ГОСТ Р 57246-2016. Национальный стандарт Российской Федерации. Препарат дендробациллин. Инсектицид. Технические условия
(утв. и введен в действие Приказом Росстандарта от 09.11.2016 № 1636-ст)
Примечание
Документ введен в действие с 1 мая 2017 года.
Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 9 ноября 2016 г. № 1636-ст
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ПРЕПАРАТ ДЕНДРОБАЦИЛЛИН. ИНСЕКТИЦИД
Preparation dendrobacillin. Insecticide. Specifications
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Некоммерческим партнерством «Координационно-информационный центр содействия предприятиям по вопросам безопасности химической продукции» при участии ООО «Центр промышленной биотехнологии имени княгини Е.Р. Дашковой»
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 326 «Биотехнологии»
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 9 ноября 2016 г. № 1636-ст
Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. № 162-ФЗ «О стандартизации в Российской Федерации». Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на бактериальный инсектицидный препарат дендробациллин смачивающийся порошок, получаемый путем микробиологического синтеза и предназначенный для использования как биологическое средство борьбы с вредителями леса и сельского хозяйства.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 8.423 Государственная система обеспечения единства измерений. Секундомеры механические. Методы и средства поверки
ГОСТ 12.1.008 Система стандартов безопасности труда. Биологическая безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.2.003 Система стандартов безопасности труда. Оборудование производственное. Общие требования безопасности
ГОСТ 12.3.002 Система стандартов безопасности труда. Процессы производственные. Общие требования безопасности
ГОСТ 12.4.028 Система стандартов безопасности труда. Респираторы ШБ-1 Лепесток. Технические условия
ГОСТ 12.4.253 Система стандартов безопасности труда. Средства индивидуальной защиты глаз. Общие технические требования
ГОСТ 1625 Формалин технический. Технические условия
ГОСТ 1770 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 2226 Мешки из бумаги и комбинированных материалов. Общие технические условия
ГОСТ 2493 Реактивы. Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный. Технические условия
ГОСТ 3399 Трубки медицинские резиновые. Технические условия
ГОСТ 3826 Сетки проволочные тканые с квадратными ячейками. Технические условия
ГОСТ 5556 Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия
ГОСТ 5833 Реактивы. Сахароза. Технические условия
ГОСТ 6309 Нитки швейные хлопчатобумажные и синтетические. Технические условия
ГОСТ 6613 Сетки проволочные тканые с квадратными ячейками. Технические условия
ГОСТ 7758 Фасоль продовольственная. Технические условия
ГОСТ 9147 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия
ГОСТ 9285 Калия гидрат окиси технический. Технические условия
ГОСТ 9412 Марля медицинская. Общие технические условия
ГОСТ 10354 Пленка полиэтиленовая. Технические условия
ГОСТ 10521 Реактивы. Кислота бензойная. Технические условия
ГОСТ 12026 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 14961 Нитки льняные и льняные с химическими волокнами. Технические условия
ГОСТ 16317 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия
ГОСТ 16484 Пестициды. Метод определения стабильности водных суспензий смачивающихся порошков
ГОСТ 17206 Агар микробиологический. Технические условия
ГОСТ 17308 Шпагаты. Технические условия
ГОСТ 17811 Мешки полиэтиленовые для химической продукции. Технические условия
ГОСТ 18251 Лента клеевая на бумажной основе. Технические условия
ГОСТ 19423 Электрокофемолки бытовые. Технические условия
ГОСТ 20010 Перчатки резиновые технические. Технические условия
ГОСТ 20370 Эфир метиловый метакриловой кислоты. Технические условия
ГОСТ 20490 Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия
ГОСТ 24104 Весы лабораторные. Общие технические требования
ГОСТ 25336 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 28495 Продукция микробиологическая. Правила приемки и методы отбора проб
ГОСТ 28498 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
ГОСТ 29227 Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
ГОСТ 32029 Термостаты (терморегуляторы) механические для газовых приборов. Общие технические требования и методы испытаний
ГОСТ Р 51232 Вода питьевая. Общие требования к организации и методам контроля качества
ГОСТ Р 54951 Корма для животных. Определение содержания влаги
ГОСТ Р 55301 Дрожжи кормовые из зерновой барды. Технические условия
ГОСТ Р 55878 Спирт этиловый технический гидролизный ректификованный. Технические условия
ГОСТ Р 57234 Продукция микробиологическая. Упаковка, маркировка, транспортирование и хранение
ГОСТ Р 57253 Дрожжи кормовые — паприн. Технические условия
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных документов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если заменен ссылочный документ, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого документа с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого документа с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный документ отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Технические требования
3.1 Дендробациллин должен изготовляться в соответствии с требованиями настоящего стандарта по технологическому регламенту, утвержденному в установленном порядке. Препарат получают микробиологическим синтезом бактерий Bac. thuringiensis var. thuringiensis
3.2 По органолептическим, физико-химическим и биологическим показателям дендробациллин должен соответствовать требованиям и нормам указанным в таблице 1.
| Физико-биологические показатели дендробациллина | Наименование показателя | |
| Характеристика или норма Метод испытаний | ||
| Внешний вид | Однородный порошок от светло-серого до светло-коричневого цвета | По п. 4.3 |
| Массовая доля влаги, %, не более | 9,0 | По ГОСТ Р 54951 и п. 5.4 |
| Массовая доля частиц размером более 500 мкм, %, не более | 0,3 | По п. 5.5 |
| Число жизнеспособных спор, млрд. спор/г, не менее | 100 | По п. 5.6 |
| Биологическая активность EA/мг, не менее | 3 000 | По п. 5.7 |
| Стабильность 1%-ной водной суспензии, %, не менее | 60,0 | По ГОСТ 16484 и п. 5.8 |
| Смачиваемость, с, не более | 120,0 | По п. 5.9 |
| Примечание: 1 Число жизнеспособных спор определяется только при выпуске препарата. 2 К концу гарантийного срока хранения препарата биологическая активность должна быть не менее 2400 EA/мг | ||
3.3 Требования безопасности
3.3.1 Дендробациллин изготавливают в соответствии с [1]. Он не токсичен для человека, теплокровных животных, полезной энтомофауны, рыб и гидробионтов при содержании его в рабочей суспензии до 1%, токсичен для тутового и непарного шелкопряда, что необходимо учитывать при применении дендробациллина в зонах разведения этих насекомых.
3.3.2 Дендробациллин не обладает фитотоксичностью, не влияет на запах и вкус обрабатываемых растений.
3.3.3 Дендробациллин пожаро- и взрывобезопасен. Нижний предел воспламенения — 105 г/м3.
3.3.4 ПДК дендробациллина — 1 мг/м3 в соответствии с [2]. В нормах, превышающих ПДК, дендробациллин мало опасен в плане острых и хронических отравлений.
3.3.5 Вдыхание пыли вызывает местное раздражение слизистой оболочки и кожных покровов тела. Места попадания дендробациллина промыть теплой водой с мылом.
3.3.6 Кумулятивные свойства дендробациллина выражены слабо.
3.3.7 Применение дендробациллина не приводит к санитарно-опасным загрязнениям растений, почвы, воздушной среды и сточных вод.
3.3.8 Для предупреждения опасного и вредного воздействия микроорганизмов на людей следует соблюдать требования биологической безопасности по ГОСТ 12.1.008.
3.3.9 Требования безопасности к производственному процессу по ГОСТ 12.3.002, к производственному оборудованию — по ГОСТ 12.2.003.
3.3.10 При изготовлении и работе с дендробациллином необходимо пользоваться специальной одеждой и индивидуальными средствами защиты:
- для защиты глаз — очками защитными — по ГОСТ 12.4.253;
- для защиты рук — перчатками — по ГОСТ 20010 и перчатками трикотажными;
- для защиты органов дыхания — респиратором ШБ-1 «Лепесток» по ГОСТ 12.4.028.
3.3.11 Во время работы с дендробациллином не следует курить, пить, принимать пищу. После работы необходимо вымыть руки и лицо водой с мылом.
3.3.12 Все работники, контактирующие с дендробациллином, подвергаются периодическим медицинским осмотрам. К работе с дендробациллином не допускаются лица с хроническими воспалительными заболеваниями органов дыхания, зрения, кожи, склонные к аллергическим реакциям, беременные женщины и кормящие матери.
3.4 Маркировка
3.4.1 На каждый бумажный мешок наносят транспортную маркировку по ГОСТ 14192 с изображением манипуляционных знаков «Беречь от влаги», «Пределы температуры» и с указанием дополнительных сведений:
- наименования предприятия-изготовителя и (или) его товарного знака;
- наименования и марки препарата;
- массы нетто;
- номера партии;
- даты изготовления препарата;
- гарантийного срока хранения;
- условий хранения;
- обозначения настоящего стандарта.
3.5 Упаковка
3.5.1 Дендробациллин фасуют в мешки по 15 кг из полиэтиленовой пленки по ГОСТ 10354 или мешки полиэтиленовые по ГОСТ 17811. Полиэтиленовые мешки термоспаивают и упаковывают в бумажные четырехслойные мешки по ГОСТ 28471.
Допускается фасовать дендробациллин в бумажные мешки марок БМ, ВМ, ПМ, БМП, ВМБ, ВМП по ГОСТ 2226.
3.5.2 Бумажные мешки зашивают машинным способом нитками по ГОСТ 14961, или по ГОСТ 6309, или шпагатом по ГОСТ 17308, оставляя гребень по всей ширине мешка не менее 4 см.
Допускается вместо зашивания бумажных мешков их склеивание по ГОСТ 18251.
3.5.3 В каждый бумажный мешок вкладывают инструкцию по применению препарата в количестве, равном числу полиэтиленовых мешков.
4 Правила приемки
4.1 Дендробациллин принимают партиями. Партией считают любое количество препарата, изготовленное согласно ГОСТ 28495.
В документе о качестве указывают:
- наименование предприятия-изготовителя и (или) его товарный знак;
- наименование и марку препарата;
- номер партии;
- массу нетто партии;
- количество мест в партии;
- дату изготовления препарата (год, месяц, число);
- результаты испытаний, дату выдачи документа о качестве;
- гарантийный срок и условия хранения;
- обозначение настоящего стандарта.
5 Методы испытаний
5.1 Метод отбора проб — по ГОСТ 28495.
Масса объединенной пробы должна быть не менее 0,5 кг.
5.2 Отбор проводят любым мешочным или амбарным щупом объемом не более 0,1 кг.
5.3 Определение внешнего вида дендробациллина проходит визуально по каждой единице упаковки при отборе точечной пробы.
5.4 Определение массовой доли влаги проводят — по ГОСТ Р 54951 методом высушивания до постоянной массы при температуре 100 — 105 °C.
5.5 Определение массовой доли частиц размером более 90 мкм и более 500 мкм
Метод основан на определении с помощью сит массовой доли частиц размером более 90 мкм и более 500 мкм.
5.5.1 Аппаратура, материалы, реактивы:
- шкаф сушильный лабораторный любого типа, обеспечивающий температуру нагрева 100 — 105 °C;
- весы лабораторные общего назначения 2 класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г — по ГОСТ 24104 или других аналогичных марок;
- сита с сеткой № 05 и 009 — по ГОСТ 6613 или по ГОСТ 3826 или по [3];
- стакан вместимостью 600 см — по ГОСТ 25336;
- стаканчик для взвешивания — по ГОСТ 25336;
- стеклянная палочка с резиновым наконечником;
- бокс металлический с крышкой;
- эксикатор — по ГОСТ 25336;
- трубка медицинская резиновая с внутренним диаметром 8 — 14 мм — по ГОСТ 3399 (далее — трубка резиновая);
- вода питьевая — по ГОСТ Р 51232 (далее — вода).
5.5.2 Проведение испытаний
10 — 20 г дендробациллина помещают в стакан и туда же при непрерывном перемешивании стеклянной палочкой с резиновым наконечником приливают небольшими порциями (2 — 5 см3) 400 см3 воды.
Содержимое стакана выливают в сито с сеткой № 05, которое устанавливают на сито с сеткой № 009.
Покачивая сито, промывают остаток на сите с сеткой № 05 слабой струей воды в течение 10 мин. Вода после сита с сеткой № 05 должна пройти через сито с сеткой № 009. Затем сито с сеткой № 05 снимают и в течение 5 мин промывают остаток на сите с сеткой № 009.
При промывании остатка воду направляют при помощи резиновой требухи от периферии сита к его центру, придерживая конец резиновой трубки на расстоянии не более 5 см от поверхности сетки.
Остатки на ситах количественно переносят в предварительно взвешенные и доведенные до постоянной массы боксы, помещают в термостат и высушивают при температуре 100 — 105 °C до постоянной массы.
Постоянная масса считается достигнутой, если разница между двумя последующими взвешиваниями не будет превышать 0,01 г.
Перед каждым взвешиванием бюкс закрыть крышкой, которая должна находиться вместе с бюксом в термостате, и охладить в эксикаторе.
5.5.3 Обработка результатов
Массовую долю частиц размером более 90 и более 500 мкм (X1) в процентах вычисляют по формуле 1:
X_{1} = \frac{M_{1} \times 100}{M} , (1)
где M1 — масса остатка на сите с сеткой;
№ 009 — для определения массовой доли частиц не более 90 мкм;
№ 05 — массовой доли частиц размером более 500 мкм;
Вычисления проводят с точностью до 0,01%.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое двух параллельных определений. Расхождение между результатами двух параллельных определений не должно превышать 10% от отношению к большому числу.
5.6 Определение числа жизнеспособных спор
Метод основан на подсчете числа колоний бактерий, выросших на питательной среде при высеве разведенной суспензии дендробациллина, приготовленной на стерильном водном растворе желчи.
5.6.1 Аппаратура, материалы, реактивы:
- размельчитель тканей РТ-2 по [4] с колбой вместимостью 150 см или гомогенизатор другой аналогичной марки;
- термостат — по ГОСТ 32029, позволяющий поддерживать температуру с отклонением от заданной +/- 2 °C;
- прибор для подсчета колоний по [5] или гистологическая игла;
- весы лабораторные общего назначения 2 класса точности — по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г или других аналогичных марок;
- колба вместимостью 250 см — по ГОСТ 25336;
- пипетка вместимостью 1 и 10 см3 — по ГОСТ 29227;
- чашка типа ЧБН (исполнение 2) — по ГОСТ 25336 (далее чашка Петри) или чашка лабораторная с крышкой пластмассовой однократного применения по [4];
- пробирка — по ГОСТ 25336;
- цилиндр вместимостью 100 см3 — по ГОСТ 1770;
- бумага фильтровальная — по ГОСТ 12026;
- палочка стеклянная — по ГОСТ 25336;
- желчь медицинская — по [6] (далее — желчь);
- агар сухой питательный (СПА) или агар мясопептонный;
- вода питьевая — по ГОСТ Р 51232 (далее — вода).
5.6.2 Проведение испытаний
1 г дендробациллина помещают в колбу размельчителя тканей РТ-2, наливают 50 см3 0,5%-ного стерильного водного раствора желчи и перемешивают в течение 2 мин со скоростью 3000 об/мин. Затем объем содержимого колбы доводят до 100 см3 водным раствором желчи, осторожно перемешивают стеклянной палочкой.
Концентрация дендробациллина в приготовленной суспензии составляет 0,01 г/см3. Из нее путем последовательных разведений (10-4, 10-6, 10-8, 10-9) приготавливают суспензию таким образом, чтобы на чашке Петри выросло 50 — 200 колоний.
Полученную суспензию засевают по 1 см3 в трех чашках Петри. Суспензию берут стерильной пипеткой, помещают в центр каждой чашки Петри, заливают стерильной расплавленной и охлажденной до 50 — 60 °C агаризованной питательной средой и тщательно перемешивают, делая чашками Петри круговые движения по гладкой поверхности стола.
После застывания агаризованной питательной среды чашки Петри помещают в термостат и выдерживают в течение (24 +/- 0,5) ч при температуре (29 +/- 1) °C. Затем производят подсчет взрослых колоний, применяя прибор для подсчета колоний.
Испытания проводят в двух параллельных определениях.
5.6.3 Обработка результатов
Число жизнеспособных спор в 1 г дендробациллина (X2) измеряемое в миллиардах спор на грамм вычисляют по формуле 2:
X_{2} = \frac{\text{П}}{\text{Р} \times V} , (2)
где П — среднее арифметическое число подсчета колоний на трех чашках Петри;
P — концентрация суспензии, г/см3;
V — объем суспензии, взятой для высева, см3.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений.
Допускаемое расхождение между результатами двух параллельных определений не должна превышать 30% по отношению к большему числу.
5.7 Определение биологической активности
Метод основан на определении концентрации дендробациллина, вызывающий 50%-ную гибель тест-объекта при свободном поглощении зараженного корма и вычислении биологической активности относительно контрольного образца.
5.7.1 Аппаратура, материалы, реактивы:
- размельчитель тканей РТ-1 и РТ-2 по [4] или гомогенизатор другой аналогичной марки;
- электрокофемолка — по ГОСТ 19423;
- весы лабораторные общего назначения 3 класса точности с наибольшим пределом взвешивания 20 г — по ГОСТ 24104 или других аналогичных марок;
- весы лабораторные общего назначения 2 класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г — по ГОСТ 24104 или других аналогичных марок;
- термостат — по ГОСТ 32029 или бокс термостатированный, поддерживающий температуру (21 +/- 1) °C, с устройством автоматического равномерного освещения камеры лампами дневного света в течение 18 ч в сутки;
- баня водяная с пределом терморегуляции от 20 °C до 100 °C и точностью терморегуляции +/- 3 °C;
- холодильник бытовой — по ГОСТ 16317;
- термометр П5 — по ГОСТ 28498;
- камера климатическая или бокс термостатированный, поддерживающий температуру (21 +/- 1) °C;
- штатив металлический;
- пипетка вместимостью 1, 5, 10 см3 — по ГОСТ 29227;
- цилиндры вместимостью 50, 100, 500 см3 — по ГОСТ 1770;
- пробирка — по ГОСТ 25336;
- чашка типа ЧБН (использование 2) — по ГОСТ 25336 (далее — чашка Петри);
- колбы вместимостью 50, 100, 500 см3 — по ГОСТ 1770;
- стаканы и колбы вместимостью 25, 50, 100 см3 — по ГОСТ 25336;
- ступка № 3 и пестик — по ГОСТ 9147;
- ложки № 2 и 3 — по ГОСТ 9147;
- pH-метр-милливольтметр PH-121 — по [7] или ионометр ЭВ-74;
- бумага фильтровальная лабораторная — по ГОСТ 12026;
- марля медицинская — по ГОСТ 9412;
- вата медицинская гигроскопическая — по ГОСТ 5556;
- фасоль продовольственная — по ГОСТ 7758;
- агар микробиологический сорта экстра — по ГОСТ 17206;
- дрожжи кормовые — по ГОСТ Р 55301 или дрожжи сухие пивные — по ФС 42-654-72 или дрожжи по ГОСТ Р 57253;
- эфир метиловый параоксибензойной кислоты (метабен) — по ГОСТ 20370 или кислота бензинная — по ГОСТ 10521;
- сахароза — по ГОСТ 5833;
- кислота аскорбиновая;
- калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный — по ГОСТ 2493;
- калия гидрат окиси технический (едкое кали) — по ГОСТ 9285;
- калий марганцовокислый — по ГОСТ 20490;
- спирт этиловый ректификованный технический — по ГОСТ Р 55878;
- формалин — по ГОСТ 1625;
- вода питьевая — по ГОСТ Р 51232 (далее вода);
- контрольный образец дендробациллина (далее — контрольный образец).
5.7.2 Подготовка к испытанию
5.7.2.1 В качестве контрольного образца использовать дендробациллин, в 1 г которого содержится не менее 90 млрд. жизнеспособных спор и летальная концентрация (ЛК50) для гусениц непарного шелкопряда второго возраста составляет не более 0,023 мг на 1 г питательной среды на 6-е сутки при температуре (21 +/- 1) °C.
Биологическую активность контрольного образца принимают за 2700 EA.
Отбор контрольного образца и определение его качества проводят совместно головной институт и завод-изготовитель.
Качество контрольного образца удостоверяют актом.
Контрольный образец хранят в герметичной посуде при температуре (6 +/- 2) °C.
Периодически раз в 3 месяца контрольный образец подлежит проверке.
Допускаются сезонные колебания показателя ЛК50 до 0,036 мг на 1 г питательной среды и падение числа жизнеспособных спор на 20%.
5.7.2.2 В качестве тест-объекта для оценки дендробациллина (далее тест-объект) используют однодневных гусениц непарного шелкопряда второго возраста, отродившихся из одной популяции вида и выращенных на искусственном корме.
5.7.2.3 Сбор яйцекладок природной популяции непарного шелкопряда производится в очагах с нарастающей численностью в одном районе в одно время (в сентябре — октябре). Для лабораторного разведения тест-объекта пригодны кладки яиц с массой 0,7 — 0,9 мг и количеством в кладке не менее 400 штук.
Не допускается сбор яйцеклеток в очагах, обработанных инсектицидами, при массовом заражении гусениц или бабочек.
5.7.2.4 На месте сбора яйцеклетки просушивают на стеллажах в помещении и хранят в сухом затемненном месте.
5.7.2.5 Собранные яйцеклетки в лаборатории обеззараживают под бактерицидной лампой в течение (24 +/- 1) ч, расфасовывают по 100 — 300 г в бумажные пакеты и помещают в холодильник. Для использования в декабре — январе яйцеклетки реактивируют в следующем режиме:
1 — 2 недели — при температуре 3 — 5 °C;
1 — 2 недели — при температуре 0 °C;
2 недели — при температуре минус 8 °C — минус 10 °C.
Далее яйцеклетки хранят в холодильнике при температуре 0 — 5 °C.
Для использования яйцеклеток в более поздние сроки их помещают в холодильник и постоянно хранят при температуре 0 — 5 °C.
5.7.2.6 Для опыта навеска яиц массой 5 — 7 г освобождают от пушка путем легкого трения в капроновом мешочке под струей воды при температуре 20 — 30 °C.
5.7.2.7 Очищенные яйца обеззараживают в течение 15 мин в растворе 1:1 40%-ного водного раствора формалина и 95%-ного этилового спирта с последующей промывкой в проточной воде при температуре 20 — 30 °C в течение 15 — 20 мин.
Затем яйца высыпают на фильтровальную бумагу, просушивают в чистом помещении 30 мин и помещают в чашку Петри на фильтровальную бумагу с вырезанным сектором, в который вкладывают ватный тампон, смоченный 0,1%-ным раствором марганцовокислого калия. Тампон не должен касаться бумаги.
5.7.2.8 Чашку Петри помещают в климатическую камеру при температуре (21 +/- 1) °C, относительной влажности воздуха 70 — 90% в равномерном освещении камеры лампами дневного света освещенностью не менее 100 лк в течение 18 ч в сутки и выдерживают до начала от рождения гусениц.
5.7.2.9 В период массового отрождения гусениц их рассаживают в чашки Петри по 150 — 200 штук, в которые предварительно наносят питательную среду толщиной 3 — 5 мм кольцом от 1/3 до 2/3 диаметра чашки Петри. Гусениц содержат в климатический камере при режимах по 5.7.2.8 без смены корма.
Питательную среду готовят следующим образом:
200 г сухих семян фасоли замачивают в 300 см3 воды в течение суток, затем в размельчителе тканей РТ-1 размельчают до образования однородной кашицы. Постоянно помешивая, добавляют последовательно следующие компоненты:
- 15 г дрожжей,
- 12 г сахарозы,
- 3 г метабена, растворенных в 10 см3 этилового спирта,
- 4 г калия фосфорнокислого двузамещенного,
- 5 см3 40%-ного раствора формалина,
- 9 г стерильной, измельченной в электрокофемолке фильтровальной бумаги, на которую выливают расплавленный, охлажденный до температуры 70 °C агар (15 г микробиологического агара, расплавленного в 350 см3 воды).
Смесь охлаждают до температуры 40 °C, вносят 4 г аскорбиновой кислоты и перемешивают.
Питательную среду разливают в стерильные банки, закрывают стерильной бумагой и хранят при температуре 5 °C не более 14 дней.
5.7.2.10 Первых перелинявших на 2-й возраст гусениц, количество которых не более 5% от отродившихся, выбраковывают. Массовый выбор тест-объекта проводят на 2 — 3 день после начала линьки вручную.
5.7.3 Проведение испытания
Готовят параллельные водные суспензии контрольного образца в дендробациллина из расчета 1 г препарата и 99 г воды в пяти концентрациях: 0,25; 0,06; 0,016; 0,004; 0,001%, обеспечивающих гибель тест-объекта от (15 +/- 56) до (85 +/- 5) %.
Исходную 0,25%-ную суспензию готовят с помощью размельчителя тканей РТ-2 при скорости 3000 об/мин в течение 2 мин, а суспензию других концентраций — путем последовательных четырехкратных разведений.
Каждую концентрацию дендробациллина испытывают в трех параллельных определениях.
3 см3 суспензии каждой концентрации тщательно перемешивают с 15 г питательной среды в ступке до получения однородной массы.
Полученную массу раскладывают на внутреннюю поверхность крышки чашки Петри по (5 +/- 1) г в каждую. Туда же помещают по 15 гусениц второго возраста. Одновременно ставят контрольный опыт в трех параллельных определениях:
- 15 г питательной среды перемешивают с 3 см3 воды и полученную массу распределяют в 3 чашки Петри, в каждую из которых помещают по 15 гусениц. Чашки Петри с гусеницами помещают в термостат и выдерживают при температуре (21 +/- 1) °C. Количество погибших гусениц подсчитывают на 6 сутки.
5.7.4 Обработка результатов
Гибель гусениц (X3) в долях с поправкой на гибель в контрольном опыте вычисляют отдельно для каждой концентрации дендробациллина по формуле Аббота, формула 3:
X_{3} = \frac{P\text{о} - P\text{к}}{X - P\text{к}} , (3)
где Pо — доля мертвых особей в опыте (среднее арифметическое трех параллельных определений);
Pк — доля мертвых особей в контроле (среднее арифметическое трех параллельных определений).
На основании полученных данных вычисляют ЛК50 по формуле Кербера в процентах концентрации дендробациллина в суспензии или в мг дендробациллина на 1 г корма, формула 4:
lg\text{ЛК}_{50} = lg\text{См } - G \times (\Sigma X_{3} - 0,5) , (4)
где Cм — максимальная из испытанных концентраций;
G — логарифмы отношения предыдущей концентрации к последующей (логарифм кратности разведения).
По полученным данным вычисляют биологическую активность (EA) в EA/мг, формула 5:
EA = \frac{\text{ЛК}50\text{контрольного образца}}{\text{ЛК}50\text{испытуемого дендробациллина}} \times 2700 . (5)
5.8 Определение стабильности 1%-ной водной суспензии
Метод определения стабильности водной суспензии — по ГОСТ 16484.
5.8.1 Аппаратура, материалы, реактивы — по ГОСТ 16484:
- весы лабораторные общего назначения 2 класса точности — по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г или других аналогичных марок;
- шкаф сушильный лабораторный любого типа, обеспечивающий температуру нагрева 100 — 105 °C.
5.8.2 Подготовка к испытанию
5.8.2.1 Подготовка к испытанию — по ГОСТ 16484.
5.8.2.2 Для приготовления суспензии необходимо взять воду 1 мг экв/дм3 жесткости.
5.8.2.3 Суспензию приготовляют по способу 3 ГОСТ 16484.
5.8.3 Проведение испытания
5.8.3.1 Проведение испытания — по ГОСТ 16484.
Удаление водной суспензии проводят в течение 15 — 20 с.
5.8.3.2 Массовая доля действующего начала не определяется.
5.8.3.3 Остаток сушат в сушильном шкафу при температуре 100 — 105 °C.
5.8.4 Обработка результатов
Обработка результатов по ГОСТ 164847.
5.9 Определение смачиваемости
Метод основан на определении времени, в течение которого навеска дендробациллина смачивается в воде при температуре 20 °C.
5.9.1 Аппаратура, материалы, реактивы:
- весы лабораторные общего назначения 2 класса точности — по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г или других аналогичных марок;
- секундомер — по ГОСТ 8.423;
- штатив металлический;
- сосуд стеклянный цилиндрический с диаметром 140 — 150 мм — по ГОСТ 25336;
- воронка полиэтиленовая с диаметром в верхней части 120 — 140 мм, в нижней части 12 — 15 мм;
- вода питьевая — по ГОСТ Р 51232 (далее — вода).
5.9.2 Подготовка к испытанию
В сосуд наливают воду и устанавливают его под воронкой, закрепленной в штативе, таким образом, чтобы нижний конец воронки находился над поверхностью воды в сосуде на расстоянии (100 +/- 5) мм.
5.9.3 Проведение испытаний
0,5 г дендробациллина высыпают по стенке воронки в сосуд в течение 5 — 7 с. При необходимости гомонил перед сбрасыванием в воду растирают, чтобы не было комков. С момента начала высыпания дендробациллина в воронку включают секундомер.
Смачивание считается законченным, когда весь препарат погрузится в воду.
Если на поверхности воды образовалась пленка в виде вуали, которая удерживает частицы дендробациллина, пропитавшегося водой, то время ее погружения в воду в расчет не принимается.
За результат опыта принимают среднее арифметическое двух параллельных определений.
6 Транспортирование и хранение
6.1 Транспортирование и хранение по ГОСТ Р 57234 и [8] при температуре от -30 °C до +30 °C.
7 Указания по применению
7.1 Дендробациллин применяют в соответствии с ГОСТ Р 57246 и с инструкцией по применению, «Списком химических и биологических средств борьбы с вредителями и болезнями леса» и «Списком химических и биологических средств борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками и регуляторов роста растений, разрешенных для применения в сельском хозяйстве».
7.2 Для приготовления рабочих суспензий следует применять специально отведенную посуду, которую после применения тщательно промывают водой.
8 Гарантии изготовителя
8.1 Изготовитель гарантирует соответствие дендробациллина требованиям настоящих технических условий при соблюдении условий транспортирования, хранения и применения по ГОСТ Р 57234 и [8].
8.2 Гарантийный срок хранения дендробациллина — 1,5 года с момента изготовления.