ГОСТ 20730-75. Государственный стандарт Союза ССР. Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей)

(утв. и введен в действие Постановлением Госстандарта СССР от 09.04.1975 № 899)

Утвержден и введен в действие Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 9 апреля 1975 г. № 899

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ. БУЛЬОН МЯСО-ПЕПТОННЫЙ (ДЛЯ ВЕТЕРИНАРНЫХ ЦЕЛЕЙ)

Nutrient media. Meat-pepton broth (for veterinary)

ГОСТ 20730-75

Группа Р35

Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 9 апреля 1975 г. № 899 срок действия установлен

с 1 января 1976 года до 1 января 1981 года

РАЗРАБОТАН Всесоюзным Государственным научно-контрольным институтом ветеринарных препаратов

Директор Бойко А.А.

Руководитель темы: Простяков А.П.

Исполнители темы: Агапова З.А., Цыганкова С.И., Голикова Г.А.

ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР

Член коллегии Третьяков А.Д.

ПОДГОТОВЛЕН К УТВЕРЖДЕНИЮ Всесоюзным научно-исследовательским институтом стандартизации (ВНИИС)

Директор Гличев А.В.

УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 9 апреля 1975 г. № 899

Настоящий стандарт распространяется на мясо-пептонный бульон, представляющий собой питательный раствор, предназначенный для выращивания микроорганизмов.

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1. Мясо-пептонный бульон должен изготавливаться в соответствии с действующими правилами по ведению технологического процесса, утвержденными в установленном порядке.

1.2. Мясо-пептонный бульон по физико-химическим, биохимическим и биологическим показателям должен соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл. 1.

Таблица 1

Наименования показателей	Характеристика и нормы
Внешний вид	Прозрачная жидкость
Цвет	Желтый
Запах	Специфический, свежего мясного экстракта и пептона
Наличие механической примеси, плесени, хлопьев и осадка	Не допускается
Содержание общего азота, %, не менее	0,40
Содержание азота аминогрупп, аминокислот и низших пептидов, %, не менее	0,09
Содержание пептонов, %, не менее	2,7
Содержание сухого вещества, %	3,0 — 3,4
Содержание белка, %, не более	0,5
Содержание хлористого натрия, %	0,5
Концентрация водородных ионов (pH)	7,2 — 7,6
Стерильность	Посев на питательные среды не должен давать роста микрофлоры в течение трех суток в термостате при 37 — 38 °C
Способность поддерживать рост микробов, оптическая плотность, не менее:
Staphylococcus aureus «Лассманов»	0,70
Escherichia coli штамм 675	0,75
Streptococcus faccalis штамм 6783	0,40

2. ПРАВИЛА ПРИЕМКИ

2.1 Мясо-пептонный бульон сдают и принимают сериями.

2.2. Каждая серия мясо-пептонного бульона на предприятиях биологической промышленности Министерства сельского хозяйства СССР должна быть принята государственным контролером Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.

2.3. Под серией следует понимать любое количество мясо-пептонного бульона, изготовленное за один технологический цикл, в одной емкости (реакторе) и оформленное одним документом о качестве.

2.4. Для проверки качества препарата от каждой серии мясо-пептонного бульона более 50 л отбирают 2 л, при объеме менее 50 л — 0,6 л.

Если вся серия мясо-пептонного бульона расфасована в бутыли, делают выборку в количестве одной бутыли. Если мясо-пептонный бульон расфасован во флаконы, составляют выборку такого количества флаконов, чтобы объем мясо-пептонного бульона в отобранных флаконах соответствовал указанной выше норме, которая установлена в зависимости от общего объема серии мясо-пептонного бульона.

2.5. При получении неудовлетворительных результатов испытаний хотя бы по одному из показателей серию мясо-пептонного бульона считают не соответствующей требованиям настоящего стандарта.

2.6. Контрольную проверку образцов по требованию потребителя проводит Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.

3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ

3.1 Методы отбора проб

3.1.1. Пробу мясо-пептонного бульона в количестве 2 или 0,6 л (в зависимости от объема серии препарата) отбирают из реактора или бутыли стерильно.

Пробу объемом 2 л расфасовывают в 10 флаконов по 200 мл. Пять флаконов используют для анализа, а пять — оставляют в архиве государственного контролера.

Пробу, отобранную от серии мясо-пептонного бульона объемом менее 50 л, в архиве не оставляют.

3.2. Внешний вид, цвет, наличие механической примеси, плесени, хлопьев и осадка устанавливают, просматривая флаконы и бутыли с мясо-пептонным бульоном в проходящем свете, для чего флаконы встряхивают, переворачивая вниз пробками, а бутыли покачивают.

3.3 Запах мясо-пептонного бульона определяют в пробе органолептически

3.4 Определение содержания общего азота

3.4.1 Аппаратура и реактивы

Для проведения испытания применяют:

весы аналитические;

колбу Кьельдаля вместимостью 50 — 100 мл по ГОСТ 10394-63;

аппарат микро-Кьельдаль;

элемент нагрева (плитку, горелку);

пипетки на 1, 2, 5 мл по ГОСТ 1770-64;

бюретки по ГОСТ 1770-64;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72;

кислоту серную по ГОСТ 4204-66, концентрированную и 0,1 н. раствор;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-66, 30 — 33%-ный и 0,1 н. растворы, приготовленные на предварительно прокипяченной дистиллированной воде;

перекись водорода по ГОСТ 10929-64;

метиловый красный по ГОСТ 5853-51;

метиленовую синь;

спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67;

метиловый оранжевый по ГОСТ 10816-64, 0,1%-ный раствор.

3.4.2 Проведение испытания

Мясо-пептонный бульон в количестве 1 мл помещают в колбу Кьельдаля и прибавляют 2 мл концентрированной серной кислоты. В горло колбы вставляют стеклянный грушевидный баллончик или небольшую воронку с запаянным кончиком и минерализуют пробу сначала на слабом огне, затем степень нагрева усиливают, не допуская выбрасывания кипящей смеси в узкую часть колбы. Минерализацию проводят в присутствии катализатора — перекиси водорода. Катализатор добавляют после начала кипения по 0,5 мл через каждые 15 — 20 мин до полного обесцвечивания раствора.

После охлаждения содержимое колбы переносят в колбу для отгона, добавляя 10 — 12 мл дистиллированной воды. Полноту переноса проверяют по индикатору метиловому оранжевому. Последняя порция смывных вод должна остаться желтой.

В приемную колбу аппарата Кьельдаля наливают 20 мл 0,1 н. раствора серной кислоты и 2 капли индикатора Таширо. Индикатор Таширо готовят, растворяя 0,4 г метилового красного и 0,2 г метиленовой сини в 200 мл 96%-ного этилового спирта.

Отгонную колбу присоединяют к холодильнику и парообразователю. Содержимое отгонной колбы нейтрализуют 30 — 33%-ным раствором гидрата окиси натрия по индикатору метиловому оранжевому. Отгон производят до тех пор, пока в приемной колбе соберется около 70 мл раствора.

Содержимое приемной колбы титруют 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия до перехода окраски раствора от лилового к зеленому.

Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо мясо-пептонного бульона в колбу для минерализации берут 1 мл дистиллированной воды.

3.4.3 Обработка результатов

Содержание общего азота в мясо-пептонном бульоне (X) в процентах вычисляют по формуле

X = \frac{(VK - V_{1}K_{1}) \cdot 0,0014 \cdot 100}{V_{2}} ,

где V — количество 0,1 н. раствора серной кислоты, налитое в приемную колбу, мл;

K — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. серной кислоты;

V₁ - количество 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование испытуемой пробы, или в контрольном опыте, мл;

K₁ - поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия;

V₂ - количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, мл;

0,0014 — количество азота, соответствующее 1 мл 0,1 н. раствора серной кислоты, г.

За окончательный результат испытания принимают разность между средними арифметическими двух параллельных определений в опытных и контрольных пробах. Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений не должны превышать +/- 0,5%.

3.5 Определение содержания азота аминогрупп аминокислот и низших пептидов

3.5.1 Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

pH-метр;

стаканы лабораторные по ГОСТ 10394-63;

пипетки, бюретки по ГОСТ 1770-64;

формалин технический по ГОСТ 1625-61;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-66, 0,1 н. раствор;

фенолфталеин по ГОСТ 5850-72, 1%-ный спиртовой раствор;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

3.5.2 Подготовка к испытанию

Непосредственно перед проведением анализа готовят формольную смесь. Для этого к 50 мл формалина добавляют 1 мл 1%-ного раствора фенолфталеина и 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия доводят смесь до слаборозового цвета.

3.5.3 Проведение испытания

К 2 мл мясо-пептонного бульона приливают 18 мл дистиллированной воды и доводят 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия pH смеси до 7,0. Затем приливают 2 мл формольной смеси и при постоянном перемешивании потенциометрически титруют 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия до pH 9,2.

Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо 2 мл мясо-пептонного бульона берут 2 мл дистиллированной воды.

3.5.4 Обработка результатов

Содержание азота аминогрупп аминокислот и низших пептидов в мясо-пептонном бульоне (X1) в процентах вычисляют по формуле

X_{1} = \frac{(V - V_{1}) \cdot K \cdot 0,0014 \cdot 100}{2} ,

где V — количество 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование испытуемой пробы, мл;

V1 — количество 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование в контрольном опыте, мл;

K — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия;

0,0014 — количество азота, соответствующее 1 мл 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, г;

2 — количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, мл.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать +/- 0,2%.

3.6 Определение содержания пептонов

3.6.1 Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

фотоэлектроколориметр или спектрофотометр;

пипетки по ГОСТ 1770-64;

пробирки по ГОСТ 10515-63;

фильтры бумажные;

воронки стеклянные по ГОСТ 8613-64;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-66, 10%-ный раствор;

медь сернокислую по ГОСТ 4165-68, 2%-ный раствор;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

3.6.2 Подготовка к испытанию

3.6.2.1. При построении градуировочного графика по оси абсцисс откладывают концентрацию истинного пептона в процентах, по оси ординат — оптическую плотность (E) согласно данным, приведенным в табл. 2.

Таблица 2

Концентрация истинного пептона, %	Оптическая плотность E
0,50	0,550
0,25	0,280
0,17	0,190

3.6.3 Проведение испытания

В пробирку наливают 10 мл мясо-пептонного бульона в разведении 1:10, прибавляют по 1 мл 10%-ного раствора гидрата окиси натрия и 2%-ного раствора сернокислой меди. Смесь после добавления каждого реактива хорошо встряхивают.

Одновременно проводят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо 10 мл разведенного мясо-пептонного бульона берут 10 мл дистиллированной воды.

Через 2 мин смесь фильтруют через бумажные фильтры. Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волн 540 — 560 нм или спектрофотометре при 540 нм в кюветах с рабочей длиной 10 мм.

3.6.4 Обработка результатов

Концентрацию истинного пептона в мясо-пептонном бульоне определяет по градуировочному графику.

Оптическая плотность (E) мясо-пептонного бульона равна разности оптических плотностей в опыте с испытуемой пробой и в контрольном опыте. Полученную по графику концентрацию истинного пептона умножают на 10 (т.е. на разведение мясо-пептонного бульона).

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать +/- 5%.

3.7 Определение содержания сухого вещества

3.7.1 Аппаратура

Для проведения испытания применяют:

весы аналитические;

шкаф сушильный лабораторный по ГОСТ 7365-55;

эксикаторы по ГОСТ 6371-64;

стаканчики для взвешивания (бюксы) по ГОСТ 7148-70;

пипетки по ГОСТ 1770-64.

3.7.2 Проведение испытания

В предварительно высушенную до постоянной массы бюксу взвешивают с погрешностью не более 0,0002 г мясо-пептонный бульон в количестве 1,0 — 1,2 г. Затем бюксу с мясо-пептонным бульоном высушивают в сушильном шкафу при температуре 100 — 105 °C до постоянной массы. Высушивание продолжают до тех пор, пока разность между двумя последующими взвешиваниями будет не более 0,0002 г.

Примечание. Увеличение массы при одном из взвешиваний в процессе высушивания при расчете не учитывают.

3.7.3 Обработка результатов

Содержание сухого вещества в мясо-пептонном бульоне (X2) в процентах вычисляют по формуле

X_{2} = \frac{(m_{2} - m) \cdot 100}{(m_{1} - m)} ,

где m — масса пустой бюксы с крышкой, г;

m1 — масса бюксы с крышкой и с мясо-пептонным бульоном до высушивания, г;

m2 — масса бюксы с крышкой и с мясо-пептонным бульоном после высушивания, г.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать 0,2%.

3.8 Определение содержания белка (по методу Лоури)

3.8.1 Аппаратура и реактивы

Для проведения испытания применяют:

фотоэлектроколориметр;

пробирки стеклянные по ГОСТ 10515-63;

пипетки по ГОСТ 1770-64;

фильтры бумажные;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-66, 0,1 н. раствор;

натрий углекислый по ГОСТ 84-66;

натрий виннокислый по ГОСТ 656-73 или калий виннокислый двузамещенный по ГОСТ 3655-71, 1%-ный раствор;

медь сернокислую по ГОСТ 4165-68;

натрий вольфрамовокислый по ГОСТ 18289-72;

натрий молибденовокислый по ГОСТ 10931-64;

кислоту ортофосфорную 85%-ную;

кислоту соляную по ГОСТ 3118-67;

литий сернокислый по ГОСТ 10563-63;

бром по ГОСТ 4109-64;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

3.8.2 Подготовка к испытанию

Приготовление реактива А

Навеску углекислого натрия массой 2 г, взвешенную с погрешностью не более 0,02 г, растворяют в 100 мл 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия. Если раствор мутный, то перед определением его надо профильтровать.

Приготовление реактива В

Навеску сернокислой меди массой 0,5 г, взвешенную с погрешностью не более 0,02 г, растворяют в 100 мл 1%-ного раствора двузамещенного виннокислого натрия или калия. Если раствор мутный, то перед определением его надо профильтровать.

Приготовление реактива С

Реактив С готовят непосредственно перед определением путем смешивания 50 частей реактива А и 1 части реактива В.

Приготовление реактива Д

Реактив Д (реактив Фолина) готовят в круглодонной на 1 л колбе из огнеупорного стекла с обратным холодильником.

В колбу помещают 100 г вольфрамовокислого натрия, 25 г молибденовокислого натрия и 700 мл дистиллированной воды. После полного растворения солей в колбу добавляют 50 мл 85%-ной ортофосфорной кислоты и 100 мл концентрированной соляной кислоты. Содержимое колбы осторожно, но хорошо перемешивают. К колбе присоединяют обратный холодильник и смесь кипятят (не слишком сильно) в течение 10 ч. Кипячение можно вести с перерывом, но учитывают лишь период кипения.

После окончания кипячения в смесь добавляют 150 г сернокислого лития, 50 мл дистиллированной воды и 5 капель брома (осторожно). Для удаления излишка брома раствор кипятят 15 мин без холодильника под тягой. После охлаждения готовый раствор доводят в мерной колбе до 1 л, фильтруют через бумажный фильтр и хранят в темной склянке с притертой пробкой в темном месте. Реактив Д должен быть соломенно-желтого цвета без зеленого оттенка, затем в реактиве определяют концентрацию кислоты. Для этого приготовленный реактив разводят дистиллированной водой 1:10 (1 мл реактива и 9 мл воды) и титруют 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия по фенолфталеину (3 — 4 капли). Кислотность рассчитывают делением количества миллилитров 0,1 н. щелочи, израсходованного на титрование 1 мл реактива Д, на 10. Реактив Д имеет кислотность 1,6 — 2,3 Н.

Приготовление реактива Е

Реактив Е является реактивом Д, разведенным до 1 н. раствора. Например, если реактив Д является 2,3 н. раствором кислоты, то для приготовления 1 н. раствора Е надо брать 10 мл реактива Д и 13 мл дистиллированной воды.

Построение градуировочного графика для определения белка

Готовят ряд растворов с определенным содержанием белка нисходящей концентрации от 0,10 до 0,01%, с которыми ставят цветную реакцию по п. 3.8.3. Для приготовления растворов можно использовать альбумин, миозин, нативную сыворотку. Содержание белка в растворах определяют по Кьельдалю. Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре против воды. Из оптической плотности растворов белка вычитают оптическую плотность контроля на реактивы и полученную величину откладывают по оси ординат. По оси абсцисс откладывают концентрацию белка в растворе (в процентах или в миллиграммах).

Разведение исследуемого образца для постановки цветной реакции выбирают такое, чтобы основное количество замеров по величине оптической плотности лежало в пределах 0,2 — 0,8, где точность измерения наиболее высокая.

3.8.3 Проведение испытания

В пробирку наливают 1 мл разведенного 1:10 мясо-пептонного бульона, добавляют 5 мл реактива С, перемешивают и через 10 мин добавляют 0,5 мл реактива Е. Одновременно ставят контроль на реактивы, для чего вместо мясо-пептонного бульона берут 1 мл дистиллированной воды и добавляют те же реактивы, что и в пробирку с мясо-пептонным бульоном. Смесь хорошо перемешивают и ставят в темное место на 30 — 40 мин.

Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре с красным фильтром (630 — 640 нм) против воды в 5-миллиметровых кюветах. Из величин оптической плотности испытуемого образца вычитают величину оптической плотности контроля на реактивы. По полученным значениям оптической плотности растворов с помощью градуировочного графика определяют содержание белка в пробах. При расчете содержания белка в пробе учитывают кратность разведения перед постановкой цветной реакции.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать +/- 0,05%.

3.9 Определение содержания хлорида натрия

3.9.1 Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

весы аналитические;

элемент нагрева (горелку, плитку);

пипетки по ГОСТ 1770-64;

бюретки по ГОСТ 1770-64;

стаканы лабораторные по ГОСТ 10394-63;

квасцы железоаммонийные по ГОСТ 4205-68, насыщенный раствор;

калий роданистый по ГОСТ 4139-65 или аммоний роданистый по ГОСТ 3768-64, 0,1 н. раствор;

кислоту азотную по ГОСТ 4461-67, концентрированную;

серебро азотнокислое по ГОСТ 1277-63, 0,1 н. раствор;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

3.9.2 Проведение испытания

Мясо-пептонный бульон в количестве 20 мл помещают в стакан и добавляют 1 мл концентрированной азотной кислоты и 10 мл 0,1 н. раствора азотнокислого серебра.

Полученную смесь нагревают до начала кипения и быстро охлаждают путем погружения стакана в сосуд с водой комнатной температуры. После охлаждения к смеси добавляют 2 мл насыщенного раствора железоаммонийных квасцов и титруют 0,1 н. раствором роданистого калия (или роданистого аммония) до появления желтовато-розового окрашивания.

3.9.3 Обработка результатов

Содержание хлорида натрия в мясо-пептонном бульоне (X3) в процентах вычисляют по формуле

X_{3} = \frac{(V_{K} - V_{1}K_{1}) \cdot 0,005844 \cdot 100}{V} ,

где V — количество 0,1 н. раствора азотнокислого серебра, взятое в стакан с пробой, мл;

K — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора азотнокислого серебра;

V1 — количество 0,1 н. раствора роданистого калия (или роданистого аммония), израсходованное на титрование испытуемой пробы, мл;

K1 — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора роданистого калия (или роданистого аммония);

0,005844 — количество хлорида натрия, соответствующее 1 мл 0,1 н. раствора азотнокислого серебра;

V2 — количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, мл.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать +/- 0,01%.

3.10 Определение концентрации водородных ионов (pH)

3.10.1 Аппаратура и материалы

Для проведения испытания применяют:

pH-метр;

стаканы лабораторные по ГОСТ 10394-63;

воронки стеклянные;

фильтры бумажные.

3.10.2 Проведение испытания

Мясо-пептонный бульон фильтруют через бумажный фильтр и в прозрачном фильтрате определяют pH по инструкции, приложенной к pH-метру.

3.11 Определение стерильности

3.11.1 Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

термостат с температурой нагрева 37 — 38 °C;

автоклав;

флаконы вместимостью 200 мл;

пипетки по ГОСТ 1770-64;

пробирки стеклянные по ГОСТ 10515-63;

воронки стеклянные;

пробки ватномарлевые;

фильтры бумажные;

пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805-68;

агар микробиологический по ГОСТ 17206-71.

3.11.2 Подготовка к испытанию

Готовят в соответствии с действующей рецептурой, мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА) и мясо-пептонный-печеночный бульон (МППБ) под маслом (среда Китт-Тароцци). Среды разливают по 8 — 10 мл в пробирки, закрывают ватномарлевыми пробками и пергаментными колпачками и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при 1,5 кгс/см2.

3.11.3 Проведение испытания

Мясо-пептонный бульон (всю серию) в реакторе или в бутылях выдерживают в течение трех дней при комнатной температуре. Взятую стерильно пробу мясо-пептонного бульона расфасовывают по 100 мл в четыре флакона вместимостью 200 мл. Затем высевают мясо-пептонный бульон в пробирки с МПБ, МПА и МППБ. Посевы производят в 6 — 8 пробирок с каждой средой. Посев производят добавлением в каждую пробирку по 0,2 мл испытываемого мясо-пептонного бульона. Пробирки и флаконы выдерживают в течение трех дней в термостате при температуре 37 — 38 °C. Среды в пробирках и мясо-пептонный бульон во флаконах должны оставаться стерильными.

3.11.4 Обработка результатов

При наличии роста микрофлоры в реакторе или бутылях серия мясо-пептонного бульона бракуется. При наличии роста микрофлоры во всех флаконах и пробирках серия мясо-пептонного бульона также бракуется.

При наличии роста микрофлоры в одном флаконе или в одной-двух пробирках контроль на стерильность повторяют на удвоенном количестве флаконов и пробирок. При повторном росте микрофлоры серию мясо-пептонного бульона бракуют.

3.12 Определение способности поддерживать рост микробов

3.12.1 Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

весы технические;

термостат;

автоклав;

pH-метр;

пипетки по ГОСТ 1770-64;

бюретки по ГОСТ 1770-64;

пробирки стеклянные по ГОСТ 10515-63;

воронки стеклянные;

пробки ватномарлевые;

фильтры бумажные;

пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805-68;

агар микробиологический по ГОСТ 17206-71.

3.12.2 Подготовка к испытанию

Готовят согласно действующей рецептуре на основе испытуемого мясо-пептонного бульона мясо-пептонный агар, добавляя к бульону 2% микробиологического агара, и устанавливают pH среды 7,4.

Испытуемый мясо-пептонный бульон и приготовленный мясо-пептонный агар разливают по 8 — 10 мл в пробирки, закрывают ватномарлевыми пробками и пергаментными колпачками и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при 1,5 кгс/см2.

3.12.3 Проведение испытания

Стерильный мясо-пептонный бульон и мясо-пептонный агар засевают суточными культурами: Staphylococcus aureus «Лассманов», Esherichia coli, штамм 675, Streptococcus faccalis, штамм 6783, полученными из Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских препаратов им. Л.А. Тарасевича. Посев каждой культуры производят пастеровской петлей в три пробирки с МПБ и в три пробирки с МПА. Инкубацию проводят в течение 24 ч в термостате при 37 — 38 °C.

Рост культуры должен быть типичным и обильным.

3.12.4 Обработка результатов

Типичность роста суточных культур определяют визуально и под микроскопом.

Интенсивность роста на МПА оценивают визуально, в МПБ — визуально и на фотоэлектроколориметре при длине волны 620 — 640 нм в кюветах с рабочей длиной 5 мм.

4. РАСФАСОВКА, УПАКОВКА, МАРКИРОВКА, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ

4.1. Мясо-пептонный бульон стерильно расфасовывают в стеклянные бутыли (баллоны) вместимостью 10 +/- 0,5 и 20 +/- 1 л. Допускается более мелкая расфасовка — флаконы вместимостью 200 и 500 мл.

4.2. Бутыли закрывают стерильными резиновыми пробками по ГОСТ 7852-65, которые сверху завязывают пергаментной бумагой. Флаконы закрывают резиновыми пробками и закатывают алюминиевыми колпачками.

4.3 На бутыли и флаконы наклеивают бумажные этикетки с указанием:

наименования препарата;

количества препарата в л;

номера серии препарата;

даты изготовления;

срока годности;

условий хранения;

обозначения настоящего стандарта.

4.4. Мясо-пептонный бульон хранят в реакторе или в бутылях в чистом, сухом и темном помещении при температуре 4 — 10 °C.

4.5. Мясо-пептонный бульон транспортируют всеми видами транспорта при соблюдении условий хранения, указанных в п. 4.4. Допускается транспортирование при более высокой температуре, но не выше 18 °C, при этом срок транспортирования должен быть не более пяти суток.

4.6. Срок годности мясо-пептонного бульона 6 месяцев со дня изготовления. По истечении указанного срока мясо-пептонный бульон подвергают испытанию и в случае соответствия требованиям, установленным настоящим стандартом, срок годности может быть продлен еще на 3 месяца.

---