МУК 4.2.4265-26. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Метод микробиологического определения концентрации штамма Bacillus subtilis List 16 ВКПМ B-14993 в воздухе рабочей зоны и атмосферном воздухе городских и сельских поселений. Методические указания по методам контроля
(утв. Роспотребнадзором 10.04.2026)
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://www.rospotrebnadzor.ru/ по состоянию на 30.06.2026. Документ введен в действие с 10.09.2026.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 10 апреля 2026 года
Дата введения 10 сентября 2026 года
4.2 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ
И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ШТАММА BACILLUS SUBTILIS LIST 16 ВКПМ B-14993 В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ И АТМОСФЕРНОМ ВОЗДУХЕ ГОРОДСКИХ И СЕЛЬСКИХ ПОСЕЛЕНИЙ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО МЕТОДАМ КОНТРОЛЯ МУК 4.2.4265-26
1. Разработаны Федеральным государственным автономным образовательным учреждением высшего образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Пироговский университет (д.б.н. Н.И. Шеина); Федеральным бюджетным учреждением науки «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (к.м.н. А.Л. Мишина).
2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой «10» апреля 2026 г.
I. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее — МУК) описывают порядок применения метода количественного микробиологического определения концентрации штамма Bacillus subtilis List 16 ВКПМ B-14993 (далее — Bacillus subtilis List 16) в воздухе рабочей зоны и в атмосферном воздухе городских и сельских поселений в диапазоне концентраций от 50 до 50000 клеток в 1 м3 воздуха.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРООРГАНИЗМА
2.1. Штамм Bacillus subtilis List 16 обнаружен в ризосфере разнотравья целины Рязанской области, идентифицирован с помощью культурально-морфологических и физиолого-биохимических тестов, а также секвенирования гена 16S РНК и депонирован в БРЦ ВКПМ Центра «Курчатовский институт» под номером ВКПМ B-14993.
2.2. Предназначен для использования в сельском хозяйстве. Штамм может расти при температуре от плюс 25 °C до плюс 40 °C при pH от 6,5 до 8,5. Оптимальная температура плюс (28 +/- 2) °C, оптимальное значение pH 7,0. Время культивирования 2 — 3 суток.
2.3. Палочковидная бактерия размером 2 — 5x0,4 — 0,6 мкм. Споры овальные, расположены центрально. Клетки подвижны за счет перитрихиально расположенных жгутиков. Колонии мелкие, сухие, мелкоморщинистые, бархатистые, бесцветные, серого или розового цвета. Край колонии волнистый.
2.4. Для культивирования штамма Bacillus subtilis List 16 используется ГРМ-агар. Температура культивирования плюс (28 +/- 2) °C, рост колоний в течение 2 — 3 суток.
2.5. Штамм не является фито- и зоопатогенным, генно модифицированным, а также не входит в состав четырех групп патогенности <1>. Работа со штаммами не требует специальных мер предосторожности.
<1> Приложение 1 СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней», утвержденных постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 № 4 (зарегистрировано Минюстом России 15.02.2021, регистрационный № 62500), с изменениями, внесенными постановлениями Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 11.02.2022 № 5 (зарегистрировано Минюстом России 01.03.2022, регистрационный № 67587); от 25.05.2022 № 16 (зарегистрировано Минюстом России 21.06.2022, регистрационный № 68934); от 25.06.2025 № 12 (зарегистрировано Минюстом России 25.07.2025, регистрационный № 83058) (далее — СанПиН 3.3686-21).
III. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
3.1. Метод основан на аспирации из воздуха колониеобразующих клеток штамма и подсчете количества выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам на питательной среде — ГРМ-агар. При наличии в воздухе высоких концентраций штамма возможно использование седиментационного метода Коха.
IV. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА, РЕАКТИВЫ, ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ И МАТЕРИАЛЫ
4.1. При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы, питательные среды и материалы, приведенные в таблицах 4.1 - 4.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Барометр-анероид | Диапазоном измерения атмосферного давления 5 — 790 мм. рт. ст., предел допустимой погрешности +/- 2,5 мм. рт. ст. |
| Весы лабораторные, аналитические | Наибольший предел взвешивания 110 г, предел допустимой погрешности +/- 0,2 мг, ГОСТ OIML R 76-1-2011 |
| Колбы мерные лабораторные конические | КН-2-50-34, КН-2-250-50, КН-2-500-50, КН-2-1000-50, ГОСТ 1770-74 |
| Пипетки градуированные | 2-го класса точности, вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 см3, ГОСТ 29227-91 |
| Цилиндры мерные | 2-го класса точности вместимостью 25 и 50 см3, ГОСТ 1770-74 |
| Термометр лабораторный шкальный | Пределы измерения от 0 до плюс 55 °C |
| Аспирационный бактериологический пробоотборник | Скорость до 40 л/мин, расход регулируется по ротаметру, диаметр чашек Петри 90, 100, 120 мм, определение в диапазоне 25 — 10000 КОЕ/м3 |
| Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками. | |
Вспомогательные устройства и материалы
| Наименование вспомогательных устройств и материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Шкаф сушильный стерилизационный | Поддерживающий температуру плюс (160 +/- 5) °C |
| Термостаты | Поддерживающие рабочую температуру плюс (28 +/- 2) °C и плюс (37 +/- 2) °C |
| Автоклав электрический | ГОСТ 9586-75 |
| Стерилизаторы паровые медицинские | ГОСТ Р ЕН 13060-2011, ГОСТ 31598-2012 |
| Дистиллятор | - |
| Облучатель бактерицидный настенный | - |
| Холодильник бытовой | ГОСТ 26678-85 |
| Микроскоп биологический с иммерсионной системой | - |
| Лупа с увеличением x10 | ГОСТ 25706-83 |
| Пробирки типов П1, П2 | ГОСТ 25336-82 |
| Спиртовки лабораторные стеклянные | ГОСТ 23932-90 |
| Чашки биологические (Петри) или одноразовые из полимерных материалов | ГОСТ 23932-90 |
| Воронки конусные | Диаметром 40 — 45 мм, ГОСТ 25336-82 |
| Груша резиновая | - |
| Петля бактериологическая | - |
| Марля медицинская | ГОСТ 9412-2021 |
| Вата медицинская гигроскопическая ГОСТ 25556-2022 | |
| Бумага фильтровальная лабораторная | ГОСТ 12026-76 |
| Примечание: допускается использование вспомогательных устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками. | |
| Таблица 4.3 | |
| Наименование реактивов и питательных сред | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| Агар микробиологический | ГОСТ 17206-96 |
| Вода дистиллированная | ГОСТ Р 58144-2018 |
| Натрий хлорид (NaCl) | ГОСТ 4233-77 |
| Панкреатический гидролизат рыбной муки | - |
| Пептон сухой ферментативный | ГОСТ 13805-76 |
| Спирт этиловый технический | ГОСТ 17299-78 |
| Спирт этиловый ректификованный | ГОСТ 5962-2013 |
| Примечание: допускается использование других питательных сред, диагностических препаратов и реактивов с аналогичными характеристиками. | |
V. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ
5.1. Определение концентрации клеток штамма в воздухе рабочей зоны и атмосферном воздухе осуществляют в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями <2>, методическими документами <3>, а также документами по стандартизации <4>.
<2> Глава IV СанПиН 3.3686-21.
<3> МУ 4.2.4071-24 «Экспериментальное обоснование ПДК и регламентация биотехнологических штаммов микроорганизмов и содержащих их микробиологических препаратов в объектах производственной и окружающей среды», утвержденные руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 29.09.2024 (далее — МУ 4.2.4071-24).
<4> ГОСТ 12.1.005-88 «Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны», введенный в действие постановлением Госстандарта СССР от 29.09.1988 № 3388.
5.2. При выполнении определения необходимо соблюдать требования по электробезопасности при работе с электроустановками <5> и инструкции по эксплуатации прибора.
<5> ГОСТ 12.1.019-2017 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты», введенный приказом Росстандарта от 07.11.2018 № 941-ст; ГОСТ 12.1.009-2017 «Электробезопасность. Термины и определения», введенный приказом Росстандарта от 07.11.2018 № 942-ст.
5.3. Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованным бактерицидными лампами.
5.4. К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.
VI. УСЛОВИЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ШТАММА
6.1 Приготовление сред, подготовку к анализу проводят в следующих условиях:
- температура воздуха — плюс (20 +/- 5) °C;
- атмосферное давление — (760 +/- 20) мм рт. ст.;
- влажность воздуха — не более 80%.
VII. ПРИГОТОВЛЕНИЕ АГАРИЗОВАННОЙ СРЕДЫ
7.1. Для приготовления среда ГРМ-агар используют компоненты следующего состава (г/1000 см3): панкреатический гидролизат рыбной муки — 12,0; пептон сухой ферментативный — 12,0; хлорид натрия — 6,0; агар — 10,0 +/- 2,0; дистиллированная вода — 1000 см3.
7.2. Сухие компоненты растворяют в 1000 см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают и нагревают до полного растворения агара.
7.3. Приготовленную среду разливают в стерильные колбы по 250 — 500 см3 и автоклавируют при температуре плюс 121 °C в течение 15 мин.
7.4. Готовую среду хранят в защищенных от света условиях при температуре не выше плюс 8 °C в течение не более 10 дней.
VIII. ПРОВЕДЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ШТАММА В ВОЗДУХЕ
8.1. Отбор проб воздуха. Отбор проб воздуха проводят в соответствии с методическими документами <6>, а также документами по стандартизации <7>.
<6> МУ 4.2.4071-24.
<7> ГОСТ Р 8.563-2009 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений», введенный приказом Ростехрегулирования от 15.12.2009 № 1253-ст.
Для этого воздух аспирируют при помощи пробоотборника на поверхность плотной питательной среды в соответствии с технической документацией (инструкцией) на прибор. Время аспирации и объем отбираемого воздуха зависит от предполагаемой концентрации штаммов препарата (таблица 8.1).
Время и скорость отбора проб воздуха
Аппарат перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают 96° этиловым спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо (количество питательной среды в чашки вносят в соответствии с инструкцией к прибору). После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.
8.2 Выполнение анализа.
8.2.1. При выполнении анализа воздуха стерильную агаризованную среду (ГРМ-агар) расплавляют, остужают до температуры плюс 50 — 60 °C и разливают в чашки Петри.
8.2.2. Контроль чистоты розлива проводят в соответствии с методическими документами <8>. Для этого чашки с застывшей средой помещают в термостат при температуре плюс 37 °C не менее чем на 18 ч. Проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха. Разлитую в чашки питательную среду хранят при температуре плюс 2 — 8 °C не более 10 дней.
<8> Подпункт 7.1.1 МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологических питательных сред», утвержденный руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 18.01.2008 (далее — МУК 4.2.2316-08).
8.2.3. После отбора проб воздуха чашки Петри культивируют при температуре плюс (28 +/- 2) °C. Через 48 ч производят подсчет выросших колоний штамма по культурально-морфологическим признакам. Для идентификации возможно использование молекулярно-генетических методов.
8.2.4. Ростовые свойства используемой питательной среды должны быть проверены до проведения анализа воздуха в соответствии ростовыми свойствами питательных сред <9>. Для этого музейный штамм высевают на 2 — 3 чашки используемой среды.
<9> Пункт 7 МУК 4.2.2316-08.
8.2.5. Лиофилизованную культуру музейного штамма необходимо использовать 2 — 3 пассажа во избежание потери им заданных ростовых свойств.
IX. ВЫЧИСЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
9.1 Расчет концентрации клеток в воздухе производят по формуле (1):
\text{К } = \frac{\text{П } \times 1000}{\text{С } \times \text{Т}} , (1)
где: К — концентрация штамма в воздухе, КОЕ/м3;
П — количество типичных колоний, выросших на чашке Петри;
1000 — коэффициент пересчета дм3 на м3 воздуха;
С — скорость аспирации воздуха, дм3/мин;
X. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
10.1. Результаты определения концентрации штаммов штамма в воздухе оформляют протоколом <10>. Протокол испытания должен включать:
<10> Пункты 7.3, 7.8 ГОСТ ISO 17025-2019 «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий», введенного приказом Росстандарта от 15.07.2019 № 385-ст.
- всю информацию, необходимую для полной идентификации образца;
- используемый метод испытаний;
- все детали испытания, не установленные настоящим документом;
- полученные результаты и соотношение их с уровнем ПДКр.з или ПДКа.в.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней».
3. МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологических питательных сред».
4. МУК 4.2.1054-01 «Измерение концентраций микроорганизмов-продуцентов, бактериальных препаратов и их компонентов в атмосферном воздухе населенных мест».
5. ГОСТ 12.1.009-2017 «Электробезопасность. Термины и определения».
6. ГОСТ OIML R 76-1-2011 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
7. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
8. ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
9. ГОСТ Р 8.563-2009 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений».
10. ГОСТ 31598-2012 «Стерилизаторы паровые большие. Общие технические требования и методы испытаний».
11. ГОСТ Р ЕН 13060-2011 «Стерилизаторы паровые малые».
12. ГОСТ 22340-89 «Аквадистилляторы медицинские электрические. Общие технические требования и методы испытаний».
13. ГОСТ 26678-85 «Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия».
14. ГОСТ 25706-83 «Лупы. Типы, основные параметры. Общие технические требования».
15. ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
16. ГОСТ 23932-90 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Общие технические условия».
17. ГОСТ 9412-2021 «Марля медицинская. Общие технические условия».
18. ГОСТ 5556-2022 «Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия».
19. ГОСТ 12026-76 «Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия».
20. ГОСТ 17206-96 «Агар микробиологический. Технические условия».
21. ГОСТ Р 58144-2018 «Вода дистиллированная. Технические условия».
22. ГОСТ 17299-78 «Спирт этиловый технический. Технические условия».
23. ГОСТ 5962-2013 «Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия».
24. ГОСТ 12.1.005-88 «Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны».
25. ГОСТ 12.1.019-2017 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
26. ГОСТ ISO 17025-2019 «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий».