температуре 121 °C и давлении 103 кПа в течение 15 - 20 мин;
5) <a id="p100377"></a>после стерилизации удаляют алюминиевую фольгу и дают возможность испытуемому образцу в емкости подсохнуть в течение 60 мин или более, оставив на лабораторном столе (см. [5.6](#p100054)) или в другом месте, где отсутствует возможность заражения от циркулирующего воздуха;
6) <a id="p100378"></a>плотно закрывают емкость крышкой.
<a id="p100379"></a>Если автоклавирование невозможно, то стерилизацию можно осуществить с помощью газа этилен оксида, гамма-лучами и другими соответствующими методами. Использование альтернативных методов должно быть отмечено в протоколе испытаний.

##### <a id="p100380"></a>10.1.3 Протокол испытания


###### <a id="p100381"></a>10.1.3.1 Нанесение посевного материала на испытуемые образцы

<a id="p100382"></a>Аккуратно наносят по 0,2 мл посевного материала, приготовленного по [10.1.1.4](#p100359), в несколько точек каждого испытуемого образца, подготовленного по [10.1.2.2](#p100366), не допуская попадания посевного материала на поверхность емкости, и затем емкость закрывают крышкой.

###### <a id="p100383"></a>10.1.3.2 Встряхивание после заражения посевным материалом

<a id="p100384"></a>Сразу после заражения по [10.1.3.1](#p100381) добавляют 20 мл SCDLP среды (см. [6.8](#p100141)) в каждую из шести емкостей, в которые помещены контрольные образцы ткани и испытуемые образцы с антибактериальной обработкой. Емкости закрывают крышками и встряхивают, как описано в [разделе 9](#p100334).

###### <a id="p100385"></a>10.1.3.3 Инкубация

<a id="p100386"></a>Проводят инкубацию в емкостях (три испытуемых образца контрольной ткани, три образца с антибактериальной обработкой) при температуре (37 +/- 2) °C в течение 18 - 24 ч.

###### <a id="p100387"></a>10.1.3.4 Встряхивание после инкубации

<a id="p100388"></a>После инкубации по [10.1.3.3](#p100385) добавляют 20 мл среды SCDLP (см. [6.8](#p100141)) в каждую емкость, плотно закрывают крышками и встряхивают, как описано в [разделе 9](#p100334).

###### <a id="p100389"></a>10.1.3.5 Подсчет числа бактерий или количества АТФ


###### <a id="p100390"></a>10.1.3.5.1 Основные положения

<a id="p100391"></a>Получают число бактерий или количество АТФ, как описано в [10.1.3.2](#p100383) и [10.1.3.4](#p100387), исходя из концентрации бактерий или концентрации АТФ, полученных в соответствии с [разделом 8](#p100304) согласно формулам, приведенным в 10.1.3.5.2 и [10.1.3.5.3](#p100397) соответственно.

###### <a id="p100392"></a>10.1.3.5.2 Число бактерий


<a id="p100393"></a>M = cB20,

<a id="p100394"></a>где M - число бактерий на образце;
<a id="p100395"></a>cB - концентрация бактерий, полученная по [8.1](#p100305);
<a id="p100396"></a>20 - объем встряхиваемого раствора, в миллилитрах (мл).

###### <a id="p100397"></a>10.1.3.5.3 Количество АТФ


<a id="p100398"></a>M' = cАТФ20,

<a id="p100399"></a>где M' - количество АТФ на образец;
<a id="p100400"></a>cАТФ - концентрация АТФ, полученная по [8.2](#p100314);
<a id="p100401"></a>20 - объем встряхиваемого раствора, в миллилитрах (мл).

##### <a id="p100402"></a>10.1.4 Результаты испытаний


###### <a id="p100403"></a>10.1.4.1 Оценка эффективности испытаний

<a id="p100404"></a>Если условия перечислений a), [b)](#p100406) и [c)](#p100407) или a), [b)](#p100406) и [d)](#p100408) удовлетворительны, то испытания можно признать эффективными. Если испытания признаны неэффективными, то испытания необходимо провести повторно.
<a id="p100405"></a>a) Посевной материал для испытаний по [10.1.1.4](#p100359) должен содержать от 1·105 до 3·105 КОЕ/мл, а концентрация АТФ должна быть от 1·10-9 до 3·10-9 моль/л.
<a id="p100406"></a>b) Различия в крайних значениях для трех контрольных полотен сразу же после заражения и после инкубации должны составлять lg <= 1.
<a id="p100407"></a>c) Уровень роста, полученный в соответствии со следующей формулой, должен быть более или равен 1 при использовании чашечного метода подсчета числа колоний.
<a id="p100408"></a>d) Уровень роста, полученный согласно следующей формуле, должен быть более или равен 0,5 при расчете методом люминесценции:

<a id="p100409"></a>F = lgCt - lgC<sub>0</sub>,

<a id="p100410"></a>где F - уровень роста на контрольном полотне;
<a id="p100411"></a>lgCt - средний десятичный логарифм числа бактерий или среднее количество АТФ, полученное от трех образцов для испытаний контрольного полотна после инкубации от 18 до 24 ч;
<a id="p100412"></a>lgC<sub>0</sub> - средний десятичный логарифм числа бактерий или среднее количество АТФ, полученное от трех образцов для испытаний контрольного полотна сразу же после заражения.

###### <a id="p100413"></a>10.1.4.2 Вычисление уровня антибактериальной активности

<a id="p100414"></a>Когда испытание признано эффективным, получают значение антибактериальной активности согласно следующей формуле:

<a id="p100415"></a>A = (lgCt - lgC<sub>0</sub>) - (lgTt - lgT<sub>0</sub>) = F - G,

<a id="p100416"></a>где A - значение антибактериальной активности;
<a id="p100417"></a>F - уровень роста на контрольном образце (F = lgCt - lgC<sub>0</sub>);
<a id="p100418"></a>G - уровень роста на образце, прошедшем антибактериальную обработку (G = lgTt - lgT0);
<a id="p100419"></a>lgTt - среднее значение десятичного логарифма от числа бактерий или среднее количество АТФ, полученное от трех образцов для испытаний полотен, прошедших антибактериальную обработку, после инкубации в течение 18 - 24 ч;
<a id="p100420"></a>lgT0 - среднее значение десятичного логарифма от числа бактерий или среднее количество АТФ, полученное от трех образцов для испытаний полотен, прошедших антибактериальную обработку, сразу же после посева.

###### <a id="p100421"></a>10.1.4.3 Протокол результатов испытаний

<a id="p100422"></a>Протокол должен содержать наименования бактерий, используемых для испытаний, номер штамма, концентрацию материала, используемого для заражения, значения антибактериальной активности, метод измерения числа бактерий и тип образца (на примере [таблиц 1](#p100425) и [2](#p100459)).
<a id="p100423"></a>Также записывают наименования и концентрации любых специальных нейтрализаторов, используемых для растворов при взбалтывании.

<a id="p100424"></a>Таблица 1

<a id="p100425"></a>*Пример* 1: Результаты испытаний
(значение антибактериальной активности методом абсорбции)


<table>
<colgroup><col width="42%"><col width="14%"><col width="14%"><col width="14%"><col width="14%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100426"></a>Наименование бактерий для испытаний (номер штамма)</td><td colspan="2"><a id="p100427"></a>Staphylococcus aureus<br>(ATCC 6538)</td><td colspan="2"><a id="p100428"></a>Klebsiella pneumoniae<br>(ATCC 4352)</td></tr>
<tr><td><a id="p100429"></a>Концентрация материала для заражения (КОЕ/мл)</td><td colspan="2"><a id="p100430"></a>1,2·105</td><td colspan="2"><a id="p100431"></a>1,1·105</td></tr>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100432"></a>Разница экстремальных значений для трех контрольных полотен (lg)</td><td><a id="p100433"></a>0 ч</td><td><a id="p100434"></a>20 ч</td><td><a id="p100435"></a>0 ч</td><td><a id="p100436"></a>20 ч</td></tr>
<tr><td><a id="p100437"></a>0,4</td><td><a id="p100438"></a>0,3</td><td><a id="p100439"></a>0,5</td><td><a id="p100440"></a>0,4</td></tr>
<tr><td><a id="p100441"></a>Значение роста F (F = lgCt - lgC<sub>0</sub>)</td><td colspan="2"><a id="p100442"></a>+2,7<br>(lgCt: +7,0; lgC<sub>0</sub>: +4,3)</td><td colspan="2"><a id="p100443"></a>+3,2<br>(lgCt: +7,5; lgC0: +4,3)</td></tr>
<tr><td><a id="p100444"></a>Значение роста G (G = lgTt - lgT<sub>0</sub>)</td><td colspan="2"><a id="p100445"></a>-1,0<br>(lgTt: +3,2; lgT<sub>0</sub>: +4,2)</td><td colspan="2"><a id="p100446"></a>+0,7<br>(lgTt: +4,9; lgT0: +4,2)</td></tr>
<tr><td><a id="p100447"></a>Значение антибактериальной активности (A = F - G)</td><td colspan="2"><a id="p100448"></a>3,7</td><td colspan="2"><a id="p100449"></a>2,5</td></tr>
<tr><td><a id="p100450"></a>Метод измерений</td><td colspan="4"><a id="p100451"></a>Чашечный метод подсчета числа колоний</td></tr>
<tr><td><a id="p100452"></a>Тип материала образцов</td><td colspan="4"><a id="p100453"></a>Носки<br>Хлопок 100%</td></tr>
<tr><td><a id="p100454"></a>Метод стерилизации</td><td colspan="4"><a id="p100455"></a>Автоклав</td></tr>
<tr><td><a id="p100456"></a>Время инкубации</td><td colspan="4"><a id="p100457"></a>20 ч</td></tr>
</table>


<a id="p100458"></a>Таблица 2

<a id="p100459"></a>*Пример* 2: Результаты испытаний
(значение антибактериальной активности методом абсорбции)


<table>
<colgroup><col width="42%"><col width="14%"><col width="14%"><col width="14%"><col width="14%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100460"></a>Наименование бактерий для испытаний (номер штамма)</td><td colspan="2"><a id="p100461"></a>Staphylococcus aureus<br>(ATCC 6538)</td><td colspan="2"><a id="p100462"></a>Klebsiella pneumoniae<br>(ATCC 4352)</td></tr>
<tr><td><a id="p100463"></a>Концентрация материала для заражения (моль/л)</td><td colspan="2"><a id="p100464"></a>1,2·10-9</td><td colspan="2"><a id="p100465"></a>1,9·10-9</td></tr>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100466"></a>Разница экстремальных значений для трех контрольных полотен (lg)</td><td><a id="p100467"></a>0 ч</td><td><a id="p100468"></a>20 ч</td><td><a id="p100469"></a>0 ч</td><td><a id="p100470"></a>20 ч</td></tr>
<tr><td><a id="p100471"></a>0,5</td><td><a id="p100472"></a>0,6</td><td><a id="p100473"></a>0,5</td><td><a id="p100474"></a>0,4</td></tr>
<tr><td><a id="p100475"></a>Значение роста F (F = lgCt - lgC<sub>0</sub>)</td><td colspan="2"><a id="p100476"></a>+1,7<br>(lgCt: -11,0; lgC<sub>0</sub>: -12,7)</td><td colspan="2"><a id="p100477"></a>+2,1<br>(lgCt: -10,4; lgC0: -12,5)</td></tr>
<tr><td><a id="p100478"></a>Значение роста G (G = lgTt - lgT<sub>0</sub>)</td><td colspan="2"><a id="p100479"></a>-0,8<br>(lgTt: -13,6; lgT<sub>0</sub>: -12,8)</td><td colspan="2"><a id="p100480"></a>-0,1<br>(lgTt: -12,6; lgT0: -12,5)</td></tr>
<tr><td><a id="p100481"></a>Значение антибактериальной активности (A = F - G)</td><td colspan="2"><a id="p100482"></a>2,5</td><td colspan="2"><a id="p100483"></a>2,2</td></tr>
<tr><td><a id="p100484"></a>Метод измерений</td><td colspan="4"><a id="p100485"></a>Метод люминесценции</td></tr>
<tr><td><a id="p100486"></a>Тип материала образцов</td><td colspan="4"><a id="p100487"></a>Занавеска<br>Полиэфир 100%</td></tr>
<tr><td><a id="p100488"></a>Метод стерилизации</td><td colspan="4"><a id="p100489"></a>Газ этиленоксид</td></tr>
<tr><td><a id="p100490"></a>Время инкубации</td><td colspan="4"><a id="p100491"></a>20 ч</td></tr>
</table>



#### <a id="p100492"></a>10.2 Метод переноса



##### <a id="p100493"></a>10.2.1 Приготовление посевного материала для испытаний


###### <a id="p100494"></a>10.2.1.1 Инкубация штамма для испытаний

<a id="p100495"></a>Получают штамм из основной культуры, находящейся на хранении, используя бактериальную петлю, высевая штрихом на чашку с триптонсоевым агаром TSA (см. [6.3](#p100092)). Чашку Петри инкубируют при температуре (37 +/- 2) °C в течение 18 - 24 ч. После инкубации колонию отбирают с чашки и высевают штрихом на другую чашку с триптонсоевым агаром TSA. Вновь инкубируют при температуре (37 +/- 2) °C в течение 18 - 24 ч.
<a id="p100496"></a>*Примечание* - При втором пересеве создается рабочая культура.

<a id="p100497"></a>Когда выращивание не может быть выполнено в течение одного дня, для последующего заражения можно использовать 48-часовую культуру бактерий, которая инкубируется в термостате (см. [5.2](#p100050)) в течение 48 ч. В этом случае необходимо предварительно приготовить для испытаний новую 24-часовую субкультуру. Четвертая субкультура при этом не должна использоваться.

###### <a id="p100498"></a>10.2.1.2 Приготовление посевного материала для испытаний

<a id="p100499"></a>Отбирают колонию со второго пересева на триптонсоевом агаре TSA, используя бактериальную петлю, и вносят ее в пептонно-солевой раствор (см. [6.6](#p100127)) и тщательно перемешивают вихревым миксером (см. [5.4](#p100052)). Создают концентрацию бактерий от 1·108 до 3·108 КОЕ/мл или концентрацию АТФ от 2·10-7 до 6·10-7 моль/л, используя пептонно-солевой раствор (см. [6.6](#p100127)), с помощью метода абсорбции или люминесцентного метода. Разводят посевной материал до концентрации от 1·106 до 3·106 КОЕ/мл или до концентрации АТФ от 2·10-9 до 6·10-9 моль/л, используя для разведения пептонно-солевой раствор (см. [6.6](#p100127)). Конечное число бактерий проверяют методом, описанным в [разделе 8](#p100304).

##### <a id="p100500"></a>10.2.2 Приготовление образцов для испытаний

<a id="p100501"></a>Используя лекало (см. [5.21](#p100069)), вырезают испытуемые образцы диаметром 3,8 см.
<a id="p100502"></a>Испытуемые образцы не должны содержать швов, кромок, вышивки, крепежа и т.п.
<a id="p100503"></a>Необходимо иметь достаточное число образцов для испытаний, вырезанных для одной партии без швов и наметок (минимум 0,5 м2), чтобы можно было провести повторные испытания.
<a id="p100504"></a>Если необходимо, то испытуемые образцы могут быть выстираны по методу, изложенному в ИСО 6330, или другому соответствующему методу. После окончания стирки образцы ополаскивают водой для удаления моющих средств. Использование любых неспецифичных методов должно быть отражено в протоколе испытаний.
<a id="p100505"></a>При необходимости испытуемые образцы могут быть стерилизованы в автоклаве, газом этилен оксидом, гамма-лучами или другим подходящим методом. Использование любых неспецифичных методов должно быть отражено в протоколе испытаний.

##### <a id="p100506"></a>10.2.3 Проведение испытания


###### <a id="p100507"></a>10.2.3.1 Нанесение посевного материала на чашки

<a id="p100508"></a>Приготавливают 12 чашек с агаровой средой для переноса (см. [6.4](#p100105)). Инокулируют 1 мл посевного материала по [10.2.1.2](#p100498) на агар, распределяют посевной материал по всей поверхности агара, покачивая чашку из стороны в сторону, чтобы полностью заполнить поверхность агара. Избыточную жидкость отсасывают. Для полного впитывания посевного материала в агар чашки оставляют стоять на лабораторном столе в течение (300 +/- 30) с.

###### <a id="p100509"></a>10.2.3.2 Перенос на образец

<a id="p100510"></a>Приготавливают три образца для испытаний контрольного полотна и три образца с антибактериальной обработкой для использования сразу же после переноса и после инкубации соответственно. Каждый образец выкладывают на поверхность агара по [10.2.3.1](#p100507) и ставят сверху 200-граммовый цилиндр из нержавеющей стали (см. [5.24](#p100072)) на (60 +/- 5) с. Каждый образец переносят в чашки Петри (см. [5.17](#p100065)) диаметром 55 - 60 мм таким образом, чтобы сторона, на которую перенесен посевной материал, была расположена сверху. Проводят инкубацию в камере влажности (см. [5.8](#p100056)) в течение 18 - 24 ч при температуре (37 +/- 2) °C.

###### <a id="p100511"></a>10.2.3.3 Встряхивание после переноса

<a id="p100512"></a>Сразу после переноса каждый образец помещают в стерильный мешочек или в колбу, содержащие 20 мл нейтрализующего раствора (см. [6.10](#p100165)), и встряхивают, как описано в [разделе 9](#p100334).

###### <a id="p100513"></a>10.2.3.4 Встряхивание после инкубации

<a id="p100514"></a>После инкубации каждый образец помещают в стерильный мешочек или в колбу, содержащие 20 мл нейтрализующего раствора (см. [6.10](#p100165)), и встряхивают, как описано в [разделе 9](#p100334).

###### <a id="p100515"></a>10.2.3.5 Подсчет числа бактерий или количества АТФ


###### <a id="p100516"></a>10.2.3.5.1 Основные положения

<a id="p100517"></a>Вычисляют число бактерий или количество АТФ, как описано в [10.2.3.2](#p100509) и [10.2.3.4](#p100513), исходя из концентрации бактерий или концентрации АТФ, полученных по [разделу 8](#p100304), согласно формулам, приведенным в 10.2.3.5.2 и [10.2.3.5.3](#p100523) соответственно.

###### <a id="p100518"></a>10.2.3.5.2 Число бактерий


<a id="p100519"></a>M = cB·20,

<a id="p100520"></a>где M - число бактерий в образце;
<a id="p100521"></a>cB - концентрация бактерий, полученная по [8.1](#p100305);
<a id="p100522"></a>20 - объем встряхивавшегося раствора, в миллилитрах (мл).

###### <a id="p100523"></a>10.2.3.5.3 Количество АТФ


<a id="p100524"></a>M' = cАТФ·20,

<a id="p100525"></a>где M' - количество АТФ в образце;
<a id="p100526"></a>cАТФ - концентрация АТФ, полученная по [8.2](#p100314);
<a id="p100527"></a>20 - объем встряхивавшегося раствора, в миллилитрах (мл).

##### <a id="p100528"></a>10.2.4 Результаты испытаний


###### <a id="p100529"></a>10.2.4.1 Оценка эффективности испытаний

<a id="p100530"></a>Если условия перечислений a), [b)](#p100532) и [c)](#p100533) или a), [b)](#p100532) и [d)](#p100534) удовлетворительны, испытания можно признать эффективными. Если испытания признаны неэффективными, испытания необходимо провести повторно.
<a id="p100531"></a>a) Посевной материал для испытаний по [10.2.1.2](#p100498) должен содержать от 1·106 до 3·106 КОЕ/мл, а концентрация АТФ должна быть от 2·10-9 до 6·10-9 моль/л.
<a id="p100532"></a>b) Различия в крайних значениях для трех контрольных полотен сразу же после заражения и после инкубации должны составлять lg не более 1.
<a id="p100533"></a>c) Уровень роста, полученный в соответствии со следующей формулой, должен быть более и равен 1 при использовании чашечного метода подсчета числа колоний.
<a id="p100534"></a>d) Уровень роста, полученный согласно следующей формуле, должен быть более и равен 0,5 при использовании метода люминесценции:

<a id="p100535"></a>F = lgCt - lgC<sub>0</sub>,

<a id="p100536"></a>где F - уровень роста на контрольном полотне;
<a id="p100537"></a>lgCt - средний десятичный логарифм числа бактерий или среднее количество АТФ, полученное от трех образцов для испытаний контрольного полотна после инкубации в течение 18 - 24 ч;
<a id="p100538"></a>lgC<sub>0</sub> - средний десятичный логарифм числа бактерий или среднее количество АТФ, полученное от трех образцов для испытаний контрольного полотна сразу же после переноса на контрольное полотно.

###### <a id="p100539"></a>10.2.4.2 Вычисление значения антибактериальной активности

<a id="p100540"></a>Когда испытание признано эффективным, получают значение антибактериальной активности согласно следующей формуле:

<a id="p100541"></a>A = (lgCt - lgC<sub>0</sub>) - (lgTt - lgT<sub>0</sub>) = F - G,

<a id="p100542"></a>где A - значение антибактериальной активности;
<a id="p100543"></a>F - уровень роста на контрольном образце (F = lgCt - lgC<sub>0</sub>);
<a id="p100544"></a>G - уровень роста на образце, прошедшем антибактериальную обработку (G = lgTt - lgT0);
<a id="p100545"></a>lgTt - среднее значение десятичного логарифма от числа бактерий или среднее количество АТФ, полученное от трех образцов для испытаний полотен, прошедших антибактериальную обработку, после инкубации в течение 18 - 24 ч;
<a id="p100546"></a>lgT0 - среднее значение десятичного логарифма от числа бактерий или среднее количество АТФ, полученное от трех образцов для испытаний полотен, прошедших антибактериальную обработку, сразу же после переноса.

###### <a id="p100547"></a>10.2.4.3 Протокол результатов испытаний

<a id="p100548"></a>Протокол должны содержать наименования бактерий, используемых для испытаний, номер штамма, число перенесенных бактерий, значения антибактериальной активности, метод измерения числа бактерий и тип образца (на примере [таблиц 3](#p100551) и [4](#p100590)).
<a id="p100549"></a>Также записывают наименования и концентрации любых специальных нейтрализаторов, используемых для растворов при взбалтывании.

<a id="p100550"></a>Таблица 3

<a id="p100551"></a>*Пример* 1: Результаты испытаний
(значение антибактериальной активности для метода переноса)


<table>
<colgroup><col width="42%"><col width="14%"><col width="14%"><col width="14%"><col width="14%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100552"></a>Наименование бактерий для испытаний (номер штамма)</td><td colspan="2"><a id="p100553"></a>Staphylococcus aureus<br>(ATCC 6538)</td><td colspan="2"><a id="p100554"></a>Klebsiella pneumoniae<br>(ATCC 4352)</td></tr>
<tr><td><a id="p100555"></a>Концентрация посевного материала (КОЕ/мл)</td><td colspan="2"><a id="p100556"></a>2,2·106</td><td colspan="2"><a id="p100557"></a>1,1·106</td></tr>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100558"></a>Разница экстремальных значений для трех контрольных полотен (lg)</td><td><a id="p100559"></a>0 ч</td><td><a id="p100560"></a>22 ч</td><td><a id="p100561"></a>0 ч</td><td><a id="p100562"></a>22 ч</td></tr>
<tr><td><a id="p100563"></a>0,3</td><td><a id="p100564"></a>0,4</td><td><a id="p100565"></a>0,2</td><td><a id="p100566"></a>0,3</td></tr>
<tr><td><a id="p100567"></a>Значение роста F (F = lgCt - lgC<sub>0</sub>)</td><td colspan="2"><a id="p100568"></a>+2,9<br>(lgCt: +8,5; lgC<sub>0</sub>: +5,6)</td><td colspan="2"><a id="p100569"></a>+2,7<br>(lgCt: +8,1; lgC0: +5,4)</td></tr>
<tr><td><a id="p100570"></a>Значение роста G (G = lgTt - lgT<sub>0</sub>)</td><td colspan="2"><a id="p100571"></a>-1,7<br>(lgTt: +3,8; lgT<sub>0</sub>: +5,5)</td><td colspan="2"><a id="p100572"></a>-2,5<br>(lgTt: +2,8; lgT0: +5,3)</td></tr>
<tr><td><a id="p100573"></a>Значение антибактериальной активности (A = F - G)</td><td colspan="2"><a id="p100574"></a>4,6</td><td colspan="2"><a id="p100575"></a>5,2</td></tr>
<tr><td><a id="p100576"></a>Метод измерений</td><td colspan="4"><a id="p100577"></a>Чашечный метод подсчета числа колоний</td></tr>
<tr><td><a id="p100578"></a>Тип материала образцов</td><td colspan="4"><a id="p100579"></a>Носки<br>Хлопок 100%</td></tr>
<tr><td><a id="p100580"></a>Метод стерилизации</td><td colspan="4"><a id="p100581"></a>Автоклав</td></tr>
<tr><td><a id="p100582"></a>Время инкубации</td><td colspan="4"><a id="p100583"></a>22 ч</td></tr>
</table>



#### <a id="p100584"></a>10.3 Метод отпечатков



##### <a id="p100585"></a>10.3.1 Инкубация и приготовление посевного материала для испытаний


###### <a id="p100586"></a>10.3.1.1 Инкубация A

<a id="p100587"></a>Проводят отбор бактерий, находящихся в контейнере на хранении, используя бактериальную петлю. Культуру бактерий высевают штрихом на агар для подсчета (см. [6.11](#p100184)) EA и проводят инкубацию при температуре (37 +/- 2) °C в течение 24 - 48 ч.
<a id="p100588"></a>*Примечание* - Чашки хранят при температуре 5 °C - 10 °C и используют не позднее чем через 1 неделю после приготовления.

<a id="p100589"></a>Таблица 4

<a id="p100590"></a>*Пример* 2: Результаты испытаний
(значение антибактериальной активности для метода переноса)


<table>
<colgroup><col width="42%"><col width="14%"><col width="14%"><col width="14%"><col width="14%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100591"></a>Наименование бактерий для испытаний (номер штамма)</td><td colspan="2"><a id="p100592"></a>Staphylococcus aureus<br>(ATCC 6538)</td><td colspan="2"><a id="p100593"></a>Klebsiella pneumoniae<br>(ATCC 4352)</td></tr>
<tr><td><a id="p100594"></a>Концентрация посевного материала (моль/л)</td><td colspan="2"><a id="p100595"></a>3,2·10-9</td><td colspan="2"><a id="p100596"></a>4,9·10-9</td></tr>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100597"></a>Разница экстремальных значений для трех контрольных полотен (lg)</td><td><a id="p100598"></a>0 ч</td><td><a id="p100599"></a>22 ч</td><td><a id="p100600"></a>0 ч</td><td><a id="p100601"></a>22 ч</td></tr>
<tr><td><a id="p100602"></a>0,5</td><td><a id="p100603"></a>0,6</td><td><a id="p100604"></a>0,4</td><td><a id="p100605"></a>0,3</td></tr>
<tr><td><a id="p100606"></a>Значение роста F (F = lgCt - lgC<sub>0</sub>)</td><td colspan="2"><a id="p100607"></a>+3,1<br>(lgCt: -9,1; lgC<sub>0</sub>: -12,2)</td><td colspan="2"><a id="p100608"></a>+2,6<br>(lgCt: -9,4; lgC0: -12,0)</td></tr>
<tr><td><a id="p100609"></a>Значение роста G (G = lgTt - lgT<sub>0</sub>)</td><td colspan="2"><a id="p100610"></a>-2,2<br>(lgTt: -14,5; lgT<sub>0</sub>: -12,3)</td><td colspan="2"><a id="p100611"></a>-2,2<br>(lgTt: -14,1; lgT0: -11,9)</td></tr>
<tr><td><a id="p100612"></a>Значение антибактериальной активности (A = F - G)</td><td colspan="2"><a id="p100613"></a>5,3</td><td colspan="2"><a id="p100614"></a>4,8</td></tr>
<tr><td><a id="p100615"></a>Метод измерений</td><td colspan="4"><a id="p100616"></a>Метод люминесценции</td></tr>
<tr><td><a id="p100617"></a>Тип материала образцов</td><td colspan="4"><a id="p100618"></a>Занавеска<br>Полиэфир 100%</td></tr>
<tr><td><a id="p100619"></a>Тип нейтрализующего агента, добавленного по <a href="#p100165">6.10</a><br>Концентрация</td><td colspan="4"><a id="p100620"></a>Лецитин яичного желтка<br>0,5% общего объема</td></tr>
<tr><td><a id="p100621"></a>Метод стерилизации</td><td colspan="4"><a id="p100622"></a>$\gamma - \text{лучи}$</td></tr>
<tr><td><a id="p100623"></a>Время инкубации</td><td colspan="4"><a id="p100624"></a>22 ч</td></tr>
</table>



###### <a id="p100625"></a>10.3.1.2 Инкубация B

<a id="p100626"></a>В коническую колбу Эрленмейера объемом 100 мл наливают 20 мл питательного бульона (см. [6.5](#p100118)). Бактериальной петлей берут одну колонию с чашки с агаром EA (инкубация A), как описано в [10.3.1.1](#p100586), и проводят посев в бульон. Инкубацию проводят в следующих условиях:
- <a id="p100627"></a>температура: (37 +/- 2) °C;
- <a id="p100628"></a>степень встряхивания: 110 мин-1 с амплитудой 3 см;
- <a id="p100629"></a>время инкубации: 18 - 24 ч.

###### <a id="p100630"></a>10.3.1.3 Инкубация C

<a id="p100631"></a>В коническую колбу Эрленмейера объемом 100 мл наливают 20 мл питательного бульона [(6.5)](#p100118), в который затем вносят 0,4 мл из инкубации B, как описано в [10.3.1.2](#p100625). Данная взвесь содержит от 1·108 до 3·108 КОЕ/мл или АТФ в концентрации от 1·10-6 до 3·10-6 моль/л.
<a id="p100632"></a>Инкубацию осуществляют в следующих условиях:
- <a id="p100633"></a>температура: (37 +/- 2) °C;
- <a id="p100634"></a>степень встряхивания: 110 мин-1 с амплитудой 3 см;
- <a id="p100635"></a>время инкубации: (3 +/- 1) ч.
<a id="p100636"></a>Целью выращивания является получение количества КОЕ, равного 107 КОЕ/мл или концентрации АТФ, равной 10-7 моль/л после инкубации.
<a id="p100637"></a>*Примечание* - Подготовленный материал для посева хранят на льду для охлаждения и используют в течение 8 ч.


###### <a id="p100638"></a>10.3.1.4 Приготовление посевного материала для испытаний

<a id="p100639"></a>Используя метод абсорбции, приготавливают бактериальную взвесь, содержащую от 1·107 до 3·107 КОЕ/мл, или методом люминесценции достигают концентрации АТФ, равной от 1·10-7 до 3·10-7 моль/л, используя 20-кратные разведения питательного бульона (см. [6.5](#p100118)) при комнатной температуре.
<a id="p100640"></a>*Примечание* - Приготовленный материал для посева хранят на льду для охлаждения и используют в течение 4 ч.


##### <a id="p100641"></a>10.3.2 Предварительная обработка образцов для испытаний


###### <a id="p100642"></a>10.3.2.1 Подготовка образцов для испытаний

<a id="p100643"></a>Берут шесть образцов контрольного полотна и шесть образцов с антибактериальной обработкой и с каждого образца вырезают куски площадью 60 мм2.
<a id="p100644"></a>Если необходимо, то испытуемые образцы стирают по методу, изложенному в ИСО 6330, или другому соответствующему способу, и затем образцы ополаскивают водой для удаления моющих средств. Использование других неспецифичных методов обработки должно быть отражено в протоколе испытаний.
<a id="p100645"></a>*Примечание* - Три контрольных образца и три образца с антибактериальной обработкой используют для подсчета числа бактерий сразу же после отпечатывания бактерий для испытаний. Оставшиеся образцы используют для подсчета числа бактерий после инкубации.


###### <a id="p100646"></a>10.3.2.2 Стерилизация образцов для испытаний

<a id="p100647"></a>Образцы помещают в чашки Петри (см. [5.17](#p100065)), которые накрывают алюминиевой фольгой, и стерилизуют в автоклаве при температуре 121 °C и давлении 103 кПа в течение 15 - 20 мин. После стерилизации фольгу удаляют и размещают образцы на чистом лабораторном столе (см. [5.6](#p100054)) или в другом месте, исключающем риск контаминации образца воздухом, и сушат в течение 60 мин и более.
<a id="p100648"></a>Если автоклавирование невозможно, то стерилизацию проводят газом этиленоксидом, гамма-лучами или другим подходящим методом. При этом использование альтернативных методов должно быть отражено в протоколе испытаний.

###### <a id="p100649"></a>10.3.2.3 Регуляция влажности образцов для испытаний

<a id="p100650"></a>10 мл агара наливают в чашку Петри (см. [5.17](#p100065)) для получения отпечатков (см. [6.12](#p100197)). Открытую чашку кладут на чистый лабораторный стол (см. [5.6](#p100054)) для охлаждения и затвердевания. Охлаждают до комнатной температуры, предотвращая образование конденсата. Когда агар затвердеет, переворачивают чашку вверх дном. Образец помещают внутри чашки и регулируют влажность образца в течение 18 - 24 ч.

##### <a id="p100651"></a>10.3.3 Проведение испытания


###### <a id="p100652"></a>10.3.3.1 Фильтрация бактерий

<a id="p100653"></a>В фильтровальный аппарат, стерилизованный автоклавированием, помещают мембранный фильтр и устанавливают на лабораторном столе (см. [5.6](#p100054)).
<a id="p100654"></a>Наливают 5 мл питательного бульона (см. [6.5](#p100118)), разведенного предварительно 20 раз, на мембранный фильтр и добавляют 2 мл посевного материала для испытаний, приготовленного в соответствии с [10.3.1.4](#p100638). Проводят фильтрацию методом аспирации. Аспирацию (отсасывание) продолжают еще примерно в течение 1 мин, после того как исчезнет жидкость с мембранного фильтра.
<a id="p100655"></a>*Примечание* 1 - Стерилизацию мембранного фильтра не проводят в связи с тем, что после его стерилизации изменяют размеры пор.
<a id="p100656"></a>*Примечание* 2 - Шлаковое стекло или покрытую тефлоном сетку располагают под мембранным фильтром при использовании фильтровального аппарата. Для отсасывания используют маленький воздушный насос.


###### <a id="p100657"></a>10.3.3.2 Отпечатывание тестовых бактерий

<a id="p100658"></a>10.3.3.2.1 С помощью стерильного пинцета (см. [5.23](#p100071)) удаляют мембранный фильтр, на который были собраны тестовые бактерии, с фильтровального аппарата и помещают его на вращающийся столик аппарата для отпечатков (см. [5.10](#p100058)) стороной с бактериями сверху, как показано на рисунке 1.
<a id="p100659"></a>10.3.3.2.2 Образец (см. [10.3.2.3](#p100649)) извлекают из чашки Петри (см. [5.17](#p100065)), используя стерильный пинцет (см. [5.23](#p100071)), и кладут на мембранный фильтр лицевой стороной вниз.
<a id="p100660"></a>10.3.3.2.3 На весовую плату помещают груз и отпечатывают бактерии с мембранного фильтра на образец, используя вращение столика на 180° в одном направлении в течение 3 с.
<a id="p100661"></a>10.3.3.2.4 Немедленно после получения отпечатка образец переносят в чашку Петри, содержащую агар по [10.3.2.3](#p100649). Образец с отпечатанной поверхностью располагают лицевой стороной вверх и помещают в термостат на 1 - 4 ч (см. [5.2](#p100050)).

###### <a id="p100662"></a>10.3.3.3 Инкубационные испытания

<a id="p100663"></a>Проводят инкубацию образца с отпечатками бактерий в чашке Петри по [10.3.3.2.4](#p100661) в инкубаторе (см. [5.2](#p100050)) с кондиционированием при температуре (20 +/- 2) °C и относительной влажности 70% и более в течение (1,0 +/- 0,1) ч, (2,0 +/- 0,1) ч, (3,0 +/- 0,1) ч или (4,0 +/- 0,1) ч. Время инкубации определяют исходя из специфики требований и условий испытаний. Время инкубации записывают в протоколе испытаний.

<a id="p100664"></a> ![10.3 Метод отпечатков](https://i.bukva.ai/UMZ1hHrG/img_0.png) 

<a id="p100665"></a>Примечание - Рисунок иллюстрирует проекцию (сторону) аппарата для получения отпечатков (см. [5.10](#p100058)). Внешние размеры (высота 170 мм, ширина 160 мм, глубина 150 мм).

<a id="p100666"></a>1 - груз массой 17 кг; 2 - весовая плата; 3 - силиконовая
резинка (диаметр 42 мм); 4 - образец (диаметр 60 мм);
5 - мембранный фильтр (диаметр 47 мм); 6 - вращающийся
столик (диаметр 54 мм) (вращение против часовой стрелки).

<a id="p100667"></a>Рисунок 1 - Аппарат для получения отпечатков <1>


<a id="p100668"></a>

---

<a id="p100669"></a><1> Данный аппарат доступен в Aloka Co., Ltd., 6-22-1, Mure, Mitaka-shi, Tokyo 181-8622, Japan.
<a id="p100670"></a>Данная информация приведена для удобства пользователей настоящим стандартом и не используется комитетом ИСО в качестве рекламы данного прибора.


###### <a id="p100671"></a>10.3.3.4 Встряхивание после отпечатывания

<a id="p100672"></a>Сразу же после получения отпечатков переносят каждый образец контрольного полотна по [10.3.3.2](#p100657) в емкость, содержащую 20 мл среды SCDLP (см. [6.8](#p100141)), и встряхивают бактерии с каждого образца, как описано в [разделе 9](#p100334).

###### <a id="p100673"></a>10.3.3.5 Встряхивание после инкубации

<a id="p100674"></a>После инкубации переносят каждый образец по [10.3.3.3](#p100662) в емкость, содержащую 20 мл среды SCDLP (см. [6.8](#p100141)), и встряхивают бактерии с каждого образца, как описано в [разделе 9](#p100334).

###### <a id="p100675"></a>10.3.3.6 Расчет числа бактерий или количества АТФ


###### <a id="p100676"></a>10.3.3.6.1 Основные положения

<a id="p100677"></a>Получают число бактерий или количество АТФ по [10.3.3.4](#p100671) и [10.3.3.5](#p100673), исходя из концентрации бактерий или АТФ концентрации, полученных в соответствии с [разделом 8](#p100304) согласно формулам, приведенным в 10.3.3.6.2 и [10.3.3.3.6.3](#p100683).

###### <a id="p100678"></a>10.3.3.6.2 Число бактерий


<a id="p100679"></a>M = cB20,

<a id="p100680"></a>где M - число бактерий на образце;
<a id="p100681"></a>cB - концентрация бактерий, полученная по [8.1](#p100305);
<a id="p100682"></a>20 - объем встряхиваемого раствора, в миллилитрах (мл).

###### <a id="p100683"></a>10.3.3.6.3 Количество АТФ


<a id="p100684"></a>M' = cАТФ20,

<a id="p100685"></a>где M' - количество АТФ на образец;
<a id="p100686"></a>cАТФ - концентрация АТФ, полученная по [8.2](#p100314);
<a id="p100687"></a>20 - объем встряхиваемого раствора, в миллилитрах (мл).

##### <a id="p100688"></a>10.3.4 Результаты испытаний


###### <a id="p100689"></a>10.3.4.1 Оценка эффективности испытаний

<a id="p100690"></a>Испытания можно признать эффективными при удовлетворении условий следующих двух перечислений. При невыполнении условий любого из этих перечислений испытания признают неэффективными и проводят повторные исследования.
<a id="p100691"></a>a) Число бактерий для испытаний, отпечатанное на контрольном полотне, должно быть не менее чем 1,0·106 КОЕ, а количество АТФ должно составлять не менее чем 1,0·10-11 моль.
<a id="p100692"></a>b) Показатель уменьшения или увеличения числа бактерий на контрольном образце F, полученный в соответствии с нижеследующей формулой, должен составлять от +0,5 до (-0,5).

<a id="p100693"></a>F = lgCt - lgC<sub>0</sub>,

<a id="p100694"></a>где F - уровень увеличения/уменьшения на контрольном полотне;
<a id="p100695"></a>lgCt - среднее значение десятичного логарифма от числа бактерий или среднее количество АТФ, полученное от трех образцов для испытаний контрольного полотна после инкубации в течение 1 - 4 ч;
<a id="p100696"></a>lgC<sub>0</sub> - среднее значение десятичного логарифма от числа бактерий, или среднее количество АТФ, полученное от трех образцов для испытаний контрольного полотна сразу же после получения отпечатков.
<a id="p100697"></a>10.<sub>3</sub>.4.2 Вычисление уровня антибактериальной активности
<a id="p100698"></a>Если испытание проведено эффективно, то уровень антибактериальной активности вычисляют по следующей формуле:

<a id="p100699"></a>A = lgCt - lgTt,

<a id="p100700"></a>где A - значение антибактериальной активности;
<a id="p100701"></a>lgCt - значение среднего десятичного логарифма от числа бактерий или среднее количество АТФ, полученное от трех образцов для испытаний контрольного полотна после инкубации в течение 1 - 4 ч;
<a id="p100702"></a>lgTt - значение среднего десятичного логарифма от числа бактерий или среднее количество АТФ, полученное от трех образцов для испытаний полотен, прошедших антибактериальную обработку, после инкубации в течение 1 - 4 ч.

###### <a id="p100703"></a>10.3.4.3 Протокол результатов испытаний

<a id="p100704"></a>Протокол должен содержать наименования бактерий, используемых для испытаний, номер штамма, число перенесенных бактерий, уровень антибактериальной активности, метод измерения числа бактерий и тип образца (на примере [таблиц 5](#p100707) и [6](#p100729)).
<a id="p100705"></a>Также записывают наименования и концентрации любых специальных нейтрализаторов, используемых для растворов при взбалтывании.

<a id="p100706"></a>Таблица 5

<a id="p100707"></a>*Пример* 1: Результаты испытаний (значение антибактериальной
активности, полученное методом печати)


<table>
<colgroup><col width="42%"><col width="29%"><col width="29%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100708"></a>Наименование бактерий для испытаний (номер штамма)</td><td><a id="p100709"></a>Staphylococcus aureus<br>(ATCC 6538)</td><td><a id="p100710"></a>Klebsiella pneumoniae<br>(ATCC 4352)</td></tr>
<tr><td><a id="p100711"></a>Число бактерий на фильтре (КОЕ)</td><td><a id="p100712"></a>3,0·107</td><td><a id="p100713"></a>3,6·107</td></tr>
<tr><td><a id="p100714"></a>Число бактерий на контрольном полотне сразу же после отпечатывания (КОЕ)</td><td><a id="p100715"></a>4,2·106</td><td><a id="p100716"></a>6,4·106</td></tr>
<tr><td><a id="p100717"></a>Уровень антибактериальной активности (A = lgCt - lgTt)</td><td><a id="p100718"></a>1,7<br>(lgCt: +6,7; lgTt: +5,0)</td><td><a id="p100719"></a>1,1<br>(lgCt: +6,7; lgTt: +5,6)</td></tr>
<tr><td><a id="p100720"></a>Метод измерений</td><td colspan="2"><a id="p100721"></a>Чашечный метод подсчета количества колоний на агаре</td></tr>
<tr><td><a id="p100722"></a>Тип материала образцов</td><td colspan="2"><a id="p100723"></a>Занавеска<br>Полиэфир 100%</td></tr>
<tr><td><a id="p100724"></a>Метод стерилизации</td><td colspan="2"><a id="p100725"></a>Автоклав</td></tr>
<tr><td><a id="p100726"></a>Время инкубации</td><td colspan="2"><a id="p100727"></a>4 ч</td></tr>
</table>


<a id="p100728"></a>Таблица 6

<a id="p100729"></a>*Пример* 2: Результаты испытаний (значение антибактериальной
активности, полученное методом печати)


<table>
<colgroup><col width="42%"><col width="29%"><col width="29%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100730"></a>Наименование бактерий для испытаний (номер штамма)</td><td><a id="p100731"></a>Staphylococcus aureus<br>(ATCC 6538)</td><td><a id="p100732"></a>Klebsiella pneumoniae<br>(ATCC 4352)</td></tr>
<tr><td><a id="p100733"></a>Количество АТФ на фильтре (моль)</td><td><a id="p100734"></a>2,9·10-10</td><td><a id="p100735"></a>1,7·10-10</td></tr>
<tr><td><a id="p100736"></a>Количество АТФ на контрольном полотне сразу же после отпечатывания (моль)</td><td><a id="p100737"></a>4,0·10-11</td><td><a id="p100738"></a>3,0·10-11</td></tr>
<tr><td><a id="p100739"></a>Уровень антибактериальной активности (A = lgCt - lgTt)</td><td><a id="p100740"></a>1,7<br>(lgCt: -10,4; lgTt: -12,1)</td><td><a id="p100741"></a>1,1<br>(lgCt: -10,6; lgTt: -11,7)</td></tr>
<tr><td><a id="p100742"></a>Метод измерений</td><td colspan="2"><a id="p100743"></a>Люминесцентный метод</td></tr>
<tr><td><a id="p100744"></a>Тип материала образцов</td><td colspan="2"><a id="p100745"></a>Занавеска<br>Полиэфир 100%</td></tr>
<tr><td><a id="p100746"></a>Метод стерилизации</td><td colspan="2"><a id="p100747"></a>Газ этиленоксид</td></tr>
<tr><td><a id="p100748"></a>Время инкубации</td><td colspan="2"><a id="p100749"></a>2 ч</td></tr>
</table>






<a id="p100750"></a>Приложение ДА
(справочное)

<a id="p100751"></a>**СВЕДЕНИЯ О СООТВЕТСТВИИ ССЫЛОЧНЫХ МЕЖДУНАРОДНЫХ СТАНДАРТОВ**
**НАЦИОНАЛЬНЫМ СТАНДАРТАМ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ**

<a id="p100752"></a>Таблица ДА.1


<table>
<colgroup><col width="25%"><col width="12%"><col width="63%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100753"></a>Обозначение ссылочного международного стандарта</td><td><a id="p100754"></a>Степень соответствия</td><td><a id="p100755"></a>Обозначение и наименование соответствующего национального стандарта</td></tr>
<tr><td><a id="p100756"></a>ИСО 6330</td><td><a id="p100757"></a>IDT</td><td><a id="p100758"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-6330-2009">ГОСТ Р ИСО 6330-2009</a> "Материалы текстильные. Методы домашней стирки и сушки для испытаний"</td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p100759"></a><a id="p100760"></a>Примечание - В настоящей таблице использовано следующее условное обозначение степени соответствия стандартов:<br>- IDT - идентичные стандарты.</td></tr>
</table>







## <a id="p100761"></a>БИБЛИОГРАФИЯ



| <a id="p100762"></a>[1] |  | <a id="p100763"></a>Guide to the expression of uncertainty in measurement (GUM), BIPM, IEC, IFCC, ISO, IUPAC, IUPAP, OIML, 19932) (Руководство по выявлению неопределенности в измерениях) |
| --- | --- | --- |
| <a id="p100764"></a>[2] | <a id="p100765"></a>ИСО 5725-1 | <a id="p100766"></a>Точность (подлинность и достоверность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные принципы и определения |
| <a id="p100767"></a>[3] | <a id="p100768"></a>ИСО 5725-2 | <a id="p100769"></a>Точность (подлинность и достоверность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости стандартного метода измерений |
| <a id="p100770"></a>[4] | <a id="p100771"></a>ИСО 5725-3 | <a id="p100772"></a>Точность (подлинность и достоверность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные вычисления точности стандартного метода измерений |
| <a id="p100773"></a>[5] | <a id="p100774"></a>ИСО 5725-4 | <a id="p100775"></a>Точность (подлинность и достоверность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения точности стандартного метода измерений |
| <a id="p100776"></a>[6] | <a id="p100777"></a>ИСО 5725-6 | <a id="p100778"></a>Точность (подлинность и достоверность) методов и результатов измерений. Часть 6. Применение на практике значений точности измерений |
| <a id="p100779"></a>[7] | <a id="p100780"></a>ЕН 12353 | <a id="p100781"></a>Химические дезинфектанты и антисептики. Предохранение организмов, используемых для испытаний бактерицидной, микобактерицидной спорицидной и фунгицидной активности |







<table>
<colgroup><col width="48%"><col width="27%"><col width="24%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100782"></a>УДК 677.04.001.4:006.354</td><td><a id="p100783"></a>ОКС 59.080.01 07.100.99</td><td><a id="p100784"></a>М09</td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p100785"></a>Ключевые слова: метод, образцы, изделия текстильные, антибактериальная обработка, протокол испытаний</td></tr>
</table>




<a id="p100786"></a>

---