МУК 4.1.4082-24. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств изофетамида и его основного метаболита GPTC в ягодах клубники, салате, ягодах винограда, виноградном соке, изюме и вине из винограда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания по методам контроля
(утв. Роспотребнадзором 25.12.2024)
Примечание
Документ введен в действие с 25.03.2025.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 25 декабря 2024 года
Дата введения 25 марта 2025 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ИЗОФЕТАМИДА И ЕГО ОСНОВНОГО МЕТАБОЛИТА GPTC В ЯГОДАХ КЛУБНИКИ, САЛАТЕ, ЯГОДАХ ВИНОГРАДА, ВИНОГРАДНОМ СОКЕ, ИЗЮМЕ И ВИНЕ ИЗ ВИНОГРАДА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО МЕТОДАМ КОНТРОЛЯ МУК 4.1.4082-24
1. Разработаны ФБУН «ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (С.В. Кузьмин, Н.Е. Федорова, Л.В. Горячева, М.С. Гречина, А.В. Суслова)
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 25 декабря 2024 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее — МУК) описывают порядок применения высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее — ВЭЖХ) с масс-спектрометрическим детектированием (далее — МС/МС) для определения массовой концентрации изофетамида и его метаболита GPTC в ягодах клубники, салате, ягодах винограда, виноградном соке, изюме и вине из винограда в диапазоне 0,01 — 0,50 мг/кг — без учета разбавления и 0,01 — 25,00 мг/кг — с учетом разбавления в 50 раз.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические свойства
2.1. Изофетамид — N-[1,1-диметил-2-(4-изопропокси-о-толил)-2-оксоэтил]-3-метилтиофен-2-карбоксамид. <1> Брутто-формула C20H25NO3S. Молекулярная масса 359,48. CAS № 875915-78-9.
<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).
2.2 Физические и химические свойства.
Порошок белого цвета без запаха. Температура плавления: плюс (103,5 — 105,0) °C. Давление паров при температуре плюс 25 °C: 4,2·10-7 Па. Растворимость в органических растворителях при температуре плюс 20 °C в г/дм3: ацетон, этилацетат, дихлорэтан и метанол более 250; н-гептан — 1,2; н-октанол — 31,7; ксилол — 61,4. Растворимость в воде при плюс 20 °C: 5,33 мг/дм3. Коэффициент распределения н-октанол/вода: Kow logP = 2,5 при плюс 40 °C. Не подвергается диссоциации в диапазоне pH окружающей среды.
2.3 Краткая токсикологическая характеристика
Для крыс острая пероральная токсичность (ЛД50) > 2000 мг/кг, острая дермальная токсичность (ЛД50) > 2000 мг/кг. Острая ингаляционная токсичность (ЛК50) > 4,8 мг/дм3 (4 часа).
2.4 Область применения препарата.
Изофетамид — фунгицид-ингибитор сукцинатдегидрогеназы (SDHI), который подавляет клеточное дыхание. Является новым средством химической борьбы с мучнистой росой и серой гнилью на винограде, салатных культурах, огурцах, рапсе, миндале, стручковой фасоли, низкорослых ягодных культурах и газонной траве.
2.5. GPTC — N-[1,1-диметил-2-(4- \beta -D-глюкопиранозилокси-2-метилфенил)-2-оксоэтил]-3-метил-2-тиофенкарбоксамид <1>. Брутто-формула C23H29NO8S. Молекулярная масса 479,54 г/моль. Метаболит изофетамида.
III. Погрешность измерений
3.1. При соблюдении условий проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК погрешность <2> (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
<2> ГОСТ Р ИСО 5725-1 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-2 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений (далее — ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002).»
Метрологические характеристики
IV. Метод измерений
4.1. Измерения концентраций изофетамида и его метаболита GPTC выполняют методом обращенно-фазовой ВЭЖХ-МС/МС.
4.2. Пробы ягод клубники, винограда, салата и изюма подвергают экстракции смесью ацетонитрила с водой (8:2), затем очищают на патроне для твердофазной экстракции (ТФЭ). После очистки проб проводят концентрирование. Пробы вина и виноградного сока очищают на патронах (картриджах) для ТФЭ.
4.3 Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы — 5 пг.
Средняя полнота извлечения для изофетамида — 90,3% (клубника), 100,7% (виноград), 88,0% (салат), 92,1% (изюм), 94,1% (вино), 100,3% (виноградный сок). Средняя полнота извлечения для GPTC — 90,6% (клубника), 92,6% (виноград), 91,4% (салат), 93,1% (изюм), 83,6% (вино), 87,9% (виноградный сок).
4.4. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
V. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Жидкостный хроматограф с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь, снабженный автоматическим пробоотборником и термостатом колонки | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы лабораторные аналитические | С пределом допустимой погрешности +/- 0,0005 г по ГОСТ Р 53228-2008 |
| Весы лабораторные | С пределом допустимой погрешности +/- 0,01 г по ГОСТ Р 53228-2008 |
| Меры массы | ГОСТ OIML R 111-1-2009 |
| Колбы мерные | Вместимостью 50, 100, 1000 см3 типа 2-50-2, 2-100-2 и 2-1000-2 по ГОСТ 1770-74 |
| Цилиндры мерные | Вместимостью 50, 100, 500 и 1000 см3, Исполнение 1-4, 1(2-4)-50-2, 1(2-4)-100-2, 1(2-4)-500-2 и 1(2-4)-1000-2 по ГОСТ 1770-74 |
| Цилиндры мерные с пришлифованной пробкой | Вместимостью 25 см3, Исполнение 2, 2-25-2, по ГОСТ 1770-74 |
| Пипетки градуированные | Вместимостью 1, 2, 5 и 10 см3 типа 1-1(2)-2-1, 1-1(2)-2-2, 1-1(2)-2-5 и 1-1(2)-2-10 по ГОСТ 29227-91 |
| Прибор/приборы для измерения атмосферного давления, температуры и относительной влажности воздуха | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками. | |
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Изофетамид | Аналитический стандартный образец с содержанием основного компонента не менее 95% |
| GPTC | Аналитический стандартный образец с содержанием основного компонента не менее 95% |
| Азот особой чистоты, сорт 1, в баллонах | ГОСТ 9293-74 (ИСО 2435-73) |
| Аммоний муравьинокислый (формиат аммония) | Чистый для анализа, 99,0% |
| Ацетонитрил для ВЭЖХ | Чистота не менее 99,9% |
| Вода для лабораторного анализа (деионизированная) | ГОСТ Р 52501-2005 |
| Метанол | Химически чистый, ГОСТ 6995-77 |
| Муравьиная кислота | Чистая для анализа, ГОСТ 5848-73 |
| Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующей дополнительной очистки растворителей. | |
Вспомогательное оборудование, устройства, материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| 1 | 2 |
| Аппарат для встряхивания или орбитальный шейкер | Орбита до 10 мм, диапазон регулировки оборотов 50 — 200 об/мин |
| Бутыли из темного стекла | Вместимостью 1000 см3 |
| Виалы хроматографические стеклянные с крышками и септами | Вместимостью 2 см3 |
| Груша резиновая | - |
| Колбы круглодонные (грушевидные) со шлифом | Типа К-1 или Гр-1 вместимостью 50 см3 с взаимозаменяемым конусом 14/23, 19/26 или 29/32, ГОСТ 25336-82 |
| Мельница лабораторная | - |
| Патроны для твердофазной экстракции на основе сополимера N-винилпирролидона и дивинилбензола | Масса сорбента 60 мг, площадь поверхности ~ 831 м2/г, средний размер пор 82 А, средний размер частиц 30 мкм |
| Пробирки стеклянные с пришлифованной пробкой | П-2-25, вместимостью 25 см3 по ГОСТ 1770-74 |
| Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом | Обеспечивающий вакуум до 10 мбар |
| Стаканы химические с носиком | Вместимостью 250 см3, типа В-1-250 по ГОСТ 25336-82 |
| Установка для твердофазной экстракции (манифолд) | С мембранным насосом, с предельно допустимым уровнем давления в системе 74 кПа |
| Холодильная/морозильная камера | ГОСТ 26678-85 |
| Хроматографическая колонка стальная, длиной 50 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазовым сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C18, зернением 1,8 мкм | - |
| Примечание: допускается использование вспомогательного оборудования, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками. | |
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2017, а также требования, изложенные в технической документации к жидкостному хроматографу.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009-83. Организуется обучение работников безопасности труда.
6.3. Работа с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 Мпа (150 кгс/см2) осуществляется в соответствии с законодательством Российской Федерации <3>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.
<3> Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору от 15.12.2020 № 536 (зарегистрировано Минюстом России 31.12.2020, регистрационный № 61998).
VII. Требования к квалификации операторов
7.1. Измерения в соответствии с настоящими МУК может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментальное соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VIII. Условия измерений
8.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 30 °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
IX. Подготовка к выполнению измерений
9.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: приготовление компонентов подвижной фазы, кондиционирование хроматографической колонки, приготовление растворов, подготовка патронов (картриджей) для ТФЭ, приготовление градуировочных растворов, установление градуировочных характеристик, отбор и подготовка проб.
9.2. Приготовление 0,05% раствора формиата аммония (вес/объем), содержащего 0,01% муравьиной кислоты (по объему) (компонент А подвижной фазы).
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 0,5 г формиата аммония, растворяют в 300 — 400 см3 деионизированной воды, вносят 0,1 см3 муравьиной кислоты, доводят до метки водой, перемешивают. При необходимости приготовленный раствор дегазируют.
9.3. Приготовление 0,01% (по объему) раствора муравьиной кислоты в метаноле (компонент Б подвижной фазы).
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 500 см3 метанола, вносят 0,1 см3 муравьиной кислоты, доводят до метки метанолом, перемешивают.
Растворы компонентов подвижной фазы (А и Б) хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.
9.4 Кондиционирование хроматографической колонки для ВЭЖХ.
Промывают колонку подвижной фазой при соотношении компонентов А и Б (1:1) и скорости подачи растворителя 0,3 см3/мин до установления стабильной базовой линии.
9.5. Приготовление смеси растворителей для экстракции проб и разбавления градуировочных растворов.
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают с помощью мерного цилиндра 800 см3 ацетонитрила, доводят до метки деионизированной водой, перемешивают. Раствор хранят в герметично закрытой стеклянной емкости не более 14 дней.
9.6 Приготовление смеси растворителей для элюирования пробы.
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают с помощью мерного цилиндра 500 см3 ацетонитрила, доводят до метки деионизированной водой, перемешивают. Раствор хранят в герметично закрытой стеклянной емкости не более 14 дней.
9.7. Подготовка к работе патронов (картриджей) для твердофазной экстракции.
Патрон (картридж) устанавливают в аллонж (адаптер) с прямым отводом в необходимые позиции для вакуума. Сверху к патрону прикрепляют контейнер объемом не менее 5 см3, используемый в качестве емкости для элюента.
Концентрирующий патрон промывают последовательно 5 см3 метанола и 5 см3 деионизированной воды, процедуру проводят с использованием вакуума. Скорость элюирования 1 — 2 см3/мин в минуту. Картриджи готовят непосредственно перед использованием <4>.
<4> Примечание: при отсутствии специального устройства для работы с патронами (манифолда), растворители наносят на патрон и промывают с помощью шприца, со скоростью не более 2 — 3 капли в секунду.
9.8 Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения.
Все растворы готовят при температуре плюс 20 °C.
9.8.1. Исходный раствор изофетамида для градуировки (концентрация 100 мкг/см3).
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают (0,0100 +/- 0,0005) г изофетамида, растворяют в 50 — 70 см3 ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранят в герметично закрытой таре в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C в течение 6 месяцев.
9.8.2. Исходный раствор метаболита GPTC для градуировки (концентрация 100 мкг/см3).
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают (0,0100 +/- 0,0005) г GPTC, растворяют в 50 — 70 см3 ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранят в герметично закрытой таре в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C в течение 6 месяцев.
Растворы NN 1 — 8 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходных растворов для градуировки.
9.8.3. Раствор № 1 изофетамида и метаболита GPTC для градуировки (концентрация 10 мкг/см3).
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 10 см3 исходных растворов изофетамида (п. 9.8.1) и GPTC (п. 9.8.2) с концентрациями 100 мкг/см3, доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают, получают раствор № 1 с концентрацией изофетамида и метаболита GPTC 10 мкг/см3. Раствор № 1 хранят в холодильнике при температуре 2 — 6 °C не более месяца.
9.8.4. Растворы № 2 и № 3 изофетамида и метаболита GPTC для градуировки (концентрация 1,0 и 0,1 мкг/см3).
В две мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают 10,0 и 1,0 см3 градуировочного раствора № 1 изофетамида и GPTC с концентрацией 10 мкг/см3 (п. 9.8.3), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают. Градуировочные растворы № 2 и № 3 хранят в холодильнике в герметично закрытой таре при температуре плюс 2 — 6 °C не более месяца.
Растворы № 1, № 2 и № 3 используют при проведении процедуры контроля качества результатов измерений.
9.8.5. Рабочие растворы NN 4 — 8 изофетамида и GPTC для градуировки (концентрация 0,001 — 0,05 мкг/см3).
В 2 мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают 5,0 и 1,0 см3 градуировочного раствора № 2 с концентрацией изофетамида и GPTC 1 мкг/см3 (п. 9.8.4), доводят до метки смесью растворителей, приготовленной по п. 9.5, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 4 и № 5 с концентрацией изофетамида и метаболита GPTC 0,05 и 0,01 мкг/см3, соответственно.
В 3 мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают 5,0; 2,0 и 1,0 см3 градуировочного раствора № 3 с концентрацией изофетамида и GPTC 0,1 мкг/см3 (п. 9.8.4), доводят до метки смесью растворителей, приготовленной по п. 9.5, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы NN 6 — 8 с концентрацией изофетамида и метаболита GPTC 0,005; 0,002 и 0,001 мкг/см3, соответственно.
Растворы хранят в холодильнике при температуре плюс 2 — 6 °C не более недели.
9.9 Установление градуировочной характеристики.
Градуировочные характеристики, выражающие зависимость площади пика от концентрации изофетамида и метаболита GPTC в растворе (мкг/см3), устанавливают по пяти рабочим растворам (NN 4 — 8) для градуировки.
В инжектор хроматографа вводят по 5 мм3 каждого раствора (NN 4 — 8) для градуировки и анализируют в условиях хроматографирования по п. 11.4. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков изофетамида и GPTC.
9.10 Контроль стабильности градуировочных характеристик.
Контроль стабильности градуировочных характеристик проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
Проводят измерения не менее двух образцов рабочих растворов для градуировки, содержание изофетамида и GPTC в которых должно входить в диапазон концентраций от 0,001 до 0,05 мкг/см3.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняются соотношения (1) и (2):
A = \frac{|(X - C)|}{C} \cdot 100 \leq B (1)
где: A — величина расхождения, %;
X — концентрация изофетамида или GPTC в растворе при контрольном измерении, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
B — норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (B = 20% при P = 0,95).
X. Отбор и хранение проб
10.1. Отбор проб осуществляют в соответствии с методическими документами <5>, а также документами по стандартизации <6>.
<5> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79;
<6> ГОСТ 31730-2012 «Продукция винодельческая. Правила приемки и методы отбора проб», введенный приказом Росстандарта от 29.11.2012 № 1634-ст; ГОСТ 33953-2016 «Земляника свежая. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 29.11.2016 № 1851-ст; ГОСТ 31782-2012 «Виноград свежий машинной и ручной уборки для промышленной переработки. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 29.11.2012 № 1735-ст; ГОСТ 32786-2014 «Виноград столовый свежий. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 30.10.2014 № 1472-ст; ГОСТ 33985-2016 «Салат-латук, эндивий кудрявый, эндивий эскариол свежие. Технические условия», введенный приказом Росстандарта от 31.10.2016 № 1528-ст; ГОСТ 6882-88 «Виноград сушеный. Технические условия», введенный Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 29.03.88 № 888; ГОСТ 32102-2013 «Консервы. Продукция соковая. Соки фруктовые концентрированные. Общие технические условия», введенный приказом Росстандарта от 28.06.2013 № 335-ст.
10.2. Отобранные пробы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в соответствии с указанием на этикетке и (или) в соответствии с нормативно-технической документацией на продукт. Свежие образцы хранятся не более 5 дней в холодильнике при температуре плюс 2 — 6 °C. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре не выше минус 18 °C. Перед анализом части образцов, подлежащих анализу, измельчают.
Вино и виноградный сок тщательно перемешивают.
XI. Выполнение определения
11.1 Подготовка проб ягод клубники, ягод винограда, салата к анализу.
11.1.1 Экстракция.
Гомогенизированный образец массой (10 +/- 0,1) г помещают в стакан вместимостью 250 см3, заливают 100 см3 смеси, приготовленной по п. 9.5, ставят на аппарат для встряхивания на 40 минут. Затем в пробирку или цилиндр с пришлифованной пробкой, вместимостью 25 см3, переносят 1 см3 экстракта и приливают 17 см3 деионизированной воды, тщательно перемешивают и подвергают очистке на патроне для твердофазной экстракции по п. 11.1.2.
11.1.2. Очистка экстракта. Экстракт, разбавленный водой, пропускают через патрон (картридж), подготовленный по п. 9.7, со скоростью прохождения пробы 1 — 2 см3/мин. После нанесения пробы изофетамид и GPTC элюируют с патрона 10 см3 смеси, приготовленной по п. 9.6. Очищенный экстракт собирают в круглодонную (грушевидную) колбу и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C.
Сухой остаток растворяют в 1 см3 смеси, приготовленной по п. 9.5, переносят в виалу и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 11.4.
11.2 Подготовка проб изюма к анализу.
11.2.1 Гомогенизация.
Образец изюма массой (50 +/- 0,1) г смачивают 85 см3 деионизированной воды и оставляют на 4 часа. Полученную массу пробы гомогенизируют.
11.2.2. Экстракция. Гомогенизированный образец, приготовленный по п. 11.2.1, массой (13,5 +/- 0,1) г (эквивалентно 5,0 г несмоченного изюма) помещают в стакан вместимостью 250 см3, заливают 100 см3 смеси, приготовленной по п. 9.5, ставят на аппарат для встряхивания на 40 минут. Затем в пробирку или цилиндр с пришлифованной пробкой, вместимостью 25 см3, переносят 1 см3 экстракта и приливают 17 см3 деионизированной воды, тщательно перемешивают и подвергают очистке на патроне для твердофазной экстракции по п. 11.2.3.
11.2.3. Очистка экстракта. Экстракт, разбавленный водой, пропускают через патрон (картридж), подготовленный по п. 9.7, со скоростью прохождения пробы 1 — 2 см3/мин. После нанесения пробы изофетамид и GPTC элюируют с патрона 10 см3 смеси, приготовленной по п. 9.6. Очищенный экстракт собирают в круглодонную (грушевидную) колбу и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C.
Сухой остаток растворяют в 0,5 см3 смеси, приготовленной по п. 9.5, переносят в виалу и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 11.4.
11.3 Подготовка проб вина из винограда, виноградного сока к анализу.
В пробирку или цилиндр с пришлифованной пробкой, вместимостью 25 см3, взвешивают (1 +/- 0,05) г образца, вносят 17 см3 деионизированной воды, тщательно перемешивают и наносят на патрон (картридж), подготовленный по п. 9.7, со скоростью прохождения пробы 1 — 2 см3/мин. Изофетамид и GPTC элюируют с патрона 10 см3 смеси, приготовленной по п. 9.6 и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 11.4.
11.4. Измерения выполняют методом ВЭЖХ-МС/МС: тройной квадруполь с источником ионизации при следующих режимных параметрах <7>:
<7> Примечание: параметры масс-спектрометрического детектора могут различаться в зависимости от марки и модели прибора.
- режим ионизации: электроспрей (англ. Electrospray ionization, ESI), электростатическое напряжение плюс 3000 В;
- полярность: положительная;
- тип сканирования: мониторинг множественных реакций (англ. Multiple Reaction Monitoring, MRM).
Параметры масс-спектрометрического детектора:
Материнский ион (масса/заряд): 360,17
Дочерние ионы (масса/заряд): 124,9 (количественный расчет), 209,9
Напряжение на фрагментаторе, В: 81
Энергия разрушения (соударения), В: 25(360,17 \rightarrow 124,9) , 5(360,17 \rightarrow 209,9)
Материнский ион (масса/заряд): 480,17
Дочерние ионы (масса/заряд): 124,9 (количественный расчет), 209,9
Напряжение на фрагментаторе, В: 114
Энергия разрушения (соударения), В: 33(480,17 \rightarrow 124,9) , 5(480,17 \rightarrow 209,9)
Давление на распылителе: 35 psi
Скорость газа распыления (азот): 12 дм3/мин.
Скорость осушающего газа (азот): 10 дм3/мин.
Температура осушающего газа: плюс 350 °C.
- хроматографическая колонка стальная, длиной 50 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C18, зернением 1,8 мкм;
- температура колонки: плюс 40 °C;
- скорость потока элюента: 0,3 см3/мин;
- объем вводимой пробы: 5 мм3;
Состав компонентов подвижной фазы и режим элюирования (градиентный) указаны в таблице 11.1.
Общее время анализа составляет 4,6 мин, включая промывку колонки после анализа, продолжительностью 0,6 мин.
Линейный диапазон детектирования 5 — 250 пг.
11.5. При превышении верхней границы калибровочного графика соответствующего определяемого соединения анализируемую пробу разбавляют смесью, приготовленной по п. 9.5 (не более, чем в 50 раз), учитывая кратность разбавления при проведении вычислений.
XII. Обработка результатов
12.1 Содержание изофетамида и GPTC в образцах (X, мг/кг) рассчитывают по формуле (3):
X = \frac{A \cdot V \cdot C \cdot \text{К}p \cdot 100}{m \cdot f} , (3)
где: A — концентрация вещества, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см3;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3 (1 см3 — ягоды, салат, 0,5 см3 — изюм, 10 см3 — вино, виноградный сок);
m — масса анализируемого образца, г (10 г — ягоды, салат, 5 г — изюм, 1 г — вино, виноградный сок);
C — коэффициент, учитывающий объем аликвоты экстракта, взятой для анализа, (C = 100 — ягоды, салат, изюм; C = 1 — вино, виноградный сок);
f — коэффициент, учитывающий степень извлечения аналитов из проб, %.
Идентификация и расчет концентрации веществ в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.
Для выражения содержания метаболита GPTC в эквиваленте действующего вещества изофетамида, уровень метаболита умножают на коэффициент К, равный соотношению молекулярных масс действующего вещества и его метаболита (К = 0,75).
12.2. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости, условие (4):
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r , (4)
где: X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл. 3.1), где r = 2,8 \cdot \sigma_{r} .
При невыполнении условия (4) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XIII. Оформление результатов измерений
13.1 Результат количественного анализа представляют в виде выражения (5):
(\overline{X} \pm \Delta) , мг/кг при вероятности P = 0,95, (5)
где: \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (6):
\Delta = \delta \cdot X100 , (6)
где: \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 3.1), %.
Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.
Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «менее 0,01 мг/кг» <8>.
<8> Примечание: 0,01 мг/кг — предел количественного определения изофетамида и его метаболита GPTC в ягодах клубники, ягодах винограда, салате, изюме, вине и виноградном соке.
XIV. Контроль качества результатов измерений
14.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с документами по стандартизации <9> и документами системы менеджмента качества лаборатории.
<9> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002; ГОСТ Р ИСО 5725-2-2022 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3-2022 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4-2022 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5-2022 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6-2022 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике», введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 № 161-ст.
Периодичность и формы контроля определяется руководством по качеству.
Библиографические ссылки
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. Федеральный закон от 19.07.1997 № 109-ФЗ «О безопасном обращении с пестицидами и агрохимикатами».
3. Технический регламент Таможенного союза «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011).
4. Единые санитарно-эпидемиологические и гигиенические требования к продукции (товарам), подлежащей санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю).
5. Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением.
6. ГОСТ Р ИСО 5725-1 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения».
7. ГОСТ Р ИСО 5725-2 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений».
8. ГОСТ Р ИСО 5725-3 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений».
9. ГОСТ Р ИСО 5725-4 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений».
10. ГОСТ Р ИСО 5725-5 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений».
11. ГОСТ Р ИСО 5725-6 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».
12. ГОСТ Р 53228-2008 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
13. ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
14. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
15. ГОСТ OIML R 111-1-2009 «Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования».
16. ГОСТ Р 52501-2005 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
17. ГОСТ 5848-73 «Кислота муравьиная. Технические условия».
18. ГОСТ 6995-77 «Реактивы. Метанол-яд. Технические условия».
19. ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
20. ГОСТ 26678-85 «Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия».
21. ГОСТ 9293-74 «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».
22. ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
23. ГОСТ 12.1.019-2017 «Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
24. ГОСТ 12.1.004-91 «Пожарная безопасность. Общие требования».
25. ГОСТ 12.4.009-83 «Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
26. ГОСТ 32030-2013 «Вина столовые и виноматериалы столовые. Общие технические условия».
27. ГОСТ 33953-2016 «Земляника свежая. Технические условия».
28. ГОСТ 32786-2014 «Виноград столовый свежий. Технические условия».
29. ГОСТ 33985-2016 «Салат-латук, эндивий кудрявый, эндивий эскариол свежие. Технические условия».
30. ГОСТ 6882-88 «Виноград сушеный. Технические условия».
31. ГОСТ 32102-2013 «Соки фруктовые концентрированные. Общие технические условия».
32. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.
| ББК 51.231 |
|---|