Статья 2Решение № 2002/364/ЕС Комиссии Европейских сообществ

Настоящее Решение адресовано государствам-членам ЕС.

Совершено в Брюсселе 7 марта 2002 г.

ОБЩИЕ ТЕХНИЧЕСКИЕ СПЕЦИФИКАЦИИ (CTS) МЕДИЦИНСКОГО ОБОРУДОВАНИЯ ДИАГНОСТИКИ IN VITRO

Техническая спецификация, установленная в настоящем Приложении, должна применяться для целей, предусмотренных приложением II списка A к Директиве 98/79/ЕС.

(Диагностическая) чувствительность

Вероятность того, что оборудование даст положительные результаты при наличии целевого маркера.

Истинно положительный

Образец, имеющий положительный целевой маркер и верно классифицируемый оборудованием.

Ложноотрицательный

Образец, имеющий положительный результат анализа на целевой маркер, но неправильно классифицируемый оборудованием.

(Диагностическая) специфичность

Вероятность того, что оборудование даст отрицательный результат при отсутствии целевого маркера.

Ложноположительный

Образец, имеющий отрицательный целевой маркер, но неправильно классифицируемый оборудованием.

Истинно отрицательный

Образец, имеющий отрицательный целевой маркер и верно классифицируемый оборудованием.

Аналитическая чувствительность

Аналитическая чувствительность может быть определена как предельное обнаружение, т.е. наименьшее количество целевых маркеров, которые могут быть четко выявлены.

Аналитическая специфичность

Аналитическая специфичность означает способность метода определять исключительно целевой маркер.

Техника амплификации нуклеиновых кислот (NAT)

Термин «NAT» применяется к исследованиям, направленным на обнаружение и/или подсчет нуклеиновых кислот путем амплификации ДНК-мишени, амплификации импульса или гибридизации.

Экспресс-тест

«Экспресс-тест» означает качественное или полуколичественное медицинское оборудование диагностики in vitro, используемое самостоятельно или в небольших группах, которое использует неавтоматизированные процедуры и было создано, чтобы дать быстрый результат.

Надежность

Надежность аналитических процедур означает способность аналитических процедур оставаться незатронутыми небольшими преднамеренными изменениями в параметрах метода и демонстрировать свою надежность при обычном использовании.

Интенсивность отказов в работе всей системы

Интенсивность отказов в работе всей системы означает количество случаев, когда весь процесс не функционирует, как описано в предписаниях производителя.

Подтверждение исследования

Подтверждение исследования означает проверку, используемую для подтверждения реактивных результатов скринингового исследования.

Исследование на определение типов вирусов

Исследование на определение типов вирусов означает исследование, проводимое для определения типа уже известных положительных проб, не используемое при первичной диагностике инфекций или при скрининговом исследовании.

Сероконверсивные ВИЧ-образцы

Сероконверсивные ВИЧ-образцы — это:

• р24 — антиген и/или ВИЧ РНК положительное; и
• признанное всеми серологическими тестированиями; и
• положительное или недетерминированное контрольное исследование;

Ранние сероконверсивные ВИЧ-образцы

Ранние сероконверсивные ВИЧ-образцы — это

• р24 — антиген и/или ВИЧ РНК положительное; и
• не признанное всеми серологическими тестированиями; и
• недетерминированное или отрицательное контрольное исследование.

Основные принципы

3.1.1. Оборудование, распознающее вирусные инфекции, размещенное на рынке для проведения скрининговых или диагностических тестов, должно соответствовать требованиям чувствительности и специфичности, установленным в таблице 1. См. также принцип, установленный пунктом 3.1.11 для скрининговых исследований.

3.1.2. Оборудование, предназначенное производителем для проведения анализов биологических жидкостей, кроме сыворотки крови и плазмы, например, таких как моча, слюна и пр., должно соответствовать тем же требованиям CTS чувствительности и специфичности, что и оборудование для тестирования сыворотки и плазмы крови. Оценкой аналитических характеристик должны исследоваться образцы от тех же лиц, у которых в обоих тестах положительные результаты, а также при исследовании соответствующей сыворотки или плазмы крови.

3.1.3. Оборудование, предназначенное производителем для самоконтроля, т.е. для домашнего использования, должно соответствовать тем же требованиям CTS чувствительности и специфичности, что и изделия для профессионального использования. Соответствующие оценки аналитических характеристик должны проводиться (либо проводиться повторно) пользователями-непрофессионалами, чтобы подтвердить работоспособность оборудования и проверку инструкций по применению.

3.1.4. Все оценки аналитических характеристик должны проводиться при непосредственном сравнении с установленными высокотехничными приборами. Приборы, используемые для сравнения, должны иметь маркировку СЕ, если они были выпущены на рынок до проведения аналитической оценки характеристик.

3.1.5. Если при оценке выявляются противоречивые результаты тестов, то необходимо как можно тщательнее разрешить противоречия путем:

• исследования противоречивых образцов в дальнейших системах тестирования;
• использования альтернативного метода или маркера;
• пересмотра клинического статуса или диагноза пациента;
• тестирования последующих образцов.

3.1.6. Оценка аналитических характеристик должна быть произведена на населении, равном по численности населению Европы.

3.1.7. Положительные образцы, используемые при оценке аналитических характеристик, должны отбираться по принципам отражения различных стадий заболевания(ий), различных образцов антител, различных генотипов, различных субтипов, мутаций и т.д.

3.1.8 Чувствительность к истинно положительным и сероконверсивным образцам оценивается по следующим критериям:

3.1.8.1. Диагностическое определение чувствительности при сероконверсивном исследовании должно соответствовать современному уровню развития. Если дальнейшее исследование тех же или дополнительных сероконверсивных анализов проводится нотифицированным органом или производителем, результаты должны подтверждать данные первоначальной оценки аналитических характеристик (см. таблицу 1). Проведение сероконверсивных анализов должно начинаться с образцов крови, давших отрицательный результат, образцы крови должны браться с небольшим временным интервалом.

3.1.8.2. Чтобы оборудование скрининга крови (за исключением тестов на поверхностный антиген вируса гепатита B и тестов на антитела к ядерному антигену вируса гепатита B) получило маркировку СЕ, все истинно положительные образцы должны быть опознаны оборудованием как положительные (таблица 1). Новое оборудование по диагностике поверхностного антигена вируса гепатита B и антител к ядерному антигену вируса гепатита B должно иметь общие эксплуатационные характеристики, аналогичные характеристикам установленного оборудования (см. 3.1.4.).

3.1.8.3 В отношении тестов на ВИЧ:

• все сероконверсивные ВИЧ-образцы должны быть определены как положительные;
• необходимо провести как минимум 40 анализов ранних сероконверсивных ВИЧ-образцов. Образцы должны соответствовать современному уровню технического развития.

3.1.9. Для оценки характеристик скрининговых исследований необходимо наличие 25 положительных (если возможно в случае редких инфекций) амбулаторных недавно изъятых образцов сыворотки и/или плазмы крови (<= 1 день после взятия).

3.1.10. Отрицательные образцы, используемые при оценке, должны быть определены таким образом, чтобы они отражали целевую аудиторию, для которой предназначено исследование, например, доноры крови, госпитализированные больные, беременные женщины и т.д.

3.1.11. Для оценки эффективности скрининговых исследований (таблица 1) донорская кровь должна быть обследована в как минимум двух центрах переливания крови, а также это должны быть последовательные образцы донорской крови, взятые также и у доноров, впервые сдавших кровь.

3.1.12. Для оборудования должна быть характерна специфичность выявления не менее 99,5% в образцах донорской крови, если иное не указано в сопроводительной таблице. Специфичность необходимо подсчитывать, используя частоту повторяющихся реактивных (например, ложноположительных) результатов при анализе донорской крови, имеющей отрицательный результат в отношении целевого маркера.

3.1.13. Также необходимо оценить влияние веществ, потенциально мешающих анализу, при оценке аналитических характеристик оборудования. На оценку потенциально мешающих веществ будет влиять состав реагента и конфигурация исследования. Вещества, потенциально мешающие анализу, должны быть отнесены к степени риска, оценка которой обязательно требуется для каждого нового прибора, и может включать в себя:

• образцы, представляющие собой «сопутствующие» инфекции;
• образцы, изъятые у повторнородящей женщины, т.е. у женщины, которая имела более чем 1 беременность, или у пациентов с положительным ревматоидным фактором;
• для рекомбинирующих антигенов, антитела человека к компонентам экспрессирующей системы, например, против кишечной палочки или против дрожжевых грибков.

3.1.14. Для приборов, предназначенных производителем для исследования сыворотки крови и плазмы крови, оценка аналитических характеристик должна продемонстрировать соотношение для сыворотки крови и плазмы крови на не менее чем 50 образцах донорской крови (25 положительных и 25 отрицательных результатов).

3.1.15. При оценке аналитических характеристик оборудования, предназначенного для использования с плазмой крови, необходимо проверить рабочие показатели оборудования, используя все антикоагулянты, которые производитель указал подходящими для использования на данном оборудовании. Данное требование считается выполненным при проверке как минимум 50 образцов крови (25 положительных и 25 отрицательных результатов).

3.1.16. В рамках требуемой в обязательном порядке оценки степени риска возможности возникновения отказов в работе всей системы, ведущих к ложноотрицательным результатам, необходимо проводить проверку на нескольких исследованиях низкопозитивных образцов.

3.1.17. Если новое медицинское оборудование диагностики in vitro, относящееся к списку A приложения II, не регулируется отдельными техническими спецификациями, необходимо учитывать общие технические спецификации родственного оборудования. Оборудование признается родственным по различным основаниям, например, по одинаковым или схожим целям использования или по схожим рискам.

3.2.1. Комплексные тесты на антитела/антигены к ВИЧ, направленные на обнаружение АТ к ВИЧ и р24 антигенов, в том числе исключительно по обнаружению р24 антигенов, должны соответствовать таблице 1 и таблице 5, в том числе критерию аналитической чувствительности к р24 антигену.

3.2.2. Комплексные тесты на антитела/антигены к ВИЧ, направленные на обнаружение АТ к ВИЧ и р24 антигенов, не включающие требования по обнаружению р24 антигенов, должны соответствовать таблице 1 и таблице 5, за исключением критерия аналитической чувствительности к р24 антигену.

Критерии оценки аналитических характеристик NAT-исследований могут быть обнаружены в таблице 2.

3.3.1. Для амплификационного исследования последовательностей клеток-мишеней функциональный контроль каждого тестируемого образца (внутренний контрольный образец) должен соответствовать современному уровню развития. Подобный контроль по возможности должен использоваться на протяжении всего процесса, т.е. экстрагирования, амплификации/гибридизации, обнаружения.

3.3.2. Аналитическая чувствительность или предельное обнаружение в NAT-исследованиях должны быть отражены в 95% положительных пороговых значениях. Эта аналитическая концентрация, при которой 95% исследований дают положительный результат после серийного разведения международных эталонных образцов, например стандартов ВОЗ или калиброванных эталонных материалов.

3.3.3. Определение генотипа должно проводиться оценкой соответствующих праймеров или зондов, а также должно оцениваться при тестировании характеризующих генотипированных образцов.

3.3.4. Результаты количественных NAT-исследований должны быть выявлены в международных стандартах или калиброванных эталонных материалах, если это возможно, а также выражены в международных единицах, используемых в определенных областях применения.

3.3.5. NAT-исследования могут применяться для обнаружения вируса в антителах отрицательных образцов, т.е. в предварительных сероконверсивных образцах. Вирусы иммунных комплексов могут вести себя не так, как свободные вирусы, например, в ходе центрифугирования. Поэтому очень важно, чтобы во время исследования устойчивости учитывались образцы, отрицательные к антителам (предварительные сероконверсивные).

3.3.6. Для исследования потенциального переноса необходимо провести как минимум пять исследований с переменными высокоположительными и отрицательными образцами при изучении устойчивости. Высокоположительные образцы должны включать в себя образцы с естественно высоким титром вируса.

3.3.7. Интенсивность отказов в работе всей системы, ведущая к ложноотрицательным результатам, должна определяться путем исследования низкоположительных образцов. Низкоположительные образцы должны содержать концентрацию вируса, эквивалентную троекратному 95% пороговому значению положительного результата вирусной концентрации.

3.4. CTS для испытаний при выпуске производителем реагентов и продукции на основе реагентов, предназначенной для обнаружения, подтверждения и количественного анализа в образцах человека маркеров ВИЧ-инфекции (ВИЧ 1 и 2), HTLV I и II, и гепатитов B, C и D (исключительно для иммунологического анализа)

3.4.1. При проведении производителем испытаний при выпуске продукции необходимо удостовериться, что в каждой партии всегда выявляются соответствующие антигены, эпитопы и антитела.

3.4.2. В ходе проверки при выпуске производителем партии для скрининговых исследований должны исследоваться как минимум 100 образцов, имеющих отрицательную реакцию на соответствующее анализируемое вещество.

3.5. CTS для оценки аналитических характеристик реагентов и продукции на основе реагентов, предназначенной для определения следующих антигенов групп крови: система антигенов группы крови ABO ABO1(A), ABO2(B), ABO3(A, B); система резус-принадлежности RH1 (D), RH2 (C), RH3 (E), RH4 (c), RH5 (e); система групп крови по Келл KEL1 (K).

Критерии оценки аналитических характеристик реагентов и продукции на основе реагентов, предназначенных для определения следующих антигенов групп крови: система антигенов группы крови ABO ABO1(A), ABO2(B), ABO3(A, B); система резус-принадлежности RH1 (D), RH2 (C), RH3 (E), RH4 (c), RH5 (e); система групп крови по Келл KEL1 (K) могут быть найдены в таблице 9.

3.5.1. Все оценки аналитических характеристик должны проводиться при непосредственном сравнении с установленными высокотехничными приборами. Приборы, используемые для сравнения, должны иметь маркировку СЕ, если они были выпущены на рынок до проведения аналитической оценки характеристик.

3.5.2. Если при оценке выявляются противоречивые результаты тестов, то необходимо как можно тщательнее разрешить противоречия путем:

• исследования противоречивых образцов в дальнейших системах тестирования;
• использования альтернативного метода.

3.5.3. Оценка аналитических характеристик должна быть произведена на населении, равном по численности населению Европы.

3.5.4. Положительные образцы, используемые при оценке аналитических характеристик, должны отбираться по принципам отражения вариативности и слабой выраженности антигенов.

3.5.5. Частью оценки аналитических характеристик должна являться оценка влияния веществ, потенциально мешающих анализу. На оценку потенциально мешающих анализу веществ будет влиять состав реагента и конфигурация исследования. Вещества, потенциально мешающие анализу, должны быть отнесены к степени риска, оценка которой обязательно требуется для каждого нового прибора.

3.5.6. При оценке аналитических характеристик оборудования, предназначенного для использования с плазмой крови, необходимо проверить рабочие показатели оборудования, используя все антикоагулянты, которые указаны производителем в качестве подходящих для использования на данном оборудовании. Данное требование считается выполненным при проверке как минимум 50 образцов крови.

3.6. CTS для испытаний при выпуске производителем реагентов и продукции на основе реагентов, предназначенной для определения антигенов групп крови: система антигенов группы крови ABO ABO1(A), ABO2(B), ABO3(A, B); система резус-принадлежности RH1 (D), RH2 (C), RH3 (E), RH4 (c), RH5 (e); система групп крови по Келл KEL1 (K).

3.6.1. При проведении производителем испытаний при выпуске продукции необходимо удостовериться, что в каждой партии всегда выявляются соответствующие антигены, эпитопы и антитела.

3.6.2. Требования к проведению испытаний при выпуске производителем партии указаны в таблице 10.

---

<*> Текст в редакции Решения 2011/869/ЕС Европейской комиссии от 20 декабря 2011 г.

CTS для скринингового исследования крови на болезнь Крейтцфельдта-Якоба установлены в таблице 11.

		Ат к ВИЧ-1/2	Ат к HTLV-I/II	антитела к вирусу гепатита C	поверхностный антиген вируса гепатита B	антитела к ядерному антигену вируса гепатита B
Диагнос-	Положительные	400 ВИЧ-1 100	300 HTLV-I	400 (положи-	400	400
тическая чувствительность	образцы	ВИЧ-2, в том числе 40 не подтипа-B, все доступные подтипы ВИЧ/1 должны быть представлены не менее чем 3 образцами на каждый подтип	100 HTLV-II	тельных проб). В том числе образцы, демонстрирующие разные стадии развития инфекции и отражающие различные образцы антител. Генотип 1 — 4:	в том числе подтипы	в том числе определение прочих маркеров вируса гепатита B
				> 20 проб каждого генотипа (в том числе не-a подтипа генотипа 4); 5: > 5 проб; 6: при возможности
	Сероконверсивные группы тестов	20 групп тестов 10 последующих групп тестов (в уполномоченном органе или у производителя)	Определяются при возможности	20 групп тестов 10 последующих групп тестов (в уполномоченном органе или у производителя)	20 групп тестов 10 последующих групп тестов (в уполномоченном органе или у производителя)	Определяются при возможности
Аналитическая чувствительность	Стандарты				0,130 МЕ/мл (Второй международный стандарт для поверхностного антигена вируса гепатита B, подтип adw2, генотип А, НИБСК <*> код: 00/588)
Специфичность	Неотобранные доноры (в том числе доноры, впервые сдавшие кровь)	5000	5000	5000	5000	5000
	Госпитализированные пациенты	200	200	200	200	200
	Перекрестно реагирующие пробы крови (RF+, сопутствующие инфекции, беременность и т.д.)	100	100	100	100	100

---

<*> Национальный институт биологических стандартов и контроля — прим. перев.

ВИЧ 1			Вирус гепатита C		Вирус гепатита B		HTLV I/II		Критерий
NAT	Качественный критерий	Количественный критерий	Качественный критерий	Количественный критерий	Качественный критерий	Количественный критерий	Качественный критерий	Количественный критерий	приемлемости
				В отношении количественной характеристики ВИЧ		В отношении количественной характеристики ВИЧ		В отношении количественной характеристики ВИЧ
Чувствительность	В соответствии с Руководством	Предел обнаружения:	В соответствии с Руководством		В соответствии с Руководством		В соответствии с Руководством
Предел обнаружения	по Европейской фармакопее	так же как и при	по Европейской фармакопее		по Европейской фармакопее		по Европейской фармакопее
Определение аналитической чувствительности	<*>: серийное разведение до пограничных концентраций; статистическое	качественном анализе; Качественный предел: раствор	<*>: серийное разведение до пограничных концентраций; статистическое		<*>: серийное разведение до пограничных концентраций; статистическое		<*>: серийное разведение до пограничных концентраций; статистическое
(МЕ/мл; определяется по стандартам	исследование (например, пробит-анализ) на основе как	(половина лог10 или менее) калиброванных	исследование (например, пробит-анализ) на основе как		исследование (например, пробит-анализ) на основе как		исследование (например, пробит-анализ) на основе как
ВОЗ или проверенным эталонным	минимум 24 повторяющихся проб; подсчет	эталонных препаратов, определение	минимум 24 повторяющихся проб; подсчет		минимум 24 повторяющихся проб; подсчет		минимум 24 повторяющихся проб; подсчет
материалам)	95% пороговых значений	нижнего и верхнего качественного предела, четкость, точность, «линейный» диапазон измерений, «динамический диапазон». Необходимо продемонстрировать воспроизводимость на различных уровнях концентрации	95% пороговых значений		95% пороговых значений		95% пороговых значений
Генотип / определение подтипа / количественная оценка эффективности	Как минимум 10 проб каждого подтипа (если возможно) Кондиционированная среда культуры клеток (используется вместо редких ВИЧ-1 подтипов) В соответствии с Руководством по Европейской фармакопее <*> при доступности калиброванных подтипов эталонных материалов; матрицы in vitro должны представляться вариативно	Серийное разведение всех соответствующих генотипов / подтипов, предпочтительно из эталонных материалов, если возможно Возможно использование матриц или плазмид, подсчитанных соответствующим методом	Не менее 10 проб каждого генотипа (если возможно) В соответствии с Руководством по Европейской фармакопее <*> при доступности калиброванных подтипов эталонных материалов; матрицы in vitro должны представляться вариативно		При доступности калиброванных подтипов эталонных материалов В соответствии с Руководством по Европейской фармакопее <*> при доступности калиброванных подтипов эталонных материалов; матрицы in vitro должны представляться вариативно		При доступности калиброванных подтипов эталонных материалов В соответствии с Руководством по Европейской фармакопее <*> при доступности калиброванных подтипов эталонных материалов; матрицы in vitro должны представляться вариативно
Диагностическая специфичность отрицательных проб	500 образцов донорской крови	100 образцов донорской крови	500 образцов донорской крови		500 образцов донорской крови		500 индивидуальных образцов донорской крови
Потенциально перекрестно реагирующие маркеры	Подходящими анализами структурных признаков (например, последовательное сравнение) и/или как минимум 10 положительных проб ретровируса человека (например, HTLV)	Так же, как и при качественном тесте	Исследование структур и/или проверка как минимум 10 флавивирусов человека (например, HGV, вирус желтой лихорадки)		Исследование структур и/или проверка как минимум 10 положительных проб прочих ДНК-вирусов человека		Исследование структур и/или проверка как минимум 10 положительных проб ретровируса человека (например, ВИЧ)
Устойчивость		Так же, как и при качественном тесте
Перекрестная	Как минимум 5		Как минимум 5		Как минимум		Как минимум 5
контаминация	серий, использующих переменные высокоположительные (возникающие естественным путем) и отрицательные пробы		серий, использующих переменные высокоположительные (возникающие естественным путем) и отрицательные пробы		5 серий, использующих переменные высокоположительные (возникающие естественным путем) и отрицательные пробы		серий, использующих переменные высокоположительные (возникающие естественным путем) и отрицательные пробы
Ингибирование	Желательно, чтобы внутренний контроль проводился на протяжении всей процедуры амплификации нуклеиновых кислот (NAT)		Желательно, чтобы внутренний контроль проводился на протяжении всей процедуры амплификации нуклеиновых кислот (NAT)		Желательно, чтобы внутренний контроль проводился на протяжении всей процедуры амплификации нуклеиновых кислот (NAT)
Интенсивность отказов в работе всей системы, ведущая к ложноотрицательным результатам	Как минимум 100 проб вируса, меченных 3 x 95% положительных предельных концентраций		Как минимум 100 проб вируса, меченных 3 x 95% положительных предельных концентраций		Как минимум 100 проб вируса, меченных 3 x 95% положительных предельных концентраций		Как минимум 100 проб вируса, меченных 3 x 95% положительных предельных концентраций		99/100 положительных анализов

---

<*> Руководство по Европейской фармакопее.

Примечания: критерием приемлемости для «интенсивности отказов в работе всей системы, ведущей к ложноотрицательным результатам» является 99/100 положительных анализов. Количественное исследование NAT должно проводиться на как минимум 100 положительных образцах, отражающих повседневные условия пользователей (например, предварительный отбор образцов). Результаты сравнительного исследования с другими системами тестирования NAT должны проводиться параллельно. Качественное исследование NAT на диагностическую чувствительность должно проводиться с использованием как минимум 10 сероконверсивных групп тестов. Результаты сравнительного исследования с другими системами тестирования NAT должны проводиться параллельно.

		Ат к ВИЧ 1/2	Антитела к вирусу гепатита C	Поверхностный антиген вируса гепатита B	Антитела к ядерному антигену вируса гепатита B	Ат к HTLV I/II	Критерий приемлемости
Диагностическая чувствительность	Положительные образцы	Те же критерии, что и для скрининговых анализов	Те же критерии, что и для скрининговых анализов	Те же критерии, что и для скрининговых анализов	Те же критерии, что и для скрининговых анализов	Те же критерии, что и для скрининговых анализов	Те же критерии, что и для скрининговых анализов
	Сероконверсивные группы тестов	Те же критерии, что и для скрининговых анализов	Те же критерии, что и для скрининговых анализов	Те же критерии, что и для скрининговых анализов	Те же критерии, что и для скрининговых анализов	Те же критерии, что и для скрининговых анализов	Те же критерии, что и для скрининговых анализов
Диагностическая специфичность	Отрицательные образцы	1000 образцов донорской крови 200 клинических образцов 200 проб от беременных женщин 100 потенциально мешающих образцов	1000 образцов донорской крови 200 клинических образцов 200 проб от беременных женщин 100 потенциально мешающих образцов	1000 образцов донорской крови 200 клинических образцов 200 проб от беременных женщин 100 потенциально мешающих образцов	1000 образцов донорской крови 200 клинических образцов 100 потенциально мешающих образцов	1000 образцов донорской крови 200 клинических образцов 200 проб от беременных женщин 100 потенциально мешающих образцов	>= 99% (Антитела к ядерному антигену вируса гепатита B: >= 96%)

		Контрольное исследование на Ат к ВИЧ	Контрольное исследование на Ат к HTLV	Сопутствующее исследование на вирус гепатита C	Контрольное исследование на поверхностный антиген вируса гепатита B	Критерий приемлемости
Диагностическая чувствительность	Положительные образцы	200 на ВИЧ-1 и 100 на ВИЧ-2 В том числе образцы, отражающие различные стадии инфекции и различные образцы антител.	200 на РЕДМ-1 и 100 на РЕДМ-2	300 на вирус гепатита C (положительные результаты) В том числе образцы, отражающие различные стадии инфекции и различные образцы антител. Генотипы 1 — 4: > 20 образцов (в том числе не-а подтипа генотипа 4); 5: > 5 образцов; 6: если возможно	300 на поверхностный антиген вируса гепатита B. В том числе образцы, отражающие различные стадии инфекции 20 высокоположительных образцов (> 26 МЕ/мл); 20 образцов в пороговом пределе	Верное определение как положительного (или недетерминируемого), а не отрицательного образца
	Сероконверсивные группы тестов	15 сероконверсивных групп тестов / группы тестов с низкими титрами		15 сероконверсивных групп тестов / группы тестов с низкими титрами	15 сероконверсивных групп тестов / группы тестов с низкими титрами
Аналитическая чувствительность	Стандарты				Второй международный стандарт для поверхностного антигена вируса гепатита B, подтипа adw2, генотипа А, НИБСК код:
					00/588
Диагностическая специ-	Отрицательные образцы	200 образцов донорской крови	200 образцов донорской крови	200 образцов донорской крови	10 ложноположительных образцов,	Не ложноположительные результаты /
фичность		200 клинических образцов, в том числе и от беременных женщин 50 потенциально мешающих образцов, в том числе образцы с недетерминированными результатами от других контрольных исследований	200 клинических образцов, в том числе и от беременных женщин 50 потенциально мешающих образцов, в том числе образцы с недетерминированными результатами от других контрольных исследований	200 клинических образцов, в том числе и от беременных женщин 50 потенциально мешающих образцов, в том числе образцы с недетерминированными результатами от других контрольных исследований	доступных после оценки аналитических характеристик скринингового исследования <*>. 50 потенциально мешающих образцов	<*> не нейтрализации

---

<*> Критерий приемлемости не нейтрализации для контрольного исследования на поверхностный антиген вируса гепатита B.

		Исследование на антиген ВИЧ-1	Критерий приемлемости
Диагностическая чувствительность	Положительные образцы	50 образцов с положительным антигеном ВИЧ-1 50 образцов кондиционированной среды культуры клеток, в том числе различные подтипы ВИЧ-1 и ВИЧ-2	Верное определение (после нейтрализации)
	Сероконверсивные группы тестов	20 сероконверсивных групп тестов/группы тестов с низкими титрами
Аналитическая чувствительность	Стандарты	Антиген р24 ВИЧ-1, первый международный референтный реагент, НИБСК код: 90/636	<= 2 МЕ/мл
Диагностическая специфичность		200 образцов донорской крови 200 клинических образцов 50 потенциально мешающих образцов	>= 99,5% после нейтрализации

		Серотипирование и генотипирование на вирус гепатита C	Критерий приемлемости
Диагностическая чувствительность	Положительные образцы	200 (положительных образцов) В том числе образцы, отражающие различные стадии инфекции и различные образцы антител. Генотипы 1 — 4: > 20 образцов (в том числе не-a подтипа генотипа 4); 5: > 5 образцов; 6: если возможно	>= 95% совпадения результатов серотипирования и генотипирования > 95% совпадения результатов генотипирования и секвенирования
Диагностическая специфичность	Отрицательные образцы	100

		Антитела к поверхностному антигену вируса гепатита B	Антитела к ядерному антигену вируса гепатита B иммуноглобулина М	Антитела к антигену вируса гепатита Be	Е антиген вируса гепатита B	Критерий приемлемости
Диагностическая чувствительность	Положительные образцы	100 вакцинированных пациентов	200 В том числе образцы, отражающие различные стадии инфекции (острая / хроническая стадия и т.д.) Критерий приемлемости применяется только к образцам, изъятым в острой стадии заболевания		200 В том числе образцы, отражающие различные стадии инфекции (острая / хроническая стадия и т.д.)	>= 98%
	Сероконверсивные группы тестов	10 последующих наблюдений или сероконверсия антитела к поверхностному антигену вируса гепатита B	Если доступно
Аналитическая чувствительность	Стандарты	Второй международный эталонный препарат ВОЗ 1977; НИБСК, Великобритания			Вирус гепатита Be- Эталонный антиген 82, Институт им. Пауля Эрлиха, Германия	Антитела к поверхностному антигену вируса гепатита B: < 10 МЕ/мл
Диагностическая специфичность	Отрицательные образцы	500 Включая клинические образцы 50 потенциально мешающих образцов	200 образцов донорской крови 200 клинических образцов 50 потенциально мешающих образцов	200 образцов донорской крови 200 клинических образцов 50 потенциально мешающих образцов	200 образцов донорской крови 200 клинических образцов 50 потенциально мешающих образцов	>= 98%

		Антитела к поверхностному антигену вируса гепатита D	Антитела к ядерному антигену вируса гепатита D иммуноглобулина М	Дельта антиген	Критерий приемлемости
Диагностическая чувствительность	Положительные образцы	100 определяющих маркеров вируса гепатита B	50 определяющих маркеров вируса гепатита B	10 определяющих маркеров вируса гепатита B	>= 98%
Диагностическая специфичность	Отрицательные образцы	200 В том числе клинические образцы 50 потенциально мешающих образцов	200 В том числе клинические образцы 50 потенциально мешающих образцов	200 В том числе клинические образцы 50 потенциально мешающих образцов	>= 98%

	1	2	3
Специфичность	Количество анализов по рекомендованному методу	Общее количество исследований образцов, необходимое для выпуска продукта	Общее количество исследований образцов, необходимое для новой формуляции или для использования положительно характеризующихся реагентов
Ат к ABO1 (анти-A), Ат к ABO2 (анти-B), Ат к ABO3 (анти-A, B)	500	3000	1000
Ат к RH1 (при резусизоиммунизации)	500	3000	1000
Ат к RH2 (Анти-C), Ат к RH4 (анти-c), Ат к RH3 (анти-E)	100	1000	200
Ат к RH5 (анти-e)	100	500	200
Ат к группе крови Келл (анти-K)	100	500	200

Критерий приемлемости:

Все вышеуказанные реагенты должны показать результаты тестов, сопоставимые с установленными реагентами, имеющими допустимые характеристики в отношении заявленной реакционной способности приборов. Дальнейшее тестирование установленных реагентов, применение или использование которых было изменено или расширено, должно проводиться в соответствии с требованиями, указанными в 1 колонке таблицы (вышерасположенной).

Оценка аналитических характеристик антирезусных реагентов должна включать в себя тесты в отношении ряда слабых антигенов RH1 (D) и частичных RH1 (D) образцов в зависимости от целей использования приборов.

Квалификация:

Клинические образцы: 10% от общего количества тестов

Неонатальные образцы: > 2% от общего количества тестов

ABO образцы: > 40% A, B положительных

Таблица 10

Требования по проверке специфичности по каждому реагенту

Реагенты групп крови	Минимальное количество контролируемых клеток, подлежащее тестированию
	Положительная реакция					Отрицательная реакция
	A1	A2B	Ax			B	0
Анти-ABO1 (Анти-A)	2	2	2 <*>			2	2
	B	A1B				A1	0
Анти-ABO2 (Анти-B)	2	2				2	2
	A1	A2	Ax	B		0
Анти-ABO2 (Анти-B)	2	2	2	2		4
	R1r	R2r	слабый D			r'r	r'r	rr
Анти-RH1 (анти-D)	2	2	2 <*>			1	1	1
	R1R2	R1r	r'r			R2R2	r'r	rr
Анти-RH2 (анти-C)	2	1	1			1	1	1
	R1R2	R1r	r'r			R1R1
Анти-RH4 (анти-c)	1	2	1			3
	R1R2	R2r	r'r			R1R1	r'r	rr
Анти-RH3 (анти-E)	2	1	1			1	1	1
	R1R2	R2r	r'r			R2R2
Анти-RH5 (анти-e)	2	1	1			3
	Kk					kk
Анти-Кел1 (анти K)	4					3

---

<*> Только рекомендованными техниками, если имеется заявленная реактивность на эти антигены.

Примечание: поликлональные реагенты должны тестироваться на большем количестве групп тестов клеток, чтобы подтвердить специфичность и исключить присутствие нежелательных инфицированных антител.

Критерий приемлемости:

Каждая партия реагентов должна демонстрировать явный положительный или отрицательный результат, полученный по всем рекомендованным техникам, в соответствии с результатами оценки аналитических характеристик.

Фенотипы эритроцитов, используемые при контроле реагентов групп крови, перечисленные выше, должны подтверждаться при помощи установленного оборудования.

	Материалы	Количество образцов	Критерий приемлемости
Аналитическая чувствительность	vCJD мозговые спайки в плазме крови человека (ВОЗ идентификационный номер NHBYO/0003)	24 воспроизводящегося результата каждого из трех титров раствора материала ВОЗ номер NHBY0/0003 4 5 (1 x 10 , 1 x 10 ,	23 из 24 воспроизводящихся результата, обнаруженных на 4 1 x 10
		6 1 x 10 )
	vCJD селезеночные спайки в плазме крови человека (10% гомогената селезенки — НИБСК идентификационный номер NHSYO/0009)	24 воспроизводящегося результата каждого из трех титров раствора материала НИБСК номер NHSY0/0009 (1 x 10, 2 3 1 x 10 , 1 x 10 )	23 из 24 воспроизводящихся результата, обнаруженных на 1 x 10
Диагностическая чувствительность	A) Образцы соответствующих моделей у животных	Максимально доступное количество образцов, но не менее 10	90%
	B) Образцы человека с клинической установленной болезнью	Максимально доступное количество образцов, но не менее 10	90%
	Крейтцфельдта — Якоба (vCJD)	В случае если 10 образцов недоступно: — количество протестированных образцов — от 6 до 9 — все доступные образцы должны быть протестированы	не более одного ложноотрицательного результата
Аналитическая специфичность	Потенциально перекрестно реагирующие образцы крови	100
Диагностическая специфичность	Нормальная плазма крови человека из областей с низко проявляющейся ГЭ КРС	5000	Не менее 99,5%

COMMISSION DECISION No. 2002/364/EC ON COMMON TECHNICAL SPECIFICATIONS FOR IN VITRO-DIAGNOSTIC MEDICAL DEVICES

(Brussels, 7.V.2002)

The Commission of the European Communities,

Having regard to the Treaty establishing the European Community,

Having regard to Directive 98/79/EC of the European Parliament and of the Council of 27 October 1998 on in vitro diagnostic medical devices <*>, and in particular the second subparagraph of Article 5(3) thereof,

---

<*> OJ L 331, 7.12.1998, p. 1.

Whereas:

(1) Directive 98/79/EC sets out the essential requirements that in vitro diagnostic medical devices must meet when they are placed on the market and conformity with harmonised standards provides a presumption of conformity with the relevant essential requirements.

(2) By way of exception to these general principles, the drawing up of common technical specifications takes account of a current practice in some Member States whereby for selected devices mainly used for the evaluation of the safety of blood supply and of organ donation, such specifications are adopted by the public authorities. These common technical specifications can be used for performance evaluation and re-evaluation.

(3) Scientific experts from various interested parties have been involved in the drafting of the common technical specifications.

(4) Directive 98/79/EC provides that Member States are to presume compliance with the essential requirements in respect of devices designed and manufactured in conformity with common technical specifications drawn up for certain devices in the highest risk category. These specifications are to establish appropriate performance evaluation and re-evaluation criteria, batch release criteria, reference methods and reference materials.

(5) Manufacturers are, as a general rule, to be required to comply with the common technical specifications. If, for duly justified reasons, manufacturers do not comply with those specifications they must adopt solutions of a level at least equivalent thereto.

(6) The measures provided for in this Decision are in accordance with the opinion of the committee set up by Article 6(2) of Council Directive 90/385/EEC <*>,

---

<*> OJ L 189, 20.7.1990, p. 17.

has adopted this Decision:

The technical specifications set out in the Annex to this Decision are adopted as common technical specifications for in vitro diagnostic medical devices in list A of Annex II to Directive 98/79/EC.

This Decision is addressed to the Member States.

COMMON TECHNICAL SPECIFICATIONS (CTS) FOR IN VITRO DIAGNOSTIC MEDICAL DEVICES

The common technical specifications set out in this Annex shall apply for the purposes of Annex II List A to Directive 98/79/EC.

(Diagnostic) sensitivity

The probability that the device gives a positive result in the presence of the target marker.

True positive

A specimen known to be positive for the target marker and correctly classified by the device.

False negative

A specimen known to be positive for the target marker and misclassified by the device.

(Diagnostic) specificity

The probability that the device gives a negative result in the absence of the target marker.

False positive

A specimen known to be negative for the target marker and misclassified by the device.

True negative

A specimen known to be negative for the target marker and correctly classified by the device.

Analytical sensitivity

Analytical sensitivity may be expressed as the limit of detection, i.e. the smallest amount of the target marker that can be precisely detected.

Analytical specificity

Analytical specificity means the ability of the method to determine solely the target marker.

Nucleic acid amplification techniques (NAT)

The term «NAT» is used for tests for the detection and/or quantification of nucleic acids by either amplification of a target sequence, by amplification of a signal or by hybridisation.

Rapid test

«Rapid test» means qualitative or semi-quantitative in vitro diagnostic medical devices, used singly or in a small series, which involve non-automated procedures and have been designed to give a fast result.

Robustness

The robustness of an analytical procedure means the capacity of an analytical procedure to remain unaffected by small but deliberate variations in method parameters and provides an indication of its reliability during normal usage.

Whole system failure rate

The whole system failure rate means the frequency of failures when the entire process is performed as prescribed by the manufacturer.

Confirmation assay

Confirmation assay means an assay used for the confirmation of a reactive result from a screening assay.

Virus typing assay

Virus typing assay means an assay used for typing with already known positive samples, not used for primary diagnosis of infection or for screening.

Sero-conversion HIV samples

Sero-conversion HIV samples mean:

• p24 antigen and/or HIV RNA positive, and
• recognised by all of the antibody screening tests, and
• positive or indeterminate confirmatory assays.

Early sero-conversion HIV samples

Early sero-conversion HIV samples mean:

• p24 antigen and/or HIV RNA positive, and
• not recognised by all of the antibody screening tests, and
• indeterminate or negative confirmatory assays.

General principles

3.1.1. Devices which detect virus infections placed on the market for use as either screening or diagnostic tests, shall meet the requirements for sensitivity and specificity set out in Table 1. See also principle 3.1.11 for screening assays.

3.1.2. Devices intended by the manufacturer for testing body fluids other than serum or plasma, e.g. urine, saliva, etc., shall meet the same CTS requirements for sensitivity and specificity as serum or plasma tests. The performance evaluation shall test samples from the same individuals in both the tests to be approved and in a respective serum or plasma assay.

3.1.3. Devices intended by the manufacturer for self-test, i.e. home use, shall meet the same CTS requirements for sensitivity and specificity as respective devices for professional use. Relevant parts of the performance evaluation shall be carried out (or repeated) by appropriate lay users to validate the operation of the device and the instructions for use.

3.1.4. All performance evaluations shall be carried out in direct comparison with an established state-of-the-art device. The device used for comparison shall be one bearing CE marking, if on the market at the time of the performance evaluation.

3.1.5. If discrepant test results are identified as part of an evaluation, these results shall be resolved as far as possible, for example:

• by evaluation of the discrepant sample in further test systems,
• by use of an alternative method or marker,
• by a review of the clinical status and diagnosis of the patient, and
• by the testing of follow-up-samples.

3.1.6. Performance evaluations shall be performed on a population equivalent to the European population.

3.1.7. Positive specimens used in the performance evaluation shall be selected to reflect different stages of the respective disease(s), different antibody patterns, different genotypes, different subtypes, mutants, etc.

3.1.8 Sensitivity with true positives and sero-conversion samples shall be evaluated as follows:

3.1.8.1. Diagnostic test sensitivity during sero-conversion has to represent the state of the art. Whether further testing of the same or additional sero-conversion panels is conducted by the notified body or by the manufacturer the results shall confirm the initial performance evaluation data (see Table 1). Sero-conversion panels should start with a negative bleed(s) and should have narrow bleeding intervals.

3.1.8.2. For blood screening devices (with the exception of HBsAg and anti-HBc tests), all true positive samples shall be identified as positive by the device to be CE marked (Table 1). For HBsAg and anti-HBc tests the new device shall have an overall performance at least equivalent to that of the established device (see 3.1.4).

3.1.8.3 Regarding HIV tests:

• all sero-conversion HIV samples shall be identified as positive, and
• at least 40 early sero-conversion HIV samples shall be tested. Results should conform to the state of the art.

3.1.9. Performance evaluation of screening assays shall include 25 positive (if available in the case of rare infections) «same day» fresh serum and/or plasma samples (<= 1 day after sampling).

3.1.10. Negative specimens used in a performance evaluation shall be defined so as to reflect the target population for which the test is intended, for example blood donors, hospitalised patients, pregnant women, etc.

3.1.11. For performance evaluations for screening assays (Table 1) blood donor populations shall be investigated from at least two blood donation centres and consist of consecutive blood donations, which have not been selected to exclude first time donors.

3.1.12. Devices shall have a specificity of at least 99,5% on blood donations, unless otherwise indicated in the accompanying tables. Specificity shall be calculated using the frequency of repeatedly reactive (i.e. false positive) results in blood donors negative for the target marker.

3.1.13. Devices shall be evaluated to establish the effect of potential interfering substances, as part of the performance evaluation. The potential interfering substances to be evaluated will depend to some extent on the composition of the reagent and configuration of the assay. Potential interfering substances shall be identified as part of the risk analysis required by the essential requirements for each new device but may include, for example:

• specimens representing «related» infections,
• specimens from multipara, i.e. women who have had more than one pregnancy, or rheumatoid factor positive patients,
• for recombinant antigens, human antibodies to components of the expression system, for example anti-E. coli, or anti-yeast.

3.1.14. For devices intended by the manufacturer to be used with serum and plasma the performance evaluation must demonstrate serum to plasma equivalency. This shall be demonstrated for at least 50 donations (25 positive and 25 negative).

3.1.15. For devices intended for use with plasma the performance evaluation shall verify the performance of the device using all anticoagulants which the manufacturer indicates for use with the device. This shall be demonstrated for at least 50 donations (25 positive and 25 negative).

3.1.16. As part of the required risk analysis the whole system failure rate leading to false-negative results shall be determined in repeat assays on low-positive specimens.

3.1.17. If a new in vitro diagnostic medical device belonging to Annex II List A is not specifically covered by the common technical specification, the common technical specification for a related device should be taken into account. Related devices may be identified on different grounds, e.g. by the same or similar intended use or by similar risks.

3.2.1. HIV antibody/antigen combined tests intended for anti-HIV and p24 antigen detection which include claims for single p24 antigen detection shall follow Table 1 and Table 5, including criteria for analytical sensitivity for p24 antigen.

3.2.2. HIV antibody/antigen combined tests intended for anti-HIV and p24 detection which do not include claims for single p24 detection shall follow Table 1 and Table 5, excluding criteria for analytical sensitivity for p24.

The performance evaluation criteria for NAT assays can be found in Table 2.

3.3.1. For target sequence amplification assays, a functionality control for each test sample (internal control) shall reflect the state of the art. This control shall as far as possible be used throughout the whole process, i.e. extraction, amplification/hybridisation, detection.

3.3.2. The analytical sensitivity or detection limit for NAT assays shall be expressed by the 95% positive cut-off value. This is the analyte concentration where 95% of test runs give positive results following serial dilutions of an international reference material for example a WHO standard or calibrated reference material.

3.3.3. Genotype detection shall be demonstrated by appropriate primer or probe design validation and shall also be validated by testing characterised genotyped samples.

3.3.4. Results of quantitative NAT assays shall be traceable to international standards or calibrated reference materials, if available, and be expressed in international units utilised in the specific field of application.

3.3.5. NAT assays may be used to detect virus in antibody negative samples, i.e. pre-sero-conversion samples. Viruses within immune-complexes may behave differently in comparison to free viruses, for example during a centrifugation step. It is therefore important that during robustness studies, antibody-negative (pre-sero-conversion) samples are included.

3.3.6. For investigation of potential carry-over, at least five runs with alternating high-positive and negative specimens shall be performed during robustness studies. The high positive samples shall comprise samples with naturally occurring high virus titres.

3.3.7. The whole system failure rate leading to false-negative results shall be determined by testing low-positive specimens. Low-positive specimens shall contain a virus concentration equivalent to three times the 95% positive cut-off virus concentration.

3.4. CTS for the manufacturer's release testing of reagents and reagent products for the detection, confirmation and quantification in human specimens of markers of HIV infection (HIV 1 and 2), HTLV I and II, and hepatitis B, C, D (immunological assays only)

3.4.1. The manufacturer's release testing criteria shall ensure that every batch consistently identifies the relevant antigens, epitopes, and antibodies.

3.4.2. The manufacturer's batch release testing for screening assays shall include at least 100 specimens negative for the relevant analyte.

Criteria for performance evaluation of reagents and reagent products for determining the blood groups antigens: ABO blood group system ABO1 (A), ABO2 (В), ABO3 (A, B); Rh blood group system RH1 (D), RH2 (C), RH3 (E), RH4 (c), RH5 (e); Kell blood group system KEL1 (K) can be found in Table 9.

3.5.1. All performance evaluations shall be carried out in direct comparison with an established state-of-the-art device. The device used for comparison shall be one bearing CE marking, if on the market at the time of the performance evaluation.

3.5.2. If discrepant test results are identified as part of an evaluation, these results shall be resolved as far as possible, for example:

• by evaluation of the discrepant sample in further test systems,
• by use of an alternative method,

3.5.3. Performance evaluations shall be performed on a population equivalent to the European population.

3.5.4. Positive specimens used in the performance evaluation shall be selected to reflect variant and weak antigen expression.

3.5.5. Devices shall be evaluated to establish the effect of potential interfering substances, as part of the performance evaluation. The potential interfering substances to be evaluated will depend to some extent on the composition of the reagent and configuration of the assay. Potential interfering substances shall be identified as part of the risk analysis required by the essential requirements for each new device.

3.5.6. For devices intended for use with plasma the performance evaluation shall verify the performance of the device using all anticoagulants which the manufacturer indicates for use with the device. This shall be demonstrated for at least 50 donations.

3.6.1. The manufacturer's release testing criteria shall ensure that every batch consistently identifies the relevant antigens, epitopes, and antibodies.

3.6.2. Requirements for manufacturers batch release testing are outlined in Table 10.

CTS for Variant Creutzfeldt-Jakob disease (vCJD) assays for blood screening are set out in Table 11.

		Anti-HIV-1/2	Anti — HTLV-I/II	Anti-HCV	HBsAg	Anti-HBc
Diagnostic	Positive	400 HIV-1	300	400 (positive	400	400
sensitivity	specimens	100 HIV-2 including 40 non-B subtypes, all available HIV/1 subtypes should be represented by at least 3 samples per subtype	HTLV-I 100 HTLV-II	samples) Including samples from different stages of infection and reflecting different antibody patterns. Genotype 1 — 4: > 20 samples per genotype (including non-a subtypes of genotype 4); 5: > 5 samples; 6: if available	Including subtypeconsideration	Including evaluation of other HBV — markers
	Sero — conversion panels	20 panels 10 further panels (at Notified Body or manufacturer)	To be defined when available	20 panels 10 further panels (at Notified Body or manufacturer)	20 panels 10 further panels (at Notified Body or manufacturer)	To be defined when available
Analytical sensitivity	Standards				0,130 IU/ml (Second International Standard for HBsAg, subtype adw2, genotype A, NIBSC code:
					00/588)
Specificity	Unselected donors (including first-time donors)	5000	5000	5000	5000	5000
	Hospitalised patients	200	200	200	200	200
	Potentially cross — reacting blood — specimens (RF+, related viruses, pregnant women, etc.)	100	100	100	100	100

HIV1			HCV		HBV		HTLV I/II		Acceptance
NAT	qualitative	quantitative	qualitative	quantitative	qualitative	quantitative	qualitative	quantitative	criteria
				As for HIV quantitative		As for HIV quantitative		As for HIV quantitative
Sensitivity	According to	Detection	According		According		According
Detection limit	EP validation guideline	limit: as for qualitative	to EP validation		to EP validation		to EP validation
Detection of analytical sensitivity	<*>: several dilution series into borderline	tests; Quantification limit: dilutions	guideline <*>: several dilution		guideline <*>: several dilution		guideline <*>: several dilution
(IU/ml; defined on	concentration;	(half-log10 or less) of	series into borderline		series into borderline		series into borderline
WHO standards or calibrated reference materials)	statistical analysis (e.g. Probit analysis) on the basis of at least 24 replicates; calculation of 95% cut — off value	calibrated reference preparations, definition of lower, upper quantification limit, precision, accuracy, «linear» measuring range, «dynamic range». Reproducibility at different concentration levels to be shown	concentration; statistical analysis (e.g. Probit analysis) on the basis of at least 24 replicates; calculation of 95% cut-off value		concentration; statistical analysis (e.g. Probit analysis) on the basis of at least 24 replicates; calculation of 95% cut-off value		concentration; statistical analysis (e.g. Probit analysis) on the basis of at least 24 replicates; calculation of 95% cut-off value
Genotype / subtype detection / quantification efficiency	At least 10 samples per subtype (as far as available) Cell culture supernatants (could substitute for rare HIV-1 subtypes) According to EP validation guideline <*> as far as calibrated subtype reference materials are available; in vitro transcripts could be an option	Dilution series of all relevant genotypes / subtypes, preferably of reference materials, as far as available Transcripts or plasmids quantified by appropriate methods may be used.	At least 10 samples per genotype (as far as available) According to EP validation guideline <*> as far as calibrated subtype reference materials are available; in vitro transcripts could be an option		As far as calibrated genotype reference materials are available According to EP validation guideline <*> as far as calibrated subtype reference materials are available; in vitro transcripts could be an option		As far as calibrated genotype reference materials are available According to EP validation guideline <*> as far as calibrated subtype reference materials are available; in vitro transcripts could be an option
Diagnostic specificity negative samples	500 blood donors	100 blood donors	500 blood donors		500 blood donors		500 individual blood donations
Potential crossreactive markers	By suitable assay design evidence (e.g. sequence comparison) and/or testing of at least 10 human retrovirus (e.g. HTLV) — positive samples	As for qualitative tests	By assays design and / or testing of at least 10 human flavivirus (e.g. HGV, YFV) positive samples		By assays design and / or testing of at least 10 other DNA-virus positive samples		By assay design and / or testing of at least 10 human retrovirus (e.g. HIV-) positive samples
Robustness		As for qualitative tests
Cross -	At least 5		At least 5		At least 5		At least
contamination	runs using alternating high positive (known to occur naturally) and negative samples		runs using alternating high positive (known to occur naturally) and negative samples		runs using alternating high positive (known to occur naturally) and negative samples		5 runs using alternating high positive (known to occur naturally) and negative samples
Inhibition	Internal control preferably to go through the whole NAT procedure		Internal control preferably to go through the whole NAT procedure		Internal control preferably to go through the whole NAT procedure		Internal control preferably to go through the whole NAT procedure
Whole system failure rate leading to false-neg results	At least 100 samples virus-spiked with 3 x the 95% pos cut-off concentration		At least 100 samples virus — spiked with 3 x the 95% pos cut-off concentration		At least 100 samples virus — spiked with 3 x the 95% pos cut-off concentration		At least 100 samples virus — spiked with 3 x the 95% pos cut-off concentration		99/100 assays positive
<*> European Pharmacopoeia guideline. Notes: Acceptance criteria for «whole system failure rate leading to false-neg results» is 99/100 assays positive. For qualitative NATs a study be performed on at least 100 positive specimens reflecting the routine conditions of users (e.g. no pre-selection of specimens). Comparative results with another NAT test system shall be generated in parallel. For quantitative NATs a study shall on diagnostic sensitivity shall be performed using at least 10 sero-conversion panels. Comparative results with another NAT test system shall be generated in parallel.

		Anti-HIV 1/2	Anti-HCV	HBsAg	Anti-HBc	Anti-HTLV I/II	Acceptance criteria
Diagnostic sensitivity	Positive specimens	Same criteria as for screening assays	Same criteria as for screening assays	Same criteria as for screening assays	Same criteria as for screening assays	Same criteria as for screening assays	Same criteria as for screening assays
	Sero — conversion panels	Same criteria as for screening assays	Same criteria as for screening assays	Same criteria as for screening assays	Same criteria as for screening assays	Same criteria as for screening assays	Same criteria as for screening assays
Diagnostic specificity	Negative specimens	1000 blood donations 200 clinical specimens 200 samples from pregnant women 100 potentially interfering samples	1000 blood donations 200 clinical specimens 200 samples from pregnant women 100 potentially interfering samples	1000 blood donations 200 clinical specimens 200 samples from pregnant women 100 potentially interfering samples	1000 blood donations 200 clinical specimens 100 potentially interfering samples	1000 blood donations 200 clinical specimens 200 samples from pregnant women 100 potentially interfering samples	>= 99% (anti-HBc: >= 96%)

		Anti-HIV confirmatory assay	Anti-HTLV confirmatory assay	HCV supplementary assay	HBsAg confirmatory assay	Acceptance criteria
Diagnostic	Positive	200 HIV-1 and	200 HTLV-I	300 HCV	300 HBsAg	Correct
sensitivity	specimens	100 HIV-2 Including samples from different stages of infection and reflecting different antibody patterns	and 100 HTLV-II	(positive samples) Including samples from different stages of infection and reflecting different antibody patterns. Genotypes 1 — 4: > 20 samples (including non-a subtypes of genotype 4); 5: > 5 samples; 6: if available	Including samples from different stages of infection 20 «high pos» samples (> 26 IU/ml); 20 samples in the cut-off range	identification as positive (or indeterminate), not negative
	Sero — conversion panels	15 sero — conversion panels/low titre panels		15 sero — conversion panels/low titre panels	15 sero — conversion panels/low titre panels
Analytical sensitivity	Standards				Second International Standard for HBsAg, subtype adw2, genotype A, NIBSC code: 00/588
Diagnostic specificity	Negative specimens	200 blood donations 200 clinical samples including pregnant women 50 potentially interfering samples, including samples with indeterminate results in other confirmatory assays	200 blood donation 200 clinical samples including pregnant women 50 potentially interfering samples including samples with indeterminate results in other confirmatory assays	200 blood donations 200 clinical samples including pregnant women 50 potentially interfering samples including samples with indeterminate results in other supplementary assays	10 false positives as available from the performance evaluation of the screening assay <*>. 50 potentially interfering samples	No false — positive results/ <*> no neutralisation
<*> Acceptance criteria no neutralisation for HBsAg confirmatory assay.

		HIV-1 antigen assay	Acceptance criteria
Diagnostic sensitivity	Positive specimens	50 HIV-1 Ag-positive 50 cell culture supernatants including different HIV-1 subtypes and HIV-2	Correct identification (after neutralisation)
	Sero-conversion panels	20 sero-conversion panels/low titre panels
Analytical sensitivity	Standards	HIV-1 p24 Antigen, First International Reference Reagent, NIBSC code: 90/636	<= 2 IU/ml
Diagnostic specificity		200 blood donations 200 clinical samples 50 potentially interfering samples	>= 99,5% after neutralisation

		HCV serotyping and genotyping assay	Acceptance criteria
Diagnostic sensitivity	Positive specimens	200 (positive samples) Including samples from different stages of infection and reflecting different antibody patterns. Genotypes 1 — 4: > 20 samples (including non-a subtypes of genotype 4); 5: > 5 samples; 6: if available	>= 95% agreement between serotyping and genotyping > 95% agreement between genotyping and sequencing
Diagnostic specificity	Negative specimens	100

		Anti-HBs	Anti-HBe IgM	Anti-HBe	HBeAg	Acceptance criteria
Diagnostic	Positive	100 vaccinees	200	200	200	>= 98%
sensitivity	specimens	100 naturally infected persons	Including samples from different stages of infection (acute / chronic, etc.) The acceptance criteria should only be applied on samples from acute infection stage.	Including samples from different stages of infection (acute / chronic, etc.)	Including samples from different stages of infection (acute / chronic, etc.)
	Sero — conversion panels	10 follow-ups or anti-HBs sero — conversions	When available
Analytical sensitivity	Standards	WHO First International Reference Preparation 1977; NIBSC, United Kingdom			HBe — Referenzantigen 82; PEI Germany	Anti-HBs: < 10 mIU/ml
Diagnostic specificity	Negative specimens	500 Including clinical samples 50 potentially interfering samples	200 blood donations 200 clinical samples 50 potentially interfering samples	200 blood donation 200 clinical samples 50 potentially interfering samples	200 blood donations 200 clinical samples 50 potentially interfering samples	>= 98%

		Anti-HDV	Anti-HDV IgM	Delta antigen	Acceptance criteria
Diagnostic sensitivity	Positive specimens	100 Specifying HBV markers	50 Specifying HBV markers	10 Specifying HBV markers	>= 98%
Diagnostic specificity	Negative specimens	200 Including clinical samples 50 potentially interfering samples	200 Including clinical samples 50 potentially interfering samples	200 Including clinical samples 50 potentially interfering samples	>= 98%

	1	2	3
Specificity	Number of tests per recommended method	Total number of samples to be tested for a launch product	Total number of samples to be tested for a new formulation, or use of well-characterised reagents
Anti-ABO1 (anti-A), anti-ABO2 (anti-B), anti-ABO3 (anti-A, B)	500	3000	1000
Anti-RH1 (anti-D)	500	3000	1000
Anti-RH2 (anti-C), anti-RH4 (anti-c), anti-RH3 (anti-E)	100	1000	200
Anti-RH5 (anti-e)	100	500	200
Anti-KEL1 (anti-K)	100	500	200

Acceptance criteria:

All of the above reagents shall show comparable test results with established reagents with acceptable performance with regard to claimed reactivity of the device. For established reagents, where the application or use has been changed or extended, further testing should be carried out in accordance with the requirements outlined in column 1 (above).

Performance evaluation of anti-D reagents shall include tests against a range of weak RH1 (D) and partial RH1 (D) samples, depending on the intended use of the product.

Qualifications:

Clinical samples: 10% of the test population

Neonatal specimens: > 2% of the test population

ABO samples: > 40% A, B positives

«weak D»: > 2% of RH1 (D) positives

Specificity testing requirements on each reagent

Blood group reagents	Minimum number of control cells to be tested
	Positive reactions					Negative reactions
	A1	A2B	Ax			B	0
Anti-ABO1 (anti-A)	2	2	2 <*>			2	2
	B	A1B				A1	0
Anti-ABO2 (anti-B)	2	2				2	2
	A1	A2	Ax	B		0
Anti-ABO3 (anti-A, B)	2	2	2	2		4
	R1r	R2r	WeakD			r'r	r'r	rr
Anti-RH1 (anti-D)	2	2	2 <*>			1	1	1
	R1R2	R1r	r'r			R2R2	r'r	rr
Anti-RH2 (anti-C)	2	1	1			1	1	1
	R1R2	R1r	r'r			R1R1
Anti-RH4 (anti-c)	1	2	1			3
	R1R2	R2r	r'r			R1R1	r'r	rr
Anti-RH3 (anti-E)	2	1	1			1	1	1
	R1R2	R2r	r'r			R2R2
Anti-RH5 (anti-e)	2	1	1			3
	Kk					kk
Anti-KEL1 (anti-K)	4					3
<*> Only by recommended techniques where reactivity against these antigens is claimed. Note: Polyclonalreagents must be tested against a wider panel of cells to confirm specificity and exclude presence of unwanted contaminating antibodies.

Acceptance criteria:

Each batch of reagent must exhibit unequivocal positive or negative results by all recommended techniques in accordance with the results obtained from the performance evaluation data.

The phenotype of red cells used in the control of blood typing reagents listed above should be confirmed using established device.

	Material	Number of specimens	Acceptance Criteria
Analytical sensitivity	vCJD brain spikes in human plasma (WHO reference number NHBY0/0003)	24 replicates of each of three dilutions of the material WHO number NHBY0/0003 4 5 6 (1 x 10 , 1 x 10 , 1 x 10 )	23 of the 24 replicates detected at 4 1 x 10
	vCJD spleen spikes in human plasma (10% spleen homogenate — NIBSC reference number NHSYO/0009)	24 replicates of each of three dilutions of the material NIBSC number NHSY0/0009 2 3 (1 x 10, 1 x 10 , 1 x 10 )	23 of the 24 replicates detected at 1 x 10
Diagnostic sensitivity	A) Specimen from appropriate animal models	As many specimen as reasonably possible and available, and at least 10 specimens	90%
	B) Specimen from humans with known clinical vCJD	As many specimen as reasonably possible and available, and at least 10 specimens	90%
		Only in case where 10 specimens are not available: — the number of specimens tested shall be comprised between 6 and 9 — all available specimens shall be tested	no more than one false negative result
Analytical specificity	Potentially cross-reacting blood-specimens	100
Diagnostic specificity	Normal human plasma samples from area of low BSE exposure	5000	At least 99,5%

---