МУК 4.1.3556-19. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств диклосулама в воде, почве, зерне и масле сои методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания

(утв. Роспотребнадзором 09.10.2019)

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 9 октября 2019 года

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ДИКЛОСУЛАМА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И МАСЛЕ СОИ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3556-19

1. Разработаны ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт фитопатологии» (Р.А. Стрелецкий, В.В. Демин, О.Д. Микитюк).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 9 октября 2019 г.

3. Введены впервые.

I. Область применения

1.1. Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с УФ-детектированием для определения массовых концентраций диклосулама в воде в диапазоне 0,001 — 0,010 мг/дм3 и в почве в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг, а также уровня их остаточных количеств в зерне и масле сои в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг.

1.2. Методические указания предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, а также могут быть использованы организациями, аккредитованными в установленном порядке на проведение исследований продовольственного сырья, пищевых продуктов.

1.3 Методические указания носят рекомендательный характер.

II. Общие положения

2.1 Диклосулам.

2,6-дихлор-5-этокси-7-фтор[1,2,4,]триазол[1,5-с]пиримидин-2-сульфоанилид

Рис. 1. Структурная формула диклосулама

Эмпирическая формула: C₁₃H₁₀Cl₂FN₅O₃S.

Молекулярная масса: 406,22.

Агрегатное состояние: порошок.

Цвет, запах: белого цвета.

Давление паров: 6,67 x 10-10 мПа (25 °C).

Коэффициент распределения октанол/вода (при pH 7, 20 °C): logP = 0,85.

Температура плавления: 220 °C.

Растворимость в воде (мг/дм3, 20 °C): 6,32.

Растворимость в органических растворителях (мг/дм3, при 20 °C): ацетон — 7970; ацетонитрил — 4590; метилен хлористый — 2170; этилацетат — 1450; метанол — 813; октанол — 44,2; толуол — 58,8.

Стабильность в водных растворах — нет данных.

ДТ50 в почве: 49 суток.

Краткая токсикологическая характеристика: диклосулам относится к малоопасным веществам по острой пероральной (ЛД50 для крыс более 5000 мг/кг) и по дермальной токсичности (ЛД50 для кроликов более 2000 мг/кг массы тела) и к умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК50 для крыс (4 часа) более 5,04 мг/м3).

Препарат обладает системным действием, проникая через корни и листья, ингибирует активность ацетолактатсинтазы (ALS) и подавляет синтез разветвленных аминокислот — лейцина, валина, изолейцина.

III. Метод измерений

3.1. Принцип метода

Метод основан на определении диклосулама с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием ультрафиолетового детектора (ВЭЖХ-УФ).

Определение диклосулама в воде проводится после его экстракции хлористым метиленом из подкисленного образца воды.

Определение диклосулама в почве проводится после его экстракции смесью ацетона с водой, очистки и концентрирования в системе несмешивающихся растворителей, очистки на концентрирующих патронах C18 и дополнительного концентрирования.

Определение диклосулама в зерне сои проводится после его экстракции подкисленным ацетонитрилом, очистки и концентрирования в системе несмешивающихся растворителей, очистки на концентрирующих патронах C18 и дополнительного концентрирования.

Определение диклосулама в масле сои проводится после его экстракции ацетонитрилом, очистки и концентрирования в системе несмешивающихся растворителей, очистки на концентрирующих патронах C18 и дополнительного концентрирования.

Идентификация диклосулама проводится по времени удерживания. Концентрацию диклосулама определяют по площадям соответствующих хроматографических пиков на хроматограммах по методу абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором колонки и условий программирования.

3.2. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры для диклосулама

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для диклосулама

IV. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

4.1. Средства измерений

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

4.2. Реактивы

Примечание. Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

4.3. Вспомогательные устройства и материалы

V. Требования при проведении испытаний

5.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на прибор.

5.2. Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать гигиенических нормативов <1>.

<1> ГН 2.2.5.3532-18 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны»; ГН 2.2.5.2308-07 «Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны».

VI. Требования к квалификации операторов

6.1. К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

VII. Условия измерений

7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

• процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;
• выполнение измерений на жидкостном хроматографе с УФ-детектором проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

VIII. Подготовка к выполнению определений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочных характеристик.

8.1. Подготовка органических растворителей

8.1.1 Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Перегоняют и собирают фракции, отогнанные при температуре 81,5 °C.

8.1.2 Приготовление бидистиллированной воды

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 часов.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C.

8.1.3 Очистка хлористого метилена

Хлористый метилен промывают равным объемом 5% раствора натрия углекислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Хлористый метилен выдерживают над осушителем в течение 12 — 24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см3 аппарата для перегонки растворителей. Перегоняют и собирают фракции, отогнанные при температуре 40,0 °C.

8.2. Приготовление растворов для проведения анализа

8.2.1 Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ

8.2.1.1 Приготовление 0,05% водного раствора уксусной кислоты.

В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 500 см3 бидистиллированной воды, прибавляют 0,5 см3 уксусной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки бидистиллированной водой.

8.2.1.2 Приготовление 0,05% раствора уксусной кислоты в ацетонитриле.

В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 500 см3 ацетонитрила, прибавляют 0,5 см3 уксусной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки ацетонитрилом.

8.2.2 Приготовление рабочих растворов

8.2.2.1 Приготовление 5% раствора натрия углекислого.

В мерную колбу на 1000 см3 переносят 50 г гидрокарбоната натрия, добавляют 200 — 300 см3 дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки.

8.2.2.2 Приготовление подкисленного ацетонитрила для экстракции.

В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 500 см3 ацетонитрила, прибавляют 50,0 см3 уксусной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки ацетонитрилом.

8.2.2.3 Приготовление 6 М раствора соляной кислоты.

Мерным цилиндром отбирают 246 см3 концентрированной соляной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 500 см3, куда предварительно наливают около 100 см3 дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

8.2.2.4 Приготовление 80% раствора ацетона в воде.

В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 800 см3 ацетона, прибавляют 200 см3 дистиллированной воды, перемешивают, объем доводят до метки ацетоном.

8.2.2.5 Приготовление 0,2 М водного раствора муравьиной кислоты.

В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 500 см3 дистиллированной воды, прибавляют 7,5 см3 муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки дистиллированной водой.

8.2.2.6. Приготовление 10%-го раствора ацетонитрила в 0,2 М муравьиной кислоте.

В мерную колбу объемом 250 см3 помещают 100 см3 0,2 М муравьиной кислоты, прибавляют 25 см3 ацетонитрила, перемешивают, объем доводят до метки 0,2 М муравьиной кислотой.

8.2.2.7 Приготовление 50%-го раствора ацетонитрила в воде.

В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 500 см3 ацетонитрила, доводят объем до метки дистиллированной водой и перемешивают.

8.2.2.8 Приготовление 5%-го раствора этилацетата в гексане.

В мерную колбу объемом 500 см3 помещают 250 см3 гексана, прибавляют 25 см3 этилацетата, перемешивают и доводят объем до метки гексаном.

8.2.2.9 Приготовление насыщенного раствора хлорида натрия.

В стеклянную бутыль с завинчивающейся крышкой объемом 1 дм3 помещают 250 граммов хлорида натрия, прибавляют 500 см3 дистиллированной воды, перемешивают и дают настояться в течение суток.

8.2.2.10 Приготовление ацетонитрила, насыщенного гексаном.

В делительную воронку объемом 1 дм3 помещают 500 см3 ацетонитрила и 100 см3 гексана. Интенсивно встряхивают в течение 2 минут, дают расслоиться и отбирают нижний ацетонитрильный слой.

8.2.2.11 Приготовление 0,05 М водного раствора гидрофосфата натрия.

В мерную колбу на 1000 см3 переносят 17,91 г гидрофосфата натрия, добавляют 200 — 300 см3 дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки.

8.2.2.12 Приготовление 0,05 М водного раствора дигидрофосфата натрия.

В мерную колбу на 1000 см3 переносят 7,8 г дигидрофосфата натрия, добавляют 200 — 300 см3 дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки.

8.2.2.13 Приготовление 0,05 М фосфатного буфера.

В мерную колбу объемом 1 дм3 помещают 500 см3 дистиллированной воды, прибавляют 30,5 см3 0,05 М раствора гидрофосфата натрия (п. 8.2.2.11) и 19,5 см3 0,5 М раствора дигидрофосфата натрия (п. 8.2.2.12), перемешивают и доводят до метки водой.

8.2.2.14 Приготовление 6 М раствора соляной кислоты.

Мерным цилиндром отбирают 246 см3 концентрированной соляной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 500 см3, куда предварительно наливают около 100 см3 дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

8.2.3 Приготовление градуировочных растворов

8.2.3.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией диклосулама 1,0 мг/см3.

Взвешивают 10 мг диклосулама в мерной колбе объемом 10 см3. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике при температуре (+4 +/- 2) °C в течение 6 месяцев.

8.2.3.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией диклосулама 10,0 мкг/см3.

Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см3 и помещают в мерную колбу объемом 100 см3. Доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании. Стандартный раствор № 2 используется для для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранят в холодильнике при температуре (+4 +/- 2) °C не более 2 месяцев.

8.2.3.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией диклосулама 2,5 мкг/см3.

Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 2,5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 3 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре (+4 +/- 2) °C не более 30 суток.

8.2.3.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией диклосулама 1,0 мкг/см3.

Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 4 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре (+4 +/- 2) °C не более 30 суток.

8.2.3.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией диклосулама 0,5 мкг/см3.

Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 5 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике при температуре (+4 +/- 2) °C при температуре (+4 +/- 2) °C не более 30 суток.

8.2.3.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией диклосулама 0,2 мкг/см3.

Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 6 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 30 суток.

8.2.3.7. Стандартные растворы диклосулама с концентрацией по 0,5; 0,2; 0,1; 0,05 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы.

Методом последовательного разведения ацетонитрилом стандартного раствора № 2 готовят растворы, содержащие по 0,5; 0,2; 0,1; 0,05 мкг/см3 и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы.

8.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую отношение поглощения при длине волны 270 нм от концентрации диклосулама в растворе (мкг/см3), устанавливают путем определения соотношения площади пиков, отвечающих идентифицируемому компоненту, и концентрации аналитического стандарта по 4 растворам для установления градуировочной характеристики.

Градуировочную зависимость для определения диклосулама в воде, почве, зерне и масле сои устанавливают по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,2, 0,5, 1,0 и 2,5 мкг/см3, приготовленным согласно пп. 7.2.3.3 — 7.2.3.6.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

8.4. Подготовка концентрирующих патронов типа C18 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения диклосулама на них

8.4.1 Подготовка концентрирующих патронов для очистки экстракта.

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 1 капли/с.

Патрон C18 устанавливают в манифолд. Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 см3 ацетонитрила, затем 5 см3 0,2 М водного раствора муравьиной кислоты (п. 8.2.2.5).

Не допускать высыхания поверхности патрона.

8.4.2. Проверка хроматографического поведения диклосулама на концентрирующих патронах C18.

В концентратор объемом 100 см3 вносят 1 см3 стандартного раствора диклосулама в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/см3 и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 60 °C.

Сухой остаток растворяют в 10 см3 10% раствора ацетонитрила в 0,2 М муравьиной кислоте (п. 8.2.2.6), помещают концентратор на 2 минуты в ультразвуковую ванну, обмывают стенки концентратора и вносят раствор на подготовленный патрон. Элюат собирают в отдельный концентратор объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 60 °C.

На патрон вносят 5 см3 10% раствора ацетонитрила в 0,2 М муравьиной кислоте и собирают элюат в отдельный концентратор объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 60 °C.

После этого на патрон вносят 6 см3 50% раствора ацетонитрила в воде (п. 8.2.2.7), собирают элюат в отдельный концентратор объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 60 °C.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 см3 ацетонитрила, обрабатывая колбы в ультразвуковой ванне в течение 2 минут, и хроматографируют.

Определяют фракции, содержащие диклосулам, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Изучение поведения диклосулама на концентрирующих патронах типа C18 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.

8.5. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии

Хроматографическую колонку с предколонкой устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 25 °C 3 — 4 часа.

IX. Отбор проб и хранение

9.1. Отбор проб производится в соответствии с утвержденными требованиями <2>.

<2> «Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» № 2051-79 от 21.08.1979, ГОСТ 31861-2012; ГОСТ 17.4.3.01-83; ГОСТ 28168-89; ГОСТ 17109-88; ГОСТ 10852-86; ГОСТ 31760-2012; 32190-2013.

Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре (+4 +/- 2) °C не более 10 суток.

Для длительного хранения проб почвы почву подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в темной таре в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Зерна сои хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре (+4 +/- 2) °C в течение суток. Для длительного хранения пробы подсушиваются, замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °C до 6 месяцев.

Масло сои хранят при температуре (+4 +/- 2) °C в стеклянных или пластиковых бутылях не более 30 суток.

X. Выполнение определения

10.1. Вода

10.1.1 Экстракция.

Пробу воды объемом 250 см3 помещают в делительную воронку объемом 500 см3. Добавляют 40 г хлорида натрия и растворяют его путем встряхивания. Подкисляют водную фазу 6 М соляной кислотой (п. 8.2.2.14) до значения pH 2.

Диклосулам экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 40 см3 каждая, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в концентратор объемом 250 см3. Полученный экстракт упаривают до объема 20 см3 на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани 30 °C.

10.1.2 Подготовка экстракта для определения диклосулама.

Экстракт из концентратора (п. 10.1.1) переносят в остродонную колбу объемом 50 см3, затем обмывают концентратор 10 см3 хлористого метилена и присоединяют к экстракту в остродонной колбе, далее упаривают экстракт досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани 30 °C. Сухой остаток растворяют в 1 см3 ацетонитрила, обрабатывая в ультразвуковой ванне в течение 2 минут, после чего пробу переносят в виалу объемом 2 см3 для автоматического дозатора проб и 20 мм3 вводят в хроматограф.

10.2. Почва

10.2.1 Экстракция.

При экстракции в каждую банку с пробой и растворителем помещается по 5 шариков для экстракции, которые перед центрифугированием удаляются.

Образец почвы массой 25 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 см3, добавляют 50 см3 80% раствора ацетона в воде (п. 8.2.2.4) и помещают на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Затем пробу центрифугируют в течение 10 минут при скорости 4000 оборотов в минуту. Супернатант фильтруют через фильтр 0,45 микрон при помощи медицинского шприца объемом 50 см3 в концентратор объемом 250 см3. Экстракцию повторяют еще дважды, экстракты объединяют.

10.2.2 Подготовка экстракта для определения диклосулама.

Полученный экстракт (п. 10.2.1) упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани 50 °C до полного улетучивания ацетона.

10.2.3. Очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

К водному остатку (п. 10.2.2) добавляют 15 см3 0,05 М фосфатного буфера (п. 8.2.2.13), обрабатывают концентратор в ультразвуковой ванне в течение 2 минут и переносят экстракт в делительную воронку объемом 100 см3. В концентратор приливают еще 15 см3 0,05 М фосфатного буфера, повторяют обработку в ультразвуковой ванне и присоединяют к экстракту в воронке. В воронку добавляется 10 см3 насыщенного хлорида натрия (п. 8.2.2.9). Экстракцию производят 20 см3 хлористого метилена при помощи интенсивного встряхивания в течение 2 минут. Жидкости в воронке дают расслоиться и отбирают нижний слой в колбу-концентратор объемом 100 см3. Экстракцию повторяют еще дважды, экстракты объединяют. Экстракт отгоняют на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре водяной бани 30 °C.

10.2.4. Очистка полученного экстракта при помощи твердофазной экстракции.

Экстракт (п. 10.2.3) растворяют в 10 см3 10% раствора ацетонитрила в 0,2 М муравьиной кислоте (п. 8.2.1.6), обрабатывая в ультразвуковой ванне в течение 2 минут, и наносят на подготовленный концентрирующий патрон. Далее патрон промывают 5 см3 10% раствора ацетонитрила в 0,2 М муравьиной кислоте. Диклосулам смывают 6 см3 50% раствора ацетонитрила в воде (п. 8.2.1.7) в остродонную колбу объемом 50 см3. Для регенерации патрона с целью повторного использования его промывают 10 см3 ацетонитрила.

10.2.5 Дополнительное концентрирование и очистка экстракта.

Экстракт (п. 10.2.4) отгоняют на ротационном вакуумном испарителе при 60 °C до улетучивания ацетонитрила. К водному остатку приливают 10 см3 0,2 М муравьиной кислоты (п. 8.2.2.5), обрабатывают в ультразвуковой ванне в течение 2 мин и помещают в делительную воронку объемом 50 см3. В отгонную колбу приливают еще 10 см3 0,2 М муравьиной кислоты, повторяют обработку в ультразвуковой ванне и присоединяют к экстракту в воронке. Затем в воронку приливают 10 см3 этилацетата и производят экстракцию интенсивным встряхиванием в течение 2 мин. После расслоения фраз отбирают верхний органический слой в остродонную колбу объемом 50 см3. Экстракцию повторяют еще дважды, экстракты объединяют. Экстракт отгоняют на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре водяной бани 60 °C. Затем в колбу добавляют 1 см3 ацетонитрила и обрабатывают в ультразвуковой ванне в течение 2 мин. После этого экстракт переносится в хроматографическую виалу объемом 2 см3 для автоматического дозатора проб и 20 мм3 вводят в хроматограф.

10.3. Зерно сои

10.3.1 Экстракция.

Образец измельченных зерен сои массой 25 г помещают в плоскодонную колбу объемом 250 см3, добавляют 100 см3 подкисленного ацетонитрила (п. 8.2.2.2) и помещают на 15 минут на аппарат для встряхивания проб с нагретой до 60 °C платформой. Экстракт отстаивают в течение 3 минут и фильтруют надосадочную жидкость через фильтр 0,45 микрон при помощи медицинского шприца объемом 50 см3 в колбу для концентрирования объемом 500 см3. Экстракцию повторяют еще дважды, экстракты объединяют. Остатки экстрагента извлекают из пробы при помощи центрифугирования в течение 10 мин при 4000 об/мин, надосадочную жидкость присоединяют к экстракту в колбе, также предварительно профильтровав.

10.3.2 Подготовка экстракта для определения диклосулама.

Полученный экстракт (п. 10.3.1) упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани 60 °C.

10.3.3. Очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

К экстракту в концентраторе (п. 10.3.2) добавляют 20 см3 ацетонитрила, насыщенного гексаном (п. 8.2.2.10), обрабатывают в ультразвуковой ванне в течение 2 мин и переносят в делительную воронку объемом 100 см3. Затем концентратор дополнительно обрабатывают при помощи ультразвуковой ванны еще 10 см3 ацетонитрила, насыщенного гексаном, и объединяют с экстрактом в делительной воронке. В воронку приливают 30 см3 5% раствора этилацетата в гексане (п. 8.2.2.8). Производят экстракцию интенсивным встряхиванием в течение 2 минут. Затем дают жидкости в колбе расслоиться и отбрасывают верхний гексановый слой. Экстракцию повторяют еще раз. После этого ацетонитрильный слой переносят в колбу-концентратор объемом 50 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани 60 °C. В колбу-концентратор добавляют 15 см3 0,05 М фосфатного буфера (п. 8.2.2.13) и переносят в делительную воронку объемом 100 см3, предварительно обработав концентратор в ультразвуковой ванне в течение 2 минут. Обработку повторяют новой порцией буфера объемом 15 см3, которая также переносится в воронку. Затем в воронку добавляется 10 см3 насыщенного хлорида натрия (п. 8.2.2.9). Экстракцию производят 20 см3 хлористого метилена при помощи интенсивного встряхивания в течение 2 минут. Жидкости в воронке дают расслоиться и отбирают нижний слой в колбу-концентратор объемом 100 см3. Экстракцию повторяют еще дважды, экстракты объединяют. Экстракт отгоняют на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре водяной бани 30 °C.

10.3.4. Очистка полученного экстракта при помощи твердофазной экстракции.

Экстракт (п. 10.3.3) подготавливается согласно п. 10.2.4.

9.3.5 Дополнительное концентрирование и очистка экстракта.

Экстракт (п. 10.3.4) подготавливается согласно п. 10.2.5.

10.4. Масло сои

10.4.1 Экстракция.

Образец масла массой 25 г помещают в химический стакан объемом 100 см3, растворяют масло в 50 см3 гексана и переносят в делительную воронку объемом 250 см3. Стакан обмывают еще 25 см3 гексана и переносят в ту же воронку. Экстракцию проводят 60 см3 ацетонитрила при помощи интенсивного встряхивания в течение 2 минут. После расслоения нижний ацетонитрильный слой собирают в колбу-концентратор объемом 250 см3. Повторяют экстракцию еще дважды, 60 и 30 см3 ацетонитрила, экстракты объединяют.

10.4.2 Подготовка экстракта для определения диклосулама.

Полученный экстракт (п. 10.4.1) упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани 60 °C.

10.4.3. Очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

Экстракт (п. 10.4.2) подготавливается согласно п. 10.3.3.

10.4.4. Очистка полученного экстракта при помощи твердофазной экстракции.

Экстракт (п. 10.4.3) подготавливается согласно п. 10.2.4.

10.4.5 Дополнительное концентрирование и очистка экстракта.

Экстракт (п. 10.4.4) подготавливается согласно п. 10.2.5.

XI. Условия хроматографирования

11.1 Определение диклосулама в воде, почве, зерне

и масле сои

Режим хроматографа:

• колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 4 мкм, заполненная сорбентом с привитыми октадецильными и полярными группами;
• предколонка хроматографическая стальная, длиной 12,5 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, зернением 4 мкм, заполненная сорбентом с привитыми октадецильными группами;
• температура колонки: 25 °C.

Подвижная фаза: 0,05% водный раствор уксусной кислоты — 0,05% раствор уксусной кислоты в ацетонитриле (% по объему) в градиентном режиме при постоянной скорости потока 1 см3/мин. Градиент потока элюента: 0 — 10 мин — 68:32; к 12,5 мин — 50:50; к 23 мин — 30:70; к 23,5 минутам — 0:100; 23,5 — 25,5 мин — 0:100.

Время стабилизации хроматографической системы после анализа пробы — 7 мин (общее время анализа 32,5 мин).

Объем вводимой пробы: 20 мм3.

Длина волны детектирования: 270 нм.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 4 — 50 нг.

XII. Обработка результатов

12.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание диклосулама в пробах рассчитывают по формуле, без учета полноты извлечения вещества из проб:

X = \frac{S_{\text{пр}} \cdot A \cdot V}{100 \cdot S_{\text{ст}} \cdot m} P,

где X — содержание диклосулама в пробе, мг/кг;

Sст — высота (площадь) пика стандарта, мм (е.о.п. x с);

Sпр — высота (площадь) пика образца, мм (е.о.п. x с);

A — концентрация стандартного раствора, мкг/см3;

V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;

m — масса анализируемого образца, г (см3);

P — содержание диклосулама в аналитических стандартах, %.

XIII. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

13.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r, (1)

где X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 \times \sigma_{r} .

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

XIV. Оформление результатов

14.1 Результат анализа представляют в виде:

(\overline{X} \pm \Delta) , мг/кг, при вероятности P = 0,95,

где \overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг;

\Delta = \frac{\delta X}{100} ,

\delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

• при определении остаточного количества диклосулама в воде — содержание вещества в пробе менее 0,001 мг/л;

Примечание: 0,001 мг/кг — предел обнаружения определяемой концентрации диклосулама в воде.

• при определении остаточного количества диклосулама в почве, зерне и масле сои — содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг.

Примечание: 0,01 мг/кг — предел обнаружения определяемой концентрации диклосулама в почве, зерне и масле сои.

XV. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 — 6.

15.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

Контроль стабильности градуировочной характеристики для диклосулама проводят при смене основного градуировочного раствора № 1 каждые 6 месяцев; при смене основного градуировочного раствора № 2 каждые 2 месяца; при смене градуировочных растворов № 3, 4, 5 и 6 каждые 30 суток, а также в начале и окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание диклосулама в которых должно охватывать весь диапазон концентраций градуировочных характеристик.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемых для контроля градуировочных растворов сохраняется соотношение.

15.1.1 Градуировочная характеристика для определения диклосулама в воде, почве, зерне и масле сои:

A = \frac{(X - C) \cdot 100}{C} \leq 5,

где X — концентрация диклосулама контрольного измерения, мкг/см3;

C — известная концентрация градуировочного раствора диклосулама в ацетонитриле, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;

5 — погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (A) превышает указанные значения, градуировочная характеристика не может быть применена для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов диклосулама, предусмотренных методикой выполнения измерений. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 7.3.

15.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок

Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:

C_{\text{д}} = \Delta_{\text{л},X} + \Delta_{\text{л},X\prime},

где \pm \Delta_{\text{л},X} ( \pm \Delta_{\text{л},X\prime}) — характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta,

где \Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг;

\Delta = \frac{\delta \cdot \overline{X}}{100} ,

где \delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:

\text{К}_{\text{к}} = \overline{X}\prime - \overline{X} - C_{\text{д}},

где \overline{X}\prime , \overline{X} , Cд — среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

\text{К } = \sqrt{\Delta_{\text{л},X\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},X}^{2}} .

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

|КК| <= К, (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

15.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

\frac{2|X_{1} - X_{2}|100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R, (3)

где X₁, X₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.