МУК 4.2.4264-26. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Метод микробиологического определения концентрации штамма Bacillus thuringiensis List 5 ВКПМ B-15109 в воздухе рабочей зоны и атмосферном воздухе городских и сельских поселений. Методические указания по методам контроля

(утв. Роспотребнадзором 10.04.2026)

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 10 апреля 2026 года

Дата введения 10 сентября 2026 года

4.2 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ

И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ШТАММА BACILLUS THURINGIENSIS LIST 5 ВКПМ B-15109 В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ И АТМОСФЕРНОМ ВОЗДУХЕ ГОРОДСКИХ И СЕЛЬСКИХ ПОСЕЛЕНИЙ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО МЕТОДАМ КОНТРОЛЯ МУК 4.2.4264-26

1. Разработаны Федеральным государственным автономным образовательным учреждением высшего образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Пироговский университет (д.б.н. Н.И. Шеина); Федеральным бюджетным учреждением науки «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (к.м.н. А.Л. Мишина).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой «10» апреля 2026 г.

3. Введены впервые.

I. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее — МУК) описывают порядок применения метода микробиологического количественного определения концентрации штамма Bacillus thuringiensis List 5 ВКПМ B-15109 (далее — Bacillus thuringiensis List 5) в воздухе рабочей зоны и в атмосферном воздухе городских и сельских поселений в диапазоне концентраций от 50 до 50000 клеток в 1 м3 воздуха.

1.2 МУК носят рекомендательный характер.

II. БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРООРГАНИЗМА

2.1. Штамм Bacillus thuringiensis List 5 выделен из тела мертвой гусеницы непарного шелкопряда в Рязанской области, идентифицирован с помощью культурально-морфологических и физиолого-биохимических тестов, а также секвенирования гена 16S РНК и депонирован в БРЦ ВКПМ Центра «Курчатовский институт» под номером ВКПМ B-15109.

2.2. Предназначен для использования в сельском хозяйстве. Штамм хорошо растет на следующих средах: мясо-пептонный агар (МПА), картофельно-глюкозный агар (КГА), LB-агар, ГРМ-агар. Штамм является облигатным аэробом. При инкубации в полноценной жидкой среде наблюдается поверхностный рост. Температура культивирования плюс (28 +/- 2) °C, время культивирования 2 — 4 суток.

2.3. Клетки бактерии представляют собой грамположительные подвижные одиночные или в цепочках спорообразующие палочки размером 2,6 — 5,0x0,7 — 1,0 мкм. Колонии кремовые матовые диаметром 3 — 5 мм. Характерной морфологической особенностью является наличие кристаллов токсина (Cry-токсина) в цитоплазме, окрашиваемых красителем анилиновым черным.

2.4. Для культивирования штамма Bacillus thuringiensis List 5 используется ГРМ-агар, температура культивирования плюс (28 +/- 2) °C, рост колоний в течение 24 — 48 ч.

2.5. Штамм не является фитопатогенным, генно модифицированным, а также не входит в состав четырех групп патогенности <1>. Работа со штаммами не требует специальных мер предосторожности.

---

<1> Приложение 1 СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней», утвержденных постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 № 4 (зарегистрировано Минюстом России 15.02.2021, регистрационный № 62500), с изменениями, внесенными постановлениями Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 11.02.2022 № 5 (зарегистрировано Минюстом России 01.03.2022, регистрационный № 67587); от 25.05.2022 № 16 (зарегистрировано Минюстом России 21.06.2022, регистрационный № 68934); от 25.06.2025 № 12 (зарегистрировано Минюстом России 25.07.2025, регистрационный № 83058) (далее — СанПиН 3.3686-21).

III. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

3.1. Метод основан на аспирации из воздуха колониеобразующих клеток штамма и подсчете количества выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам на питательной среде — ГРМ-агар. При наличии в воздухе высоких концентраций штамма возможно использование седиментационного метода Коха.

IV. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА, РЕАКТИВЫ, ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ И МАТЕРИАЛЫ

4.1. При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы, питательные среды и материалы, приведенные в таблицах 4.1 - 4.3.

Таблица 4.1

Средства измерений

Наименование средств измерения	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Барометр-анероид	Диапазоном измерения атмосферного давления 5 — 790 мм. рт. ст., предел допустимой погрешности +/- 2,5 мм. рт. ст.
Весы лабораторные, аналитические	Наибольший предел взвешивания 110 г, предел допустимой погрешности +/- 0,2 мг, ГОСТ OIML R 76-1-2011
Колбы мерные лабораторные конические	КН-2-50-34, КН-2-250-50, КН-2-500-50, КН-2-1000-50, ГОСТ 1770-74
Пипетки градуированные	2-го класса точности, вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 см3, ГОСТ 29227-91
Цилиндры мерные	2-го класса точности вместимостью 25 и 50 см3, ГОСТ 1770-74
Термометр лабораторный шкальный	Пределы измерения от 0 до плюс 55 °C
Аспирационный бактериологический пробоотборник	Скорость до 40 л/мин, расход регулируется по ротаметру, диаметр чашек Петри 90, 100, 120 мм, определение в диапазоне 25 — 10000 КОЕ/м3
Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Таблица 4.2

Вспомогательные устройства и материалы

Наименование вспомогательных устройств и материалов	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Шкаф сушильный стерилизационный	Поддерживающий температуру плюс (160 +/- 5) °C
Термостаты	Поддерживающие рабочую температуру плюс (28 +/- 2) °C и плюс (37 +/- 2) °C
Автоклав электрический	ГОСТ 9586-75
Стерилизаторы паровые медицинские	ГОСТ Р ЕН 13060-2011, ГОСТ 31598-2012
Дистиллятор	-
Облучатель бактерицидный настенный	-
Холодильник бытовой	ГОСТ 26678-85
Микроскоп биологический с иммерсионной системой	-
Лупа с увеличением x10	ГОСТ 25706-83
Пробирки типов П1, П2	ГОСТ 25336-82
Спиртовки лабораторные стеклянные	ГОСТ 23932-90
Чашки биологические (Петри) или одноразовые из полимерных материалов	ГОСТ 23932-90
Воронки конусные	Диаметром 40 — 45 мм, ГОСТ 25336-82
Груша резиновая	-
Петля бактериологическая	-
Марля медицинская	ГОСТ 9412-2021
Вата медицинская гигроскопическая ГОСТ 25556-2022
Бумага фильтровальная лабораторная	ГОСТ 12026-76
Примечание: допускается использование вспомогательных устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
Таблица 4.3

Реактивы и питательные среды

Наименование реактивов и питательных сред	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Агар микробиологический	ГОСТ 17206-96
Вода дистиллированная	ГОСТ Р 58144-2018
Панкреатический гидролизат рыбной муки	-
Натрий хлорид (NaCl)	ГОСТ 4233-77
Пептон сухой ферментативный	ГОСТ 13805-76
Спирт этиловый технический	ГОСТ 17299-78
Спирт этиловый ректификованный	ГОСТ 5962-2013
Примечание: допускается использование других питательных сред и реактивов с аналогичными характеристиками.

V. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ

5.1. Определение концентрации клеток штамма в воздухе рабочей зоны и атмосферном воздухе осуществляют в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями <2>, методическими документами <3>, а также документами по стандартизации <4>.

---

<2> Глава IV СанПиН 3.3686-21.

<3> МУ 4.2.4071-24 «Экспериментальное обоснование ПДК и регламентация биотехнологических штаммов микроорганизмов и содержащих их микробиологических препаратов в объектах производственной и окружающей среды», утвержденные руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 29.09.2024 (далее — МУ 4.2.4071-24).

<4> ГОСТ 12.1.005-88 «Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны», введенный в действие постановлением Госстандарта СССР от 29.09.1988 № 3388.

5.2. При выполнении определения необходимо соблюдать требования по электробезопасности при работе с электроустановками <5> и инструкции по эксплуатации прибора.

---

<5> ГОСТ 12.1.019-2017 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты», введенный приказом Росстандарта от 07.11.2018 № 941-ст; ГОСТ 12.1.009-2017 «Электробезопасность. Термины и определения», введенный приказом Росстандарта от 07.11.2018 № 942-ст.

5.3. Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованным бактерицидными лампами.

5.4. К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.

VI. УСЛОВИЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ШТАММА

6.1 Приготовление сред, подготовку к анализу проводят в следующих условиях:

• температура воздуха — плюс (20 +/- 5) °C;
• атмосферное давление — (760 +/- 20) мм рт. ст.;
• влажность воздуха — не более 80%.

VII. ПРИГОТОВЛЕНИЕ АГАРИЗОВАННОЙ СРЕДЫ

7.1. Для приготовления среды ГРМ-агар используют компоненты следующего состава (г/1000 см3): панкреатический гидролизат рыбной муки — 12,0; пептон сухой ферментативный — 12,0; хлорид натрия — 6,0; агар — (10,0 +/- 2,0); дистиллированная вода — 1000 см3.

7.2. Сухие компоненты растворяют в 1000 см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают и нагревают до полного растворения агара.

7.3. Приготовленную среду разливают в стерильные колбы по 250 — 500 см3 и автоклавируют при температуре плюс 121 °C в течение 15 мин.

7.4. Готовую среду хранят в защищенных от света условиях при температуре не выше плюс 8 °C в течение не более 10 дней.

VIII. ПРОВЕДЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ШТАММА В ВОЗДУХЕ

8.1. Отбор проб воздуха. Отбор проб воздуха проводят в соответствии с методическими документами <6>, а также документами по стандартизации <7>.

---

<6> МУ 4.2.4071-24.

<7> ГОСТ Р 8.563-2009 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений», введенный приказом Ростехрегулирования от 15.12.2009 № 1253-ст.

Для этого воздух аспирируют при помощи пробоотборника на поверхность плотной питательной среды в соответствии с технической документацией (инструкцией) на прибор. Время аспирации и объем отбираемого воздуха зависит от предполагаемой концентрации штаммов препарата (таблица 8.1).

Таблица 8.1

Время и скорость отбора проб воздуха

Предполагаемая концентрация микроорганизма в воздухе, КОЕ/м3	Время отбора проб воздуха, мин			Количество чашек Петри на 1 пробу воздуха
	10 дм3/мин	20 дм3/мин	30 дм3/мин
50	-	-	10	1
500	-	-	5	1
5000	-	1	-	Последовательно 2 чашки по 30 сек
50000	1	-	-	Последовательно 4 чашки по 15 сек

Аппарат перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают 96° этиловым спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо (количество питательной среды в чашки вносят в соответствии с инструкцией к прибору). После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

8.2 Выполнение анализа.

8.2.1. При выполнении анализа воздуха стерильную агаризованную среду (ГРМ-агар) расплавляют, остужают до температуры плюс 50 — 60 °C и разливают в чашки Петри.

8.2.2. Контроль чистоты розлива проводят в соответствии с методическими документами <8>. Для этого чашки с застывшей средой помещают в термостат при температуре плюс 37 °C не менее чем на 18 ч. Проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха. Разлитую в чашки питательную среду хранят при температуре плюс 2 — 8 °C не более 10 дней.

---

<8> Подпункт 7.1.1 МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологических питательных сред», утвержденных руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 18.01.2008 (далее — МУК 4.2.2316-08).

8.2.3. После отбора проб воздуха чашки Петри культивируют при температуре плюс (28 +/- 2) °C. Через 48 ч производят подсчет выросших колоний штамма по культурально-морфологическим признакам. Для идентификации возможно использование молекулярно-генетических методов.

8.2.4. Ростовые свойства используемой питательной среды должны быть проверены до проведения анализа воздуха в соответствии ростовыми свойствами питательных сред <9>. Для этого музейный штамм высевают на 2 — 3 чашки используемой среды.

---

<9> Пункт 7 МУК 4.2.2316-08.

8.2.5. Лиофилизованную культуру музейного штамма необходимо использовать 2 — 3 пассажа во избежание потери им заданных ростовых свойств.

IX. ВЫЧИСЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

9.1 Расчет концентрации клеток в воздухе производят по формуле (1):

K = \frac{\text{П } \times 1000}{C \times \text{Т}} , (1)

где: К — концентрация штамма в воздухе, КОЕ/м3;

П — количество типичных колоний, выросших на чашке Петри;

1000 — коэффициент пересчета дм3 на м3 воздуха;

С — скорость аспирации воздуха, дм3/мин;

T — время аспирации, мин.

X. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

10.1. Результаты определения концентрации штаммов штамма в воздухе оформляют протоколом <10>. Протокол испытания должен включать:

---

<10> Пункты 7.3, 7.8 ГОСТ ISO 17025-2019 «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий», введенного приказом Росстандарта от 15.07.2019 № 385-ст.

• всю информацию, необходимую для полной идентификации образца;
• используемый метод испытаний;
• все детали испытания, не установленные настоящим документом;
• полученные результаты и соотношение их с уровнем ПДКр.з или ПДКа.в.

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ

1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».

2. СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней».

3. МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологических питательных сред».

4. МУ 4.2.4071-24 «Экспериментальное обоснование ПДК и регламентация биотехнологических штаммов микроорганизмов и содержащих их микробиологических препаратов в объектах производственной и окружающей среды».

5. ГОСТ 12.1.009-2017 «Электробезопасность. Термины и определения».

6. ГОСТ OIML R 76-1-2011 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».

7. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».

8. ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».

9. ГОСТ Р 8.563-2009 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений».

10. ГОСТ 31598-2012 «Стерилизаторы паровые большие. Общие технические требования и методы испытаний».

11. ГОСТ Р ЕН 13060-2011 «Стерилизаторы паровые малые».

12. ГОСТ 22340-89 «Аквадистилляторы медицинские электрические. Общие технические требования и методы испытаний».

13. ГОСТ 26678-85 «Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия».

14. ГОСТ 25706-83 «Лупы. Типы, основные параметры. Общие технические требования».

15. ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».

16. ГОСТ 23932-90 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Общие технические условия».

17. ГОСТ 9412-2021 «Марля медицинская. Общие технические условия».

18. ГОСТ 5556-2022 «Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия».

19. ГОСТ 12026-76 «Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия».

20. ГОСТ 17206-96 «Агар микробиологический. Технические условия».

21. ГОСТ Р 58144-2018 «Вода дистиллированная. Технические условия».

22. ГОСТ 17299-78 «Спирт этиловый технический. Технические условия».

23. ГОСТ 5962-2013 «Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия».

24. ГОСТ 12.1.005-88 «Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны».

25. ГОСТ 12.1.019-2017 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».

26. ГОСТ ISO 17025-2019 «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий».

---