ГОСТ Р 57247-2016. Национальный стандарт Российской Федерации. Препарат лепидоцид. Инсектицид. Технические условия
(утв. и введен в действие Приказом Росстандарта от 09.11.2016 № 1637-ст)
Примечание
Документ введен в действие с 1 мая 2017 года.
Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 9 ноября 2016 г. № 1637-ст
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ПРЕПАРАТ ЛЕПИДОЦИД. ИНСЕКТИЦИД
Preparation lepidocide. Insecticide. Specifications
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Некоммерческим партнерством «Координационно-информационный центр содействия предприятиям по вопросам безопасности химической продукции» при участии ООО «Центр промышленной биотехнологии имени княгини Е.Р. Дашковой»
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 326 «Биотехнологии»
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 9 ноября 2016 г. № 1637-ст
Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. № 162-ФЗ «О стандартизации в Российской Федерации». Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на бактериальный инсектицидный препарат лепидоцид концентрированный порошок, получаемый путем микробиологического синтеза и предназначенный для борьбы с листогрызущими и плодоповреждающими чешуекрылыми вредителями на овощных и плодовых культурах, в лесопарковых и лесных насаждениях.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 8.423 Государственная система обеспечения единства измерений. Секундомеры механические. Методы и средства поверки
ГОСТ 2.1.008 Система стандартов безопасности труда. Биологическая безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.2.003 Оборудование производственное. Общие требования безопасности
ГОСТ 12.4.028 Респираторы ШБ-1 Лепесток. Технические условия (с Изменениями № 1, 2)
ГОСТ 12.4.253 Система стандартов безопасности труда. Средства индивидуальной защиты глаз. Общие технические требования
ГОСТ 1770 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 27987 Анализаторы жидкости потенциометрические ГСП. Общие технические условия
ГОСТ 29227 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
ГОСТ 3399 Трубки медицинские резиновые. Технические условия
ГОСТ 3826 Сетки проволочные тканые с квадратными ячейками. Технические условия
ГОСТ 5556 Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия
ГОСТ 5833 Реактивы. Сахароза. Технические условия
ГОСТ 6309 Нитки швейные хлопчатобумажные и синтетические. Технические условия
ГОСТ 6613 Сетки проволочные тканые с квадратными ячейками. Технические условия
ГОСТ 6709 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 7758 Фасоль продовольственная. Технические условия
ГОСТ 9147 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия (с Изменениями № 1, 2, 3)
ГОСТ 9285 Калия гидрат окиси технический. Технические условия
ГОСТ 9412 Марля медицинская. Общие технические условия
ГОСТ 10354 Пленка полиэтиленовая. Технические условия
ГОСТ 10521 Реактивы. Кислота бензойная. Технические условия
ГОСТ 12026 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия (с Изменениями № 1, 2, 3, 4)
ГОСТ 13496.3 Комбикорма, сырье. Методы определения влажности
ГОСТ 14961 Нитки льняные и льняные с химическими волокнами. Технические условия
ГОСТ 1625 Формалин технический. Технические условия
ГОСТ 16317 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия
ГОСТ 16484 Пестициды. Метод определения стабильности водных суспензий смачивающихся порошков
ГОСТ 17206 Агар микробиологический. Технические условия
ГОСТ 17308 Шпагаты. Технические условия
ГОСТ 17811 Мешки полиэтиленовые для химической продукции. Технические условия
ГОСТ 18251 Лента клеевая на бумажной основе. Технические условия
ГОСТ 19423 Электрокофемолки бытовые. Технические условия
ГОСТ 20010 Перчатки резиновые технические. Технические условия
ГОСТ 20083 Дрожжи кормовые. Технические условия
ГОСТ 20490 Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия
ГОСТ 20730 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия
ГОСТ 21507 Защита растений. Термины и определения
ГОСТ 2226 Мешки из бумаги и комбинированных материалов. Общие технические условия
ГОСТ 24104 Весы лабораторные. Общие технические требования
ГОСТ 2493 Реактивы. Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный. Технические условия
ГОСТ 25336 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 28498 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
ГОСТ 29227 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
ГОСТ 33319 Мясо и мясные продукты. Метод определения массовой доли влаги
ГОСТ Р 55878 Спирт этиловый технический гидролизный ректификованный. Технические условия
ГОСТ Р 57253 Дрожжи кормовые — паприн. Технические условия
ГОСТ Р 57234 Продукция микробиологическая. Упаковка, маркировка, транспортирование и хранение
ГОСТ Р 57233 Продукция микробиологическая. Правила приемки и методы отбора проб
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Технические требования
3.1 Лепидоцид должен изготовляться в соответствии с требованиями настоящего стандарта по технологическому регламенту, утвержденному в установленном порядке. Препарат получают путем микробиологического синтеза на основе культуры продуцента Bacillus thuringiensis var. curstaki.
3.2 По органолептическим, физико-химическим и биологическим показателям лепидоцид должен соответствовать требованиям и нормам, указанным в таблице 1.
Физико-биологические показатели Лепидоцида
| Наименование показателя | Характеристика или норма | Метод испытаний |
| Внешний вид Однородный порошок от светло-серого до серовато-бежевого цвета | ||
| По 4.3 | Массовая доля влаги, %, не более | 9,0 |
| По ГОСТ 13496.3 и 5.4 Массовая доля частиц размером более 90 мкм, %, не более в том числе | ||
| 5,0 | Массовая доля частиц размером более 500 мкм, %, не более | |
| 0,5 | По 5.5 | Число жизнеспособных спор, млрд спор/г, не менее |
| 100 | По 5.6 | Биологическая активность ЕА/мг, не менее |
| 3000 | По 5.7 | Стабильность 1%-ной водной суспензии, %, не менее |
| 60,0 | По ГОСТ 16484 и 5.8 | Смачиваемость, с, не более |
| 120,0 | По 5.9 | |
| Примечания | 1 Число жизнеспособных спор определяется только при выпуске препарата. | 2 К концу гарантийного срока хранения препарата допускается снижение, в том числе, жизнеспособных спор на 20%, без снижения биологической активности. |
3.3 Требования безопасности
3.3.1 Препарат лепидоцид изготавливают в соответствии с [1].
3.3.2 Лепидоцид — концентрированный порошок не токсичен для человека, теплокровных животных, полезной энтомофауны, рыб и гидробионтов в нормах, рекомендуемых методическими указаниями по применению лепидоцида концентрированного, в которых предусмотрены меры предосторожности при работе с препаратом.
3.3.3 ПДК лепидоцида (на основе Bacillus thuringiensis) в воздухе рабочей зоны — 5ТО4 КОЕ/м3, ПДК лепидоцида (на основе Bacillus thuringiensis) в воздухе атмосферы — 5ТО3 КОЕ/м3 [2].
3.3.4 Лепидоцид концентрированный имеет температуру воспламенения — 230 °C; температуру самовозгорания — 150 °C в объеме 100 x 100 x 100 мм3. Нижний предел воспламенения аэровзвеси — 113 +/- г/м3.
3.3.5 Не допускается пылевыделение при размоле, стандартизации фасовке препарата. Производственное оборудование при этой работе должно отвечать требованиям ГОСТ 12.2.003.
3.3.6 При изготовлении и работе с лепидоцидом необходимо пользоваться специальной одеждой и индивидуальными средствами защиты:
- для защиты глаз — очками защитными по ГОСТ 12.4.253;
- для защиты рук — перчатками по ГОСТ 20010 и перчатками трикотажными;
- для защиты органов дыхания — респиратором ШБ-1 «Лепесток» по ГОСТ 12.4.028.
3.3.7 Во время работы с лепидоцидом не следует курить, пить, принимать пищу. После работы необходимо вымыть руки и лицо водой с мылом.
3.3.8 Все работники, контактирующие с лепидоцидом, подвергаются периодическим медицинским осмотрам. К работе с лепидоцидом не допускаются лица с хроническими воспалительными заболеваниями органов дыхания, зрения, кожи, склонные к аллергическим реакциям, беременные женщины и кормящие матери.
3.3.9 Для предупреждения опасного и вредного воздействия микроорганизмов следует соблюдать требования биологической безопасности по ГОСТ 12.1.008.
3.4 Маркировка
3.4.1 На каждый бумажный мешок наносят транспортную маркировку по ГОСТ 14192 и ГОСТ Р 57234 и манипуляционные знаки «Беречь от влаги» и «Пределы температуры» с указанием дополнительных сведений:
- наименования предприятия-изготовителя и (или) его товарного знака;
- наименования и марки препарата;
- массы нетто;
- номера партии;
- даты изготовления препарата;
- гарантийного срока хранения;
- условий хранения;
- обозначения настоящего стандарта.
3.5 Упаковка
3.5.1 Лепидоцид фасуют по ГОСТ Р 57234 в мешки по 5, 10, 15 кг из полиэтиленовой пленки по ГОСТ 10354 или мешки полиэтиленовые по ГОСТ 17811. Полиэтиленовые мешки термоспаивают и упаковывают в бумажные четырехслойные мешки по ГОСТ 2226.
Допускается фасовать лепидоцид в бумажные мешки марок БМ, ВМ, ПМ, БМП, ВМБ, ВМП по ГОСТ 2226.
3.5.2 Бумажные мешки зашивают машинным способом нитками по ГОСТ 14961, или по ГОСТ 6309, или шпагатом по ГОСТ 17308, оставляя гребень по всей ширине мешка не менее 4 см.
Допускается вместо зашивания бумажных мешков их склеивание по ГОСТ 18251.
3.5.3 В каждый бумажный мешок вкладывают инструкцию по применению препарата в количестве, равном числу полиэтиленовых мешков.
4 Правила приемки
4.1 Лепидоцид принимают партиями по ГОСТ Р 57233. Партией считают любое количество препарата, изготовленное за один технологический цикл, однородное по показателям качества и оформленное одним документом о качестве.
В документе о качестве указывают:
- наименование предприятия-изготовителя и (или) его товарный знак;
- наименование и марку препарата;
- номер партии;
- массу нетто партии;
- количество мест в партии;
- дату изготовления препарата (год, месяц, число);
- результаты испытаний, дату выдачи документа о качестве;
- гарантийный срок и условия хранения;
- обозначение настоящего стандарта.
5 Методы испытаний
5.1 Метод отбора проб — по ГОСТ Р 57233.
Масса объединенной пробы должна быть не менее 0,5 кг.
5.2 Отбор проводят любым мешочным или амбарным щупом объемом не более 0,1 кг.
5.3 Определение внешнего вида лепидоцида проходит визуально по каждой единице упаковки при отборе точечной пробы.
5.4 Определение массовой доли влаги проводят по ГОСТ 33319 методом высушивания до постоянной массы при температуре 100 °C — 105 °C.
5.5 Определение массовой доли частиц размером более 90 мкм и более 500 мкм
Метод основан на определении с помощью сит массовой доли частиц размером более 90 мкм и более 500 мкм.
5.5.1 Аппаратура, материалы, реактивы:
- шкаф сушильный лабораторный любого типа, обеспечивающий температуру нагрева 100 °C — 105 °C;
- весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104 или других аналогичных марок;
- сита с сеткой № 05 и 009 по ГОСТ 6613 или — по ГОСТ 3826 или по [3];
- стакан вместимостью 600 см по ГОСТ 25336;
- стаканчик для взвешивания по ГОСТ 25336;
- стеклянная палочка с резиновым наконечником;
- бокс металлический с крышкой;
- эксикатор по ГОСТ 25336;
- трубка медицинская резиновая с внутренним диаметром 8 — 14 мм по ГОСТ 3399 (далее — трубка резиновая);
- вода дистиллированная по ГОСТ 6709 (далее — вода);
5.5.2 Проведение испытаний
10 — 20 г лепидоцида помещают в стакан и туда же, при непрерывном перемешивании стеклянной палочкой с резиновым наконечником, приливают небольшими порциями (2 — 5 см3) 400 см3 воды.
Содержимое стакана выливают в сито с сеткой № 05, которое устанавливают на сито с сеткой № 009.
Покачивая сито, промывают остаток на сите с сеткой № 05 слабой струей воды в течение 10 мин. Вода после сита с сеткой № 05 должна пройти через сито с сеткой № 009. Затем сито с сеткой № 05 снимают и в течение 5 мин промывают осадок на сите с сеткой № 009.
При промывании осадка воду направляют при помощи резиновой требухи от периферии сита к его центру, придерживая конец резиновой трубки на расстоянии не более 5 см от поверхности сетки.
Остатки на ситах количественно переносят в предварительно взвешенные и доведенные до постоянной массы боксы, помещают в термостат и высушивают при температуре 100 °C — 105 °C до постоянной массы.
Постоянная масса считается достигнутой, если разница между двумя последующими взвешиваниями не будет превышать 0,01 г.
Перед каждым взвешиваниям бокс закрыть крышкой, которая должна находиться вместе с боксом в термостате, и охладить в эксикаторе.
5.5.3 Обработка результатов
Массовую долю частиц размером более 90 мкм и более 500 мкм (X1) в процентах вычисляют по формуле
X_{1} = \frac{M_{1} \cdot 100}{M} , (1)
где M1 — масса остатка на сите с сеткой;
№ 009 — для определения массовой доли частиц не более 90 мкм;
№ 05 — массовой доли частиц размером более 500 мкм;
Вычисления проводят с точностью до 0,01%
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое двух параллельных определений. Расхождение между результатами двух параллельных определений не должно превышать 10% по отношению к большому числу.
5.6 Определение числа жизнеспособных спор
Метод основан на подсчете числа колоний бактерий, выросших на питательной среде при высеве разведенной суспензии лепидоцида, приготовленной на стерильном водном растворе желчи.
5.6.1 Аппаратура, материалы, реактивы:
- размельчитель тканей РТ-2 по [4] или миксеры MICROTRON MB 550 И MICROTRON MB 800 с колбой вместимостью 150 см3 или гомогенизатор другой аналогичной марки;
- термостат, позволяющий поддерживать температуру с отклонением от заданной +/- 2 °C;
- прибор для подсчета колоний по [5] или гистологическая игла;
- весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104 или других аналогичных марок;
- колба вместимостью 250 см3 по ГОСТ 25336;
- пипетка вместимостью 1 и 10 см3 по ГОСТ 29227;
- чашка типа ЧБН (исполнение 2) по ГОСТ 25336 (далее чашка Петри) или чашка лабораторная с крышкой пластмассовой однократного применения по [6];
- пробирка по ГОСТ 25336;
- цилиндр вместимостью 100 см3 по ГОСТ 1770;
- бумага фильтровальная по ГОСТ 12026;
- палочка стеклянная;
- желчь медицинская по [7] (далее — желчь);
- агар сухой питательный (СПА) или агар мясопептонный по ГОСТ 20730;
- вода дистиллированная по ГОСТ 6709 (далее — вода);
5.6.2 Проведение испытаний
1 г лепидоцида помещают в колбу размельчителя тканей РТ-2 наливают 50 см3 0,5%-ного стерильного водного раствора желчи и перемешивают в течение 2 мин со скоростью 3000 об/мин. Затем объем содержимого колбы доводят до 100 см3 водным раствором желчи, осторожно перемешивают стеклянной палочкой.
Концентрация лепидоцида в приготовленной суспензии составляет 0,01 г/см3. Из нее путем последовательных разведений (10-4, 10-6, 10-8, 10-9) приготавливают суспензию таким образом, чтобы на чашке Петри выросло 50 — 200 колоний.
Полученную суспензию засевают по 1 см3 в трех чашках Петри. Суспензию берут стерильной пипеткой, помещают в центр каждой чашки Петри, заливают стерильной расплавленной и охлажденной до 50 °C — 60 °C агаризованной питательной средой и тщательно перемешивают, делая чашками Петри круговые движения по гладкой поверхности стола.
После застывания агаризованной питательной среды чашки Петри помещают в термостат и выдерживают в течение (24 +/- 0,5) ч при температуре (29 +/- 1) °C. Затем производят подсчет взрослых колоний, применяя прибор для подсчета колоний.
Испытания проводят в двух параллельных определениях.
5.6.3 Обработка результатов
Число жизнеспособных спор в 1 г лепидоцида (X2), измеряемое в миллиардах спор на грамм вычисляют по формуле
X_{2} = \frac{\text{П}}{\text{Р} \cdot V} , (2)
где П — среднее арифметическое число подсчета колоний на трех чашках Петри;
P — концентрация суспензии, г/см3;
V — объем суспензии, взятой для высева, см3;
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений.
Допускаемое расхождение между результатами двух параллельных определений не должна превышать 30% по отношению к большему числу.
5.7 Определение биологической активности
Метод основан на определении концентрации лепидоцида, вызывающий 50%-ную гибель тест-объекта при свободном поглощении зараженного корма и вычислении биологической активности относительно контрольного образца.
5.7.1 Аппаратура, материалы, реактивы:
- размельчитель тканей РТ-1 и РТ-2 по [4] или миксеры MICROTRON MB 550 И MICROTRON MB 800 или гомогенизатор другой аналогичной марки;
- электрокофемолка по ГОСТ 19423;
- весы лабораторные общего назначения 3-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 20 г по ГОСТ 24104 или других аналогичных марок;
- весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104 или других аналогичных марок;
- термостат или бокс термостатированный, поддерживающий температуру (21 +/- 1) °C, с устройством автоматического равномерного освещения камеры лампами дневного света в течение 18 ч в сутки;
- баня водяная с пределом терморегуляции от 20 °C до 100 °C и точностью терморегуляции +/- 3 °C;
- холодильник бытовой по ГОСТ 16317;
- термометр П5 по ГОСТ 28498;
- камера климатическая или бокс термостатированный, поддерживающий температуру (21 +/- 1) °C;
- штатив металлический;
- пипетка вместимостью 1, 5, 10 см3 по ГОСТ 29227;
- цилиндры вместимостью 50, 100, 500 см3 по ГОСТ 1770;
- пробирка по ГОСТ 25336;
- чашка типа ЧБН (использование 2) по ГОСТ 25336 (далее — чашка Петри);
- колбы вместимостью 50, 100, 500 см3 по ГОСТ 1770;
- стаканы и колбы вместимостью 25, 50, 100 см3 по ГОСТ 25336;
- ступка № 3 и пестик по ГОСТ 9147;
- ложки № 2 и 3 по ГОСТ 9147;
- pH-метр-милливольтметр PH-121 по ГОСТ 27987 или ионометр ЭВ-74;
- бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026;
- марля медицинская по ГОСТ 9412;
- вата медицинская гигроскопическая по ГОСТ 5556;
- фасоль продовольственная по ГОСТ 7758;
- агар микробиологический сорта экстра по ГОСТ 17206;
- дрожжи кормовые по ГОСТ 20083 или дрожжи сухие пивные по [8] или дрожжи по ГОСТ Р 57253;
- эфир метиловый параоксибензойной кислоты (метабен) по [9] или кислота бензинная по ГОСТ 10521;
- сахароза по ГОСТ 5833;
- кислота аскорбиновая;
- калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный по ГОСТ 2493;
- калия гидрат окиси технический (едкое кали) по ГОСТ 9285;
- калий марганцовокислый по ГОСТ 20490;
- спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ Р 55878;
- формалин по ГОСТ 1625;
- вода дистиллированная по ГОСТ 6709 (далее вода)
- контрольный образец лепидоцида (далее — контрольный образец)
5.7.2 Подготовка к испытанию
5.7.2.1 В качестве контрольного образца использовать лепидоцид в 1 г которого, содержится не менее 90 млрд. жизнеспособных спор и летальная концентрация (ЛК50) для гусениц непарного шелкопряда второго возраста составляет не более 0,023 мг на 1 г питательной среды на 6-е сутки при температуре (21 +/- 1) °C.
Биологическую активность контрольного образца принимают за 2700 ЕА.
Отбор контрольного образца и определение его качества проводят совместно головой институт и завод-изготовитель.
Качество контрольного образца удостоверяют актом.
Контрольный образец хранят в герметичной посуде при температуре (6 +/- 2) °C.
Периодически раз в 3 месяца контрольный образец подлежит проверке.
Допускаются сезонные колебания показателя ЛК50 до 0,036 мг на 1 г питательной среды и падение числа жизнеспособных спор на 20%.
5.7.2.2 В качестве тест-объекта для оценки лепидоцида (далее тест-объект) используют 1-дневных гусениц непарного шелкопряда второго возраста, отродившихся из одной популяции вида и выращенных на искусственном корме.
5.7.2.3 Сбор яйцекладок природной популяции непарного шелкопряда производится в очагах с нарастающей численностью в одном районе в одно время (в сентябре — октябре). Для лабораторного разведения тест-объекта пригодны кладки яиц с массой 0,7 — 0,9 мг и количеством в кладке не менее 400 штук.
Не допускается сбор яйцеклеток в очагах, обработанных инсектицидами, при массовом заражении гусениц или бабочек.
5.7.2.4 На месте сбора яйцеклетки просушивают на стеллажах в помещении и хранят в сухом затемненном месте.
5.7.2.5 Собранные яйцеклетки в лаборатории обеззараживают под бактерицидной лампой в течение (24 +/- 1) ч, расфасовывают по 100 — 300 г в бумажные пакеты и помещают в холодильник. Для использования в декабре — январе яйцеклетки реактивируют в следующем режиме:
1 — 2 недели — при температуре 3 °C — 5 °C;
1 — 2 недели — при температуре 0 °C;
2 недели — при температуре минус 8 — минус 10 °C.
Далее яйцеклетки хранят в холодильнике при температуре 0 — 5 °C.
Для использования яйцеклеток в более поздние сроки их помещают в холодильник и постоянно хранят при температуре 0 — 5 °C.
5.7.2.6 Для опыта навеска яиц массой 5 — 7 г освобождают от пушка путем легкого трения в капроновом мешочке под струей воды при температуре 20 — 30 °C.
5.7.2.7 Очищенные яйца обеззараживают в течение 15 мин в растворе 1:1 40%-ного водного раствора формалина и 95%-ного этилового спирта с последующей промывкой в проточной воде при температуре 20 — 30 °C в течение 15 — 20 мин.
Затем яйца высыпают на фильтровальную бумагу, просушивают в чистом помещении 30 мин и помещают в чашку Петри на фильтровальную бумагу с вырезанным сектором, в который вкладывают ватный тампон, смоченный 0,1%-ным раствором марганцовокислого калия. Тампон не должен касаться бумаги.
5.7.2.8 Чашку Петри помещают в климатическую камеру при температуре (21 +/- 1) °C, относительной влажности воздуха 70% — 90% в равномерном освещении камеры лампами дневного света освещенностью не менее 100 лк в течение 18 ч в сутки и выдерживают до начала отрождения гусениц.
5.7.2.9 В период массового отрождения гусениц их рассаживают в чашки Петри по 150 — 200 штук, в которые предварительно наносят питательную среду толщиной 3 — 5 мм кольцом от 1/3 до 2/3 диаметра чашки Петри. Гусениц содержат в климатический камере при режимах по 5.7.2.8 без смены корма.
Питательную среду готовят следующим образом:
200 г сухих семян фасоли замачивают 300 см3 воды в течение суток, затем в размельчителе тканей РТ-1 размельчают до образования однородной кашицы. Постоянно помешивая, добавляют последовательно следующие компоненты:
- 15 г дрожжей,
- 12 г сахарозы,
- 3 г метабена, растворенных в 10 см3 этилового спирта,
- 4 г калия фосфорнокислого двузамещенного,
- 5 см3 40%-ного раствора формалина,
- 9 г стерильной, измельченной в электрокофемолке фильтровальной бумаги, на которую выливают расплавленный, охлажденный до температуры 70 °C агар (15 г микробиологического агара, расплавленного в 350 см3 воды).
Смесь охлаждают до температуры 40 °C, вносят 4 г аскорбиновой кислоты и перемешивают.
Питательную среду разливают в стерильные банки, закрывают стерильной бумагой и хранят при температуре 5 °C не более 14 дней.
5.7.2.10 Первых перелинявших на 2-й возраст гусениц, количество которых не более 5% от отродившихся, выбраковывают. Массовый выбор тест-объекта проводят на 2 — 3 день после начала линьки вручную.
5.7.3 Проведение испытания
Готовят параллельные водные суспензии контрольного образца в лепидоцида на расчета 1 г препарата и 99 г воды в пяти концентрациях: 0,25; 0,06; 0,016; 0,004; 0,001%, обеспечивающих гибель тест-объекта от (15 +/- 56) до (85 +/- 5)%.
Исходную 0,25%-ную суспензию готовят с помощью размельчителя тканей РТ-2 при скорости 3000 об/мин в течение 2 мин, а суспензию других концентраций — путем последовательных четырехкратных разведений.
Каждую концентрацию лепидоцида испытывают в трех параллельных определениях.
3 см3 суспензии каждой концентрации тщательно перемешивают с 15 г питательной среды в ступке до получения однородной массы.
Полученную массу раскладывают на внутреннюю поверхность крышки чашки Петри по (5 +/- 1) г в каждую. Туда же помещают по 15 гусениц второго возраста. Одновременно ставят контрольный опыт в трех параллельных определениях:
- 15 г питательной среды перемешивают с 3 см3 воды и полученную массу распределяют в 3 чашки Петри, в каждую из которых помещают по 15 гусениц. Чашки Петри с гусеницами помещают в термостат и выдерживают при температуре (21 +/- 1) °C. Количество погибших гусениц подсчитывают на 6-е сутки.
5.7.4 Обработка результатов
Гибель гусениц (X3) в долях с поправкой на гибель в контрольном опыте вычисляют отдельно для каждой концентрации лепидоцида по формуле Аббота:
X_{3} = \frac{P_{\text{о}} - P_{\text{к}}}{X - P_{\text{к}}} , (3)
где Pо — доля мертвых особей в опыте (среднее арифметическое трех параллельных определений);
Pк — доля мертвых особей в контроле (среднее арифметическое трех параллельных определений);
На основании полученных данных вычисляют ЛК50 по формуле Кербера в процентах концентрации лепидоцида в суспензии или в мг лепидоцида на 1 г корма:
lg\text{ЛК}_{50} = lg\text{С}_{\text{м}} - G \cdot (\sum X_{3} - 0,5) ,
где Cм — максимальная из испытанных концентраций;
G — логарифмы отношения предыдущей концентрации к последующей (логарифм кратности разведения).
По полученным данным вычисляют биологическую активность (ЕА) в ЕА/мг.
EA = \frac{\text{ЛК}50\text{контрольного образца}}{\text{ЛК}50\text{испытуемого лепидоцида}} \times 2700 . (4)
5.8 Определение стабильности 1%-ной водной суспензии
Метод определения стабильности водной суспензии — по ГОСТ 16484
5.8.1 Аппаратура, материалы, реактивы — по ГОСТ 16484:
- весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104 или других аналогичных марок;
- шкаф сушильный лабораторный любого типа, обеспечивающий температуру нагрева 100 °C — 105 °C.
5.8.2 Подготовка к испытанию
5.8.2.1 Подготовка к испытанию — по ГОСТ 16484
5.8.2.2 Для приготовления суспензии необходимо взять воду 1 мг экв/дм3 жесткости.
5.8.2.3 Суспензию приготовляют — по способу 3 ГОСТ 16484
5.8.3 Проведение испытания
5.8.3.1 Проведение испытания — по ГОСТ 16484.
Удаление водной суспензии проводят в течение 15 — 20 с.
5.8.3.2 Массовая доля действующего начала не определяется.
5.8.3.3 Остаток сушат в сушильном шкафу при температуре 100 °C — 105 °C.
5.8.4 Обработка результатов
Обработка результатов — по ГОСТ 16484.
5.9 Определение смачиваемости
Метод основан на определении времени, в течение которого навеска лепидоцида смачивается в воде при температуре 20 °C.
5.9.1 Аппаратура, материалы, реактивы:
- весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г — по ГОСТ 24104 или других аналогичных марок;
- секундомер по ГОСТ 8.423;
- штатив металлический;
- сосуд стеклянный цилиндрический с диаметром 140 — 150 мм по ГОСТ 25336;
- воронка полиэтиленовая с диаметром в верхней части 120 — 140 мм, в нижней части 12 — 15 мм;
- вода дистиллированная по ГОСТ 6709 (далее — вода).
5.9.2 Подготовка к испытанию
В сосуд наливают воду и устанавливают его под воронкой, закрепленной в штативе, таким образом, чтобы нижний конец воронки находился над поверхностью воды в сосуде на расстоянии (100 +/- 5) мм.
5.9.3 Проведение испытаний
0,5 г лепидоцида высыпают по стенке воронки в сосуд в течение 5 — 7 с. При необходимости лепидоцид перед сбрасыванием в воду растирают, чтобы не было комков, с момента начала высыпания лепидоцида в воронку включают секундомер.
Смачивание считается законченным, когда весь препарат погрузится в воду.
Если на поверхности воды образовалась пленка в виде вуали, которая удерживает частицы лепидоцида, пропитавшегося водой, то время ее погружения в воду в расчет не принимается.
За результат опыта принимают среднее арифметическое двух параллельных определений.
6 Транспортирование и хранение
6.1 Транспортирование и хранение по ГОСТ Р 57234 и [10].
7 Указания по применению
7.1 Лепидоцид применяют в соответствии с инструкцией по применению и по ГОСТ Р 57234 и [10].
7.2 Для приготовления рабочих суспензий следует применять специально отведенную посуду, которую после применения тщательно промывают водой.
8 Гарантии изготовителя
8.1 Изготовитель гарантирует соответствие лепидоцида требованиям настоящих технических условий при соблюдении условий транспортирования, хранения и применения — по ГОСТ Р 57234 и [10].
8.2 Гарантийный срок хранения лепидоцида — 1,5 года с момента изготовления.