МУК 4.1.3638-20. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств цифлуфенамида в яблоках, яблочном соке, огурцах, томатах, томатном соке и моркови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 18.08.2020)
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 18 августа 2020 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ЦИФЛУФЕНАМИДА В ЯБЛОКАХ, ЯБЛОЧНОМ СОКЕ, ОГУРЦАХ, ТОМАТАХ, ТОМАТНОМ СОКЕ И МОРКОВИ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3638-20
1. Разработаны ФБУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (В.Н. Ракитский, Н.Е. Федорова, В.В. Баюшева).
2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 18 августа 2020 г.
I. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания (далее — МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее — ВЭЖХ) для определения в яблоках, яблочном соке, огурцах, томатах, томатном соке и моркови массовой концентрации цифлуфенамида в виде цифлуфенамида-E в диапазоне 0,001 — 0,01 мг/кг и цифлуфенамида-Z в диапазоне 0,009 — 0,09 мг/кг.
1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы организациями, осуществляющими исследования в области безопасности и качества пищевой продукции и продовольственного сырья.
1.3 МУК носят рекомендательный характер.
II. Физико-химические и токсикологические свойства
2.1. Цифлуфенамид — в природе представлен в виде E- и Z-изомеров (E)-N-( \alpha -(цикло-пропилметоксиимино)-2,3-дифтор-6-(трифторметил)бензил]-2-фенил-ацетамид и (Z)-N-( \alpha -(цикло-пропилметоксиимино)-2,3-дифтор-6-(трифторметил)бензил]-2-фенил-ацетамид <1>. Брутто-формула C20H17F5N2O2. Молекулярная масса 412,36. Порошок белого цвета со слабым сладковатым запахом. Температура плавления 61,5 — 62,5 °C. Давление паров 3,54·10-3 мПа (при 20 °C). Коэффициент распределения н-октанол/вода Kow log P = 4,55 — 4,68 (при 20 °C, pH 9,95 — 4,05). Плотность 1,35 (при 20 °C). Растворимость в воде 0,925 г/дм3 (при 20 °C), pH 6,15 — 6,35). Растворимость в органических растворителях (при 25 °C, г/дм3): ацетон — более 198; дихлорметан — более 331; хлороформ — более 372; этанол — более 198; этилацетат — более 225; метанол — более 198. Стабилен при нормальных условиях, а также при нагревании до 70 °C. Гидролитически стабилен в щелочной и нейтральной средах.
<1> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).
2.2. Острая пероральная токсичность (LD50) для крыс > 5000 мг/кг (самцы), > 5000 мг/кг (самки); острая дермальная токсичность (LD50) для крыс > 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC50) для крыс > 4,76 мг/дм3.
2.3. Цифлуфенамид — системный фунгицид с длительным профилактическим и выраженным лечебным действием против широкого спектра патогенов грибной этиологии.
III. Погрешность измерений
3.1. При соблюдении всех регламентируемых условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерения при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/м3 | Показатель точности <2> (граница относительной погрешности), \pm \delta , %, P = 0,95 | Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), \sigma_{r} , % | Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), \sigma_{R} , % | Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, % | Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях), R, % |
| Цифлуфенамид-E | ||||||
| Яблоки | 0,001 — 0,01 | 50 | 9,3 | 13,1 | 26 | 37 |
| Яблочный сок | 0,001 — 0,01 | 50 | 1,4 | 2,0 | 4 | 5 |
| Огурцы | 0,001 — 0,01 | 50 | 4,7 | 6,5 | 13 | 18 |
| Томаты | 0,001 — 0,01 | 50 | 4,6 | 6,5 | 13 | 18 |
| Томатный сок | 0,001 — 0,01 | 50 | 1,8 | 2,5 | 5 | 7 |
| Морковь | 0,001 — 0,01 | 50 | 2,6 | 3,6 | 7 | 10 |
| Цифлуфенамид-Z | ||||||
| Яблоки | 0,009 — 0,09 | 50 | 11,1 | 15,5 | 31 | 43 |
| Яблочный сок | 0,009 — 0,09 | 50 | 5,0 | 7,0 | 14 | 20 |
| Огурцы | 0,009 — 0,09 | 50 | 7,6 | 10,7 | 21 | 30 |
| Томаты | 0,009 — 0,09 | 50 | 8,3 | 11,6 | 23 | 32 |
| Томатный сок | 0,009 — 0,09 | 62 | 4,1 | 5,7 | 11 | 16 |
| Морковь | 0,009 — 0,09 | 58 | 9,6 | 13,4 | 27 | 38 |
<2> Соответствует расширенной неопределенности Uотн. (в относительных единицах) при коэффициенте охвата k = 2.
3.2. Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 3.2.
Полнота извлечения цифлуфенамида, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для n = 20, P = 0,95
IV. Метод измерений
4.1. Методика основана на определении вещества с помощью ВЭЖХ на обращенной фазе с тройным квадрупольным масс-спектрометрическим детектором (далее — ВЭЖХ-МС/МС).
4.2. Экстракцию веществ из анализируемых проб выполняют ацетонитрилом, содержащим 1% уксусной кислоты, с использованием смеси солей для экстракции (смесь сульфата магния и хлорида натрия). Очистку экстрактов проводят методом дисперсионной твердофазной экстракции с применением смеси сорбентов на основе амина, октадецилсилана и графитизированной сажи.
4.3. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки. Нижний предел измерения цифлуфенамида-E в анализируемом объеме пробы — 2,5 пг, цифлуфенамида-Z — 22,5 пг.
V. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
| Наименование средства измерений | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| Жидкостный хроматограф с тандемным масс-спектрометрическим детектором, тройной квадруполь, снабженный автоматическим пробоотборником и термостатом колонки | Внесено в Реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Прибор для измерения атмосферного давления, температуры и влажности воздуха | Внесено в Реестр «Утвержденные типы средств измерений» Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| Весы лабораторные аналитические, предел допустимой погрешности +/- 0,1 мг | ГОСТ Р 53228 |
| Весы лабораторные, предел допустимой погрешности +/- 0,01 г | ГОСТ Р 53228 |
| Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-500-2, 2-1000-2 | ГОСТ 1770 |
| Меры массы | ГОСТ OIML R 111-1 |
| Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0, 2,0, 5,0, 10 см3 | ГОСТ 29227 |
| Термометр лабораторный, пределы измерения -35 — +50 °C | ГОСТ 28498 |
| Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, 100, 250 и 500 см3 Гигрометр с диапазоном измерений относительной влажности от 30% до 90% |
ГОСТ 1770 |
Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
| Наименование реактивов | Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
|---|---|
| Цифлуфенамид, представленный смесью изомеров E и Z в соотношении 1:9, аналитический стандарт | CAS 180409-60-3 Содержание основных компонентов не менее 95,0% |
| Азот осч, из баллона | ГОСТ 9293 |
| Ацетонитрил | Квалификация не ниже «для ВЭЖХ» |
| Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная или деионизованная) | ГОСТ Р 52501 |
| Калий углекислый (карбонат калия, поташ), хч, прокаленный | ГОСТ 4221 |
| Магний сернокислый (сульфат магния), безводный | Квалификация не ниже «химически чистый» |
| Натрий хлористый (хлорид натрия), хч | ГОСТ 4233 |
| Сорбент для твердофазной экстракции на основе силикагеля с привитыми пропиламинными группами, тип — первичный-вторичный амин | - |
| Сорбент для твердофазной экстракции на основе силикагеля с привитыми октадецильными группами (CH2)17CH3 | - |
| Графитизированная сажа | - |
| Метиловый спирт (метанол), хч | ГОСТ 6995 |
| Уксусная кислота | Ледяная по ГОСТ 61 |
| Аммоний уксуснокислый (ацетат аммония) | ч.д.а, массовая доля уксуснокислого аммония не менее 97% по ГОСТ 3117 |
| Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид, пентоксид фосфора) | Квалификация не ниже «химически чистый» |
Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.
Вспомогательные устройства, оборудование, материалы
Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
VI. Требования безопасности
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовые хроматографы.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
6.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), необходимо соблюдать правила <3>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.
<3> Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением, утвержденные приказом Ростехнадзора от 25.03.2014 № 116.
6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VII. Условия выполнения измерений
7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха 20 +/- 5 °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на газовых хроматографах проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
VIII. Подготовка к выполнению измерений
8.1. Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, градуировочных растворов, растворов внесения, смеси растворителей для растворения проб, компонентов подвижной фазы, смеси солей для экстракции и смеси сорбентов для очистки экстрактов, установление градуировочных характеристик, отбор проб.
8.2. Очистка органических растворителей. Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30. Хранят в емкости из темного стекла не более 3 месяцев.
Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм3 ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют; непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм3 ацетонитрила 10 г карбоната калия).
8.3 Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ.
Компонент А: 0,01 М ацетат аммония + 0,1% (по объему) уксусная кислота в смеси вода-ацетонитрил (9:1). В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 0,77 г ацетата аммония, растворяют в 300 см3 бидистиллированной воды, вносят 1,0 см3 уксусной кислоты, добавляют 600 см3 воды, доводят до метки ацетонитрилом, перемешивают.
Компонент Б: 0,01 М ацетат аммония + 0,1% (по объему) уксусная кислота в смеси вода-ацетонитрил (1:9). В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 0,77 г ацетата аммония, растворяют в 100 см3 бидистиллированной воды, вносят 1,0 см3 уксусной кислоты, доводят до метки ацетонитрилом, перемешивают.
Растворы компонентов подвижной фазы хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.
8.4. Приготовление растворов для экстракции и градуировочных растворов.
8.4.1. Приготовление раствора уксусной кислоты в ацетонитриле с объемной долей 1% (1%-й раствор). В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 300 — 400 см3 ацетонитрила, вносят 10 см3 ледяной уксусной кислоты, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают.
8.4.2. В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 500 см3 ацетонитрила, доводят до метки бидистиллированной водой, перемешивают.
8.4.3. В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 500 см3 метанола, доводят до метки бидистиллированной водой, перемешивают.
Растворы хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.
8.5 Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения.
8.5.1. Исходный раствор цифлуфенамида, представленного смесью изомеров E и Z в соотношении 1:9, для градуировки (концентрация 100 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 0,0100 +/- 0,0001 г цифлуфенамида, добавляют 50 — 70 см3 ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранится в холодильнике при температуре 4 — 6 °C в течение 6 месяцев.
Растворы № 1 — 6 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходных растворов для градуировки.
8.5.2. Раствор № 1 цифлуфенамида, представленного смесью изомеров E и Z в соотношении 1:9, для градуировки и внесения (концентрация 1 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 1 см3 исходного раствора цифлуфенамида (п. 8.5.1) с концентрацией 100 мкг/см3, разбавляют до метки смесью, приготовленной по п. 8.4.2, перемешивают. Раствор № 1 хранится в холодильнике при температуре 4 — 6 °C в течение 6 месяцев.
8.5.3. Рабочие растворы № 2 — 6 цифлуфенамида, представленного смесью изомеров E и Z в соотношении 1:9, для градуировки (суммарные концентрации 5 — 100 нг/см3, цифлуфенамид-E 0,5 — 10 нг/см3, цифлуфенамид-Z 4,5 — 90 нг/см3). В 5 мерных колб вместимостью 100 см3 помещают по 10,0, 5,0, 2,0, 1,0 и 0,5 см3 градуировочного раствора № 2 с концентрацией цифлуфенамида 1 мкг/см3 (п. 8.5.2), доводят до метки раствором, приготовленным по п. 8.4.3, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2 — 6 с суммарной концентрацией цифлуфенамида 100, 50, 20, 10 и 5 нг/см3, соответственно. Растворы хранятся в холодильнике при температуре 4 — 6 °C в течение одной недели.
8.6. Приготовление смеси солей для экстракции. Для приготовления одного набора смеси солей для экстракции смешивают 4 +/- 0,01 г магния сернокислого и 1 +/- 0,01 г натрия хлористого. До использования хранят в герметичной упаковке (не более 6 месяцев).
Примечание: возможно использование наборов солей для экстракции проб фруктов и овощей массой 10 г.
8.7. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов. Для приготовления одного набора смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 2 см3 помещают 50 +/- 4 мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичного-вторичного амина, 50 +/- 4 мг графитизированной сажи, 150 +/- 4 мг магния сернокислого и 50 +/- 4 мг твердофазного сорбента на основе октадецилсилана, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6 месяцев.
Примечание: возможно использование дисперсионных наборов для фруктов и овощей с маслом и пигментами, помещенных в полипропиленовые пробирки вместимостью 2 см3.
8.8. Кондиционирование хроматографической колонки для ВЭЖХ. Промывают колонку подвижной фазой (смесь компонентов А и Б, приготовленных по п. 8.3, в соотношении 1:1) при скорости подачи растворителя 0,2 см3/мин до установления стабильной базовой линии.
8.8 Установление градуировочных характеристик.
Градуировочные характеристики, выражающие зависимость площади пика (I) от концентрации цифлуфенамида, представленного смесью изомеров E и Z, в растворе (нг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки.
В инжектор хроматографа вводят по 5 мм3 каждого градуировочного раствора, приготовленного по п. 8.4.3, и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Осуществляют не менее 4 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков веществ, на основании которых строят градуировочные зависимости.
8.9 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание цифлуфенамида (в виде суммы E- и Z-изомеров) в которых должно охватывать весь диапазон концентраций — от 5 до 100 нг/см3.
Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемых для контроля градуировочных растворов сохраняется соотношение:
A = \frac{(X - C) \cdot 100}{C} \leq B,
где X — концентрация цифлуфенамида (в виде суммы E- и Z-изомеров) в пробе при контрольном измерении, нг/см3;
C — известная концентрация градуировочного раствора цифлуфенамида (в виде суммы E- и Z-изомеров), взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, нг/см3;
B — норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (равен 20% при P = 0,95).
IX. Отбор и хранение проб
9.1. Отбор проб осуществляется в соответствии с действующими методическими документами <4>.
<4> ГОСТ Р 54697; ГОСТ 27572; ГОСТ 1726; ГОСТ 1725; ГОСТ 32284; Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов № 2051-79 от 21.08.79.
9.2. Пробы яблок, огурцов, томатов и моркови хранят при температуре 4 — 6 °C не более недели. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре не выше минус 18 °C. Перед анализом образцы измельчают. Соки — яблочный и томатный — анализируют в день приготовления.
X. Выполнение определения
10.1 Экстракция.
Образец измельченных плодов яблок, огурцов, томатов, моркови, а также яблочного и томатного сока массой 10 г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см3, вносят 10 см3 раствора уксусной кислоты в ацетонитриле (приготовленный по п. 7.3.1), помещают в пробирку керамический гомогенизатор, закрывают крышку и интенсивно встряхивают вручную 30 с, вносят в пробирку смесь солей для экстракции (приготовленную по п. 7.5), закрывают крышкой и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин. Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин при скорости вращения 4 000 об./мин и подвергают очистке с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п. 9.2.
10.2 Очистка экстракта.
Часть экстракта (верхний слой в пробирке после центрифугирования) объемом 1,5 — 1,8 см3 с помощью пипетки переносят в пропиленовую центрифужную пробирку, содержащую смесь сорбентов, приготовленную по п. 7.6. Закрывают крышку и интенсивно встряхивают вручную в течение 30 с. Центрифугируют 15 мин при скорости вращения 4 000 об./мин. Отбирают с помощью медицинского шприца раствор, фильтруют в количестве 0,5 см3 через мембранный фильтр (размер пор 0,22 мкм) в виалу вместимостью 2 см3 с фторопластовой прокладкой и навинчивающейся крышкой, доводят до 1,0 см3 раствором, приготовленным по п. 7.3.1. Помещают в автосамплер хроматографа для анализа в условиях хроматографирования по п. 10.3.
Примечание: допускается концентрирование полученных после очистки экстрактов отдуванием в токе инертного газа при температуре не более 35 °C.
10.3 Условия хроматографирования.
Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:
- жидкостный хроматограф с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь с источником ионизации, оснащенным соосной подачей горячего азота для эффективной десольвации ионов;
- источник ионизации — электростатическое распыление (электроспрей);
- полярность положительная;
- режим работы — мониторинг множественных реакций.
- материнский ион (масса/заряд) 411,1;
- дочерние ионы (масса/заряд): 217,9 (количественный расчет), 149,9;
- напряжение на фрагментаторе, В: 104;
- энергия разрушения (соударения), В: 21 (411,1 -> 217,9), 53 (411,1 -> 149,9).
- материнский ион (масса/заряд) 411,1;
- дочерние ионы (масса/заряд): 217,9 (количественный расчет), 319,0;
- напряжение на фрагментаторе, В: 114;
- энергия разрушения (соударения), В: 17 (411,1 -> 217,9), 13 (411,1 -> 319,0);
- скорость сканирования 200 мс;
- давление на распылителе 35 psi;
- скорость осушающего газа 1 (азот) 10 дм3/мин;
- температура газа 1: 250 °C;
- скорость газа 2 (азот) 11 дм3/мин;
- температура газа 2: 340 °C;
- напряжение на капилляре 4500 В;
- температура квадруполей (1 и 3) 100 °C;
- хроматографическая колонка стальная длиной 150 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C18, зернением 1,8 мкм;
- температура колонки 35 °C;
- скорость потока элюента 0,2 см3/мин;
- объем вводимой пробы 5 мм3;
- подвижная фаза: компонент А — 0,01 М ацетат аммония + 0,1% (по объему) уксусной кислоты в смеси вода-ацетонитрил (9:1); компонент Б — 0,01 М ацетат аммония + 0,1% (по объему) уксусной кислоты в смеси вода-ацетонитрил (1:9). Режим элюирования (градиентный), пробег 12 мин (таблица 10.1).
| Время, мин | Компонент А, % | Компонент Б, % |
|---|---|---|
| 0 | 90 | 10 |
| 2,0 | 50 | 50 |
| 5,0 | 20 | 80 |
| 10 | 20 | 80 |
| 11 | 0 | 100 |
| 12 | 90 | 10 |
Линейный диапазон детектирования 2,5 — 25 пг для цифлуфенамида-E и 22,5 — 225 пг — для цифлуфенамида-Z.
Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 50 нг/см3, разбавляют ацетонитрилом, содержащим 1% уксусной кислоты (не более чем в 50 раз).
XI. Обработка результатов анализа
11.1. Содержание цифлуфенамида, представленного смесью изомеров E и Z в соотношении 1:9, в пробах яблок, яблочном соке, огурцах, томатах, томатном соке и моркови (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:
X = \frac{(A + B) \cdot V \cdot C \cdot 100}{1000 \cdot mf} ,
где A, B — концентрации цифлуфенамида-E и цифлуфенамида-Z, находящиеся в соотношении 1:9, найденные по градуировочным графикам в соответствии с величинами площадей хроматографических пиков, нг/см3;
m — масса анализируемого образца, г;
C — коэффициент, учитывающий объема экстракта, взятого для анализа, C = 20;
f — полнота извлечения вещества, выраженная в относительных единицах (величину полноты извлечения, приведенную в табл. 3.2, разделить на 100).
XII. Проверка приемлемости результатов измерений
12.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r,
где X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (табл. 3.1), при этом r = 2,8 \cdot \sigma_{r} .
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
XIII. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
(\overline{X} \pm \Delta)\text{мг}/\text{кг} при вероятности P = 0,95,
где \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100} ,
где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1 и 3.2), %.
Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание цифлуфенамида-E в пробе яблок, яблочном соке, огурцах, томатах, томатном соке и моркови — менее 0,001 мг/кг и содержание цифлуфенамида-Z в пробе яблок, яблочном соке, огурцах, томатах, томатном соке и моркови — менее 0,009 мг/кг» <5>.
<5> 0,001 мг/кг — нижний предел количественного определения цифлуфенамида-E; 0,009 мг/кг — нижний предел количественного определения цифлуфенамида-Z.
XIV. Контроль качества результатов измерений
14.1. Организация контроля качества измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725.
14.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:
C_{\text{д}} \geq \Delta_{\text{л},X} + \Delta_{\text{л},X\prime},
где \Delta_{\text{л},X}( \pm \Delta_{\text{л},X\prime}) — характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta,
где \Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100} ,
где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.
Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:
\text{К}_{\text{к}} = \overline{X}\prime - \overline{X} - C_{\text{д}},
где \overline{X}\prime , \overline{X} , Cд — среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми в главе XII) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
\text{К } = \sqrt{\Delta_{\text{л},X\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},X}^{2}} .
Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
14.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости. Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R,
где X1, X2 - результаты измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/кг;
R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. ГОСТ Р ИСО 5725 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
2. ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
3. ГОСТ 29227 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
4. ГОСТ 28498 «Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний».
5. ГОСТ 1770 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».
6. ГОСТ OIML R 111-1 «Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования».
7. ГОСТ 9293 «Азот газообразный и жидкий. Технические условия».
8. ГОСТ Р 52501 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
9. ГОСТ 20490 «Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия».
10. ГОСТ 4221 «Реактивы. Калий углекислый. Технические условия».
11. ГОСТ 6995 «Реактивы. Метанол-яд. Технические условия».
12. ГОСТ 5848 «Реактивы. Кислота муравьиная. Технические условия».
13. ГОСТ 4233 «Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия».
14. ГОСТ 3117 «Реактивы. Аммоний уксуснокислый. Технические условия».
15. ГОСТ 61 «Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия».
16. ГОСТ 25336 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».
17. ГОСТ 12.1.007 «Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
18. ГОСТ 12.1.019 «Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
19. ГОСТ 12.1.004 «Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная безопасность. Общие требования».
20. ГОСТ 12.4.009 «Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
21. ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Организация обучения безопасности труда. Общие положения».
22. Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением, утвержденные приказом Ростехнадзора от 25.03.2014 г. № 116.
23. ГОСТ Р 54697 «Яблоки свежие, реализуемые в розничной торговой сети. Технические условия».
24. ГОСТ 27572 «Яблоки свежие для промышленной переработки. Технические условия».
25. ГОСТ 1726 «Огурцы свежие. Технические условия».
26. ГОСТ 1725 «Томаты свежие. Технические условия».
27. ГОСТ 32284 «Морковь столовая свежая, реализуемая в розничной торговой сети. Технические условия».
28. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов № 2051-79 от 21.08.79.