ГОСТ 34847-2022. Межгосударственный стандарт. Изделия кондитерские. Методы определения массовой доли фруктового сырья. Часть 3. Количественное определение фруктового сырья
(введен в действие Приказом Росстандарта от 06.06.2022 № 450-ст)
Примечание
Документ введен в действие с 01.01.2023.
Введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 6 июня 2022 г. № 450-ст
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ ФРУКТОВОГО СЫРЬЯ
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФРУКТОВОГО СЫРЬЯ
Confectionery. Methods for determination of mass fraction of fruit raw materials. Part 3. Quantification of raw fruit
Дата введения 1 января 2023 года
Предисловие
Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом кондитерской промышленности — филиалом Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный научный центр пищевых систем им. В.М. Горбатова» РАН (ВНИИКП — филиал ФГБНУ «ФНЦ пищевых систем им. В.М. Горбатова» РАН)
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 29 апреля 2022 г. № 150-П)
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 6 июня 2022 г. № 450-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34847-2022 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2023 г.
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.
В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге «Межгосударственные стандарты»
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на кондитерские изделия, изготовленные с использованием фруктового, ягодного или фруктово-ягодного сырья (яблочного, сливового, абрикосового, персикового, вишневого, грушевого, черносмородинового), и устанавливает расчетный метод определения массовой доли фруктового сырья, основанный на результатах определения массовой доли органических кислот и массовой доли макроэлементов методом капиллярного электрофореза.
Диапазон измерения массовой доли фруктового сырья — от 0,8% и выше. При использовании высушенного фруктового сырья массовая доля фруктового сырья в пересчете на яблочное пюре может составлять выше 100%.
Метод может быть применен для определения массовой доли органических кислот в диапазоне измерений от 0,05% до 1,00% и макроэлементов в следующих диапазонах:
- для калия — от 0,005% до 0,500%;
- для магния — от 0,002% до 0,200%;
- для натрия — от 0,003% до 0,300%;
- для кальция — от 0,004% до 0,300%.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:
ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.018 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования
ГОСТ 12.1.019 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ OIML R 76-1 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ 1770 (ИСО 1042, ИСО 4788) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 3118 (СТ СЭВ 4276) Реактивы. Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 4328 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия
ГОСТ 5904 Изделия кондитерские. Правила приемки и методы отбора проб
ГОСТ 6709 <1> Вода дистиллированная. Технические условия
<1> В Российской Федерации действует ГОСТ Р 58144-2018.
ГОСТ 9147 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия
ГОСТ 10521 Реактивы. Кислота бензойная. Технические условия
ГОСТ 12026 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 14919 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия
ГОСТ 21240 Скальпели и ножи медицинские. Общие технические требования и методы испытаний
ГОСТ 25336 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 28311 Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний
ГОСТ 28498 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
ГОСТ 29227 (ИСО 835-1) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
ГОСТ ИСО 5725-1-2003 <2> Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения
<2> В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002.
ГОСТ ИСО 5725-6-2003 <3> Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
<3> В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002.
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов и классификаторов на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (www.easc.by) или по указателям национальных стандартов, издаваемым в государствах, указанных в предисловии, или на официальных сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации. Если на документ дана недатированная ссылка, то следует использовать документ, действующий на текущий момент, с учетом всех внесенных в него изменений. Если заменен ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, то следует использовать указанную версию этого документа. Если после принятия настоящего стандарта в ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение применяется без учета данного изменения. Если ссылочный документ отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Условия проведения измерений
При подготовке и проведении измерений должны быть соблюдены следующие условия:
4 Требования безопасности
При выполнении измерений необходимо соблюдать правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками — по ГОСТ 12.1.019, требования пожаровзрывобезопасности — по ГОСТ 12.1.018, а также требования, изложенные в технической документации на применяемые средства измерений и вспомогательное оборудование.
5 Требования к квалификации оператора
К выполнению измерений и обработке результатов допускается специалисты, имеющие опыт работы в химической лаборатории, освоившие методы проведения измерений, отбора проб и прошедшие инструктаж по технике безопасности при работе с вредными веществами и по пожарной безопасности.
6 Отбор и подготовка проб
Отбор и подготовка проб — по ГОСТ 5904.
7 Определение массовой доли органических кислот методом капиллярного электрофореза с фотометрическим детектированием
7.1 Сущность метода
Метод определения массовой доли органических кислот с использованием капиллярного электрофореза основан на миграции и разделении анионных форм анализируемых компонентов под действием электрического поля вследствие их различной электрофоретической подвижности.
7.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда и реактивы
Система капиллярного электрофореза с положительной полярностью источника высокого напряжения, оснащенная кварцевым капилляром (эффективная длина не менее 50 см), фотометрическим детектором, позволяющим регистрировать оптическое поглощение в диапазоне длин волн от 210 до 280 нм.
Весы утвержденного типа, поверенные в установленном порядке, с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более +/- 0,5 мг.
Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 класса точности I с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более +/- 0,001 г.
pH-метр с диапазоном измерений pH от 1 до 14 pH с пределом допускаемой абсолютной погрешности не более +/- 0,02 pH.
Центрифуга лабораторная медицинская со скоростью вращения ротора не менее 3000 об/мин.
Баня ультразвуковая, обеспечивающая поддержание температуры до 80 °C.
Баня водяная, обеспечивающая поддержание температуры до 100 °C с погрешностью не более +/- 2 °C.
Термометр жидкостной стеклянный с диапазоном измерений от 0 °C до 100 °C с ценой деления 1 °C, с пределом допускаемой погрешности +/- 2 °C по ГОСТ 28498.
Плитка электрическая закрытого типа, обеспечивающая нагрев в диапазоне температур от 120 °C до 200 °C по ГОСТ 14919.
Дозаторы пипеточные для отбора и дозирования с регулируемым объемом дозирования от 1000 до 5000 мкл с относительной погрешностью дозирования +/- 1% с соответствующими наконечниками по ГОСТ 28311.
Дозаторы пипеточные для отбора и дозирования с регулируемым объемом дозирования от 100 до 1000 мкл с относительной погрешностью дозирования +/- 2% с соответствующими наконечниками по ГОСТ 28311.
Дозаторы пипеточные для отбора и дозирования с регулируемым объемом дозирования от 5 до 50 мкл с относительной погрешностью дозирования +/- 3% с соответствующими наконечниками по ГОСТ 28311.
Пипетки градуированные номинальной вместимостью 1, 5 и 10 см3 по ГОСТ 29227.
Скальпель медицинский по ГОСТ 21240.
Колбы мерные 2-50-1, 2-100-1 и 2-1000-1 по ГОСТ 1770.
Цилиндр 3-500, 1-250 или 3-250, 3-25 и 3-50 по ГОСТ 1770.
Стаканы В-1-10 ТС, В-1-50 ТС по ГОСТ 25336.
Воронки ВФ-1-56 ХС по ГОСТ 25336.
Пробирки Эппендорфа вместимостью от 1,5 см3 в соответствии с техническими характеристиками используемой системы капиллярного электрофореза.
Виалы стеклянные вместимостью 30 см3 с герметично закрывающимися пластиковыми винтовыми крышками.
Пробирки центрифужные из полипропилена вместимостью 50 см3 с винтовыми крышками.
Фильтры мембранные с порами диаметром не более 0,45 мкм.
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
Ступка фарфоровая диаметром не более 70 мм с пестиком по ГОСТ 9147.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Кислота бензойная, ч.д.а., по ГОСТ 10521.
Этилендиаминтетрауксусная кислота, массовая доля основного вещества не менее 99,0% (C10H16N2O8).
Диэтаноламин, массовая доля основного вещества не менее 99,7% (C4H11NO2).
Цетилтриметиламмония бромид, массовая доля основного вещества не менее 99,8% (C19H42BrN).
Натрия гидроокись, х.ч., по ГОСТ 4328.
Кислота соляная, х.ч., по ГОСТ 3118.
Лимонная кислота, массовая доля основного вещества не менее 99,5%.
Щавелевая кислота, массовая доля основного вещества не менее 99,0% (C2H2O4).
Винная кислота, массовая доля основного вещества не менее 99,5% (C4H6O6).
Яблочная кислота, массовая доля основного вещества не менее 99,0% (C4H6O5).
Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования и посуды, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивов, по качеству не ниже указанных.
7.3 Подготовка к проведению измерений
7.3.1 Приготовление раствора гидроокиси натрия молярной концентрацией c (NaOH) = 0,5 моль/дм3 для промывания капилляра
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают (400 +/- 50) см3 дистиллированной воды, при перемешивании добавляют 20,00 г гидроокиси натрия, взвешенного с точностью до второго знака после запятой. Объем раствора доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.
Срок хранения раствора в емкости из полимерного материала — не более 6 мес.
7.3.2 Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрацией c (HCl) = 0,5 моль/дм3 для промывания капилляра
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают (400 +/- 50) см3 дистиллированной воды, добавляют 40 см3 соляной кислоты и перемешивают. Объем раствора доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.
Срок хранения раствора не ограничен.
7.3.3 Приготовление компонентов для буферного раствора
7.3.3.1 Приготовление раствора бензойной кислоты молярной концентрацией 20 ммоль/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 0,244 г бензойной кислоты, взвешенной с точностью до третьего знака после запятой, добавляют 50 см3 дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения при нагревании на водяной бане, доводят объем до метки дистиллированной водой.
Срок хранения раствора при температуре от 2 °C до 8 °C — не более 1 мес.
7.3.3.2 Приготовление раствора диэтаноламина молярной концентрацией 20 ммоль/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 0,210 г диэтаноламина, взвешенного с точностью до третьего знака после запятой, добавляют 50 см3 дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения, доводят объем до метки дистиллированной водой.
Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 2 мес.
7.3.3.3 Приготовление раствора цетилтриметиламмония бромида молярной концентрацией 20 ммоль/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 0,730 г цетилтриметиламмония бромида, взвешенного с точностью до третьего знака после запятой, добавляют 50 см3 дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения при нагревании на водяной бане, доводят объем до метки дистиллированной водой.
Раствор готовят перед использованием.
7.3.3.4 Приготовление раствора этилендиаминтетрауксусной кислоты молярной концентрацией 4 ммоль/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 0,117 г этилендиаминтетрауксусной кислоты, взвешенной с точностью до третьего знака после запятой, добавляют 50 см3 дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения при нагревании на водяной бане, доводят объем до метки дистиллированной водой.
Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 6 мес.
7.3.4 Приготовление буферного раствора
Для приготовления 20 см3 буферного раствора в сухом стакане емкостью 50 см3 смешивают 10 см3 раствора бензойной кислоты по 7.3.3.1, 9 см3 раствора диэтаноламина по 7.3.3.2, 0,5 см3 раствора цетилтриметиламмония бромида по 7.3.3.3 и 0,5 см3 раствора этилендиаминтетрауксусной кислоты по 7.3.3.4 и перемешивают. Затем полученный буферный раствор фильтруют через мембранный фильтр в центрифужную пробирку, центрифугируют в течение 10 мин при скорости 2900 об/мин, после чего контролируют значение pH на pH-метре.
Готовый буферный раствор должен иметь значение pH (5,60 +/- 0,02).
Примечание - Допускается доводить значение pH до требуемой величины.
Раствор готовят в объеме, необходимом и достаточном для проведения работ в течение одного рабочего дня.
Буферный раствор можно использовать для выполнения не более трех измерений. После проведения трех измерений буферный раствор в пробирке Эппендорфа заменяют на новую порцию раствора.
Примечание - Приготовленный буферный раствор содержит 10 ммоль/дм3 бензойной кислоты, 9 ммоль/дм3 диэтаноламина, 0,5 ммоль/дм3 цетилтриметиламмония бромида и 0,1 ммоль/дм3 этилендиаминтетрауксусной кислоты в 1 дм3 буферного раствора.
7.3.5 Приготовление основных растворов органических кислот
7.3.5.1 Приготовление основного раствора щавелевой кислоты массовой концентрацией 100 мг/дм3
Взвешивают 0,010 г щавелевой кислоты с точностью до третьего знака после запятой, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют (55 +/- 5) см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают до полного растворения и доводят объем до метки дистиллированной водой.
Полученный основной раствор фильтруют через мембранный фильтр и дегазируют на центрифуге в течение 10 мин при 2900 об/мин.
Срок хранения раствора в емкости из полимерного материала в холодильнике при температуре от 4 °C до 8 °C — не более 1 мес.
7.3.5.2 Приготовление основного раствора винной кислоты концентрацией 100 мг/дм3
Взвешивают 0,010 г винной кислоты с точностью до третьего знака после запятой, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют (55 +/- 5) см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают до полного растворения и доводят объем до метки дистиллированной водой.
Полученный основной раствор фильтруют через мембранный фильтр и дегазируют на центрифуге в течение 10 мин при 2900 об/мин.
Срок хранения раствора в емкости из полимерного материала в холодильнике при температуре от 4 °C до 8 °C — не более 1 мес.
7.3.5.3 Приготовление основного раствора яблочной кислоты массовой концентрацией 100 мг/дм3
Взвешивают 0,010 г яблочной кислоты с точностью до третьего знака после запятой, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют (55 +/- 5) см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают до полного растворения и доводят объем до метки дистиллированной водой.
Полученный основной раствор фильтруют через мембранный фильтр и дегазируют на центрифуге в течение 10 мин при 2900 об/мин.
Срок хранения раствора в емкости из полимерного материала в холодильнике при температуре от 4 °C до 8 °C — не более 1 мес.
7.3.5.4 Приготовление основного раствора лимонной кислоты концентрацией 100 мг/дм3
Взвешивают 0,010 г лимонной кислоты с точностью до третьего знака после запятой, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют (55 +/- 5) см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают до полного растворения и доводят объем до метки дистиллированной водой.
Полученный основной раствор фильтруют через мембранный фильтр и дегазируют на центрифуге в течение 10 мин при 2900 об/мин.
Срок хранения раствора в емкости из полимерного материала в холодильнике при температуре от 4 °C до 8 °C — не более 1 мес.
7.3.6 Приготовление градуировочных растворов органических кислот
7.3.6.1 Градуировочный раствор смеси органических кислот массовой концентрацией каждой кислоты 2 мг/дм3
В пробирку Эппендорфа вместимостью от 1,5 см3 с помощью пипеточного дозатора вносят по 0,02 см3 основных растворов щавелевой (см. 7.3.5.1), винной (см. 7.3.5.2), яблочной (см. 7.3.5.3) и лимонной (см. 7.3.5.4) кислот и 0,92 см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают.
Раствор готовят перед использованием.
7.3.6.2 Градуировочный раствор смеси органических кислот массовой концентрацией каждой кислоты 5 мг/дм3
В пробирку Эппендорфа вместимостью от 1,5 см3 с помощью пипеточного дозатора вносят по 0,05 см3 основных растворов щавелевой (см. 7.3.5.1), винной (см. 7.3.5.2), яблочной (см. 7.3.5.3) и лимонной (см. 7.3.5.4) кислот и 0,80 см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают.
Раствор готовят перед использованием.
7.3.6.3 Градуировочный раствор смеси органических кислот массовой концентрацией каждой кислоты 10 мг/дм3
В пробирку Эппендорфа вместимостью от 1,5 см3 с помощью пипеточного дозатора вносят по 0,10 см3 основных растворов щавелевой (см. 7.3.5.1), винной (см. 7.3.5.2), яблочной (см. 7.3.5.3) и лимонной (см. 7.3.5.4) кислот и 0,60 см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают.
Раствор готовят перед использованием.
7.3.6.4 Градуировочный раствор смеси органических кислот массовой концентрацией каждой кислоты 15 мг/дм3
В пробирку Эппендорфа вместимостью от 1,5 см3 с помощью пипеточного дозатора вносят по 0,15 мм3 основных растворов щавелевой (см. 7.3.5.1), винной (см. 7.3.5.2), яблочной (см. 7.3.5.3) и лимонной (см. 7.3.5.4) кислот и 0,40 см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают.
Раствор готовят перед использованием.
7.3.7 Подготовка пробы
Для кондитерских изделий (мармелада, желейных конфет, карамели с фруктовой начинкой, пастильных изделий) предварительно готовят водный раствор.
Среднюю пробу кондитерского изделия, отобранную в соответствии с разделом 6, измельчают скальпелем до размера частиц (3 +/- 1) мм, а затем берут навеску массой 1 г, взвешивают с точностью до третьего десятичного знака, помещают в виалу вместимостью 30 см3, добавляют 25 см3 дистиллированной воды и взбалтывают до получения однородной суспензии. Плотно закрывают крышкой и помещают в ультразвуковую баню.
Экстракцию органических кислот на ультразвуковой бане проводят:
- для пастильных изделий при температуре 65 °C в течение 45 мин с целью осаждения белковых веществ;
- для остальных кондитерских изделий при температуре 40 °C в течение 30 мин.
Затем экстракты фильтруют сначала через бумажный фильтр, затем через мембранный фильтр в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 10 мин при скорости 2900 об/мин.
Если результат измерения не укладывается в диапазон содержания органических кислот, то следует взять массу навески, обеспечивающую результат в требуемом диапазоне.
При определении органических кислот проводят два измерения в условиях повторяемости по ГОСТ ИСО 5725-1-2003 (подраздел 3.14).
7.4 Проведение измерений
7.4.1 Подготовка системы капиллярного электрофореза к измерениям
Для детектирования органических кислот используют косвенный метод при длине волны 235 нм. Капилляр с внутренним диаметром 75 мкм, общей длиной 60 см. Систему капиллярного электрофореза подготавливают к работе в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают следующие рабочие параметры:
- рабочее напряжение — минус 17 кВ;
- рекомендуемая температура для анализа — 25 °C;
- длительность анализа — 7 мин;
- ввод пробы гидродинамический под давлением — 30 мбар·5 с.
1 Все растворы для системы капиллярного электрофореза должны быть профильтрованы через мембранный фильтр и дегазированы на центрифуге.
2 Допускается проведение исследований при других рабочих параметрах, обеспечивающих получение результатов измерений в указанном диапазоне с установленными показателями точности (таблица 1).
7.4.2 Подготовка капилляра
7.4.2.1 Подготовка нового капилляра
Подготовку нового капилляра к работе проводят в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации системы капиллярного электрофореза. При отсутствии в руководстве (инструкции) указаний к подготовке нового капилляра его последовательно промывают: дистиллированной водой — 10 мин, раствором соляной кислоты молярной концентрацией 0,5 моль/дм3 по 7.3.2 - 30 мин, дистиллированной водой — 10 мин, раствором гидроокиси натрия молярной концентрацией 0,5 моль/дм3 по 7.3.1 - 30 мин, дистиллированной водой — 10 мин и буферным раствором по 7.3.4 - 30 мин.
7.4.2.2 Подготовка капилляра к работе
Перед измерением подготавливают капилляр к работе, промывая его раствором гидроокиси натрия молярной концентрацией 0,5 моль/дм3 (см. 7.3.1) в течение 4 мин (давление ввода 1000 мбар), затем буферным раствором (см. 7.3.4) 6 мин (давление ввода 1000 мбар).
Капилляр промывают каждый раз при включении прибора.
7.4.2.3 Промывка капилляра между измерениями
Между измерениями капилляр промывают аналогично 7.4.2.2.
7.4.2.4 Промывка капилляра в конце рабочего дня
После завершения измерений капилляр последовательно промывают: дистиллированной водой — 2 мин, раствором соляной кислоты молярной концентрацией 0,5 моль/дм3 по 7.3.2 - 5 мин, дистиллированной водой — 5 мин, раствором гидроокиси натрия молярной концентрацией 0,5 моль/дм3 по 7.3.1 - 5 мин, дистиллированной водой — 5 мин и оставляют концы капилляра погруженными в пробирки Эппендорфа с дистиллированной водой.
Примечание - При обнаружении на электрофореграммах дрейфа нулевой линии, ступеней и смещения времен миграции органических кислот рекомендуется:
- увеличить продолжительность промывания капилляра буферным раствором между измерениями;
- провести промывание капилляра буферным раствором при рабочем напряжении в течение 2 — 3 мин;
- заменить буферный раствор в пробирках Эппендорфа на входе и на выходе свежими порциями.
7.4.2.5 Условия хранения капилляра
Если перерыв в работе составляет:
- не более 14 сут, то перед хранением капилляр последовательно промывают аналогично 7.4.2.4;
- более 14 сут, то перед хранением капилляр промывают последовательно дистиллированной водой — 2 мин, раствором соляной кислоты молярной концентрацией 0,5 моль/дм3 по 7.3.2 - 5 мин, дистиллированной водой — 5 мин, раствором гидроокиси натрия молярной концентрацией 0,5 моль/дм3 по 7.3.1 - 5 мин, дистиллированной водой в течение 10 мин, затем капилляр продувают воздухом в течение 10 мин. Хранят капилляр в сухом состоянии, при этом перед использованием капилляр подготавливают к работе по 7.4.2.1.
7.4.3 Градуировка прибора
7.4.3.1 Установление градуировочной характеристики
Градуировку прибора проводят, используя градуировочные растворы смеси органических кислот, приготовленные по 7.3.6, при заданных рабочих параметрах прибора по 7.4.1. При этом непосредственно перед измерениями подготавливают капилляр к работе по 7.4.2.2. Градуировочные растворы органических кислот анализируют в порядке возрастания их массовых концентраций. Для каждого градуировочного раствора регистрируют по две электрофореграммы. Пример электрофореграммы представлен на рисунке А.1 приложения А.
Примечание — Если на электрофореграмме градуировочной смеси наблюдается плохое разделение органических кислот, то в буферный раствор необходимо добавить 0,03 см3 раствора бензойной кислоты (см. 7.3.3.1). Необходимо добавлять раствор бензойной кислоты до получения электрофореграммы с хорошо поделившимися пиками.
Обрабатывают электрофореграммы согласно процедуре градуировки в соответствии с программным обеспечением прибора.
Устанавливают градуировочную характеристику в виде линейной зависимости оптического поглощения соответствующей кислоты от ее массовой концентрации в градуировочном растворе смеси кислот, которая должна проходить через 0, вычисляют коэффициент корреляции с помощью программного обеспечения.
Градуировочные характеристики признаются приемлемыми, если соблюдается следующее требование: коэффициент корреляции должен быть не менее 0,9.
При несоблюдении требования находят причины несоответствия и устраняют их, после чего градуировку прибора проводят повторно.
При замене капилляра, после проведения ремонта или длительного простоя прибора (более 14 сут), при смене партии хотя бы одного из компонентов буферного раствора, при изменении хотя бы одного из параметров или характеристик прибора (см. 7.4.1), а также при получении неудовлетворительных результатов контроля стабильности градуировочной характеристики (см. 7.4.3.2) градуировку прибора проводят заново.
7.4.3.2 Контроль стабильности градуировочной характеристики
Стабильность градуировочной характеристики контролируют перед началом анализа проб после промывания капилляра в соответствии с 7.4.2.2, используя в качестве контрольного образца градуировочный раствор, содержащий определяемые органические кислоты в концентрациях, соответствующих середине диапазонов градуировочных характеристик (см. 7.3.6.3).
Контрольную пробу анализируют при заданных параметрах прибора по 7.4.1. Используя градуировочную характеристику (см. 7.4.3.1), устанавливают значение массовой концентрации определяемой органической кислоты в контрольном образце Cк, мг/дм3.
Градуировочную характеристику признают стабильной при выполнении условия
где Cк — измеренное значение массовой концентрации определяемой органической кислоты, мг/дм3;
C0 — действительное значение массовой концентрации определяемой органической кислоты в контрольном растворе, использованном для контроля стабильности градуировочной характеристики, мг/дм3;
G — норматив контроля стабильности градуировочной характеристики, %, рассчитываемый по формуле
где \delta — границы относительной погрешности, %, (см. таблицу 1).
7.4.4 Порядок выполнения измерений
7.4.4.1 Промывают капилляр в соответствии с требованиями 7.4.2.3.
7.4.4.2 Приготовленный водный экстракт пробы по 7.3.7 разводят в пробирке Эппендорфа вместимостью от 1,5 см3, для этого в пробирку Эппендорфа пипеточным дозатором помещают 90 мм3 экстракта и 810 мм3 дистиллированной воды, перемешивают. У пробирки Эппендорфа отрезают крышку. Пробирку помещают в систему капиллярного электрофореза и определяют массовую долю органических кислот на приборе при условиях, указанных в 7.4.1.
На электрофореграмме идентифицируют определяемые органические кислоты, сравнивая с электрофореграммой градуировочного раствора 7.4.3.1 по времени миграции. Определяют оптическое поглощение для каждой определяемой органической кислоты из электрофореграммы. Рассчитывают массовые концентрации обнаруженных органических кислот с помощью программного обеспечения прибора, учитывая 10-кратное разбавление в пробирке Эппендорфа.
7.4.4.3 При сомнении в идентификации кислоты используют метод добавок.
В пробирку Эппендорфа с анализируемым водным экстрактом пробы пипеточным дозатором добавляют 0,10 см3 основного раствора определяемой кислоты. Пробирку Эппендорфа помещают в систему капиллярного электрофореза и проводят анализ при условиях, указанных в 7.4.1.
Если на полученной электрофореграмме высота пика увеличилась, то кислота идентифицирована правильно, если появился новый пик, то кислота идентифицирована неверно.
7.5 Обработка результатов
7.5.1 Массовую долю определяемой органической кислоты в кондитерских изделиях C, %, рассчитывают по формуле
C = \frac{C_{\text{э}} \cdot V}{m \cdot 10000} , (3)
где Cэ — массовая концентрация определяемой органической кислоты в водном экстракте пробы, мг/дм3;
V — объем воды, взятый для приготовления раствора анализируемой пробы, см3 (V = 25 см3);
m — масса анализируемой пробы, г;
10 000 — коэффициент пересчета, учитывающий переход от содержания органических кислот в мг/дм3 к содержанию органических кислот в %.
7.5.2 Вычисления проводят до третьего десятичного знака с последующим округлением до второго десятичного знака.
За окончательный результат определения массовой доли органических кислот в кондитерских изделиях принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости
|C1 - C2| <= 0,01·rотн·Cср, (4)
где C1 и C2 — результаты двух параллельных определений, %;
rотн — предел повторяемости (сходимости) двух параллельных определений, приведенный в таблице 1, %;
Cср — среднее арифметическое C1 и C2%, %.
7.5.3 Результат определения массовой доли органических кислот представляют в виде
(C_{\text{ср}} \pm \Delta)\% при P = 0,95, (5)
где Cср — среднее арифметическое двух параллельных определений массовой доли органических кислот, %;
\Delta — значение абсолютной погрешности определения массовой доли органических кислот, %, которое рассчитывается по формуле
\Delta = \delta \cdot 0,01 \cdot \text{С}_{\text{ср}} , (6)
где \delta — границы относительной погрешности, %, (см. таблицу 1).
Числовое значение результата измерений должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и значение абсолютной погрешности измерений, содержащее не более двух значащих цифр.
Настоящий метод выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений в диапазонах и с показателем точности и пределами повторяемости и воспроизводимости при P = 0,95, приведенными в таблице 1.
Метрологические характеристики определения массовой доли органических кислот
7.6 Контроль точности результатов измерений
Процедуры и периодичность контроля точности (контроля стабильности) получаемых результатов измерений в пределах лаборатории проводят с учетом требований ГОСТ ИСО 5725-6-2003 (подраздел 6.2).
8 Определение массовой доли макроэлементов методом капиллярного электрофореза с фотометрическим детектированием
8.1 Сущность метода
Метод определения массовой доли макроэлементов с использованием капиллярного электрофореза основан на миграции и разделении катионов под действием электрического поля вследствие их различной электрофоретической подвижности.
8.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда и реактивы
Система капиллярного электрофореза с источником высокого напряжения положительной полярности, оснащенная кварцевым капилляром (эффективная длина не менее 50 см), фотометрическим детектором, позволяющим регистрировать оптическое поглощение в диапазоне длин волн от 210 до 280 нм.
Весы утвержденного типа, поверенные в установленном порядке, с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более +/- 0,5 мг.
Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 класса точности I с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более +/- 0,001 г.
pH-метр с диапазоном измерений pH от 1 до 14 pH с пределом допускаемой абсолютной погрешности не более +/- 0,02 pH.
Центрифуга лабораторная медицинская со скоростью вращения ротора не менее 3000 об/мин.
Баня ультразвуковая, обеспечивающая поддержание температуры до 80 °C.
Баня водяная, обеспечивающая поддержание температуры до 100 °C с погрешностью не более +/- 2 °C.
Термометр жидкостной стеклянный с диапазоном измерений от 0 °C до 100 °C с пределом допускаемой погрешности +/- 2 °C по ГОСТ 28498.
Плитка электрическая закрытого типа, обеспечивающая нагрев в диапазоне температур от 120 °C до 200 °C по ГОСТ 14919.
Дозаторы пипеточные для отбора и дозирования с регулируемым объемом дозирования от 1000 до 5000 мкл с относительной погрешностью дозирования +/- 1% с соответствующими наконечниками по ГОСТ 28311.
Дозаторы пипеточные для отбора и дозирования с регулируемым объемом дозирования от 100 до 1000 мкл с относительной погрешностью дозирования +/- 2% с соответствующими наконечниками по ГОСТ 28311.
Дозаторы пипеточные для отбора и дозирования с регулируемым объемом дозирования от 5 до 50 мкл с относительной погрешностью дозирования +/- 3% с соответствующими наконечниками по ГОСТ 28311.
Пипетки градуированные номинальной вместимостью 1, 5 и 10 см3 по ГОСТ 29227.
Колбы мерные 2-100-1, 2-1000-1 по ГОСТ 1770.
Цилиндр 3-500, 1-250 или 3-250, 3-25 и 3-50 по ГОСТ 1770.
Стаканы В-1-10 ТС, В-1-50 ТС по ГОСТ 25336.
Воронки ВФ-1-56 ХС по ГОСТ 25336.
Пробирки Эппендорфа вместимостью от 1,5 см3 в соответствии с техническими характеристиками используемой системы капиллярного электрофореза.
Склянки стеклянные с широкой горловиной вместимостью 50 см3 с герметично закрывающимися винтовыми крышками.
Пробирки центрифужные из полипропилена вместимостью 50 см3 с винтовыми крышками.
Фильтры мембранные с порами диаметром не более 0,45 мкм.
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
Ступка фарфоровая диаметром не более 70 мм с пестиком по ГОСТ 9147.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Государственные стандартные образцы (ГСО): ГСО 7473-98 состава раствора ионов калия, ГСО 7475-98 состава раствора ионов кальция, ГСО 7681-99 состава водного раствора ионов магния, ГСО 7474-98 состава раствора ионов натрия массовой концентрации 1 г/дм3 с допускаемой относительной погрешностью аттестованного значения не более +/- 1%.
Натрия гидроокись, х.ч., по ГОСТ 4328.
Кислота соляная, х.ч., по ГОСТ 3118.
Кислота винная, массовая доля основного вещества не менее 99,5% (C4H6O6).
18-Crown-6 (далее — 18-Краун-6), массовая доля основного вещества не менее 99,0% (C12H24NO6).
Бензимидазол, ч.д.а., массовая доля основного вещества не менее 98,0% (C7H6N2).
Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования и посуды, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивов, по качеству не ниже указанных.
8.3 Подготовка к проведению измерений
8.3.1 Приготовление раствора гидроокиси натрия молярной концентрацией 0,5 моль/дм3 для промывания капилляра
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают (400 +/- 50) см3 дистиллированной воды, при перемешивании добавляют 20,00 г гидроокиси натрия, взвешенной с точностью до второго знака после запятой. Объем раствора доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.
Срок хранения раствора — не более 6 мес.
8.3.2 Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрацией 0,5 моль/дм3 для промывания капилляра
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают (400 +/- 50) см3 дистиллированной воды, добавляют 40 см3 соляной кислоты и перемешивают. Объем раствора доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.
Срок хранения раствора — до изменения внешнего вида.
8.3.3 Приготовление компонентов для буферного раствора
8.3.3.1 Приготовление раствора бензимидазола молярной концентрацией 40 ммоль/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 0,473 г бензимидазола, взвешенного с точностью до третьего знака после запятой, добавляют 50 см3 дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения, затем доводят дистиллированной водой до метки и снова перемешивают.
Срок хранения раствора — не более 3 мес.
8.3.3.2 Приготовление раствора винной кислоты молярной концентрацией 20 ммоль/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 0,30 г винной кислоты, взвешенной с точностью до второго знака после запятой, добавляют 50 см3 дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения, затем доводят дистиллированной водой до метки и снова перемешивают.
Срок хранения раствора при температуре от 2 °C до 8 °C — не более 1 мес.
8.3.3.3 Приготовление раствора 18-Краун-6 молярной концентрацией 19,85 ммоль/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 0,525 г 18-Краун-6, взвешенного с точностью до третьего знака после запятой, добавляют 50 см3 дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения, затем доводят дистиллированной водой до метки и снова перемешивают.
Срок хранения раствора при температуре от 2 °C до 8 °C — не более 6 мес.
8.3.4 Приготовление буферного раствора
Для приготовления 20 см3 буферного раствора в сухую емкость приливают 5 см3 раствора бензимидазола (см. 8.3.3.1), 5 см3 раствора винной кислоты (см. 8.3.3.2), 2,0 см3 раствора 18-Краун-6 (см. 8.3.3.3) и 8,0 см3 дистиллированной воды, перемешивают. Затем полученный буферный раствор фильтруют через мембранный фильтр в центрифужную пробирку, центрифугируют в течение 10 мин при скорости 2900 об/мин.
Буферный раствор должен иметь значение pH (5,05 +/- 0,02).
Примечание - Допускается доводить значение pH до требуемой величины.
Раствор готовят в объеме, необходимом и достаточном для проведения работ в течение одного рабочего дня.
Буферный раствор можно использовать для выполнения не более пяти измерений. После проведения пяти измерений буферный раствор в пробирке Эппендорфа заменяют на новую порцию раствора.
Примечание - Приготовленный буферный раствор содержит 10 ммоль/дм3 бензимидазола, 5 ммоль/дм3 винной кислоты, 2 ммоль/дм3 18-Краун-6 в 1 дм3 буферного раствора.
8.3.5 Приготовление градуировочных растворов смеси макроэлементов
8.3.5.1 Приготовление градуировочного раствора смеси макроэлементов калия, натрия, кальция массовой концентрацией по 50 мг/дм3 и магния массовой концентрацией 25 мг/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят пипеткой по 5 см3 ГСО калия, натрия, кальция и 2,5 см3 ГСО магния, доводят содержимое колбы дистиллированной водой до метки.
Срок хранения раствора в плотно закрытых емкостях из полимерного материала при температуре от 2 °C до 8 °C — не более 3 мес.
8.3.5.2 Приготовление градуировочного раствора смеси макроэлементов калия, натрия, кальция массовой концентрацией по 0,5 мг/дм3 и магния массовой концентрацией 0,25 мг/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят пипеткой 1 см3 градуировочного раствора смеси макроэлементов (см. 8.3.5.1), доводят содержимое колбы дистиллированной водой до метки.
Срок хранения раствора в плотно закрытых емкостях из полимерного материала при температуре от 2 °C до 8 °C — не более 7 сут.
8.3.5.3 Приготовление градуировочного раствора смеси макроэлементов калия, натрия, кальция массовой концентрацией по 2,0 мг/дм3 и магния массовой концентрацией 1,0 мг/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят пипеткой 4 см3 градуировочного раствора смеси макроэлементов (см. 8.3.5.1), доводят содержимое колбы дистиллированной водой до метки.
Срок хранения раствора в плотно закрытых емкостях из полимерного материала при температуре от 2 °C до 8 °C — не более 7 сут.
8.3.5.4 Приготовление градуировочного раствора смеси макроэлементов калия, натрия, кальция массовой концентрацией по 5,0 мг/дм3 и магния массовой концентрацией 2,5 мг/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят пипеткой 10 см3 градуировочного раствора смеси макроэлементов (см. 8.3.5.1), доводят содержимое колбы дистиллированной водой до метки.
Срок хранения раствора в плотно закрытых емкостях из полимерного материала при температуре от 2 °C до 8 °C — не более 21 сут.
8.3.5.5 Приготовление градуировочного раствора смеси макроэлементов калия, натрия, кальция массовой концентрацией по 20 мг/дм3 и магния массовой концентрацией 10 мг/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят пипеткой 40 см3 градуировочного раствора смеси макроэлементов (см. 8.3.5.1), доводят содержимое колбы дистиллированной водой до метки.
Срок хранения раствора в плотно закрытых емкостях из полимерного материала при температуре от 2 °C до 8 °C — не более 21 сут.
8.3.6 Подготовка пробы
Для кондитерских изделий (мармелад, желейные конфеты, карамель с фруктовой начинкой, пастильные изделия) готовят водный раствор.
Среднюю пробу кондитерского изделия, отобранную в соответствии с разделом 6, измельчают скальпелем до размера частиц (3 +/- 1) мм, а затем берут навеску массой 1 г, взвешивают с точностью до третьего десятичного знака и помещают в стеклянную склянку вместимостью 50 см3. Затем добавляют 50 см3 дистиллированной воды и взбалтывают до получения однородной суспензии. Плотно закрывают крышкой и помещают в ультразвуковую баню.
Экстракцию макроэлементов проводят на ультразвуковой бане:
- для пастильных изделий при температуре 65 °C в течение 45 мин с целью осаждения белковых веществ;
- для остальных кондитерских изделий при температуре 40 °C в течение 45 мин.
Затем экстракты фильтруют сначала через бумажный фильтр, затем через мембранный фильтр в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 10 мин при скорости 2900 об/мин.
Если результат измерения не укладывается в диапазон содержания макроэлементов, то следует взять массу навески, обеспечивающую результат в требуемом диапазоне.
При определении макроэлементов проводят два измерения в условиях повторяемости по ГОСТ ИСО 5725-1-2003 (подраздел 3.14).
8.4 Проведение измерений
8.4.1 Подготовка системы капиллярного электрофореза к измерениям
Для детектирования макроэлементов используют косвенный метод при длине волны 254 нм. Капилляр с внутренним диаметром 75 мкм, общей длиной 60 см. Систему капиллярного электрофореза подготавливают к работе в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают следующие рабочие параметры:
- рабочее напряжение — 13 кВ;
- рекомендуемая температура для анализа — 21 °C;
- длительность анализа — 12 мин;
- ввод пробы гидродинамический под давлением — 30 мбар·5 с.
1 Все растворы для системы капиллярного электрофореза должны быть профильтрованы через мембранный фильтр и дегазированы на центрифуге.
2 Допускается проведение исследований при других рабочих параметрах, обеспечивающих получение результатов измерений в диапазонах и с установленными показателями точности (таблица 2).
8.4.2 Подготовка капилляра
8.4.2.1 Подготовка нового капилляра
Подготовку нового капилляра к работе проводят в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации прибора. При отсутствии в руководстве (инструкции) указаний к подготовке нового капилляра его последовательно промывают дистиллированной водой в течение 10 мин, раствором соляной кислоты молярной концентрацией 0,5 моль/дм3 по 8.3.2 в течение 30 мин, дистиллированной водой в течение 10 мин, раствором гидроокиси натрия молярной концентрацией 0,5 моль/дм3 по 8.3.1 в течение 30 мин, дистиллированной водой в течение 10 мин и буферным раствором по 8.3.4 в течение 30 мин.
8.4.2.2 Подготовка капилляра к работе
Перед измерением подготавливают капилляр к работе, промывая его раствором гидроокиси натрия молярной концентрацией 0,5 моль/дм3 (см. 8.3.1) в течение 5 мин (давление ввода 1000 мбар), дистиллированной водой в течение 5 мин (давление ввода 1000 мбар), затем буферным раствором (см. 8.3.4) в течение 8 мин (давление ввода 1000 мбар).
Капилляр промывают каждый раз при включении прибора.
8.4.2.3 Промывка капилляра между измерениями
Между измерениями капилляр промывают аналогично 8.4.2.2.
8.4.2.4 Промывка капилляра в конце рабочего дня
После завершения измерений капилляр последовательно промывают: дистиллированной водой — 2 мин, раствором соляной кислоты молярной концентрацией 0,5 моль/дм3 по 8.3.2 - 5 мин, дистиллированной водой — 5 мин, раствором гидроокиси натрия молярной концентрацией 0,5 моль/дм3 по 8.3.1 - 5 мин, дистиллированной водой — 5 мин и оставляют концы капилляра погруженными в пробирки Эппендорфа с дистиллированной водой.
Примечание - При обнаружении на электрофореграммах дрейфа нулевой линии, ступеней и смещения времен миграции макроэлементов рекомендуется:
- увеличить продолжительность промывания капилляра буферным раствором между измерениями;
- провести промывание капилляра буферным раствором при рабочем напряжении в течение 2 — 3 мин;
- заменить буферный раствор в пробирках Эппендорфа на входе и на выходе свежими порциями.
8.4.2.5 Условия хранения капилляра
Если перерыв в работе составляет:
- не более 14 сут, то перед хранением капилляр последовательно промывают аналогично 8.4.2.4;
- более 14 сут, то перед хранением капилляр промывают последовательно дистиллированной водой — 2 мин, раствором соляной кислоты молярной концентрацией 0,5 моль/дм3 по 8.3.2 - 5 мин, дистиллированной водой — 5 мин, раствором гидроокиси натрия молярной концентрацией 0,5 моль/дм3 по 8.3.1 - 5 мин, дистиллированной водой в течение 10 мин, затем капилляр продувают воздухом в течение 10 мин. Хранят капилляр в сухом состоянии, при этом перед использованием его подготавливают к работе по 8.4.2.1.
8.4.3 Градуировка прибора
8.4.3.1 Установление градуировочной характеристики
Градуировку прибора проводят, используя градуировочные растворы смеси макроэлементов, приготовленные по 8.3.5, при заданных рабочих параметрах прибора по 8.4.1. При этом непосредственно перед измерениями подготавливают капилляр к работе по 8.4.2.2. Устанавливают в прибор градуировочные растворы смеси макроэлементов и анализируют их в порядке возрастания массовой концентрации. Для каждого градуировочного раствора регистрируют по две электрофореграммы. Пример электрофореграммы градуировочного раствора смеси макроэлементов представлен на рисунке Б.1 приложения Б.
Обрабатывают электрофореграммы согласно процедуре градуировки в соответствии с Руководством пользователя программного обеспечения прибора.
Устанавливают градуировочную характеристику в виде линейной зависимости оптического поглощения соответствующего макроэлемента от его массовой концентрации в градуировочном растворе смеси макроэлементов, которая должна проходить через 0, и вычисляют коэффициент корреляции с помощью программного обеспечения.
Градуировочные характеристики признаются приемлемыми, если соблюдается следующее требование: коэффициент корреляции должен быть не менее 0,9.
При несоблюдении требования находят причины несоответствия и устраняют их, после чего градуировку прибора проводят повторно.
При замене капилляра, после проведения ремонта или длительного простоя прибора (более 14 сут), при смене партии хотя бы одного из компонентов буферного раствора, при изменении хотя бы одного из параметров или характеристик прибора (см. 8.4.1), а также при получении неудовлетворительных результатов контроля стабильности градуировочной характеристики (см. 8.4.3.2) градуировку прибора проводят заново.
8.4.3.2 Контроль стабильности градуировочной характеристики
Стабильность градуировочной характеристики контролируют перед началом анализа проб после промывания капилляра в соответствии с 8.4.2.2, используя в качестве контрольного образца раствор, содержащий определяемые макроэлементы в концентрациях, соответствующих середине диапазонов градуировочных характеристик (см. 8.3.5.5).
Контрольную пробу анализируют при заданных параметрах прибора по 8.4.1.
Используя градуировочную характеристику (см. 8.4.3.1), устанавливают значение массовой концентрации определяемого макроэлемента в контрольном образце Cк, мг/дм3.
Градуировочную характеристику признают стабильной при выполнении условия
где Cк — установленное значение массовой концентрации определяемого макроэлемента, мг/дм3;
C0 — действительная массовая концентрация конкретного макроэлемента в контрольном растворе, использованном для контроля стабильности градуировочной характеристики, мг/дм3;
G — норматив контроля стабильности градуировочной характеристики, %, рассчитываемый по формуле
где \delta — границы относительной погрешности, %, (см. таблицу 2).
8.4.4 Порядок выполнения измерений
8.4.4.1 Промывают капилляр в соответствии с требованиями 8.4.2.3.
8.4.4.2 В пробирку Эппендорфа вместимостью от 1,5 см3 помещают пипеточным дозатором 0,9 см3 экстракта пробы, приготовленного по 8.3.6. У пробирки Эппендорфа отрезают крышку. Пробирку помещают в систему капиллярного электрофореза и проводят измерения при условиях, указанных в 8.4.1.
На полученной электрофореграмме проверяют правильность автоматической разметки пиков и, если необходимо, корректируют ее. Используя программное обеспечение, проводят идентификацию макроэлементов в экстракте пробы по совпадению времени миграции макроэлементов в экстракте пробы и градуировочной смеси при ширине окна идентификации 5%.
Рассчитывают массовые концентрации обнаруженных макроэлементов с использованием градуировочной характеристики, установленной по 8.4.3.1, с помощью программного обеспечения прибора.
8.4.4.3 При сомнении в идентификации макроэлемента используют метод добавок.
В пробирку Эппендорфа с анализируемым водным экстрактом пробы пипеточным дозатором добавляют 0,015 см3 ГСО водного раствора предполагаемого макроэлемента. Пробирку Эппендорфа помещают в систему капиллярного электрофореза и проводят анализ при условиях, указанных в 8.4.1.
Если на полученной электрофореграмме высота пика увеличилась, то макроэлемент идентифицирован правильно, если появился новый пик, то макроэлемент идентифицирован неверно.
8.5 Обработка результатов
8.5.1 Массовую долю определяемого макроэлемента в кондитерских изделиях C, %, рассчитывают по формуле
C = \frac{C_{\text{э}} \cdot V}{m \cdot 10000} , (9)
где Cэ — массовая концентрация определяемого макроэлемента в водном экстракте пробы, мг/дм3;
V — объем воды, взятый для приготовления раствора анализируемой пробы, см3 (V = 50 см3);
m — масса анализируемой пробы, г;
10 000 — коэффициент пересчета от содержания макроэлементов в мг/дм3 к массовой доле макроэлементов в %.
8.5.2 За окончательный результат определения массовой доли конкретного макроэлемента в кондитерских изделиях принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости
|C1 - C2| <= 0,01·rотн·Cср, (10)
где C1 и C2 — результаты двух параллельных определений массовой доли макроэлемента, %;
rотн — предел повторяемости (сходимости) двух параллельных определений, приведенный в таблице 2, %;
Cср — среднее арифметическое двух параллельных определений массовой доли макроэлемента, %.
8.5.3 Результат определения содержания определяемого макроэлемента представляют в виде
(C_{\text{ср}} \pm \Delta)\% при P = 0,95, (11)
где Cср — среднее арифметическое результатов двух параллельных определений массовой доли макроэлемента, %;
\Delta — значение абсолютной погрешности определения массовой доли макроэлементов, %, которое рассчитывается по формуле
\Delta = \delta \cdot 0,01 \cdot \text{С}_{\text{ср}} , (12)
где \delta — границы относительной погрешности, % (см. таблицу 2).
Числовое значение результата измерений должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и значение абсолютной погрешности измерений, содержащее не более двух значащих цифр.
Настоящий метод выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений в диапазонах и с показателем точности и пределами повторяемости и воспроизводимости при P = 0,95, приведенными в таблице 2.
Метрологические характеристики определения макроэлементов
При возникновении разногласий в оценке качестве продукции за окончательный результат принимают среднее арифметическое не менее четырех параллельных определений (ГОСТ ИСО 5725-6).
8.6 Контроль точности результатов измерений
Процедуры и периодичность контроля точности (контроля стабильности) получаемых результатов измерений в пределах лаборатории проводят с учетом требований ГОСТ ИСО 5725-6-2003 (подраздел 6.2).
9 Расчет массовой доли фруктового сырья
9.1 Сущность метода
Метод определения массовой доли фруктового сырья основан на определении массовых долей яблочной кислоты, калия и магния в исследуемых образцах кондитерских изделий или используемого фруктового (ягодного) сырья и последующем расчете массовой доли фруктового сырья. Если количество яблочной кислоты и/или суммы калия и магния равно нулю, то фруктовое сырье в изделии отсутствует и расчет массовой доли фруктового сырья не проводится.
9.2 Определение массовой доли яблочной кислоты в изделии осуществляют по 7.
9.3 Массовую долю калия и массовую долю магния в изделии определяют по 8.
9.4 Расчет массовой доли фруктового сырья в изделиях возможен только при одновременном присутствии в исследуемых образцах калия, магния и яблочной кислоты.
При исследовании фруктового (ягодного) сырья и/или овощного сырья, не входящего в область применения данного стандарта, расчет массовой доли фруктового сырья также не проводится.
9.5 Для обеспечения заданного количества фруктового сырья в кондитерских изделиях рекомендуется осуществлять входной контроль фруктового сырья по содержанию яблочной кислоты, калия и магния.
Массовая доля яблочной кислоты во фруктовом (ягодном) сырье приемлемого качества должна быть не менее 0,38%, а массовая доля суммы калия и магния — не менее 0,12%.
9.6 Массовую долю фруктового сырья в изделиях в пересчете на яблочное пюре Mфр.с, %, рассчитывают по формуле
где Пя — массовая доля яблочной кислоты в изделии, %;
197 — константа критерия яблочной кислоты;
210 — константа критерия суммы калия и магния;
Пм — массовая доля суммы калия и магния в изделии, %, которая рассчитывается по формуле
где CK — массовая доля калия в изделии, %;
CMg — массовая доля магния в изделии, %.
Массовая доля фруктового сырья в продукте должна быть в соответствии с расчетным содержанием по рецептуре с учетом допускаемых отклонений, указанных в рецептурах кондитерских изделий или технологических инструкциях.
9.7 Вычисления проводят до второго десятичного знака с последующим округлением до первого десятичного знака.
9.8 Результат вычислений массовой доли фруктового сырья представляют в виде
(M_{\text{фр}.\text{с}.} \pm \Delta)\% при P = 0,95, (15)
где Mфр.с — массовая доля фруктового сырья в изделии в пересчете на яблочное пюре, %;
\Delta — значение абсолютной погрешности определения массовой доли фруктового сырья, %, которое рассчитывается по формуле
\Delta = \delta \cdot 0,01 \cdot M_{\text{фр}.\text{с}} , (16)
где \delta — границы относительной погрешности, % (см. таблицу 3).
Числовое значение результата вычислений должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и значение абсолютной погрешности вычислений, содержащее не более двух значащих цифр.
Настоящий метод обеспечивает получение результатов измерений в диапазонах и с показателем точности и пределами повторяемости и воспроизводимости при P = 0,95, приведенными в таблице 3.
Метрологические характеристики определения массовой доли фруктового сырья
ПРИМЕР ТИПОВОЙ ЭЛЕКТРОФОРЕГРАММЫ ГРАДУИРОВОЧНОГО РАСТВОРА ОРГАНИЧЕСКИХ КИСЛОТ
Рисунок А.1 — Электрофореграмма градуировочного раствора смеси органических кислот концентрацией каждой кислоты 10 мг/дм3
ПРИМЕР ТИПОВОЙ ЭЛЕКТРОФОРЕГРАММЫ ГРАДУИРОВОЧНОГО РАСТВОРА СМЕСИ МАКРОЭЛЕМЕНТОВ
Рисунок Б.1 — Электрофореграмма градуировочного раствора смеси макроэлементов