МУК 4.2.2886-11. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Идентификация микроорганизмов и определение чувствительности их к антибиотикам с применением автоматизированной системы для биохимического анализа. Методические указания

№ МУК 4.2.2886-11Действующий акт

(утв. Роспотребнадзором 30.06.2011)

Примечание

Документ введен в действие с 30 июня 2011 года.

Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко

30 июня 2011 года

4.2 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.

БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ИДЕНТИФИКАЦИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ИХ К АНТИБИОТИКАМ С ПРИМЕНЕНИЕМ АВТОМАТИЗИРОВАННОЙ СИСТЕМЫ ДЛЯ БИОХИМИЧЕСКОГО АНАЛИЗА

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.2.2886-11

Дата введения:

с момента утверждения

1. Разработаны ФГУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора; ФГУН ГНЦ ПМБ Роспотребнадзора; ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в г. Москве» при участии ООО «СИ-ЛАБ», Москва.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 № 1).

3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Г.Г. Онищенко 30.06.2011.

4. Введены впервые.

1. Область применения

1.1. Настоящие Методические указания устанавливают методы идентификации патогенных биологических агентов, обнаруженных в продовольственном сырье и пищевых продуктах, парфюмерно-косметической и другой продукции, объектах окружающей среды, клиническом (биологическом) материале, и устанавливают методы определения чувствительности выделенных микроорганизмов к антимикробным препаратам.

1.2. Методические указания предназначены для органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, парфюмерно-косметической и другой продукции, объектов окружающей среды, а также могут быть использованы для проведения производственного контроля другими испытательными лабораториями, аккредитованными в установленном порядке.

2. Нормативные ссылки

1. Федеральный закон «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» от 30 марта 1999 г. № 52-ФЗ.

2. Федеральный закон «О качестве и безопасности пищевых продуктов» от 2 января 2000 г. № 29-ФЗ.

3. Единые санитарно-эпидемиологические и гигиенические требования к товарам, подлежащим санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю), утверждены решением Комиссии таможенного союза от 28 мая 2010 г. № 299.

4. СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I — II групп патогенности (опасности)».

5. СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III — IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».

6. СанПиН 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов» (с изменениями и дополнениями).

7. СанПиН 1.2.681-97 «Производство и контроль парфюмерно-косметической продукции для обеспечения ее безопасности и качества».

8. СанПиН 2.1.3.2630-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность».

9. МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам».

10. ГОСТ Р ИСО 7218-2008 «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям».

11. Инструкция по мерам профилактики распространения инфекционных заболеваний при работе в клинико-диагностических лабораториях лечебных и профилактических учреждений. М., 1991.

3. Общие положения

3.1. Автоматизированная система для биохимического анализа (далее — система) может быть использована при биохимической идентификации видовой принадлежности штаммов микроорганизмов, выделенных из различного материала, в соответствии с действующими методическими документами и определении чувствительности микроорганизмов к противомикробным препаратам. Биохимическая идентификация микроорганизмов с применением системы может осуществляться альтернативно биохимической идентификации, проводимой общепринятыми методами in vitro.

3.2. Работы по идентификации микроорганизмов и определению чувствительности их к противомикробным препаратам с применением системы следует осуществлять в соответствии с требованиями действующих нормативно-методических документов, регламентирующих безопасность работы с патогенными биологическими агентами.

4. Сущность метода

4.1. Идентификация микроорганизмов с применением системы основана на регистрации и анализе результатов изменения биохимических субстратов под действием микроорганизмов (биохимическая идентификация) в сопоставлении с базой данных, включающей информацию о биохимических профилях микроорганизмов.

4.2. Принцип определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам с применением системы основан на определении ингибиции роста микроорганизмов антимикробными препаратами различных концентраций с установлением их минимальных ингибирующих концентраций (МИК) либо на выявлении множественной лекарственной устойчивости микроорганизмов.

4.3. Система позволяет осуществлять идентификацию аэробных и факультативно-анаэробных бактерий различных групп и семейств, дрожжевых, дрожжеподобных и других микроскопических грибов (Прилож. 1).

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам и антимикотическим препаратам осуществляется с применением системы и различных типов планшет (Прилож. 2).

4.4. Система включает фотометр, который позволяет считывать результаты, полученные при проведении идентификации микроорганизмов и определении их чувствительности к антибиотикам на адаптированных к ней тест-планшетах. Результаты обрабатываются и интерпретируются автоматически. Информация о результатах идентификации микроорганизмов (с указанием рода, вида, биотипа, альтернативного близкородственного вида, статистических данных) отражается на экране компьютера в течение нескольких секунд. Возможно сохранение данных на диске и вывод их на печать.

4.5. Наименования микроорганизмов, идентифицируемых системой, приводятся в соответствии с 9-м изданием международного «Определителя бактерий Берджи».

5. Отбор, подготовка проб (культур) и внесение бактериальной суспензии

5.1. При работе с применением системы используются суточные бактериальные культуры, выращенные на питательной среде в соответствии с инструкцией по применению тест-планшетов и стрипов. Если исследуемый материал находился в лиофилизированном состоянии в ампулах, то необходимо восстановить культуру на питательной среде, рекомендуемой в инструкциях по применению тест-планшетов или стрипов, после чего еще раз пересеять культуру на аналогичную питательную среду.

5.2. Для внесения исследуемого материала в тест-планшеты необходимо приготовить бактериальную суспензию определенной мутности (в зависимости от типа теста) по стандартам мутности подобных Mc-Farland или ФГБУ «НЦЭСМП» или с аналогичными характеристиками.

5.3. Внесение бактериальной суспензии в лунки планшета осуществляется 8-канальным дозатором с помощью стерильных наконечников объемом 1200 мкл.

5.4. Все работы, в т.ч. пересевы, приготовление бактериальной суспензии и внесение ее в лунки планшета, осуществляют асептично с соблюдением требований биологической безопасности и техники лабораторных работ.

6. Аппаратура, материалы и реактивы

Система, подобная МикроТакс, SY-LAB Gerate, GmbH (или Система с аналогичными характеристиками), включающая:

ридер МТ-1 — 8-канальный фотометр для считывания планшет со встроенным шейкером и жидкокристаллическим дисплеем; спектральный диапазон: 400 — 750 нм, 7 фильтров — 405, 414, 450, 492, 540, 620 и 690 нм; способ измерения: монохроматический, бихроматический, мультихроматический, точность 2% или 0,007 А, диапазон измерений 0 — 3,5 ед. оптической плотности;
инкубатор МТ-5 (внутренняя камера которого выполнена из нержавеющей стали) с жидкокристаллическим дисплеем. Диапазон температур: от 20 до 70 °С. Отклонение от температуры при 37 °С: +/- 0,5 °С, время нагрева до 37 °С — 37 мин., время охлаждения с 37 до 30 °С — 79 мин.;
автоматическая 8-канальная электронная пипетка с зарядным устройством;
управляющий блок на базе персонального компьютера с программным обеспечением и принтером.

Тест-планшеты, подобные МикроТакс, или с аналогичными характеристиками — стандартные, 96-луночные, с внесенными компонентами:
МикроТакс-IDS (4 теста/планшет) — для быстрой (экспресс) в течение 5 — 6 ч идентификации 113 наиболее клинически значимых штаммов энтеробактерий, стафилококков, стрептококков, энтерококков;
МикроТакс-E (4 теста/планшет) — для идентификации 79 видов энтеробактерий за 18 — 24 ч;
МикроТакс-NF (3 теста/планшет) — для идентификации 72 видов неферментирующих бактерий за 18 — 24 ч;
МикроТакс-RPO (2 теста/планшет) — для идентификации 167 видов бактерий родов: стафилококки, стрептококки, энтерококки, коринебактерии, листерии;
МикроТакс-Candida (4 теста/планшет) — для идентификации 32 видов клинически значимых грибов/дрожжей за 24 ч;
МикроТакс-STAPH (4 теста/планшет) — для идентификации клинически значимых стафилококков за 6 и 18 — 24 ч;
МикроТакс-STREP 2 (4 теста/планшет) — для идентификации клинически значимых стрептококков и энтерококков за 20 — 24 ч;
МикроТакс-S бета-Lactamase detection (1 тест/планшет) — подтверждающий тест для фенотипической детекции ESBL (расширенного спектра бета-лактамазы) у грамотрицательных бактерий за 18 — 24 ч;
МикроТакс-S MRSA & VRE (1 тест/планшет) — для детекции множественной устойчивости стафилококков (MRSA), энтерококков (VRE) и пневмококков за 18 — 24 ч;
МикроТакс-S Anaerobs MIC (1 тест/планшет) — для определения минимальной подавляющей концентрации (МПК) антимикробных агентов с высокой активностью в отношении анаэробов за 18 — 24 ч;
МикроТакс-S Pneumococcus & Haemophilus (1 тест/планшет) — для определения минимальной подавляющей концентрации (МПК) антимикробных агентов в отношении пневмококков и гемофильных бактерий за 18 — 24 ч;
МикроТакс-S Campylobacter (1 тест/планшет) — для определения минимальной подавляющей концентрации (МПК) антимикробных агентов в отношении кампилобактерий за 18 — 24 ч;
МикроТакс-S Cystic Fibrosis (1 тест/планшет) — для исследования множественной лекарственной устойчивости неферментирующих бактерий, вызывающих развитие цистита, за 18 — 24 ч;
МикроТакс-AM KH2 (1, 2 или 4 теста/планшет) — для определения чувствительности дрожжей и криптококков к антимикотическим агентам (6 антимикотических агентов в различных концентрациях) за 22 — 24 ч;
МикроТакс-AM MIC (1, 2 или 4 теста/планшет) — для определения чувствительности дрожжей и криптококков к антимикотическим агентам (9 антимикотических агентов в различных концентрациях) за 22 — 24 ч;
МикроТакс-SB/быстрый тест (1, 2 или 4 теста/планшет) — для определения бактериальной чувствительности к антибиотикам за 6 ч;
МикроТакс-SB/ночная инкубация (1, 2 или 4 теста/планшет) — для определения бактериальной чувствительности к антибиотикам за 18 — 24 ч;
МикроТакс-UR (2 теста/планшет) — для идентификации и определения чувствительности быстрорастущих аэробных бактерий к антибиотикам за 18 — 24 ч.
Стрипы, подобные перечисленным, или с аналогичными характеристиками:
MIC-стрип ESBL II (1 контроль) — фенотипический подтверждающий тест для детекции ESBL (бета-лактамазы), которая продуцируется энтеробактериями;
MIC-стрип MRSA (1 контроль) — фенотипический подтверждающий тест для детекции метициллин-резистентных стафилококков;
MIC-стрип PEN (1 контроль) — фенотипический подтверждающий тест для детекции резистентности к пенициллину у пенициллиноустойчивых изолятов стрептококков и пневмококков;
MIC-стрип VAN (1 контроль) — фенотипический подтверждающий тест для детекции ванкомицин-резистентных грамположительных бактерий.
Реактивы и питательные среды:
типа NF-Susmed, реактив для МикроТакс-NF или с аналогичными характеристиками;
типа Candida-Susmed, реактив для МикроТакс-RC или с аналогичными характеристиками;
изосенситест, реактив для МикроТакс-S;
H-бульон, реактив для МикроТакс-S;
среда МикроТакс-SB;
индольный реагент;
TDA-реагент;
нитрат реагент A;
нитрат реагент B;
парафиновое масло;
пептидазный реагент.
Стандарты мутности, подобные McFarland или ФГБУ «НЦЭСМП», или с аналогичными характеристиками.
Пластиковые расходные материалы (наконечники для пипетки, контейнер для стерилизации и хранения наконечников, 2- и 4-камерные кюветы).

Допускается применение других материалов, реактивов, питательных сред с аналогичными по назначению и свойствам характеристиками, адаптированных к системе и разрешенных к применению в установленном порядке.

7. Проведение испытаний

7.1. Идентификация микроорганизмов с применением планшетов

7.1.1. Экспресс-идентификация микроорганизмов

Для экспресс-идентификации в течение 5 — 6 ч 113 наиболее клинически значимых аэробных грамотрицательных оксидазоотрицательных бактерий и грампозитивных бактерий применяют планшеты соответствующего назначения (4 теста/планшет; 23 биохимические реакции; 1 контроль).

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке «Работа с данными» перейдите в раздел «Ввод и правка образцов», в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста «I» и введите код таксона.

Приготовьте бактериальную суспензию из 24-часовой культуры микроорганизмов, выращенной строго на кровяном агаре без добавок. Если проводить культивирование на иной среде, то это приведет к изменению биохимических характеристик исследуемых микроорганизмов и, как следствие, к ложным результатам. Суспензию со значением мутности 2,0 по МакФарланду необходимо приготовить в 5 мл физиологического раствора. Перенесите полученную суспензию в 4-камерную кювету.

Внесите по 100 мкл бактериальной суспензии в следующие лунки планшета:

A1:B12 определение 1

C1:D12 определение 2

E1:F12 определение 3

G1:H12 определение 4.

Добавьте по 2 капли парафинового масла в следующие лунки (здесь и далее порядок расположения лунок указан согласно приведенной ниже схеме планшета):

A 4 + 5 + 6, B 4 + 5, C 4 + 5 + 6, D 4 + 5, E 4 + 5 + 6, F 4 + 5, G 4 + 5 + 6, H 4 + 5.

Схема планшета

«+» — парафиновое масло

Накройте планшет специальной перфорированной пленкой, которая прилагается к набору. Использование перфорированной пленки гарантирует проникновение кислорода, необходимого для реакций. В то же время газовый обмен между ячейками планшета, нарушающий протекание реакций, становится невозможным.

Инкубируйте 5 — 6 ч при 37 °С.

По окончании инкубации снимите покрывающую планшет пленку и добавьте по 2 капли реактивов в следующие лунки:

пептидазный реагент — в лунки A 1 + 2 + 3, B 2, C 1 + 2 + 3, D 2, E 1 + 2 + 3, F 2, G 1 + 2 + 3, H 2;
индольный реагент — в лунки B 1, D 1, F 1, H 1.

Подождите не менее 5 мин. (но не более 30 мин.) для развития окраски, после чего тщательно протрите дно лунок планшета фильтровальной бумагой и проведите считывание на ридере. Для этого войдите в программу MCN. В колонке «Работа с данными» перейдите в раздел «Считывание». Нажмите «Старт» для начала считывания. Планшеты должны быть считаны в тот же день, на следующий день считывание невозможно.

После считывания проведите вычисление результатов. Для этого в программе MCN в колонке «Работа с данными» перейдите в раздел «Вычисление». Нажмите «Старт» для начала вычисления. Система выдаст полученные в ходе исследования результаты.

7.1.2. Идентификации энтеробактерий и других грамотрицательных оксидазоотрицательных бактерий

Для идентификации энтеробактерий и других грамотрицательных оксидазоотрицательных бактерий за 18 — 24 ч применяют планшеты соответствующего назначения (4 теста/планшет; 21 биохимическая реакция; 4 контроля).

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке «Работа с данными» перейдите в раздел «Ввод и правка образцов», в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста «Е» и введите код таксона.

Приготовьте бактериальную суспензию из 24-часовой культуры микроорганизмов, выращенной на кровяном агаре (с эритроцитами барана) или на простом питательном агаре. Если проводить культивирование на иной среде, то это приведет к изменению биохимических характеристик исследуемых микроорганизмов и, как следствие, к ложным результатам. Суспензию со значением мутности 0,5 (строго не более!) по МакФарланду необходимо приготовить в 5 мл физраствора. Перенесите полученную суспензию в 4-камерную кювету.

Внесите по 100 мкл бактериальной суспензии в следующие лунки планшета:

A1:B12 определение 1

C1:D12 определение 2

E1:F12 определение 3

G1:H12 определение 4.

Добавьте по 2 капли парафинового масла в следующие лунки:

B 1 + 2 определение 1

D 1 + 2 определение 2

F 1 + 2 определение 3

H 1 + 2 определение 4.

Накройте планшет E специальной перфорированной пленкой, которая прилагается к набору. Использование перфорированной пленки гарантирует проникновение кислорода, необходимого для реакций. В то же время газовый обмен между ячейками планшета, нарушающий протекание реакций, становится невозможным.

Инкубируйте 18 — 24 ч при 37 °С.

По окончании инкубации снимите покрывающую планшет пленку и добавьте по 2 капли реактивов в следующие лунки:

	ТДА-реагент	Индольный реагент
Определение 1	A1	A3
Определение 2	C1	C3
Определение 3	E1	E3
Определение 4	G1	G3

Подождите 3 — 30 мин. (не более!) для развития окраски, после чего тщательно протрите дно лунок планшета фильтровальной бумагой и проведите считывание на ридере. Для этого войдите в программу MCN. В колонке «Работа с данными» перейдите в раздел «Считывание». Нажмите «Старт» для начала считывания. Планшеты должны быть считаны в тот же день, на следующий день считывание невозможно.

7.1.3. Идентификация неферментирующих грамотрицательных оксидазоположительных бактерий

Для идентификации неферментирующих грамотрицательных оксидазоположительных бактерий за 18 — 24 ч применяют планшеты соответствующего назначения (3 теста/планшет; 27 биохимических реакций; 5 контролей).

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке «Работа с данными» перейдите в раздел «Ввод и правка образцов», в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста «N» и введите код таксона.

Приготовьте бактериальную суспензию из 24-часовой культуры микроорганизмов, выращенной строго на кровяном агаре (с эритроцитами барана) без добавок. Если проводить культивирование на иной среде, то это приведет к изменению биохимических характеристик исследуемых микроорганизмов и, как следствие, к ложным результатам.

Суспензию со значением мутности 0,5 по МакФарланду необходимо приготовить в 5 мл физраствора. Перенесите 1,0 мл приготовленной суспензии в 6 мл предварительно приготовленной среды NF-Susmed и перемешайте. Перенесите полученную суспензию в стерильную (стерилизация паром под давлением при 121 °С) 2-камерную кювету.

Внесите по 100 мкл бактериальной суспензии в следующие лунки планшета:

A1:H4 определение 1

A5:H8 определение 2

A9:H12 определение 3.

Добавьте по 2 капли парафинового масла в следующие лунки:

B1-H1; A2, B2 определение 1

B5-H5; A6, B6 определение 2

B9-H9; A10, B10 определение 3.

Инкубируйте 18 — 24 ч строго при 28 — 30 °С. Если бактериальный рост недостаточен, то инкубируйте еще 24 ч.

По окончании инкубации снимите покрывающую планшет пленку и добавьте по 2 капли индола в следующие лунки:

	Индольный реагент
Определение 1	A1
Определение 2	A5
Определение 3	A9

Подождите не менее 3 мин. для развития окраски (но не более 20 мин. перед считыванием), после чего тщательно протрите дно лунок планшета фильтровальной бумагой и проведите считывание на ридере. Для этого войдите в программу MCN. В колонке «Работа с данными» перейдите в раздел «Считывание». Нажмите «Старт» для начала считывания. Планшеты должны быть считаны в тот же день, на следующий день считывание невозможно.

7.1.4. Идентификация грамположительных кокков и палочек

Для идентификации грамположительных кокков и палочек (бактерии родов Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, Corynebacteria, Listeria и др.) за 18 — 24 ч применяют планшеты соответствующего назначения (2 теста/планшет; 44 биохимических реакции; 4 контроля).

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке «Работа с данными» перейдите в раздел «Ввод и правка образцов», в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста «Р»и введите код таксона (STA, STR, COR или BAC).

    Приготовьте    бактериальную    суспензию    из   24-часовой   культуры
микроорганизмов,  выращенной  строго  на  кровяном  агаре  (с  эритроцитами
барана)  без  добавок. Если проводить культивирование на иной среде, то это
приведет    к    изменению    биохимических    характеристик    исследуемых
микроорганизмов  и,  как  следствие, к ложным результатам. Медленнорастущие
бактерии,  такие  как бактерии родов Streptococcus, Gardnerella и некоторые
виды  рода Corinebacteria, необходимо выращивать в течение 48 ч в атмосфере

5% CO . 2

Суспензию со значением мутности 2,0 по МакФарланду необходимо приготовить в 6 мл физраствора.

Внесите по 100 мкл бактериальной суспензии в следующие лунки планшета:

A1:D12 определение 1

E1:H12 определение 2.

Добавьте по 2 капли парафинового масла в следующие лунки:

A12-D12 определение 1

E12-H12 определение 2.

Инкубируйте 18 — 24 ч при 37 °С. Если бактериальный рост недостаточен, то инкубируйте еще 24 ч.

По окончании инкубации снимите покрывающую планшет пленку и добавьте по 2 капли пептидазного реагента в следующие лунки:

	Пептидазный реагент
Определение 1	A1 — D4
Определение 2	E1 — H4

7.1.5. Идентификация грибов и дрожжей

Для идентификации клинически значимых грибов/дрожжей за 24 ч применяют планшеты соответствующего назначения (4 теста/планшет; 21 биохимическая реакция; 3 контроля).

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке «Работа с данными» перейдите в раздел «Ввод и правка образцов», в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста «Y» и введите код таксона.

Приготовьте суспензию из 24 — 48-часовой культуры микроорганизмов, выращенной строго на агаре Сабуро с 2%-й глюкозой. Если проводить культивирование на иной среде, то это приведет к изменению биохимических характеристик исследуемых микроорганизмов и, как следствие, к ложным результатам. Суспензию со значением мутности 0,5 по МакФарланду необходимо приготовить в 6 мл реактива Candida-Susmed. Перенесите полученную суспензию в 4-камерную кювету.

Внесите по 100 мкл суспензии в следующие лунки планшета:

A1:B12 определение 1

C1:D12 определение 2

E1:F12 определение 3

G1:H12 определение 4.

Инкубируйте 24 ч при 25 — 30 °С.

По окончании инкубирования снимите с планшета покровную пленку, тщательно протрите дно лунок планшета фильтровальной бумагой и проведите считывание на ридере. Для этого войдите в программу MCN. В колонке «Работа с данными» перейдите в раздел «Считывание». Нажмите «Старт» для начала считывания. Планшеты должны быть считаны в тот же день, на следующий день считывание невозможно.

7.1.6. Идентификация стафилококков

Для идентификации клинически значимых стафилококков за 6 и 18 — 24 ч применяют планшеты соответствующего назначения (4 теста/планшет; 21 биохимическая реакция; 2 контроля).

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке «Работа с данными» перейдите в раздел «Ввод и правка образцов», в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста («C3» — для 6-часовой инкубации и «D1» — для 18 — 24-часовой инкубации). В поле «Код таксона» укажите бета-гемолиз +/-.

Для 6-часовой инкубации необходимо приготовить суспензию со значением мутности 2,0 по МакФарланду в 5 мл физраствора. Для 18 — 24-часовой инкубации необходимо приготовить суспензию со значением мутности 0,5 по МакФарланду в 5 мл физраствора.

Полученную суспензию перенесите в 4-камерную кювету.

Внесите по 100 мкл суспензии в следующие лунки планшета:

A1:B12 определение 1

C1:D12 определение 2

E1:F12 определение 3

G1:H12 определение 4.

Добавьте по 2 капли парафинового масла в следующие лунки:

A — H12.

В зависимости от выбранного метода инкубируйте 6 или 18 — 24 ч при 37 °С.

7.1.7. Идентификация стрептококков

Для идентификации клинически значимых стрептококков и энтерококков за 20 — 24 ч применяют планшеты соответствующего назначения (4 теста/планшет; 24 биохимические реакции).

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке «Работа с данными» перейдите в раздел «Ввод и правка образцов», в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста «К». В поле «Код таксона» укажите бета-гемолиз +/- и пигментацию +/-.

Бактериальную суспензию со значением мутности 1,0 по МакФарланду необходимо приготовить в 5 мл физраствора. Полученную суспензию перенесите в 4-камерную кювету.

Внесите по 100 мкл суспензии в следующие лунки планшета:

A1:B12 определение 1

C1:D12 определение 2

E1:F12 определение 3

G1:H12 определение 4.

Добавьте по 2 капли парафинового масла в следующие лунки:

A — H12.

Инкубируйте 20 — 24 ч при 37 °С.

7.2. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам на планшетах

7.2.1. Определение минимальных подавляющих концентраций антимикробных препаратов (МПК) и детекция множественной устойчивости микроорганизмов к антибиотикам

Перечень антимикробных препаратов, чувствительность к которым можно определять с помощью планшетов, указан в инструкциях по применению соответствующих типов планшетов и включает в себя следующие антибиотики: азитромицин, амоксициллин/клавулановая кислота, ампициллин, пенициллин, бацитрацин, цефтриаксон, цефуроксим, ципрофлоксацин, кларитромицин, клиндамицин, колистин, доксициклин, эритромицин, имипинем, меропенем, моксифлоксацин, метронидазол, абактам, ванкомицин, пиперациллин, хлорамфеникол, гентамицин, стрептомицин, тетрациклин, триметоприм, налидиксовая кислота.

Для определения минимальных подавляющих концентраций (МПК) антимикробных препаратов и детекции множественной устойчивости микроорганизмов к антибиотикам за 18 — 24 ч применяют планшеты соответствующего назначения:

подтверждающий тест (1 тест/планшет, 2 контроля) для фенотипической детекции ESBL (бета-лактамазы) у соответствующих грамотрицательных бактерий за 18 — 24 ч;
для детекции множественной устойчивости (1 тест/планшет, 1 контроль) стафилококков (MRSA), энтерококков (VRE) и пневмококков за 18 — 24 ч;
для определения минимальной подавляющей концентрации (1 тест/планшет, 1 контроль) антимикробных агентов с высокой активностью в отношении анаэробов за 18 — 24 ч;
для определения минимальной подавляющей концентрации (1 тест/планшет, 1 контроль) антимикробных агентов в отношении пневмококков и гемофильных бактерий за 18 — 24 ч;
для определения минимальной подавляющей концентрации (1 тест/планшет, 1 контроль) антимикробных агентов в отношении кампилобактерий за 18 — 24 ч;
для исследования множественной лекарственной устойчивости (1 тест/планшет, 1 контроль) неферментирующих бактерий, вызывающих развитие цистита за 18 — 24 ч.

Для всех типов указанных выше планшетов применяется одна схема работы.

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке «Работа с данными» перейдите в раздел «Ввод и правка образцов», в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста «Rx» («Hx» — для медленнорастущих бактерий).

Необходимо приготовить суспензию со значением мутности 0,5 по МакФарланду в 5 мл физраствора.

Для определения грамотрицательных бактерий необходимо перемешать 50 мкл приготовленной суспензии в 11 мл бульона Мюллера — Хинтона II.

Для определения грамположительных бактерий необходимо перемешать 100 мкл приготовленной суспензии в 11 мл бульона Мюллера — Хинтона II.

Для определения медленнорастущих бактерий (стрептококков, коринебактерий, гемофильной палочки, нейссерий) необходимо перемешать 200 мкл приготовленной суспензии в 11 мл H-бульона (H-broth).

Для определения медленнорастущих неферментирующих бактерий необходимо перемешать 50 мкл приготовленной суспензии в 11 мл H-бульона (H-broth).

Перенесите полученную суспензию в 1-, 2- или 4-камерную кювету.

Внесите по 100 мкл суспензии в следующие лунки планшета:

A1:B12 определение 1

C1:D12 определение 2

E1:F12 определение 3

G1:H12 определение 4.

Накройте планшет неперфорированной пленкой, которая прилагается к набору.

    Инкубируйте  18  -  24  ч  при  37  °С.  Медленнорастущие бактерии (при
необходимости) инкубируются в обогащенной CO  атмосфере 22 - 24 ч.

Примечание: Контрольная лунка должна быть мутной (т.е. должен быть бактериальный рост). В противном случае тест должен быть повторен.

Интерпретация полученных результатов осуществляется на основании сопоставления величины МПК антимикробного препарата с пограничными значениями этих параметров, отделяющих чувствительные штаммы от промежуточных и промежуточные от устойчивых. Оценка МПК должна осуществляться в соответствии с критериями чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам и уровнями МПК, установленными в действующих нормативно-методических документах.

7.2.2. Определение чувствительности грибов и дрожжей к антимикотикам

Для определения антимикотической чувствительности дрожжей и криптококков к противомикотическим препаратам, в т.ч. амфотерицину, флюконазолу, 5-флюороцитозину, итраконазолу, кетоконазолу, вориконазолу, за 24 — 48 ч применяют планшеты соответствующего назначения (1, 2 или 4 теста/планшет, 2 контроля):

для определения чувствительности дрожжей и криптококков к антимикотическим агентам (6 антимикотических агентов в различных концентрациях) за 22 — 24 ч;
для определения чувствительности дрожжей и криптококков к антимикотическим агентам (9 антимикотических агентов в различных концентрациях) за 22 — 24 ч.

Для всех типов указанных выше планшетов применяется одна схема работы.

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке «Работа с данными» перейдите в раздел «Ввод и правка образцов», в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста «R6».

Приготовьте суспензию из 24-часовой культуры микроорганизмов, выращенной строго на агаре Сабуро с 2%-ной глюкозой. Если проводить культивирование на иной среде, то это приведет к изменению биохимических характеристик исследуемых микроорганизмов и, как следствие, к ложным результатам.

Суспензию со значением мутности 0,5 по МакФарланду необходимо приготовить в 4 мл физраствора. Перемешать 200 мкл полученной суспензии с 4 мл физраствора.

Приготовление суспензии для засева:

суспензия дрожжей: перемешать 200 мкл полученной предварительно суспензии с 11 мл среды RPMI (с добавлением 50 мкл индикатора AST и 50 мкл метиленового синего);
суспензия криптококков: перемешать 2000 мкл полученной предварительно суспензии с 11 мл среды RPMI (с добавлением 50 мкл индикатора AST и 50 мкл метиленового синего).

Полученную суспензию перенесите в 1-, 2- или 4-камерную кювету.

Внесите по 100 мкл суспензии в следующие лунки планшета:

A1:B12 определение 1

C1:D12 определение 2

E1:F12 определение 3

G1:H12 определение 4.

Накройте планшет специальной неперфорированной пленкой, которая прилагается к набору (не ставьте покрытые пленкой планшеты друг на друга).

Инкубируйте 24 — 48 ч при 37 °С.

Интерпретация полученных результатов осуществляется на основании сопоставления величины МПК препарата с пограничными значениями этих параметров, отделяющих чувствительные штаммы от промежуточных и промежуточные от устойчивых. Оценка МПК должна осуществляться в соответствии с критериями чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам и уровнями МПК, установленными в действующих нормативно-методических документах.

7.2.3. Экспресс-определение чувствительности бактерий к антибиотикам

Для определения чувствительности бактерий к антибиотикам за 6 ч (определение МПК) применяют планшеты соответствующего назначения (1, 2 или 4 теста/планшет). В зависимости от разновидности планшетов спектр антибиотиков на планшете может включать: амикацин, ампициллин, цефалоспорины, хлорамфеникол, доксициклин, эритромицин, ципрофлоксацин, левофлоксацин, моксифлоксацин, оксациллин, пенициллин, пиперациллин, пиперациллин/сульбактам, имипенем, меропенем, клиндамицин, котримаксазол, гентамицин, тобрамицин, ванкомицин.

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке «Работа с данными» перейдите в раздел «Ввод и правка образцов», в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста «Sx».

Необходимо приготовить суспензию со значением мутности 0,5 по МакФарланду в 5 мл физраствора.

Для определения грамотрицательных бактерий необходимо перемешать 200 мкл приготовленной суспензии в 11 мл среды МикроТакс-SB.

Для определения грамположительных и неферментирующих бактерий необходимо перемешать 400 мкл приготовленной суспензии в 11 мл среды МикроТакс-SB.

Перенесите полученную суспензию в 1-, 2- или 4-камерную кювету.

Внесите по 100 мкл суспензии в следующие лунки планшета:

A1:B12 определение 1

C1:D12 определение 2

E1:F12 определение 3

G1:H12 определение 4.

Накройте планшет-тест специальной неперфорированной пленкой, которая прилагается к набору.

Инкубируйте 6 ч при 37 °С.

Примечание. Контрольная лунка должна быть мутной (т.е. должен быть бактериальный рост). В противном случае тест должен быть повторен.

7.2.4. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам

Для определения чувствительности бактерий к антибиотикам за 18 — 24 ч (определение МПК) применяют планшеты соответствующего назначения (1, 2 или 4 теста/планшет). В зависимости от разновидности планшетов спектр антибиотиков на планшете может включать: амикацин, ампициллин, цефалоспорины, хлорамфеникол, доксициклин, эритромицин, ципрофлоксацин, левофлоксацин, моксифлоксацин, оксациллин, пенициллин, пиперациллин, пиперациллин/сульбактам, имипенем, меропенем, клиндамицин, котримаксазол, гентамицин, тобрамицин, ванкомицин.

Необходимо приготовить суспензию со значением мутности 0,5 по МакФарланду в 5 мл физраствора.

Для определения грамотрицательных бактерий необходимо перемешать 50 мкл приготовленной суспензии в 11 мл среды МикроТакс-SB.

Для определения грамположительных бактерий необходимо перемешать 100 мкл приготовленной суспензии в 11 мл среды МикроТакс-SB.

Для определения медленнорастущих бактерий (стрептококки, коринебактерии, гемофильная палочка, нейссерии) необходимо перемешать 200 мкл приготовленной суспензии в 11 мл H-бульона.

Перенесите полученную суспензию в 1-, 2- или 4-камерную кювету.

Внесите по 100 мкл суспензии в следующие лунки планшета:

A1:B12 определение 1

C1:D12 определение 2

E1:F12 определение 3

G1:H12 определение 4.

Накройте планшет специальной неперфорированной пленкой, которая прилагается к набору.

    Инкубируйте   18 - 24  ч  при  37  °С.  Медленнорастущие  бактерии (при
необходимости) инкубируются в обогащенной CO  атмосфере 22 - 24 ч.

7.2.5. Определение чувствительности аэробных бактерий к антибиотикам

Для идентификации и определения чувствительности аэробных бактерий к антибиотикам за 18 — 24 ч применяют планшеты соответствующего назначения (2 теста/планшет, 23 биохимические реакции, 2 контроля). Перечень антибиотиков, чувствительность к которым можно определять на планшетах, включает: амоксициллин, амоксициллин/клавулановая кислота, цефахлор, цефотаксим, цефродоксим, цефтазидим, цефуроксим, ципрофлоксацин, котримаксазол, доксициклин, фосфомицин, гентамицин, левофлоксацин, нитрофурантоин, нитроксолин, норфлоксацин, оксациллин, пенициллин, пиперациллин, пиперациллин/тазобактам, триметоприм.

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке «Работа с данными» перейдите в раздел «Ввод и правка образцов», в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста «UR1».

Приготовьте 5 мл бактериальной суспензии в физрастворе со значением мутности 0,5 по МакФарланду из 24-часовой культуры микроорганизмов, выращенной на:

для грамотрицательных бактерий — агаре МакКонки;
для грамположительных и неферментирующих бактерий — кровяном агаре (с эритроцитами барана) без добавок.

Если проводить культивирование на иной среде, то это приведет к изменению биохимических характеристик исследуемых микроорганизмов и, как следствие, к ложным результатам.

Ряды лунок A — B и E — F предназначены для идентификации, а ряды C — D и G — H - для определения бактериальной чувствительности к антибиотикам. Таким образом, на одном планшете Микро-Такс-UR можно проводить одновременно идентификацию и определение бактериальной чувствительности к антибиотикам у двух проб бактериальной суспензии.

Для идентификации перенесите полученную суспензию в резервуары 1 и 3 (4-камерной кюветы). Внесите по 100 мкл суспензии в следующие лунки планшета:

A1:B12 идентификация 1

E1:F12 идентификация 2.

Для определения чувствительности бактерий к антибиотикам:

для определения грамотрицательных бактерий необходимо перемешать 25 мкл приготовленной суспензии в 5 мл среды МикроТакс-SB;
для определения грамположительных бактерий необходимо перемешать 50 мкл приготовленной суспензии в 5 мл среды МикроТакс-SB;
для определения медленнорастущих бактерий (streptococci) необходимо перемешать 100 мкл приготовленной суспензии в 5 мл среды МикроТакс-SB.

Перенесите полученную суспензию в резервуары 2 и 4 (4-камерной кюветы). Внесите по 100 мкл суспензии в следующие лунки планшета:

C1:D12 определение бактериальной чувствительности к антибиотикам 1

G1:H12 определение бактериальной чувствительности к антибиотикам 2.

Добавьте по 2 капли парафинового масла в следующие лунки:

A 10 + 11 + 12, B 10 + 11, E 10 + 11 + 12, F 10 + 11.

Инкубируйте 18 — 24 ч при 37 °С.

По окончании инкубации снимите покрывающую планшет пленку и добавьте по 2 капли реактивов в следующие лунки:

пептидазный реагент — в лунки A 1 + 2, B 1 + 2, E 1 + 2, F 1 + 2;
индольный реагент — в лунки A 3, E 3.

Подождите 5 — 30 мин. (не более!) для развития окраски, после чего тщательно протрите дно лунок планшета фильтровальной бумагой и проведите считывание на ридере. Для этого войдите в программу MCN. В колонке «Работа с данными» перейдите в раздел «Считывание». Нажмите «Старт» для начала считывания. Планшеты должны быть считаны в тот же день, на следующий день считывание невозможно.

7.3. Методики исследований с применением различных типов стрипов

Для исследований могут быть применимы типы стрипов соответствующего назначения:

фенотипический подтверждающий тест для детекции ESBL (бета-лактамазы), которая продуцируется энтеробактериями;
фенотипический подтверждающий тест для детекции метициллин-резистентных стафилококков;
фенотипический подтверждающий тест для детекции резистентности к пенициллину у пенициллиноустойчивых изолятов стрептококков и пневмококков;
фенотипический подтверждающий тест для детекции ванкомицин-резистентных грамположительных бактерий.

Для всех типов MIC-стрипов применяется одна схема работы.

Достаньте MIC-стрип из упаковки и поместите его в специальную рамку.

Необходимо приготовить суспензию со значением мутности 0,5 по МакФарланду в 5 мл физраствора.

Для определения анаэробных бактерий необходимо перемешать 200 мкл приготовленной суспензии в 11 мл реактива Wilkins-Chalgren (с добавкой НАД).

Для определения медленнорастущих бактерий (стрептококки, коринебактерии, гемофильные палочки, нейссерии) необходимо перемешать 200 мкл приготовленной суспензии в 11 мл H-бульона (H-broth).

Внесите по 100 мкл суспензии во все лунки стрипа.

Накройте MIC-стрип крышкой, которая прилагается к набору.

Инкубируйте при 37 °С в соответствии с инструкцией производителя.

По окончании инкубирования снимите с планшета покровную пленку, тщательно протрите дно лунок стрипа фильтровальной бумагой и проведите визуальную оценку опыта.

Мутность в лунке свидетельствует о наличии бактериального роста и, следовательно, о положительном результате.

Отсутствие мутности в лунке свидетельствует об отсутствии бактериального роста и, следовательно, об отрицательном результате.

Контрольная лунка должна изменить цвет с синего на розовый (т.е. должен быть бактериальный рост). В противном случае тест необходимо повторить.

Задокументируйте результаты теста.

Приложение 1

(справочное)

ПЕРЕЧЕНЬ

МИКРООРГАНИЗМОВ, ИДЕНТИФИЦИРУЕМЫХ НА ПЛАНШЕТАХ

1. МикроТакс-IDS

1. Acinetobacter lwoffii	58. Ochrobactrum anthropi
2. Acinetobacter species I	59. Pantoea agglomerans
3. Acinetobacter species II	60. Plesiomonas shigelloides
4. Acinetobacter species III	61. Proteus mirabilis
5. Acinetobacter species V	62. Proteus vulgaris
6. Aeromonas caviae	63. Providencia alcalifaciens
7. Aeromonas hydrophila	64. Providencia rettgeri
8. Aeromonas sobria	65. Providencia stuartii
9. Aeromonas veronii	66. Pseudomonas aeruginosa
10. Achromobacter denitrificans	67. Pseudomonas alcaligenes
11. Alcaligenes faecalis sub. faecalis	68. Pseudomonas fluorescens
12. Bordetella bronchiseptica	69. Pseudomonas luteola
13. Brevundimonas diminuta	70. Pseudomonas mendocina
14. Brevundimonas vesicularis	71. Pseudomonas putida
15. Burkholderia cepacia	72. Pseudomonas stutzeri
16. Cedecea davisae	73. Pseudomonas oryzihabitans
17. Cedecea lapagei	74. Rahnella aquaticus
18. Chryseobacterium indologenes	75. Ralstonia pickettii
19. Chryseobacterium	76. Rhizobium radiobacter
meningosepticum	77. Salmonella choleraesuis
20. Citrobacter amalonaticus	sub. arizonae
21. Citrobacter freundii	78. Salmonella paratyphi A
22. Citrobacter koseri	79. Salmonella species
23. Citrobacter species 1	80. Salmonella typhi
24. Citrobacter species 2	81. Serratia liquefaciens
25. Comamonas testosteroni	82. Serratia marcenses
26. Delftia acidovorans	83. Serratia rubidaea
27. Edwardsiella tarda	84. Shewanella putrefaciens
28. Empedobacter brevis	85. Shigella sonnei
29. Enterobacter aerogenes	86. Shigella species
30. Enterobacter cloacae	87. Sphingobacterium multivorum
31. Enterobacter gergoviae	88. Sphingobacterium spiritovorum
32. Enterobacter sakazakii	89. Sphingomonas paucimobilis
33. Enterococcus avium	90. Staphylococcus arlettae
34. Enterococcus casseliflavus	91. Staphylococcus aureus
35. Enterococcus durans	92. Staphylococcus cohnii
36. Enterococcus faecalis	93. Staphylococcus epidermidis
37. Enterococcus faecium 1	94. Staphylococcus gallinarum
38. Enterococcus faecium 2	95. Staphylococcus haemoliticus
39. Enterococcus flavescens	96. Staphylococcus intermedius
40. Enterococcus gallinarum	97. Staphylococcus lentus
41. Enterococcus hirae	98. Staphylococcus lugdunensis
42. Enterococcus malodoratus	99. Staphylococcus saprophyticus
43. Enterococcus mundtii	sub. saprophyticus
44. Escherichia coli	100. Staphylococcus schleiferi
45. Escherichia coli LDC-/ODC-	101. Staphylococcus sciuri
46. Escherichia coli PYR+	102. Staphylococcus simulans
47. Escherichia vulneris	103. Staphylococcus xylosus
48. Ewingella americana	104. Stenotrophomonas maltophilia
49. Hafnia alvei	105. Streptococcus agalactiae
50. Klebsiella oxitoca	106. Streptococcus bovis
51. Klebsiella pneumoniae sub.	107. Streptococcus pneumoniae
pneumoniae	108. Streptococcus pyogenes
52. Kluyvera ascorbata	109. Vibrio alginolyticus
53. Kluyvera cryocrescens	110. Vibrio metschnikovii
54. Leclercia adecarboxylata	111. Vibrio parahaemolyticus
55. Moellera wisconsensis	112. Yersinia enterocolitica
56. Morganella morganii	113. Yersinia pseudotuberculosis
57. Myroides odoratus

2. МикроТакс-E

1. Acinetobacter lwoffii	35. Morganella morganii LDC+
2. Acinetobacter species	36. Pantoea agglomerans IND-
3. Aeromonas hydrophila	37. Pantoea agglomerans IND+
4. Cedecea davisae	38. Plesiomonas shigelloides
5. Cedecea lapagei	39. Proteus mirabilis
6. Citrobacter amalonaticus	40. Proteus penneri
7. Citrobacter freundii	41. Proteus vulgaris
8. Citrobacter koseri	42. Providencia alcalifaciens
9. Edwardsiella hoshinae	43. Providencia rettgeri
10. Edwardsiella tarda	44. Providencia rustigianii
11. Enterobacter aerogenes	45. Providencia stuartii
12. Enterobacter cloacae	46. Providencia stuartii URE+
13. Enterobacter gergoviae	47. Rahnella aquaticus
14. Enterobacter sakazakii	48. Salmonella choleraesuis
15. Enterobacter cancerogenus	sub. arizonae
16. Escherichia coli	49. Salmonella choleraesuis sub.
17. Escherichia coli H S+	choleraesuis
2	50. Salmonella paratyphi A
18. Escherichia coli LDC-/ODC-	51. Salmonella pullorum
19. Escherichia coli ONPG-	52. Salmonella species
20. Escherichia fergusonii	53. Salmonella typhi
21. Escherichia hermannii	54. Serratia ficaria
22. Escherichia vulneris	55. Serratia liquefaciens
23. Ewingella americana	56. Serratia marcenses
24. Hafnia alvei	57. Serratia odorifera
25. Raoultella ornithinolytica	58. Serratia plymuthica
26. Klebsiella oxitoca	59. Serratia rubidaea
27. Klebsiella pneumoniae sub.	60. Shigella sonnei
ozaenae	61. Shigella sonnei PGUR-
28. Klebsiella pneumoniae sub.	62. Shigella species
pneumoniae	63. Stenotrophomonas maltophilia
29. Klebsiella pneumoniae sub.	64. Yersinia enterocolitica
rhinoscleromatis	65. Yersinia frederiksenii
30. Kluyvera ascorbata	66. Yersinia intermedia
31. Kluyvera cryocrescens	67. Yersinia kristensenii
32. Leclercia adecarboxylata	68. Yersinia pseudotuberculosis
33. Moellera wisconsensis	69. Yersinia ruckeri
34. Morganella morganii

3. МикроТакс-NF

1. Acinetobacter lwoffii	32. Mannheimia haemolytica
2. Acinetobacter species	33. Mannheimia haemolytica T
3. Actinobacillus ureae	34. Pasteurella multocida
4. Achromobacter denitrificans	35. Pasteurella pneumotropica
5. Achromobacter xylosoxidans	36. Plesiomonas shigelloides
6. Aeromonas hydrophila	37. Pseudomonas aeruginosa
7. Alcaligenes faecalis sub. faecalis	38. Pseudomonas alcaligenes
8. Bergeyella zoohelcum	39. Pseudomonas fluorescens
9. Bordetella bronchiseptica	40. Pseudomonas luteola
10. Brevundimonas diminuta	41. Pseudomonas mendocina
11. Brevundimonas vesicularis	42. Pseudomonas oryzihabitans
12. Burkholderia cepacia	43. Pseudomonas pseudoalcaligenes
13. Burkholderia pseudomallei	44. Pseudomonas putida
14. CDC IVc-2	45. Pseudomonas stutzeri
15. CDC IIc	46. Psychrobacter phenylpyruvicus
16. CDC IIf	47. Rhizobium radiobacter
17. Chromobacterium violaceum	48. Ralstonia pickettii
18. Chryseobacterium indologenes	49. Shewanella putrefaciens
19. Chryseobacterium	50. Sphingobacterium multivorum
meningosepticum	51. Sphingobacterium spiritovorum
20. Comamonas testosteroni	52. Sphingobacterium thalpophilum
21. Delftia acidovorans	53. Sphingomonas paucimobilis
22. Empedobacter brevis	54. Stenotrophomonas maltophilia
23. Flavobacterium II-h	55. Vibrio alginolyticus
24. Moraxella atlantae	56. Vibrio cholerae
25. Moraxella nonliquefaciens	57. Vibrio fluvialis
26. Moraxella osloensis	58. Vibrio furnissii
27. Myroides odoratus	59. Vibrio metschnikovii
28. Ochrobactrum anthropi	60. Vibrio mimicus
29. Oligella ureolytica	61. Vibrio parahaemolyticus
30. Oligella urethralis	62. Vibrio vulnificus
31. Pasteureila aerogenes

4. МикроТакс-RPO

1. Actinomyces europaeus	86. Enterococcus hirae
2. Actinomyces neuii	87. Enterococcus malodoratus
3. Actinomyces radingae	88. Enterococcus mundtii
4. Actinomyces turicensis	89. Enterococcus raffinosus
5. Aerococcus viridans	90. Enterococcus saccharolyticus
6. Arcanobacterium bernardiae	91. Eysipelothrix rhusiopathiae
7. Arcanobacterium haemolyticum	92. Exiguobacterium acetylicum
8. Arcanobacterium pyogenes	93. Gardnerella speciec
9. Arthrobacter agilis	94. Kosuria kristinae
10. Arthrobacter cumminsii	95. Kosuria rosea
11. Arthrobacter spezies I	96. Kosuria varians Biotype 1
12. Arthrobacter spezies II	97. Kosuria varians Biotype 2
13. Aureobacterium spezies I	98. Kytococcus sedentarius
14. Aureobacterium spezies II	99. Listeria innocua
15. Bacillus cereus	100. Listeria ivanovii
16. Bacillus circulans I	101. Listeria monocytogenes TAG-
17. Bacillus circulans II	102. Listeria monocytogenes TAG+
18. Bacillus coagulans I	103. Listeria seeligeri
19. Bacillus coagulans II	104. Listeria welshimeri
20. Bacillus coagulans III	105. Microbacterium spezies I
21. Bacillus coagulans IV	106. Microbacterium spezies II
22. Bacillus coagulans V	107. Micrococcus luteus
23. Bacillus firmus I	108. Oerskovia turbata
24. Bacillus firmus II	109. Cellulosimicrobium cellulans
25. Bacillus lentus	110. Paenibacillus alvei
26. Bacillus licheniformis	111. Paenibacillus macerans I
27. Bacillus megaterium	112. Paenibacillus macerans II
28. Virgibacillus pantothenticus	113. Paenibacillus macerans III
29. Bacillus pumilis	114. Paenibacillus polymixa
30. Bacillus sphaericus I	115. Rothia dentocariosa I
31. Bacillus sphaericus II	116. Rothia dentocariosa II
32. Bacillus sphaericus III	117. Staphylococcus arlettae
33. Bacillus subtilis	118. Staphylococcus aureus
34. Paenibacillus thiaminolyticus	119. Staphylococcus auricularis
35. Brevibacillus brevis	120. Staphylococcus capitis sub.
36. Brevibacillus laterosporus	capitis
37. Brevibacillus parabrevis	121. Staphylococcus capitis sub.
38. Brevibacterium casei	ureolyticus
39. Brevibacterium epidermidis	122. Staphylococcus chromogenes
40. Brevibacterium mcbrellneri	123. Staphylococcus cohnii Biotyp 1
41. Brevibacterium otitidis	124. Staphylococcus cohnii Biotyp 2
42. Cellulomonas fimi	125. Staphylococcus epidermidis
43. Cellulomonas spezies I	126. Staphylococcus gallinarum
44. Cellulomonas spezies II	127. Staphylococcus haemolyticus
45. Cellulomonas spezies III	128. Staphylococcus hominis
46. Corynebacterium accolens	129. Staphylococcus huicus
47. Corynebacterium aferment sub.	130. Staphylococcus kloosii
aferm.	131. Staphylococcus lentus
48. Corynebacterium aferment sub.	132. Staphylococcus lugdunensis
lipophil.	133. Staphylococcus saprophyticus
49. Corynebacterium amycolatum	134. Staphylococcus schleiferi
50. Leifsonia aquatica	135. Staphylococcus sciuri
51. Corynebacterium argentoratense	136. Staphylococcus simulans
52. Corynebacterium auris	137. Staphylococcus warneri
53. Corynebacterium CDC group FI	138. Staphylococcus xylosus
54. Corynebacterium CDC group G	139. Stomatococcus spezies
55. Corynebacterium confusum	140. Streptococcus agalactiae
56. Corynebacterium coyleae	141. Streptococcus anginosus
57. Corynebacterium macginleyi	142. Streptococcus bovis Biotyp 1
58. Corynebacterium matruchotii	143. Streptococcus bovis Biotyp 2
59. Corynebacterium minutissimum	144. Streptococcus bovis Biotyp 3
60. Corynebacterium mucifaciens	145. Streptococcus constellatus
61. Corynebacterium propinquum	146. Streptococcus dysgalactiae
62. Corynebacterium	sub. dysgalactiae
pseudodiphthericum	147. Streptococcus dysgalactiae
63. Corynebacterium	sub. equisimilis
pseudotuberculosis	148. Streptococcus equi sub.
64. Corynebacterium renale	zooepidemicus
65. Corynebacterium riegelii	149. Streptococcus equi sub. equi
66. Corynebacterium striatum	150. Streptococcus equinus
67. Corynebacterium ulcerans	151. Streptococcus intermedius
68. Corynebacterium urealyticum	152. Streptococcus mitis/sanguinis
69. Corynebacterium xerosis	Biotyp 1
70. Corynebacterium diphtheriae	153. Streptococcus mitis/sanguinis
71. Corynebacterium durum	Biotyp 2
72. Corynebacterium falsenii	154. Streptococcus mutans
73. Corynebacterium	155. Streptococcus oralis
glucuronolyticum	156. Streptococcus pneumoniae I
74. Corynebacterium glutamicum	157. Streptococcus pneumoniae II
75. Corynebacterium jeikeium	158. Streptococcus pyogenes
76. Corynebacterium kutscheri	159. Streptococcus salivarius
77. Dermabacter hominis	160. Streptococcus sanguinis
78. Dermacoccus nishiomiyaensis	161. Streptococcus suis
79. Enterococcus avium	162. Streptococcus uberis
80. Enterococcus casseliflavus	163. Tsukamurella tyrosinosolvens
81. Enterococcus durans	164. Tsukamurella inchonensis
82. Enterococcus faecalis	165. Tsukamurella paurometabola
83. Enterococcus faecium	166. Tsukamurella pulmonis
84. Enterococcus flavescens	167. Turicella otitidis
85. Enterococcus gallinarum

5. МикроТакс-Candida

1. Candida africana	21. Candida norvegica
2. Candida albicans	22. Candida parapsilosis
3. Candida catenulate	23. Candida pelliculosa
4. Candida dubliniensis	24. Candida rugosa/pararugosa
5. Candida famata I	25. Candida tropicalis
6. Candida famata II	26. Candida utilis
7. Candida famata III	27. Candida valida
8. Candida famata IV	28. Cryptococcus albidus
9. Candida glabrata	29. Cryptococcus humicola
10. Candida guilliermondii	Komplex
11. Candida inconspicua	30. Cryptococcus neoformans
12. Candida intermedia	31. Cryptococcus terreus
13. Candida kefyr	32. Geotrichum capitatum
14. Candida krusei	33. Geotrichum candidum
15. Candida lambica	34. Rhodotorula mucilaginosa
16. Candida lipolytica	35. Rhodotorula glutinis
17. Candida lusitaniae	36. Saccharomyces cerevisae TRE-
18. Candida magnoliae	37. Saccharomyces cerevisae TRE+
19. Candida membranefaciens	38. Trichosporon species
20. Candida norvegensis	39. Trichosporon species RAF-/MEL-

6. МикроТакс-STAPH

1. Micrococcus luteus	11. Staphylococcus hominis
2. Staphylococcus aureus	12. Staphylococcus huicus
3. Staphylococcus capitis sub.	13. Staphylococcus intermedius
capitis	14. Staphylococcus kloosii
4. Staphylococcus sub. ureolyticus	15. Staphylococcus lentus
5. Staphylococcus chromogenes	16. Staphylococcus lugdunensis
6. Staphylococcus cohnii sub. cohnii	17. Staphylococcus saprophyticus sub. saprophyticus
7. Staphylococcus cohnii sub.	18. Staphylococcus schleiferi
urealyticum	19. Staphylococcus sciuri
8. Staphylococcus epidermidis	20. Staphylococcus simulans
9. Staphylococcus gallinarum	21. Staphylococcus warneri
10. Staphylococcus haemolyticus	22. Staphylococcus xylosus

7. МикроТакс-STREP 2

1. Enterococcus avium	17. Streptococcus equi sub.
2. Enterococcus casseliflavus	zooepidemicus
3. Enterococcus durans	18. Streptococcus equinus
4. Enterococcus faecalis	19. Streptococcus gordonii
5. Enterococcus faecium	20. Streptococcus intermedius
6. Enterococcus gallinarum	21. Streptococcus mitis
7. Enterococcus hirae	22. Streptococcus mutans
8. Streptococcus agalactiae	23. Streptococcus mutans PYR+
9. Streptococcus agalactiae PYR+	24. Streptococcus oralis
10. Streptococcus alactolyticus	25. Streptococcus pneumoniae
11. Streptococcus anginosus	26. Streptococcus pyogenes
12. Streptococcus bovis Biotyp 1	27. Streptococcus salivarius
13. Streptococcus bovis Biotyp 2	28. Streptococcus sanguinis
14. Streptococcus constellatus	29. Streptococcus sorbrinus
15. Streptococcus dysgalactiae sub.	30. Streptococcus suis
equisimilis	31. Streptococcus uberis
16. Streptococcus equi sub. equi	32. Streptococcus vestibularis

8. МикроТакс-UR

1. Acinetobacter species	25. Proteus mirabilis
2. Aeromonas species	26. Providencia rettgeri
3. Achromobacter species	27. Providencia alcalifaciens
4. Burkholderia cepacia	28. Providencia stuartii
5. Citrobacter amalonaticus	29. Pseudomonas aeruginosa
6. Citrobacter freundii	30. Pseudomonas putida
7. Citrobacter koseri	31. Pseudomonas species
8. Cronobacter sakazakii	32. Pseudomonas oryzihabitans
9. Enterobacter aerogenes	33. Raoulltella ornithinolytica
10. Enterobacter cloacae	34. Salmonella species
11. Enterobacter gergoviae	35. Serratia liquefaciens
12. Enterococcus durans	36. Serratia marcescens
13. Enterococcus faecalis	37. Serratia rubidaea
14. Enterococcus faecium	38. Staphylococcus aureus
15. Escherichia coli	39. Staphylococcus epidermidis
16. Hafnia alvei	40. Staphylococcus haemolyticus
17. Klebsiella oxytoca	41. Staphylococcus lugdunensis
18. Klebsiella pneumoniae sup. pneumoniae	42. Staphylococcus saprophyticus sub. saprophyticus
19. Kluyvera cryocrescens	43. Stenotrophomonas maltophilia
20. Leclercia adecarboxylata	44. Streptococcus agalactiae
21. Morganella morganii	45. Streptococcus bovis
22. Pantoea agglomerans	46. Streptococcus pneumoniae
23. Plesiomonas shigelloides	47. Streptococcus pyogenes
24. Proteus vulgaris

Приложение 2

(справочное)

ТИПЫ ПЛАНШЕТОВ (СТРИПОВ) И ИХ НАЗНАЧЕНИЕ

№ п/п	Назначение планшетов или стрипов	Сроки исследования (в часах)	Тип планшетов или стрипов
1	2	3	4
1	для экспресс-идентификации 113 наиболее клинически значимых штаммов энтеробактерий, стафилококков, стрептококков, энтерококков	5 — 6	Микро-Такс-IDS
2	для идентификации 79 видов Enterobacteriaceae и др. грамотрицательных оксидазоотрицательных бактерий	18 — 24	Микро-Такс-E
3	для идентификации 72 видов неферментирующих грамотрицательных оксидазоположительных бактерий	18 — 24	Микро-Такс-NF
4	для идентификации 167 видов грамположительных бактерий: стафилококков, стрептококков, энтерококков, коринебактерий, листерий и пр.	18 — 24	Микро-Такс-RPO
5	для идентификации 32 видов клинически значимых грибов/дрожжей	24	Микро-Такс- Candida
6	для идентификации клинически значимых стафилококков	6 или 18 — 24	Микро-Такс- STAPH
7	для идентификации клинически значимых стрептококков и энтерококков	20 — 24	Микро-Такс- STREP 2
8	для фенотипической детекции ESBL (беталактамазы) у грамотрицательных бактерий	18 — 24	Микро-Такс-S бета-Lactamase detection
9	для детекции множественной устойчивости стафилококков (MRSA), энтерококков (VRE) и пневмококков	18 — 24	Микро-Такс-S MRSA & VRE
10	для определения минимальной ингибирующей концентрации (MIC) антимикробных агентов в отношении анаэробов	18 — 24	Микро-Такс-S Anaerobs MIC
11	для определения минимальной ингибирующей концентрации (MIC) антимикробных агентов в отношении пневмококков и гемофильных бактерий	18 — 24	Микро-Такс-S Pneumococcus & Haemophilus
12	для определения минимальной ингибирующей концентрации (MIC) антимикробных агентов в отношении кампилобактерий	18 — 24	Микро-Такс-S Campylobacter
13	для исследования множественной лекарственной устойчивости неферментирующих бактерий, вызывающих развитие цистического фиброза	18 — 24	Микро-Такс-S Cystic Fibrosis
14	для определения чувствительности дрожжей и криптококков к 6 или 9 антимикотическим агентам	22 — 24	Микро-Такс-AM KH2 или Микро- Такс-AM MIC
15	для быстрого определения бактериальной чувствительности к антибиотикам	6	Микро-Такс- SB/быстрый тест
16	для определения бактериальной чувствительности к антибиотикам	18 — 24	Микро-Такс- SB/ночная инкубация
17	для идентификации и определения чувствительности быстрорастущих аэробных бактерий к антибиотикам	18 — 24	Микро-Такс-UR
18	фенотипический подтверждающий тест для детекции ESBL (бета-лактамазы), которая продуцируется энтеробактериями	18 — 48 ч в зависимости от типа бактерий	MIC-стрип ESBL II
19	фенотипический подтверждающий тест для детекции метициллин-резистентных стафилококков	18 — 48 ч в зависимости от типа бактерий	MIC-стрип MRSA
20	фенотипический подтверждающий тест для детекции резистентности к пенициллину у пенициллин-устойчивых изолятов стрептококков и пневмококков	18 — 48 ч в зависимости от типа бактерий	MIC-стрип PEN
21	фенотипический подтверждающий тест для детекции ванкомицин-резистентных грамположительных бактерий	18 — 48 ч в зависимости от типа бактерий	MIC-стрип VAN