Приказ Минсельхоза России от 27.03.2020 № 160
(ред. от 18.11.2021)
«Об утверждении Методики производства экспертиз (исследований) биологической безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов, используемых для производства кормов и кормовых добавок для животных»
(Зарегистрировано в Минюсте России 15.04.2020 № 58095)
Внимание
Документ утратил силу с 26 апреля 2026 года в связи с истечением срока действия, установленного п. 2. Начало действия редакции — 01.03.2022. Окончание действия документа — 25.04.2026. Изменения, внесенные Приказом Минсельхоза России от 18.11.2021 № 772, вступили в силу с 1 марта 2022 года.
Зарегистрировано в Минюсте России 15 апреля 2020 г. № 58095
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ПРИКАЗ от 27 марта 2020 г. № 160
ОБ УТВЕРЖДЕНИИ МЕТОДИКИ ПРОИЗВОДСТВА ЭКСПЕРТИЗ (ИССЛЕДОВАНИЙ) БИОЛОГИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНО-МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОРГАНИЗМОВ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА КОРМОВ И КОРМОВЫХ ДОБАВОК ДЛЯ ЖИВОТНЫХ
В соответствии с пунктом 13 Правил государственной регистрации генно-инженерно-модифицированных организмов, предназначенных для выпуска в окружающую среду, а также продукции, полученной с применением таких организмов или содержащей такие организмы, включая указанную продукцию, ввозимую на территорию Российской Федерации, утвержденных постановлением Правительства Российской Федерации от 23 сентября 2013 г. № 839 (Собрание законодательства Российской Федерации, 2013, № 39, ст. 4991), приказываю:
1. Утвердить прилагаемую Методику производства экспертиз (исследований) биологической безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов, используемых для производства кормов и кормовых добавок для животных.
2. Настоящий приказ действует до 26 апреля 2026 г.
(п. 2 введен Приказом Минсельхоза России от 18.11.2021 № 772)
Утверждена приказом Минсельхоза России от 27.03.2020 № 160
МЕТОДИКА ПРОИЗВОДСТВА ЭКСПЕРТИЗ (ИССЛЕДОВАНИЙ) БИОЛОГИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНО-МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОРГАНИЗМОВ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА КОРМОВ И КОРМОВЫХ ДОБАВОК ДЛЯ ЖИВОТНЫХ
1. Настоящая Методика устанавливает порядок проведения экспертиз (исследований) биологической безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов, используемых для производства кормов и кормовых добавок для животных (далее — экспертиза, ГМО соответственно).
2. Экспертиза проводится организацией (испытательной лабораторией), аккредитованной в национальной системе аккредитации с областью аккредитации, соответствующей исследованиям, указанным в настоящей Методике, и (или) с областью аккредитации, соответствующей молекулярно-генетическим исследованиям ГМО.
(в ред. Приказа Минсельхоза России от 18.11.2021 № 772)
3. Требования к проведению исследований и показатели (условия) безопасности ГМО приведены в главах V, VI настоящей Методики.
4. Результаты экспертизы оформляются заключением о результатах экспертизы, составленным на основании протоколов исследований ГМО и (или) отчетов о результатах научных исследований ГМО (далее — протоколы исследований), которое должно содержать следующие сведения:
(в ред. Приказа Минсельхоза России от 18.11.2021 № 772)
полное наименование и место нахождения организации (испытательной лаборатории), осуществившей проведение экспертизы;
наименование ГМО с указанием его таксономического статуса;
полное наименование, место нахождения, идентификационный номер налогоплательщика юридического лица, осуществляющего на территории Российской Федерации генно-инженерную деятельность в целях создания ГМО (далее — заявитель);
полное наименование и место нахождения юридического лица либо фамилия, имя, отчество (при наличии), место жительства индивидуального предпринимателя — изготовителя образцов ГМО, представленных на экспертизу;
вид предполагаемого целевого использования ГМО;
сведения о трансформационном событии в виде кода, сформированного согласно Общероссийскому классификатору трансформационных событий;
место депонирования и коллекционный номер (указывается для депонированных штаммов ГМО);
регистрационный номер свидетельства о государственной регистрации ГМО, предназначенного (предназначенных) для выпуска в окружающую среду, на основе которого (которых) создан ГМО, в отношении которого проведена экспертиза (в случае если ГМО создан на основе иного (иных) ГМО);
регистрационный номер свидетельства о государственной регистрации ГМО для иного целевого использования (при наличии);
сведения о регистрации ГМО за рубежом (при наличии);
оценка полноты представленных заявителем документов и данных;
краткое содержание документов и данных, представленных заявителем для проведения экспертизы;
перечень исследований ГМО с указанием их результатов;
описание представленных заявителем на экспертизу образцов ГМО и исходного организма-реципиента с указанием их количества, а также оценку их пригодности для проведения исследований;
выводы о результатах экспертизы: о наличии или отсутствии негативного воздействия ГМО на окружающую среду;
специальные условия использования ГМО (при наличии);
срок действия свидетельства о государственной регистрации ГМО (в случае отсутствия сведений о негативном воздействии ГМО на окружающую среду);
фамилии, имена, отчества (при наличии) лиц, проводивших экспертизу, ученые степени, ученые звания (при наличии), места их работы и должности;
дата и номер заключения экспертизы;
подпись руководителя организации (испытательной лаборатории), осуществившей проведение экспертизы.
5. К заключению о результатах экспертизы должны прилагаться протоколы исследований ГМО, на основании которых оно составлено, подписанные лицами, проводившими исследования.
6. В случае если заявителем не представлены документы и данные, предусмотренные пунктами 7, 11, 15 настоящей Методики, и (или) необходимые образцы, пригодные для проведения исследований в случаях, если протоколы исследований не представлены заявителем, экспертиза не проводится. Заявителю должен быть выдан мотивированный отказ в проведении экспертизы, подписанный руководителем организации (испытательной лаборатории), аккредитованной в национальной системе аккредитации, с областью аккредитации, соответствующей исследованиям, указанным в настоящей Методике, и (или) с областью аккредитации, соответствующей молекулярно-генетическим исследованиям ГМО, в которую обратился заявитель для проведения экспертизы.
(в ред. Приказа Минсельхоза России от 18.11.2021 № 772)
II. Экспертиза ГМО, используемого для производства кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением жизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм
7. В рамках экспертизы ГМО для производства кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением жизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм, осуществляется анализ представленных заявителем документов и данных:
а) наименования ГМО с указанием его таксономического статуса; полного наименования, места нахождения, идентификационного номера налогоплательщика заявителя; полного наименования и места нахождения юридического лица либо фамилии, имени, отчества (при наличии), места жительства индивидуального предпринимателя — изготовителя образцов ГМО, предоставленных на экспертизу; вида предполагаемого целевого использования ГМО; регистрационного номера свидетельства о государственной регистрации ГМО, предназначенного (предназначенных) для выпуска в окружающую среду, на основе которого (которых) создан ГМО, в отношении которого проводится экспертиза (в случае если ГМО создан на основе иного (иных) ГМО); регистрационного номера свидетельства о государственной регистрации ГМО для иного целевого использования (при наличии) либо информации об отсутствии такого свидетельства;
б) сведений об исходном организме-реципиенте (таксономическая характеристика с указанием метода идентификации; источник выделения штамма: субстрат, географический пункт, дата выделения; методы идентификации штамма, кем идентифицирован (фамилия, имя, отчество (при наличии)), ссылка на использованные определители);
в) описания структуры генетической конструкции (внесенной или удаленной) и места ее локализации, характеристики экспрессии встроенных или измененных генов;
г) сведений о трансформационном событии в виде кода, сформированного согласно Общероссийскому классификатору трансформационных событий;
д) информации о способе генетической модификации (описание метода модификации, структуры вектора, структуры вставки);
е) информации о месте депонирования и коллекционном номере штамма ГМО, паспорт штамма ГМО (для депонированных штаммов ГМО) либо следующей информации (в случае непредставления информации о месте депонирования и коллекционном номере штамма ГМО, паспорта штамма ГМО):
о культурально-морфологических, физиолого-биохимических (ферментативных), антигенных, биологических свойствах и генетических особенностях штамма ГМО;
об условиях культивирования: наименованиях питательных сред, pH среды, температуре и продолжительности выращивания, сроке хранения и периодичности пересева культуры штамма ГМО в нативной форме;
о применяемом способе и условиях хранения штамма ГМО: в случае лиофилизации указывается продолжительность выращивания на питательной среде (возраст культуры), состав защитной среды, титр клеточной суспензии, режим высушивания, температура хранения, срок хранения; в случае криоконсервации указывается продолжительность выращивания на питательной среде (возраст культуры), состав защитной среды, титр клеточной суспензии, скорость замораживания (град/мин), температура хранения, срок хранения;
о диссоциации культуры в зависимости от метода хранения (описание морфологических типов колоний на конкретной среде с подробным описанием типа, сохраняющего полезный или диагностический признак);
о среде, на которой заявителем предоставляется штамм ГМО;
о количестве, дате приготовления и сроке годности образцов штамма ГМО;
ж) информации о вносимых генах (для организмов-доноров указывается таксономический статус, данные о вирулентных, аллергенных и патогенных свойствах);
з) описания свойств, приобретенных ГМО в результате модификации;
и) характеристики различий ГМО с исходным организмом-реципиентом, в том числе описания способа размножения, распространения, вирулентности, схемы культивирования, новых фенотипических свойств, биологических преимуществах ГМО по сравнению с исходным организмом;
к) описания методик, позволяющих подтвердить таксономический статус ГМО и характеристику генетической модификации, описания нуклеотидных последовательностей, используемых праймеров, зондов, состава и свойств стандартных образцов;
л) результатов изучения стабильности ГМО, в том числе в организмах животных (крыс или мышей), а также оценки способности к переносу генов, введенных в исходный организм-реципиент с использованием методов генной инженерии, в том числе генов устойчивости к антибиотикам, в другие организмы;
м) информации о потенциальной колонизации ГМО в желудочно-кишечном тракте животных и его влиянии на естественную микрофлору;
н) информации о регистрации ГМО, кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением жизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм, в государствах — членах Евразийского экономического союза, иных государствах или об отсутствии такой регистрации, а также о наличии либо отсутствии фактов о негативных последствиях применения ГМО, кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением жизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм;
о) копий заключения о результатах молекулярно-генетического исследования ГМО;
п) информации о биоинформатическом анализе, поиске гомологии рекомбинантного белка с аминокислотными последовательностями токсических белков, белков, обладающих фармакологической или иной биологической активностью, при использовании специализированных баз данных;
р) информации об условиях промышленного культивирования ГМО;
с) протоколов исследований, указанных в пункте 8 настоящей Методики, проведенных в организациях (испытательных лабораториях), аккредитованных в национальной системе аккредитации с областью аккредитации, соответствующей исследованиям, указанным в настоящей Методике, и (или) с областью аккредитации, соответствующей молекулярно-генетическим исследованиям ГМО (при наличии).
(в ред. Приказа Минсельхоза России от 18.11.2021 № 772)
8. В отношении ГМО, предназначенного для производства кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением жизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм, должны быть проведены следующие исследования в сравнении с исходным организмом-реципиентом:
а) токсикологические исследования на лабораторных животных;
б) аллергологические исследования ГМО на лабораторных животных;
в) исследование вирулентности ГМО на лабораторных животных;
г) исследования микробиологических свойств, чувствительности к антибиотикам и бактериофагам, гемолитической активности на эритроцитах животных (в отношении ГМО-бактерий);
д) исследования стабильности свойств ГМО-бактерий, простейших, грибов;
е) исследование жизнестойкости ГМО на объектах окружающей среды, в том числе на влажных опилках, ватных тампонах, при термической обработке;
ж) исследование инвазивности ГМО с помощью кератоконъюнктивальной пробы;
з) исследование антагонистической активности ГМО с представителями резидентной микрофлоры кишечника;
и) иммунологические исследования ГМО на лабораторных животных.
9. В случае отсутствия у заявителя протоколов исследований, указанных в подпункте «с» пункта 7 настоящей Методики, им должны быть представлены образцы ГМО и исходного организма-реципиента. Соответствующие исследования этих образцов проводятся организацией (испытательной лабораторией), осуществляющей проведение экспертизы.
10. Если ГМО соответствует показателям (условиям) безопасности, указанным в пункте 19 настоящей Методики, заявителю должно быть выдано заключение об отсутствии негативного воздействия ГМО на окружающую среду. В заключении об отсутствии негативного воздействия на окружающую среду могут быть указаны специальные условия использования ГМО.
III. Экспертиза ГМО, используемого для производства кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением нежизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм
11. В рамках экспертизы ГМО для производства кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением нежизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм, осуществляется анализ представленных заявителем документов и данных, предусмотренных подпунктами «а» - «л», «о», «п», «р» пункта 7 настоящей Методики, а также:
а) информации о регистрации ГМО, кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением нежизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм, в государствах — членах Евразийского экономического союза, иных государствах или об отсутствии такой регистрации, а также о наличии либо отсутствии фактов негативных последствий применения кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением нежизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм;
б) протоколов исследований, указанных в пункте 12 настоящей Методики, проведенных в организациях (испытательных лабораториях), аккредитованных в национальной системе аккредитации, с областью аккредитации, соответствующей исследованиям, указанным в настоящей Методике, и (или) с областью аккредитации, соответствующей молекулярно-генетическим исследованиям ГМО (при наличии).
(в ред. Приказа Минсельхоза России от 18.11.2021 № 772)
12. В отношении ГМО, предназначенных для производства кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением нежизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм, должны быть проведены следующие исследования образцов кормов и (или) кормовых добавок для животных, полученных с применением нежизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм, образцов жизнеспособного ГМО в сравнении с исходным организмом-реципиентом:
а) аллергологические исследования ГМО на лабораторных животных;
б) исследования на отсутствие жизнеспособного ГМО с использованием микробиологических методов в представленных образцах кормов и кормовых добавок для животных;
в) токсикологические исследования на лабораторных животных;
г) иммунологические исследования на лабораторных животных.
13. В случае отсутствия у заявителя протоколов исследований, указанных в подпункте «б» пункта 11 настоящей Методики, им должны быть представлены образцы кормов и (или) кормовых добавок для животных, образцы жизнеспособного ГМО и образцы исходного организма-реципиента. Исследования этих образцов проводятся организацией (испытательной лабораторией), осуществляющей проведение экспертизы.
14. Если ГМО соответствует показателям (условиям) безопасности, указанным в пункте 20 настоящей Методики, заявителю должно быть выдано заключение об отсутствии негативного воздействия ГМО на окружающую среду. В заключении об отсутствии негативного воздействия на окружающую среду могут быть указаны специальные условия использования ГМО.
IV. Экспертиза ГМО, используемых для производства кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением ГМО растительного или животного происхождения или содержащих такой организм
15. Экспертиза ГМО для производства кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением ГМО растительного или животного происхождения или содержащих такой организм, должна включать анализ представленных заявителем документов и данных, указанных в подпунктах «а» - «д», «ж», «з», «и», «к», «о» - «р» пункта 7 настоящей Методики, а также:
а) информации о регистрации ГМО, кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением ГМО растительного или животного происхождения или содержащих такой организм, в государствах — членах Евразийского экономического союза, иных государствах или об отсутствии такой регистрации, а также о наличии либо отсутствии фактов негативных последствий применения кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением ГМО растительного или животного происхождения или содержащих такой организм;
б) результатов изучения стабильности рекомбинантного белка при обработке, хранении, технологической переработке; влияния температуры и pH, возможных модификаций и (или) образований стабильных белковых фрагментов в результате различных воздействий; устойчивости белка к обработке протеолитическими ферментами в эксперименте;
в) результатов исследований острой пероральной токсичности белка в эксперименте на лабораторных животных (мышах или крысах);
г) протоколы исследований, указанных в пункте 16 настоящей Методики, проведенных в организациях (испытательных лабораториях), аккредитованных в национальной системе аккредитации, с областью аккредитации, соответствующей исследованиям, указанным в настоящей Методике, и (или) с областью аккредитации, соответствующей молекулярно-генетическим исследованиям ГМО (при наличии).
(в ред. Приказа Минсельхоза России от 18.11.2021 № 772)
16. В отношении ГМО для производства кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением ГМО растительного или животного происхождения или содержащих такой организм, должны быть проведены следующие исследования образцов ГМО в сравнении с исходным организмом-реципиентом:
а) оценка композиционной эквивалентности ГМО и исходного организма-реципиента;
б) токсикологические исследования ГМО на лабораторных животных с изучением репродуктивной токсичности;
в) иммунологические исследования ГМО на лабораторных животных;
г) аллергологические исследования ГМО на лабораторных животных.
17. В случае отсутствия у заявителя протоколов исследований, указанных в подпункте «г» пункта 15 настоящей Методики, им должны быть представлены образцы ГМО и образцы исходного организма-реципиента. Соответствующие исследования этих образцов проводятся организацией (испытательной лабораторией), осуществляющей проведение экспертизы.
18. Если ГМО соответствует показателям (условиям) безопасности, указанным в пункте 21 настоящей Методики, заявителю должно быть выдано заключение об отсутствии негативного воздействия ГМО на окружающую среду. В заключении об отсутствии негативного воздействия на окружающую среду могут быть указаны специальные условия использования ГМО.
V. Требования к проведению исследований и показатели (условия) безопасности ГМО, являющегося микроорганизмом
19. Требования к проведению исследований и показатели (условия) безопасности ГМО для производства кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением жизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм:
а) токсикологические исследования на лабораторных животных должны проводиться на самцах и самках крыс или мышей (в зависимости от вида животных, сведения о которых представлены заявителем в соответствии с пунктом 7 настоящей Методики) в течение 90 календарных дней при соотношении полов 1:1. Животные должны быть разделены на 2 равные группы: группа «контроль» и группа «опыт». Группа «контроль» должна получать рацион с включением исходного организма-реципиента; группа «опыт» должна получать рацион с включением исследуемого ГМО. Обе группы животных должны получать одинаковый по объему и составу рацион, за исключением включенного исследуемого ГМО или исходного организма-реципиента. Исследуемый ГМО и исходный организм-реципиент должен быть включен в состав корма в равном количестве. Животные должны иметь доступ к корму и воде, содержаться в помещении с системой отопления и регулируемым микроклиматом.
Должны исследоваться следующие показатели состояния животных:
персистенция и выделение ГМО из организма животных;
общее состояние животных: внешний вид, двигательная активность, состояние шерстного покрова — каждые 2 календарных дня; поедаемость корма — ежедневно; масса тела — каждые 7 календарных дней;
гематологические показатели крови: концентрация гемоглобина; гематокрит; общее количество эритроцитов; средний объем эритроцита (СОЭ); среднее содержание гемоглобина в эритроците (ССЭ); средняя концентрация гемоглобина в эритроците (СКЭ); общее количество тромбоцитов; общее количество лейкоцитов; дифференцированный подсчет лейкоцитов (нейтрофилы, лимфоциты, эозинофилы, моноциты, базофилы);
биохимические показатели крови: аланинаминотрансфераза (АЛТ); аспартатаминотрансфераза (АСТ); желчные кислоты; фосфатаза щелочная; билирубин общий; билирубин прямой; белок общий; альбумин; глобулин; креатинин; глюкоза; альфа-амилаза; липаза; лактатдегидрогеназа; общие липиды; триглицериды; холестерин; холинэстераза; мочевина; хлориды; натрий; фосфор; калий;
общий анализ мочи: цвет и прозрачность; относительная плотность; pH; белок; глюкоза; креатинин.
Исследование гематологических и биохимических показателей крови, персистенции и показателей мочи должны проводиться на 90-й календарный день опыта у 50% животных из каждой группы. По окончании восстановительного периода (10-й календарный день со дня окончания дачи рациона с ГМО, 101-й календарный день опыта) должны проводиться те же исследования у второй половины животных каждой группы.
Скармливание животным рациона, содержащего ГМО, не должно вызывать клинических изменений (показатели крови, мочи, общего состояния животных группы «опыт», персистенции и выделения ГМО не должны отклоняться от показателей группы «контроль»), не должны выявляться патологоанатомические изменения при вскрытии;
б) аллергологические исследования ГМО на лабораторных животных должны проводиться на крысах линии Вистар. Животные должны быть разделены на 2 равные группы: группа «контроль» и группа «опыт». Группа «контроль» должна получать рацион с включением исходного организма-реципиента; группа «опыт» должна получать рацион с включением исследуемого ГМО. Обе группы животных должны получать одинаковый по объему и составу рацион, за исключением включенного исследуемого ГМО или исходного организма-реципиента. Исследуемый ГМО и исходный организм-реципиент должен быть включен в состав корма в равном количестве. Рацион не должен содержать яичный белок. Животные должны иметь доступ к корму и воде; содержаться в помещении с системой отопления и регулируемым микроклиматом.
На 1-й, 3-й, 5-й календарный день опыта крысам внутрибрюшинно должен вводиться пищевой антиген — овальбумин куриного яйца (далее — ОВА), а на 21-й календарный день эксперимента должна вводиться доза ОВА, уменьшенная в 10 раз в сравнении с дозами, введенными ранее. Кормление рационами необходимо продолжать до 29-го календарного дня эксперимента, и затем необходимо ввести внутривенно ОВА, после чего должна быть оценена на протяжении 24 часов тяжесть развивающейся реакции анафилаксии по величине анафилактического индекса. Непосредственно перед внутривенным введением разрешающей дозы у крыс должна отбираться кровь в количестве 0,1 — 0,2 мл из хвостовой вены для иммуноферментного определения уровня специфических антител к ОВА.
Тяжесть реакции анафилактического шока в каждой из групп животных должна оцениваться по анафилактическому индексу, учитывающему тяжесть реакции анафилаксии, и проценту летальных реакций анафилаксии.
Вычисление анафилактического индекса должно проводиться по формуле:
\frac{(Nx4) + (N1x3) + (N2x2) + (N3x1) + (N4x0)}{N + N1 + N2 + N3 + N4} ,
N — число животных, у которых наступила смерть;
N1 — число животных, у которых развился тяжелый анафилактический шок (асфиксия, общие судороги, при которых животное теряет способность удерживаться на лапах, не погибает);
N2 — число животных, у которых развился умеренный анафилактический шок (судороги, при которых животное не теряет способность удерживаться на лапах, бронхоспазм);
N3 — число животных, у которых развился слабый анафилактический шок (беспокойство, учащенное дыхание, почесывание мордочки, непроизвольное мочеиспускание, дефекация, шерсть взъерошена);
N4 — животные, у которых анафилактический шок не наступил.
Анафилактический индекс и процент летальных реакций анафилаксии группы «опыт» не должен превышать анафилактический индекс и процент летальных реакций анафилаксии группы «контроль». Уровень антител к ОВА у группы «опыт» не должен отличаться от уровня антител к ОВА группы «контроль»;
в) исследования вирулентности ГМО на лабораторных животных должны проводиться на свободных от специфических патогенов мышах, цыплятах с определением летальной дозы для 50% лабораторных животных (далее — ЛД50). Определение ЛД50 проводится путем внутрибрюшинного введения по 0,1 см3 живой суточной культуры исследуемого штамма в концентрации 1 x 10(9), 1 x 10(7), 1 x 10(5) и 1 x 10(3) КОЕ/см3. Каждая группа животных должна быть размещена в отдельные клетки и в течение 10 календарных дней необходимо наблюдать за гибелью животных. В качестве контрольных групп должны использоваться группы животных, которым внутрибрюшинно вводится стерильный физиологический раствор или вирулентный штамм с установленной дозой ЛД50. По завершении эксперимента необходимо подсчитать гибель животных в каждой группе и определить ЛД50. Если ЛД50 равна 5 x 10(8) КОЕ/см3 и более штамм считается авирулентным. ЛД50 для штамма ГМО не должна быть меньше ЛД50 исходного организма-реципиента;
г) исследования микробиологических свойств, чувствительности к антибиотикам и бактериофагам, гемолитической активности на эритроцитах животных должны проводиться в отношении штаммов ГМО-бактерий. Эксперименты необходимо проводить с использованием компонентов (сред, диагностических панелей, антибиотиков, бактериофагов и иных) и методов согласно информации, представленной заявителем в соответствии с пунктом 7 настоящей Методики. Определение микробиологических свойств, чувствительности к антибиотикам и бактериофагам, гемолитической активности ГМО необходимо проводить с использованием в качестве контроля исходного организма-реципиента. Условия эксперимента для исходного организма-реципиента и ГМО должны совпадать.
Микробиологические свойства, чувствительность к антибиотикам и бактериофагам, гемолитическая активность ГМО не должны отличаться от свойств исходного организма-реципиента в части, не затронутой генетической модификацией;
д) стабильность свойств ГМО-бактерий, простейших, грибов должна проверяться при пассировании исследуемых штаммов на жидких и плотных питательных средах с тестированием фенотипических (биохимических) свойств через 6 последовательных пассажей. Молекулярно-генетическими методами должен исследоваться исходный ГМО и ГМО после шестикратного пассирования. Стабильными являются штаммы ГМО-бактерий, простейших, грибов, не изменившие фенотипических (биохимических) свойств и сохранившие генетическую структуру после проведения шестикратного пассирования. ГМО-бактерии, простейшие, грибы должны демонстрировать стабильность фенотипических (биохимических) свойств и генетической структуры;
е) исследование жизнестойкости ГМО на объектах окружающей среды, в том числе на влажных опилках, ватных тампонах, после термической обработки должно проводиться с использованием питательных сред, культур клеток или иных тест-объектов, чувствительных к исходному организму-реципиенту, согласно информации, представленной заявителем в соответствии с пунктом 7 настоящей Методики. Эксперименты должны проводиться с использованием в качестве контроля исходного организма-реципиента. Условия экспериментов для исходного организма-реципиента и ГМО должны совпадать. Жизнестойкость ГМО в окружающей среде не должна превышать жизнестойкость исходного организма-реципиента;
ж) определение инвазивности ГМО с помощью кератоконъюнктивальной пробы должно осуществляться путем внедрения ГМО и исходного организма-реципиента в качестве контроля в эпителиальные клетки конъюнктивы и роговицу лабораторных животных для оценки размножения в них. Условия эксперимента для исходного организма-реципиента и ГМО должны совпадать. Инвазивность ГМО не должна превышать инвазивность исходного организма-реципиента;
з) при определении антагонистической активности ГМО для контроля должны использоваться исходный организм-реципиент и тест-штаммы микроорганизмов, представляющие основные виды резидентной кишечной микрофлоры животных-реципиентов (грамположительные: облигатно-анаэробные бактерии-лактобактерии, бифидобактерии, пептостептококки; грамотрицательные: облигатно-анаэробные бактерии, бактероиды, факультативно-анаэробные микроорганизмы, кишечная палочка, стафилококки, стрептококки, дрожжеподобные грибы рода Candida). Уровень антагонистической активности в отношении штаммов резидентной микрофлоры должен определяться методом отсроченного антагонизма на плотной среде по зонам задержки роста тест-штаммов. Антагонистическое действие ГМО не должно проявляться к представителям резидентной микрофлоры и не должно превышать антагонистическую активность исходного организма-реципиента;
и) иммунологические исследования ГМО должны проводиться на мышах линий СВА, высокочувствительных к введению эритроцитов барана и нечувствительных к гистамину и Salmonella typhimurium, и C57B1/6, низкочувствительных к введению эритроцитов барана, чувствительных к гистамину и Salmonella typhimurium, и должны включать изучение иммуномодулирующих и сенсибилизирующих свойств по четырем тестам: действие на гуморальное звено иммунитета в тесте определения уровня гемагглютининов к эритроцитам барана; действие на клеточное звено иммунитета в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) к эритроцитам барана; действие как сенсибилизирующего агента в тесте чувствительности к гистамину; действие на естественную резистентность мышей к Salmonella typhimurium. Эксперименты должны проводиться с использованием в качестве контроля исходного организма-реципиента. Условия экспериментов для исходного организма-реципиента и ГМО должны совпадать. ГМО должен быть не менее безопасен, чем исходный организм-реципиент.
20. Требования к проведению исследований и показатели (условия) биологической безопасности ГМО для производства кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением нежизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм:
а) аллергологические исследования ГМО на лабораторных животных должны проводиться на крысах линии Вистар в порядке, установленном подпунктом «б» пункта 19 настоящей Методики;
б) исследования образцов кормов и кормовых добавок для животных на отсутствие жизнеспособного ГМО должны проводиться с использованием микробиологических методов. В качестве контрольных посевов и (или) пассажей должна использоваться живая культура штамма;
в) токсикологические исследования на лабораторных животных должны проводиться в соответствии с подпунктом «а» пункта 19 настоящей Методики;
г) иммунологические исследования ГМО должны проводиться в соответствии с подпунктом «и» пункта 19 настоящей Методики.
VI. Требования к проведению исследований и показатели (условия) безопасности ГМО растительного или животного происхождения
21. Требования к проведению исследований и показатели (условия) безопасности ГМО для производства кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением ГМО растительного или животного происхождения или содержащих такой организм:
а) оценка композиционной эквивалентности ГМО и исходного организма-реципиента должна проводиться с целью исключения риска снижения биологической полноценности ГМО по результатам сравнения химического состава ГМО с химическим составом исходного организма-реципиента по следующим показателям:
содержание макро- и микроэлементов;
содержание биологически активных веществ;
содержание антропогенных и природных контаминантов (токсичных элементов, микотоксинов, пестицидов, радионуклидов, вредных примесей);
В случае если генетическая модификация направлена на изменение химического состава ГМО, химический состав ГМО должен соответствовать данным, представленным заявителем в соответствии с пунктом 15 настоящей Методики. В случае если генетическая модификация не направлена на изменение химического состава ГМО, химический состав ГМО не должен отличаться от химического состава исходного организма-реципиента;
б) токсикологические исследования ГМО на лабораторных животных с изучением репродуктивной токсичности должны проводиться на двух поколениях крыс линии Вистар в течение 180 календарных дней.
Токсикологические исследования должны включать изучение репродуктивной функции крыс поколения F0, изучение эмбриотоксического и тератогенного действий, регистрируемых в пре- и постнатальном периодах развития потомства поколения F1, а также оценку физиолого-биохимических показателей крыс поколения F0, F1. Эксперимент проводится на самцах и самках крыс (исходный возраст 25 — 30 дней). Животные должны быть разделены на 2 равные группы: группа «контроль» и группа «опыт». Группа «контроль» должна получать рацион с включением исходного организма-реципиента; группа «опыт» должна получать рацион с включением исследуемого ГМО. Обе группы животных должны получать одинаковый по объему и составу рацион, за исключением включенного исследуемого ГМО или исходного организма-реципиента. Исследуемый ГМО и исходный организм-реципиент должен быть включен в состав корма в равном количестве. Количество животных в группах в начале эксперимента должно составлять 55 самок и 25 самцов. Животные должны иметь доступ к корму и воде; содержаться в помещении с системой отопления и регулируемым микроклиматом.
Должны оцениваться показатели состояния животных:
общее состояние животных (внешний вид, двигательная активность, состояние шерстного покрова) — каждые 2 календарных дня; поедаемость корма — ежедневно; масса тела — каждые 7 календарных дней;
гематологические показатели крови: концентрация гемоглобина; гематокрит; общее количество эритроцитов; средний объем эритроцита (СОЭ); среднее содержание гемоглобина в эритроците (ССЭ); средняя концентрация гемоглобина в эритроците (СКЭ); общее количество тромбоцитов; общее количество лейкоцитов; дифференцированный подсчет лейкоцитов (нейтрофилы, лимфоциты, эозинофилы, моноциты, базофилы);
биохимические показатели крови: аланинаминотрансфераза (АЛТ); аспартатаминотрансфераза (АСТ); желчные кислоты; фосфатаза щелочная; билирубин общий; билирубин прямой; белок общий; альбумин; глобулин; креатинин; глюкоза; альфа-амилаза; липаза; лактатдегидрогеназа; общие липиды; триглицериды; холестерин; холинэстераза; мочевина; хлориды; натрий; фосфор; калий;
общий анализ мочи: цвет и прозрачность; относительная плотность; pH; белок; глюкоза; креатинин.
Исследование гематологических и биохимических показателей крови, персистенции и показателей мочи должны проводиться на 90-й календарный день опыта у половины животных из каждой группы. По окончании восстановительного периода (10-й календарный день со дня окончания дачи рациона с ГМО, 101-й календарный день опыта) должны проводиться те же исследования у второй половины животных каждой группы.
На 90-й и 180-й календарные дни эксперимента (плановый забой 15 крыс на группу) должны выполняться макроскопические и микроскопические исследования, обзорные гистологические исследования, морфометрический анализ, определения массы внутренних органов (головного мозга, сердца, селезенки, легких, тимуса, гипофиза, печени, почек, надпочечников, матки, яичников и семенников). Для погибших в течение эксперимента животных должны проводиться морфологические исследования кожи, головного мозга, сердца, аорты, селезенки, легких. В случае если невозможно установить причину смерти, дополнительно должны проводиться морфологические исследования лимфатических узлов, тимуса, щитовидной железы, гипофиза, желудка, тонкой и толстой кишки, печени.
Токсикологическое исследование на лабораторных животных с изучением репродуктивной токсичности на двух поколениях крыс линии Вистар (F0 и F1) должны быть продолжены на третьем поколении (F2) и четвертом поколении (F3) указанных лабораторных животных в случаях, если:
в результатах исследований между группой «опыт» и группой «контроль» наблюдаются различия в диапазоне между погрешностью эксперимента и величиной двукратной погрешности (статистически значимое различие) по исследуемым показателям;
между группой «опыт» и группой «контроль» наблюдаются различия по следующим показателям: пигментация, отклонение в поведении, появление нехарактерных физиологических, анатомических, биохимических признаков;
в процессе проведения экспертизы (исследования) получены данные из научных источников о негативном влиянии исследуемого ГМО на окружающую среду.
Скармливание животным рациона, содержащего ГМО, не должно вызывать клинических изменений (показатели крови, мочи, общего состояния животных, персистенции и выделения ГМО не должны отклоняться от показателей группы «контроль»), не должны выявляться патологоанатомические изменения при вскрытии;
в) иммунологические исследования ГМО должны проводиться в порядке, установленном подпунктом «и» пункта 19 настоящей Методики;
г) аллергологические исследования ГМО на лабораторных животных должны проводиться на крысах линии Вистар в соответствии с подпунктом «б» пункта 19 настоящей Методики.