МУК 4.1.3707-21. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика измерений массовой концентрации (7альфа, 17бета)-7-[9-[4,4,5,5,5-пентафторпентил)сульфинил)нонил]эстра-1,3,5(10)-триен-3,17-диола (фулвестрант) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 12.10.2021)
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 12 октября 2021 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОДИКА ИЗМЕРЕНИЙ МАССОВОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ ( 7\alpha , 17\beta )-7-[9-[4,4,5,5,5-ПЕНТАФТОРПЕНТИЛ)СУЛЬФИНИЛ) НОНИЛ]ЭСТРА-1,3,5(10)-ТРИЕН-3,17-ДИОЛА (ФУЛВЕСТРАНТ) В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3707-21
1. Подготовлены ФГБНУ «Научно-исследовательский институт медицины труда имени академика Н.Ф. Измерова» (Л.Г. Макеева, Н.С. Горячев, Н.Л. Полуэктова).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 12 октября 2021 г.
Введение
Сборник методических указаний МУК 4.1.3707-21 - МУК 4.1.3710-21 «Измерение концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны» (выпуск 61) разработан с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ, их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочным безопасным уровням воздействия (ОБУВ).
Включенные в данный сборник методические указания по контролю вредных веществ в воздухе рабочей зоны разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.016, ГОСТ 12.1.005, ГОСТ Р 8.563, ГОСТ Р ИСО 5725.
Методики выполнены с использованием современных методов исследования, метрологически аттестованы и дают возможность контролировать концентрации химических веществ на уровне и ниже их ПДК и ОБУВ в воздухе рабочей зоны, установленных в СанПиН 1.2.3685-21 «Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания».
Свидетельство о государственной метрологической аттестации № 205-44/RA.RU.311787-2016/2017.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания (далее — МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для измерений массовой концентрации фулвестранта в воздухе рабочей зоны в диапазоне массовых концентраций 0,001 — 0,01 мг/м3.
1.2. МУК по измерению массовых концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны предназначены для лабораторий Роспотребнадзора, санитарных лабораторий промышленных предприятий при осуществлении контроля за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны, а также научных и других организаций, осуществляющих исследования за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны.
1.3 МУК носят рекомендательный характер.
II. Характеристика вещества
2.1 Физико-химические свойства фулвестранта:
Эмпирическая формула: C32H47F5O3S.
Регистрационный номер CAS: 129453-61-8.
Фулвестрант — белый или почти белый кристаллический порошок с температурой плавления 104 — 106 °C, очень мало растворим в воде, легко растворим в этиловом спирте и диметилсульфоксиде, растворим в хлористом метилене.
Агрегатное состояние в воздухе — аэрозоль.
2.2 Токсикологическая характеристика фулвестранта:
- высокоактивный противоопухолевый антиэстрогенный препарат, обладает кумулятивной активностью, оказывает выраженное влияние на репродуктивную систему организма.
III. Метрологические характеристики
3.1. При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой при выполнении измерений массовой концентрации фулвестранта метрологические характеристики не превышают значений, представленных в табл. 1 (при доверительной вероятности P = 0,95).
Метрологические характеристики методики
IV. Метод измерений
4.1. Измерение массовой концентрации фулвестранта выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуоресцентным детектированием. Метод основан на разделении фулвестранта и других компонентов анализируемой смеси на хроматографической колонке, заполненной сорбентом с последующей регистрацией фулвестранта с помощью флуоресцентного детектора. Сигнал детектора прямо пропорционален концентрации фулвестранта в анализируемой пробе.
Измерение проводят при длине волны 610 нм.
Отбор проб проводят с концентрированием на аналитические аэрозольные фильтры.
Минимально определяемое содержание фулвестранта в анализируемом объеме раствора пробы — 0,005 мкг.
Нижний предел измерений массовой концентрации фулвестранта в воздухе 0,001 мг/м3 (при отборе 1000 дм3 воздуха).
Метод специфичен в условиях приготовления препаративных форм на основе фулвестранта. Измерению не мешают вспомогательные вещества: этанол (96%), бензиловый спирт, бензилбензоат.
V. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
5.1 Средства измерений
| Хроматограф жидкостной с флуоресцентным детектором, с термостатом колонки и соответствующей системой сбора хроматографических данных | |
|---|---|
| Весы лабораторные с наибольшим пределом взвешивания 200 г, диапазон взвешивания по шкале 1 — 100 мг, цена деления шкалы 1 мг, погрешность взвешивания по шкале +/- 0,2 мг | ГОСТ OIML R 76-1 |
| Аспирационное устройство трехканальное с диапазоном расхода 40,0 — 200 дм3/мин и пределом допустимой погрешности +/- 5% | ТУ 4215-000-11696625 |
| Колбы мерные, 2-50-2, 2-100-2, 2-1000-2 | ГОСТ 1770 |
| Пипетки, 1-1-2-1, 1-1-2-5, 1-1-2-10 | ГОСТ 29227 |
| Пробирки мерные с пришлифованными пробками, П-2-10-14/23 ХС | ГОСТ 1770 |
| Цилиндры мерные, 1-500, 1-1000 | ГОСТ 1770 |
| Микрошприц для хроматографии вместимостью 0,05 см3 | ТУ 4215-002-84030495 |
Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
5.2 Реактивы
| Фулвестрант с содержанием основного вещества не менее 98,0% в пересчете на сухое вещество, НД: Сертификат анализа от июня 2014 года | |
|---|---|
| Ацетонитрил особо чистый | ТУ 6-09-14-2167 |
| Спирт этиловый 96% ректификованный | ГОСТ Р 51723 |
| Вода дистиллированная | ГОСТ Р 58144 |
| Вода особо чистая | ТУ 6-09-2502 |
Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.
5.3 Вспомогательные устройства и материалы
| Колонка аналитическая, размером 150 мм x 4,6 мм, заполненная сорбентом C 8 с размером частиц 3,5 мкм | |
|---|---|
| Аналитические аэрозольные фильтры гидрофобные на основе перхлорвинила с площадью рабочей поверхности 20 см2 | ТУ 95-1892 |
| Фильтродержатели | ТУ 95.72.05 |
| Мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм | ТУ 9471-002-10471723 |
| Бюксы стеклянные | ГОСТ 25336 |
| Палочки стеклянные | ГОСТ 25336 |
| Воронки химические | ГОСТ 25336 |
| Дистиллятор | ГОСТ Р 50444 |
| Шкаф сушильный | ТУ 61-1-721 |
Примечание: Допускается использование оборудования, вспомогательных устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
VI. Требования безопасности
6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007, ГОСТ 12.1.005.
6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004. Должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Необходимо провести обучение работающих правилам безопасности труда согласно ГОСТ 12.0.004.
6.3. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.
6.4. Помещение лаборатории оборудуются приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать гигиенических нормативов <1>.
<1> СанПиН 1.2.3685-21 «Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания».
VII. Требования к квалификации оператора
7.1. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VIII. Требования к условиям измерений
8.1 Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:
| - температура воздуха | (20 +/- 5) °C; |
|---|---|
| - атмосферное давление | (84 — 106) кПа; |
| - относительная влажность воздуха, не более | 80%. |
8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
IX. Подготовка к выполнению измерений
9.1. Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовка жидкостного хроматографа, установление градуировочной характеристики, отбор проб воздуха.
9.2. Приготовление основного раствора фулвестранта: основной раствор фулвестранта с массовой концентрацией 1000 мкг/см3 готовят растворением 0,1000 +/- 0,0002 г фулвестранта в спирте этиловом 96% в мерной колбе вместимостью 100 см3. Срок хранения раствора 1 месяц в холодильнике.
9.3. Приготовление рабочего раствора фулвестранта № 1: рабочий раствор фулвестранта № 1 с массовой концентрацией 50 мкг/см3 готовят разбавлением 5,0 см3 основного раствора фулвестранта спиртом этиловым 96% в мерной колбе вместимостью 100 см3. Срок хранения раствора 2 недели в холодильнике.
9.4. Приготовление рабочего раствора фулвестранта № 2: рабочий раствор фулвестранта № 2 с массовой концентрацией 10 мкг/см3 готовят разбавлением 10,0 см3 рабочего раствора фулвестранта № 1 спиртом этиловым 96% в мерной колбе вместимостью 50 см3. Срок хранения раствора 1 неделя в холодильнике.
9.5. Приготовление подвижной фазы — смеси ацетонитрила и воды особо чистой с объемным соотношением (7 : 3): в мерной колбе вместимостью 1000 см3 смешивают 700 см3 ацетонитрила и 300 см3 воды особо чистой. Перед использованием подвижную фазу фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и дегазируют. Срок хранения раствора 1 неделя в хорошо укупоренной таре в защищенном от света месте, в холодильнике.
9.6. Подготовку хроматографа проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.
Установление градуировочной характеристики
9.7. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пиков (приборные единицы) от содержания фулвестранта в анализируемом объеме градуировочных растворов, устанавливают по методу абсолютной градуировки по шести сериям измерений по шести концентрациям вещества в каждой серии и контрольного раствора № 0 согласно табл. 2.
Растворы для установления градуировочной характеристики при определении фулвестранта
| № градуировочного раствора | Объем рабочего раствора с концентрацией № 1 фулвестранта 50 мкг/см3, см3 | Объем рабочего раствора № 2 с концентрацией фулвестранта 10 мкг/см3, см3 | Содержание фулвестранта на фильтре, мкг | Массовая концентрация фулвестранта в градуировочном растворе, мкг/см3 | Содержание фулвестранта в анализируемом объеме градуировочного раствора, мкг |
| 0 <*> | 0,00 | 0,0 | 0,0 | 0,0 | 0,000 |
| 1 | 0,00 | 0,1 | 1,0 | 0,1 | 0,005 |
| 2 | 0,00 | 0,2 | 2,0 | 0,2 | 0,010 |
| 3 | 0,00 | 0,4 | 4,0 | 0,4 | 0,020 |
| 4 | 0,12 | 0,0 | 6,0 | 0,6 | 0,030 |
| 5 | 0,16 | 0,0 | 8,0 | 0,8 | 0,040 |
| 6 | 0,20 | 0,0 | 10,0 | 1,0 | 0,050 |
| <*> — контрольный раствор Градуировочные растворы используют свежеприготовленными | |||||
На аналитические аэрозольные фильтры, помещенные в бюксы, пипеткой вместимостью 1 см3 наносят рабочий раствор фулвестранта № 1 с массовой концентрацией 50 мкг/см3 и рабочий раствор фулвестранта № 2 с массовой концентрацией 10 мкг/см3 в соответствии с табл. 2. Фильтры подсушивают при комнатной температуре и с помощью пипетки вместимостью 5,0 см3, приливают по 5,0 см3 спирта этилового 96% и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтры тщательно отжимают, растворы сливают в мерные пробирки вместимостью 10 см3. Фильтры повторно обрабатывают 5,0 см3 спирта этилового 96% и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой, затем фильтры тщательно отжимают и удаляют. Растворы сливают в те же пробирки и доводят объем до 10,0 см3 спиртом этиловым 96%. Далее растворы фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм в хроматографические виалы. Аналогично обрабатывается чистый аэрозольный фильтр (контрольный раствор).
Инжектируют в хроматограф по 0,05 см3 каждого из градуировочных растворов.
По полученным данным строят градуировочную характеристику зависимости площади пика (приборные единицы) от содержания фулвестранта в анализируемом объеме градуировочного раствора (мкг).
9.8 Условия хроматографирования градуировочных растворов и анализируемых проб:
Контроль стабильности градуировочной характеристики
9.9. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа (после ремонта и поверки прибора). Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
Один раз в год градуировочную характеристику устанавливают заново.
Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества по п. 9.7 (соответствующих началу, середине и концу диапазона измерений) и анализируют в точном соответствии с методикой.
Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:
\frac{|S_{\text{изм}} - S_{\text{гр}}|}{S_{\text{гр}}} \cdot 100 \leq K_{\text{гр}} , где (1)
Sизм, Sгр — значение площади пика (приборные единицы) фулвестранта в образце для контроля, измеренное и найденное по градуировочной характеристике соответственно;
Kгр — норматив контроля, K_{\text{гр}} = 0,5 \cdot \delta , где
\pm \delta — границы относительной погрешности, % (табл. 1).
Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то выполняют повторное хроматографирование этого образца с целью исключения результата, содержащего грубую ошибку.
Если градуировочная характеристика не стабильна и условие (1) не выполняется для двух или более образцов градуировочных растворов, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для установления градуировочной характеристики, предусмотренных методикой (табл. 2).
При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики ее устанавливают заново.
9.10. Отбор проб проводят с учетом требований ГОСТ 12.1. и Р 2.2.2006.
Одновременно отбирают две пробы. При отборе проб фиксируется температура воздуха и атмосферное давление.
Воздух аспирируют через аналитический аэрозольный фильтр, помещенный в фильтродержатель, снабженный металлической сеткой. Для определения массовой концентрации фулвестранта на уровне 0,001 мг/м3 отбирают не менее 1000 дм3 воздуха в течение 10 минут.
Срок хранения отобранных проб в бюксах 1 сутки в холодильнике.
X. Выполнение измерения
10.1. Аналитический аэрозольный фильтр с отобранной пробой помещают в бюкс и с помощью пипетки вместимостью 5 см3 приливают 5,0 см3 спирта этилового 96% периодически помешивая при этом стеклянной палочкой в течение 15 минут для лучшего растворения вещества. Затем фильтр тщательно отжимают, раствор сливают в мерную пробирку вместимостью 10 см3. Фильтр повторно обрабатывают 5,0 см3 спирта этилового 96% оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой, затем тщательно отжимают и удаляют. Раствор сливают в ту же пробирку, объем раствора доводят до 10 см3 спиртом этиловым 96%. Далее раствор фильтруют через мембранные фильтры с диаметром пор 0,45 мкм в хроматографическую виалу.
Хроматографический анализ проб выполняют в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов.
Регистрируют не менее двух хроматограмм для каждой пробы, соблюдая все условия, требуемые для градуировки хроматографической системы.
Устанавливают содержание фулвестранта (в мкг) в анализируемом объеме пробы по градуировочной характеристике (п. 9.7).
Примечание: Фильтрование анализируемых проб проводится для удаления нерастворимых в спирте этиловом 96% вспомогательных веществ, входящих в состав препаративных форм фулвестранта.
XI. Вычисление результатов измерений
11.1 Массовую концентрацию фулвестранта в воздухе рабочей зоны C, мг/м3, вычисляют по формуле:
C = \frac{\text{а} \cdot B}{\text{б} \cdot V_{20}} , где (2)
а — содержание вещества в анализируемом объеме раствора пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг;
B — общий объем раствора пробы, см3;
б — анализируемый объем раствора пробы, см3;
V20 — объем воздуха, отобранный для анализа, приведенный к условиям в соответствии с ГОСТ 8.395 при температуре 293 °К (20 °C) и атмосферном давлении 101,3 кПа (760 мм рт. ст.), дм3 (приложение 1 к настоящим методическим указаниям).
За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости:
\frac{2 \cdot |C_{1} - C_{2}| \cdot 100}{C_{1} + C_{2}} \leq r , где (3)
C1, C2 - результаты параллельных определений массовой концентрации фулвестранта в воздухе рабочей зоны, мг/м3;
r — значение предела повторяемости, % (табл. 1).
Если условие (3) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями методики измерений.
XII. Оформление результатов измерений
12.1 Результат количественного химического анализа представляют в виде:
\overline{C} \pm 0,01 \cdot \delta \cdot \overline{C} при P = 0,95, где
\overline{C} — среднее арифметическое значение результатов n определений, признанных приемлемыми, мг/м3;
\pm \delta — границы относительной погрешности измерений, % (табл. 1).
Если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале: «массовая концентрация фулвестранта менее 0,001 мг/м3 (более 0,01 мг/м3)».
XIII. Контроль результатов измерений
Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости
13.1 Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:
а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;
б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сравнительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).
Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.
Приемлемость результатов измерений, полученных в двух лабораториях оценивают сравнением разности этих результатов с критической разностью CD0,95 по формуле:
\frac{2 \cdot |C_{\text{ср}1} - C_{\text{ср}2}| \cdot 100}{C_{\text{ср}1} + C_{\text{ср}2}} \leq CD_{0,95} , где (4)
Cср1, Cср2 — средние значения массовой концентрации фулвестранта, полученные в первой и второй лабораториях, мг/м3;
CD0,95 — значение критической разности, % (табл. 1).
Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6.
При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6.
Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории
13.2. Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6, используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по ГОСТ Р ИСО 5725-6 и показателя правильности по ГОСТ Р ИСО 5725-6.
Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.
При неудовлетворительных результатах контроля, например, при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.
Методические указания разработаны сотрудниками ООО «Алгама» (Сергеюк Н.П.), АО «Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ» (Голубева М.И., Крымова Л.И.), ФГБУ «Научный центр биомедицинских технологий ФМБА» (Савченко А.Ю.), ООО «ФНЦ» ИннофармаТех» (Шохин И.Е.), АНО «Международная ассоциация клинических фармакологов» (Раменская Г.В.).
Приложение 1 к МУК 4.1.3707 - 4.1.3710-21
ПРИВЕДЕНИЕ ОБЪЕМА ВОЗДУХА К СТАНДАРТНЫМ УСЛОВИЯМ
Приведение объема воздуха, отобранного для анализа, в соответствии с ГОСТ 8.395-80 при температуре 293 °К (20 °C) и атмосферном давлении 101,3 кПа (760 мм рт. ст.), дм3
V_{20} = \frac{V_{t} \cdot 293 \cdot P}{(273 + t) \cdot 101,33} , где
Vt — объем воздуха, отобранный для анализа, дм3;
P — барометрическое давление, кПа (101,33 кПа = 760 мм рт. ст.);
t — температура воздуха в месте отбора пробы, °C.
Для удобства расчета V20 следует пользоваться таблицей коэффициентов (Приложение 2). Для приведения воздуха к температуре 293 °К (20 °C) и атмосферному давлению 101,3 кПа надо умножить Vt на соответствующий коэффициент.
Приложение 2 к МУК 4.1.3707 - 4.1.3710-21
КОЭФФИЦИЕНТЫ ДЛЯ ПРИВЕДЕНИЯ ОБЪЕМА ВОЗДУХА, ОТОБРАННОГО ДЛЯ АНАЛИЗА, В СООТВЕТСТВИИ С ГОСТ 8.395-80 ПРИ ТЕМПЕРАТУРЕ 293 °К (20 °C) И АТМОСФЕРНОМ ДАВЛЕНИИ 101,3 кПа (760 ММ РТ. СТ.)
Приложение 3 к МУК 4.1.3707 - 4.1.3710-21
УКАЗАТЕЛЬ ОСНОВНЫХ СИНОНИМОВ, ТЕХНИЧЕСКИХ, ТОРГОВЫХ И ФИРМЕННЫХ НАЗВАНИЙ ВЕЩЕСТВ
| Название | Номер страницы |
|---|---|
| Фулвестрант | 5 |
| Иксазомиба цитрат | 16 |
| Осимертиниба мезилат | 29 |
| Дапаглифлозин | 42 |
| ББК 51.24 |
|---|