МУК 4.1.3961-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств паклобутразола в зерне и соломе зерновых колосовых культур, зерне и масле кукурузы, семенах и масле рапса, клубнях картофеля, плодах яблони и яблочном соке методом газожидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 06.07.2023)
Примечание
Документ введен в действие с 06.10.2023.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 6 июля 2023 года
Дата введения 6 октября 2023 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПАКЛОБУТРАЗОЛА В ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ КОЛОСОВЫХ КУЛЬТУР, ЗЕРНЕ И МАСЛЕ КУКУРУЗЫ, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА, КЛУБНЯХ КАРТОФЕЛЯ, ПЛОДАХ ЯБЛОНИ И ЯБЛОЧНОМ СОКЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3961-23
1. Разработаны ФГБОУ ВО «Российский государственный аграрный университет — МСХА имени К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр „Агроэкология пестицидов и агрохимикатов“ Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, О.И. Рыбакова, Е.Ю. Панов, Е.Н. Тестова).»
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 6 июля 2023 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания (далее — МУК) устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии (далее — ГЖХ) для определения уровня остаточных количеств паклобутразола в зерне зерновых колосовых культур, зерне и масле кукурузы, семенах и масле рапса, клубнях картофеля, в плодах яблони и яблочном соке в диапазоне 0,01 — 0,10 мг/кг; в соломе зерновых колосовых культур в диапазоне 0,10 — 1,00 мг/кг.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические свойства
2.1 Физико-химические свойства паклобутразола.
Название вещества по ИЮПАК: (2RS, 3RS)-1-(4-хлорфенил)-4,4-диметил-2-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)пентан-3-ол.
Эмпирическая формула: C15H20ClN3O.
Агрегатное состояние: кристаллическое вещество.
Давление насыщенного пара: 1,9 x 10-3 МПа (при 20 °C).
Температура плавления: плюс 165 — 166 °C.
Коэффициент распределения в системе октанол/вода: KowlogP = 3,2.
Растворимость в воде (г/дм3, при плюс 20 °C): 0,026.
Растворимость в органических растворителях (г/дм3, при 20 °C): метанол — 150; ацетон — 72,4; дихлорметан — 5,05; ксилол — 5,67; н-гептан — 0,199.
Паклобутразол устойчив к фотолизу и гидролизу в кислой, нейтральной и щелочной средах. В почвах паклобутразол разрушается очень медленно (в среднем DT50 = 180 — 360 дней); только в щелочных почвах (pH 8,8) этот процесс протекает быстрее (DT50 < 42 дней).
2.2. Паклобутразол относится к веществам малоопасным по острой пероральной (ЛД50 для крыс составляет 1336 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД50 для крыс составляет более 2000 мг/кг), но к умеренно опасным по ингаляционной токсичности (ЛК50 для крыс (4 часа) 3130 мг/м3 воздуха).
2.3. Паклобутразол — системный ретардант, обладающий также фунгицидными свойствами. Как ретардант он активен на ряде плодовых, древесных, декоративных и зерновых культур. Ингибирует вегетативный рост и увеличивает образование плодовых почек у некоторых плодовых культур, тормозит рост и уменьшает полегание зерновых культур. В небольших дозах он проявляет фунгицидный эффект в отношении возбудителей мучнистой росы и парши.
III. Метод измерения
3.1. Метод основан на определении паклобутразола методом капиллярной ГЖХ с использованием термоионного детектора.
Определение паклобутразола проводится после его экстракции из образцов ацетонитрилом, дальнейшей очистки экстракта в системе несмешивающихся растворителей и дальнейшей очистки экстракта на концентрирующих патронах № 1.
Идентификация вещества проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором колонки и условий хроматографирования.
IV. Метрологические характеристики
4.1. При соблюдении всех условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 4.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
Метрологические характеристики
V. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
| Наименование средств измерения | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| 1 | 2 |
| Хроматограф газовый с термоионным (азотно-фосфорным) детектором (ТИД) | Внесено в реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы аналитические | Наибольший предел взвешивания 110 г, дискретность 0,0001 г, класс точности специальный (I) по ГОСТ Р 53228 |
| Весы лабораторные | Наибольший предел взвешивания 400 г, предел допустимой погрешности +/- 0,5 г, класс точности средний (III) по ГОСТ Р 53228 |
| Колбы мерные лабораторные стеклянные | Тип 2-10-2, 2-25-2 и 2-100-2 по ГОСТ 1770 |
| Пипетки градуированные лабораторные стеклянные | Тип 1-2-2-1, 1-2-2-2 и 1-2-2-5 по ГОСТ 29227 |
| Цилиндры мерные лабораторные стеклянные | Тип 1-10-2, 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2, 1-500-2, 1-1000-2 по ГОСТ 1770 |
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| 1 | 2 |
| Паклобутразол, аналитический стандарт | Содержание основного вещества не менее 98,4% |
| Азот газообразный особой чистоты | ГОСТ 9293 |
| Ацетон химически чистый | ГОСТ 2603 |
| Ацетонитрил химически чистый | Содержание основного вещества не менее 99,8% |
| Вода дистиллированная | ГОСТ Р 58144 |
| Вода для лабораторного анализа | ГОСТ Р 52501 |
| Гелий очищенный | Содержание основного вещества не менее 99,9% |
| н-Гексан химически чистый | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Калий марганцовокислый чистый для анализа | ГОСТ 20490 |
| Кальций хлористый чистый для анализа | Содержание основного вещества не менее 99% |
| Натрий сернокислый химически чистый | ГОСТ 4166 |
| Натрий хлористый химически чистый | ГОСТ 4233 |
| Этилацетат чистый для анализа | ГОСТ 22300 |
Вспомогательные устройства, материалы
| Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| 1 | 2 |
| Аппарат для встряхивания проб | Направление колебаний — возвратно-поступательное, максимальная загрузка 10 кг, амплитуда колебаний — до 30 мм, скорость от 10 до 300 колебаний в минуту |
| Банки полипропиленовые с крышками для экстракции | Объем 250 см3 |
| Ванна ультразвуковая | Рабочая частота 50 кГц |
| Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная | ГОСТ 5556 |
| Виалы, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, для жидких проб | Объем 2 см3 |
| Виалы стеклянные с крышкой с тефлоновой прокладкой | Объем не менее 40 см3 |
| Воронки делительные | Тип ВД по ГОСТ 25336 |
| Воронки лабораторные стеклянные | Тип В по ГОСТ 25336 |
| Колбы конические стеклянные | Тип Кн по ГОСТ 25336 |
| Колбы круглодонные стеклянные | Тип К по ГОСТ 25336 |
| Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла | Внутренний диаметр 0,32 мм, длина 30 м, с неподвижной фазой, содержащей 100% диметилполисилоксана и толщиной пленки 0,25 мкм |
| Насос мембранный вакуумный | Обеспечивающий вакуум — до 10 мбар |
| Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции (патрон № 1) | Заполнены гидрофильным слабокислым сорбентом (C) с размером частиц 63 — 200 мкм (объем — 1 см3, масса сорбента — 0,6 г) |
| Ротационный вакуумный испаритель | Снабжен ручным подъемником, с диагональным конденсатором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об/мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом не менее 5 дм3 и с диапазоном температур 20 — 100 °C |
| Стаканы лабораторные стеклянные | Тип В, номинальная вместимость 100 — 800 см3 по ГОСТ 25336 |
| Установка для перегонки растворителей | С круглодонной колбой объемом 4000 см3 и приемной конической колбой объемом 1000 см3 |
| Фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие | Диаметр 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г |
Примечание. Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, а также посуды, реактивов и материалов, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам.
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
VII. Квалификация операторов
7.1. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VIII. Отбор проб
8.1. Отбор проб производится в соответствии с правилами <1>.
<1> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 № 2051-79.
Отобранные пробы зерна и соломы зерновых колосовых культур, а также зерна кукурузы и семян рапса подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.
Пробы клубней картофеля и плодов яблони хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более суток, для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре минус 18 °C.
Пробы сока хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 5 суток.
Пробы растительных масел хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 10 суток.
IX. Условия проведения измерений
9.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 — 30 °C, относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
X. Подготовка к выполнению измерений
10.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.
Подготовка органических растворителей.
10.1.1 Очистка ацетонитрила.
Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов.
Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс 81,0 — 82,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 81,0 — 82,0 °C, отбрасывают.
10.1.2 Очистка ацетона.
Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов.
Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцовокислый калий из расчета 100 мг/дм3. Ацетон перегоняют при температуре плюс 56,0 — 56,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 56,0 — 56,5 °C, отбрасывают.
10.1.3 Очистка гексана.
Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Гексан перегоняют при температуре плюс 68,5 — 69,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 68,5 — 69,0 °C, отбрасывают.
10.1.4 Очистка этилацетата.
Этилацетат, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 12 — 24 часов. Далее этилацетат сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей.
Этилацетат перегоняют при температуре плюс 76,5 — 77,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 76,5 — 77,5 °C, отбрасывают.
10.2 Приготовление растворов для проведения анализа.
10.2.1 Приготовление рабочих растворов.
10.2.1.1 Приготовление насыщенного раствора хлорида натрия.
400 г хлорида натрия переносят в стеклянную емкость объемом 1000 см3, доливают 800 см3 дистиллированной воды, помещают на 15 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Получают насыщенный раствор хлорида натрия над слоем нерастворившейся соли. Приготовленный раствор хранится при комнатной температуре в темном месте (в емкости из темного стекла) в течение 12 месяцев.
10.2.1.2. Приготовление смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1 (по объему).
В коническую колбу объемом 250 см3 помещают 160 см3 гексана и добавляют 40 см3 этилацетата. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстракта на концентрирующих патронах № 1. Раствор готовят непосредственно перед использованием.
10.2.1.3. Приготовление смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1 (по объему).
В коническую колбу объемом 250 см3 помещают 100 см3 этилацетата и добавляют 100 см3 гексана. Раствор в колбе перемешивают и используют при очистке экстракта на концентрирующих патронах № 1. Раствор готовят непосредственно перед использованием.
10.2.2 Приготовление градуировочных растворов.
10.2.2.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией паклобутразола 100,0 мкг/см3.
Взвешивают 10 мг паклобутразола в мерной колбе объемом 100 см3. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 6 месяцев.
10.2.2.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией паклобутразола 10,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 30 дней.
10.2.2.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией паклобутразола 1,0 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 2,5 см3, помещают в мерную колбу объемом 25 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 3 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 3 хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 дней.
10.2.2.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией паклобутразола 0,5 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 4 используется для установления градуировочной характеристики и приготовления стандартных растворов, хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 дней.
10.2.2.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией паклобутразола 0,2 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 6 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 дней.
10.2.2.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией паклобутразола 0,1 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 7 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 дней.
10.2.2.7. Стандартный раствор № 7 с концентрацией паклобутразола 0,05 мкг/см3.
Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 8 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 дней.
10.2.2.8. Стандартные растворы паклобутразола с концентрацией 5,0; 2,0; 1,0; 0,5; 0,4 и 0,2 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы матриц.
Методом последовательного разведения ацетоном из стандартных растворов готовят растворы, содержащие по 5,0; 2,0; 1,0; 0,5; 0,4 и 0,2 мкг/см3 паклобутразола и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы матриц.
Стандартные растворы для внесения хранятся в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 14 дней.
10.3. Установление и контроль стабильности градуировочной характеристики.
10.3.1 Установление градуировочной характеристики.
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации паклобутразола в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,50; 0,20; 0,10 и 0,05 мкг/см3.
В инжектор хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 11.5. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
10.3.2 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки. Содержание паклобутразола должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,05 до 0,50 мкг/см3 при определении паклобутразола.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:
A = \frac{(X - C) \times 100}{C} \leq 10 , (1)
где X — концентрация паклобутразола в пробе при контрольном измерении, мкг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора паклобутразола в ацетоне, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
10 — погрешность градуировочной характеристики, %.
Если величина расхождения (A) превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов паклобутразола, предусмотренных методикой выполнения измерений. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 10.3.1.
10.4. Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения паклобутразола на них.
10.4.1 Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстракта.
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин.
Патрон № 1 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: в день использования концентрирующий патрон последовательно промывают 5 см3 этилацетата и 5 см3 гексана. Элюаты отбрасывают.
Не допускать высыхания поверхности патрона.
10.4.2. Проверка хроматографического поведения паклобутразола на концентрирующих патронах № 1.
В отгонную колбу объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора паклобутразола в ацетоне с концентрацией 0,10 мкг/см3 и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток в колбе растворяют в 1 см3 этилацетата, тщательно обмывают стенки колбы, добавляют 9 см3 гексана, перемешивают и наносят на подготовленный патрон. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Патрон последовательно промывают 10 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1 и четырьмя порциями объемом по 5 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1 и последовательно вносят на патрон. Каждую порцию собирают отдельно в чистые отгонные колбы объемом по 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 см3 ацетона и 1 мм3 хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие паклобутразол, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюата.
Изучение поведения паклобутразола на концентрирующих патронах № 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.
XI. Проведение измерений
11.1. Зерно зерновых колосовых культур, зерно кукурузы, семена рапса, клубни картофеля, плоды яблони.
11.1.1. Экстракция и очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.
Навеску исследуемой матрицы массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 50 см3 ацетонитрила и помещают на 30 минут в аппарат для встряхивания проб. По истечении времени экстракт фильтруют в делительную воронку объемом 250 см3 через бумажный фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют еще раз, используя 30 см3 ацетонитрила и помещая на 15 минут в аппарат для встряхивания проб. Экстракты фильтруют и объединяют в делительной воронке объемом 250 см3.
Для клубней картофеля и плодов яблони: к ацетонитрильному экстракту в делительной воронке прибавляют 5 г хлористого натрия и встряхивают делительную воронку в течение 2 минут. Выделившуюся воду (нижний слой) отбрасывают.
В делительную воронку добавляют 20 см3 гексана и встряхивают делительную воронку в течение 2 минут. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а нижний слой (ацетонитрил) возвращают в делительную воронку и повторяют процедуру очистки еще раз, используя 20 см3 гексана. Верхний слой (гексан) отбрасывают, а нижний слой (ацетонитрил) собирают в отгонную колбу объемом 250 см3 через слой безводного сернокислого натрия.
Объединенный ацетонитрильный экстракт выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
11.1.2 Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1.
Сухой остаток в колбе, полученный по п. 11.1.1, растворяют в 1 см3 этилацетата, тщательно обмывают стенки колбы, добавляют 9 см3 гексана, перемешивают и наносят на подготовленный по п. 10.4.1 концентрирующий патрон № 1. Элюат отбрасывают.
Патрон промывают 10 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1, элюат отбрасывают.
Паклобутразол элюируют с концентрирующего патрона 15 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см3 и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Сухой остаток после очистки растворяют в 2 см3 ацетона и 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.
11.2 Солома зерновых колосовых культур.
11.2.1. Экстракция и очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.
Навеску соломы массой 5 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см3, прибавляют 70 см3 ацетонитрила и помещают на 30 минут в аппарат для встряхивания проб. По истечении времени экстракт фильтруют в делительную воронку объемом 250 см3 через бумажный фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют еще раз, используя 30 см3 ацетонитрила и помещая на 15 минут в аппарат для встряхивания проб. Экстракты фильтруют и объединяют в делительной воронке объемом 250 см3.
В делительную воронку добавляют 20 см3 гексана и встряхивают делительную воронку в течение 2 минут. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а нижний слой (ацетонитрил) возвращают в делительную воронку и повторяют процедуру очистки еще раз, используя 20 см3 гексана. Верхний слой (гексан) отбрасывают, а нижний слой (ацетонитрил) собирают в отгонную колбу объемом 250 см3 через слой безводного сернокислого натрия.
Объединенный ацетонитрильный экстракт выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Далее проводят очистку экстракта как указано в п. 11.1.2. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1.
Сухой остаток после очистки растворяют в 10 см3 ацетона и 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.
11.3 Растительные масла (масло кукурузы и рапса).
11.3.1 Экстракция.
Навеску растительного масла массой 10 г помещают в химический стакан объемом 100 см3, прибавляют 25 см3 гексана, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см3. Химический стакан обмывают еще одной порцией гексана объемом 25 см3 и объединяют с первым смывом в делительной воронке объемом 250 см3.
Паклобутразол экстрагируют тремя порциями ацетонитрила объемом по 30 см3 каждая, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в отгонную колбу объемом 250 см3. Верхний слой (гексан) отбрасывают. Объединенный ацетонитрильный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Далее проводят очистку экстракта как указано в п. 11.1.2. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1.
Сухой остаток после очистки растворяют в 2 см3 ацетона и 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.
11.4 Яблочный сок.
11.4.1 Экстракция.
Образец яблочного сока массой 10 г помещают в химический стакан объемом 100 см3, прибавляют туда 20 см3 насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см3.
Паклобутразол экстрагируют тремя порциями ацетонитрила объемом по 20 см3 каждая, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний ацетонитрильный слой собирают в отгонную колбу объемом 250 см3, пропуская его через слой безводного сульфата натрия. Осушитель обмывают 5 см3 ацетонитрила и объединяют смыв с основным экстрактом. Объединенный ацетонитрильный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.
Далее проводят очистку экстракта как указано в п. 11.1.2. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1.
Сухой остаток после очистки растворяют в 2 см3 ацетона и 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.
11.5 Условия хроматографирования.
11.5.1 Хроматографическая система.
Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла, с внутренний диаметром 0,32 мм, длиной 30 м, с неподвижной фазой, содержащей 100% диметилполисилоксана и толщиной пленки 0,25 мкм.
Температура детектора — плюс 320 °C, поток воздуха — 120,0 см3/мин, поток газа горения (водород) — 3,0 см3/мин, поток газа поддувки (азот) — 5,0 см3/мин.
Температура испарителя — плюс 300 °C, газ-носитель — гелий, режим без деления потока, общий поток 35 см3/мин, поток обдува септы — 3,0 см3/мин.
Температура колонки: градиентный нагрев колонки начиная с плюс 150 °C (выдержка 1 мин) по 15 град/мин до плюс 235 °C (выдержка 1 мин), затем по 30 град/мин до плюс 300 °C (выдержка 1 мин). Поток газа-носителя (гелий) — 2,0 см3/мин, скорость 39,1 см/сек.
Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 0,05 — 0,50 нг.
Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор паклобутразола с концентрацией 0,5 мкг/см3, соответственно разбавляют. В этом случае разбавление учитывают в конечной формуле расчета содержания паклобутразола в пробах.
XII. Обработка результатов измерения
12.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание паклобутразола в пробах рассчитывают по формуле, без учета полноты извлечения вещества из проб:
где X — содержание паклобутразола в пробе, мг/кг;
A — концентрация паклобутразола, найденная по градуировочному графику в соответствии с величинами площадей хроматографических пиков, мкг/см3;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;
m — масса анализируемого образца, г.
XIII. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
13.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r , (3)
где X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл. 4.1), при этом r = 2,8 \times \sigma_{r} .
При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XIV. Оформление результатов
14.1 Результат анализа представляют в виде:
(\overline{X} \pm \Delta) , мг/кг при вероятности P = 0,95,
где \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
\Delta = \delta \cdot \overline{X}100 ,
где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 4.1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«Содержание паклобутразола в зерне зерновых колосовых культур, зерне и масле кукурузы, семенах и масле рапса, клубнях картофеля, в плодах яблони и яблочном соке — менее 0,01 мг/кг; содержание паклобутразола в соломе зерновых колосовых культур — менее 0,01 мг/кг».
XV. Контроль качества результатов измерений
15.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1 — 6).
Периодичность и формы контроля определяются руководством по качеству.
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ПАКЛОБУТРАЗОЛА ИЗ ЗЕРНА И СОЛОМЫ ЗЕРНОВЫХ КОЛОСОВЫХ КУЛЬТУР, ЗЕРНА И МАСЛА КУКУРУЗЫ, СЕМЯН И МАСЛА РАПСА, КЛУБНЕЙ КАРТОФЕЛЯ, ПЛОДОВ ЯБЛОНИ И ЯБЛОЧНОГО СОКА (5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ, P = 0,95)
Библиографические ссылки
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. ГОСТ Р 8.563 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений».
3. ГОСТ Р ИСО 5725-(1 — 6) «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
4. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
5. ГОСТ 12.1.007 «Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
6. ГОСТ 12.1.019 «Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
7. ГОСТ 12.1.004 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования».
8. ГОСТ 12.4.009 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
9. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
10. ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
11. ГОСТ 1770 (ИСО 1042, ИСО 4788) «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
12. ГОСТ 29227 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
13. ГОСТ 25336 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
14. ГОСТ Р 58144 «Вода дистиллированная. Технические условия».
15. ГОСТ Р 52501 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
16. ГОСТ 5556 «Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия».
17. ГОСТ 9293 «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».
18. ГОСТ 2603 «Реактивы. Ацетон. Технические условия»
19. ГОСТ 20490 «Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия».
20. ГОСТ 4166 «Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия».
21. ГОСТ 4233 «Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия».
22. ГОСТ 22300 «Реактивы. Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия».
23. ГОСТ 13586.3 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб».
24. ГОСТ ISO 6497 «Корма. Отбор проб».
25. ГОСТ 10852 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб».
26. ГОСТ 8808 «Масло кукурузное. Технические условия».
27. ГОСТ 31759 «Масло рапсовое. Технические условия».
28. ГОСТ 32190 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб».
29. ГОСТ 7176 «Картофель продовольственный. Технические условия».
30. ГОСТ 34314 «Яблоки свежие, реализуемые в розничной торговле. Технические условия».
31. ГОСТ 27572 «Яблоки свежие для промышленной переработки. Технические условия».
32. ГОСТ 32101 «Консервы. Продукция соковая. Соки фруктовые прямого отжима. Общие технические условия».
| ББК 51.231 |
|---|