МУК 4.1.3205-14. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств глюфосината аммония и его метаболита в клубнях картофеля методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания

(утв. Роспотребнадзором 30.07.2014)

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 30 июля 2014 года

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ГЛЮФОСИНАТА АММОНИЯ И ЕГО МЕТАБОЛИТА В КЛУБНЯХ КАРТОФЕЛЯ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3205-14

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом — МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (В.А. Калинин, Т.С. Калинина).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 26 июня 2014 г. № 1).

3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 30 июля 2014 г.

4. Введены впервые.

Свидетельство о метрологической аттестации № 01.00282-2008/0167.27.05.13 от 27.05.2013.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств глюфосината аммония и его метаболита, 3-метилфосфино-пропионовой кислоты, в клубнях картофеля в диапазоне 0,25 — 2,5 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Название действующего вещества по ИСО: глюфосинат аммония (I).

Название действующего вещества по ИЮПАК: Аммония DL-гомоаланин-4-ил(метил)фосфинат (I).

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₅H₁₅N2O4P.

Молекулярная масса: 198,2.

Агрегатное состояние: бесцветный кристаллический порошок со слабым специфическим запахом.

Температура плавления: 215 °C.

Давление паров (при 20 °C): более 0,1 мПа.

Коэффициент распределения октанол/вода: Kow log P < 0,1.

Растворимость в воде (г/дм3, при 22 °C): 1 370.

Растворимость (г/дм3, при 20 °C): ацетон — 0,16, этанол — 0,65, этилацетат, толуол — 0,14, н-гексан — 0,2.

Вещество стабильно при нормальных условиях хранения, не гидролизуется в умеренно кислых и щелочных средах.

Достаточно быстро разрушается в воде и почве: DT50 в воде и почве — 3 - 20 дней.

Краткая токсикологическая характеристика. Глюфосинат аммония относится к мало опасным веществам по острой пероральной (ЛД50 для крыс — от 1 620 до 2 000 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД50 для крыс более 4 000 мг/кг), но к опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК50 для крыс (4 ч) от 1 260 до 2 600 мг/м3).

Глюфосинат аммония не обладает тератогенным, канцерогенным и мутагенным действием. Малотоксичен для рыб, водорослей, дафний, дождевых червей, пчел, птиц и диких животных.

Область применения. Глюфосинат аммония (I) — десикант и неселективный контактный гербицид с ограниченной системностью, передвигающийся только внутри обработанных листьев. В процессе поступления в растение вещество диссоциирует и в клетках присутствует только глюфосинат свободная кислота (II). Гербицид используется для уничтожения однолетних и многолетних широколистных и злаковых сорняков в парах, посадках плодовых и цитрусовых культур, ягодных кустарниках и виноградниках путем направленного опрыскивания в период активного роста сорных растений, а также на овощных культурах при довсходовом применении препарата.

Глюфосинат аммония применяется для десикации ботвы картофеля, подсолнечника, клещевины, люцерны и сеникации яровой пшеницы. Используется в России в качестве десиканта на посевах подсолнечника, рапса, клещевины, льна-долгунца, люцерны и клевера лугового (семенные посевы) при норме расхода от 0,225 до 0,45 кг/га (по д.в).

Глюфосинат аммония в воде и растениях превращается в глюфосинат свободную кислоту (II), которая подвергается разрушению, результатом чего является образование токсикологически значимого метаболита — 3-метилфосфино-пропионовой кислоты (III).

Глюфосинат свободная кислота (II)

DL-гомоаланин-4-ил-(метил)-фосфиновая кислота.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₅H15NO4P.

Молекулярная масса: 181,1.

Метаболит глюфосината аммония (III)

3-метилфосфино-пропионовая кислота.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C4H9O4P.

Молекулярная масса: 152,1.

В России установлены следующие гигиенические нормативы для глюфосината аммония: ДСД — 0,02 мг/кг массы человека; МДУ в продукции (мг/кг): плодовые семечковые и косточковые, ягоды и другие мелкие фрукты (кроме смородины), цитрусовые, виноград, морковь — 0,2; картофель — 0,5; подсолнечник (семена), рапс (зерно) — 5,0; гречиха, просо, зерно хлебных злаков — 0,4; растительные масла (кроме нерафинированных рапсового и подсолнечного масла) — 0,4; горох — 3,0; соя (бобы), фасоль — 2,0.

1. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры для глюфосината аммония и его метаболита

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для глюфосината аммония и его метаболита

2. Метод измерения

Метод основан на определении глюфосината аммония и его метаболита 3-метилфосфино-пропионовой кислоты по их дериватам (IV и V соответственно) методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после экстракции веществ из образцов водой, очистки экстрактов на концентрирующих патронах № 2, дериватизации веществ с помощью триметилортоацетата в кислой среде и последующей очистки полученных дериватов на концентрирующих патронах № 1.

Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность метода достигается за счет подбора условий дериватизации анализируемых веществ, подбора капиллярной колонки и условий программирования ее температуры.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1 Средства измерений

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2 Реактивы

Примечание. Допускается использование реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.3 Вспомогательные устройства, материалы

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1 При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004-91.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

• процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;
• выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к определению

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов № 1 и 2 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения веществ на концентрирующих патронах № 1 и 2, установление градуировочной характеристики.

7.1 Подготовка органических растворителей

7.1.1 Очистка ацетона

Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 ч. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см3 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцово-кислый калий из расчета 100 мг/дм3. Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C, отбрасывают.

7.1.2 Очистка метанола

Метанол, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный углекислый калий из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 ч. Затем метанол фильтруют через фильтр «красная лента» в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см3 аппарата для перегонки растворителей.

Метанол перегоняют при температуре 64,7 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 64,7 °C, отбрасывают.

7.1.3 Приготовление бидистиллированной воды

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцово-кислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 ч.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.

7.2 Приготовление растворов для проведения анализа

7.2.1 Приготовление рабочих растворов

7.2.1.1 Приготовление 0,015 М раствора водного аммиака.

В мерную колбу вместимостью 1 000 см3 добавляют 500 см3 деионизированной воды и 10 см3 водного аммиака (содержит 28 — 30% NH3), перемешивают и доводят водой объем в колбе до метки.

7.2.1.2 Приготовление 0,01 М раствора гидроокиси натрия.

В мерную колбу на 500 см3 переносят 0,2 г гидроксида натрия, добавляют 200 — 300 см3 дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.1.3 Приготовление 40%-го водного раствора муравьиной кислоты

В мерную колбу объемом 1 000 см3 помещают 500 см3 очищенной воды, прибавляют 400 см3 муравьиной кислоты, перемешивают и доводят водой объем в колбе до метки.

7.2.2 Приготовление градуировочных растворов

7.2.2.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией деривата глюфосината аммония (IV) 100 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).

В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 13,9 мг метил-4-(метоксиметил)-фосфинил-2-ацетамидобутирата (IV, дериват глюфосината аммония), растворяют в 40 — 50 см3 метанола, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают. Стандартный раствор № 1 хранят в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.2.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией деривата метаболита глюфосината аммония (V) 100 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).

В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 10 мг метил-3-(метоксиметил)-фосфинил-пропионата (V, дериват метаболита), растворяют в 40 — 50 см3 метанола, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают. Стандартный раствор № 2 хранят в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.2.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией дериватов глюфосината аммония и его метаболита по 10,0 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).

Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 10 см3, помещают в мерную колбу объемом 100 см3. Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 10 см3 и помещают в ту же колбу объемом 100 см3, доводят объем до метки метилацетатом. Стандартный раствор № 3 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 3 хранят в холодильнике в течение 3 месяцев.

7.2.2.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией дериватов глюфосината аммония и его метаболита по 2,0 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).

Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки метилацетатом при перемешивании. Стандартный раствор № 4 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.2.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией дериватов глюфосината аммония и его метаболита по 1,0 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).

Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки метилацетатом при перемешивании. Стандартный раствор № 5 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.2.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией дериватов глюфосината аммония и его метаболита по 0,4 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).

Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки метилацетатом при перемешивании. Стандартный раствор № 6 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.2.7. Стандартный раствор № 7 с концентрацией дериватов глюфосината аммония и его метаболита по 0,2 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).

Из стандартного раствора № 5 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки метилацетатом при перемешивании. Стандартный раствор № 7 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.3 Приготовление растворов для хроматографического

исследования и внесения в контрольные образцы

7.2.3.1. Стандартный раствор A с концентрацией глюфосината аммония 1 мг/см3.

В мерную колбу вместимостью 50 см3 помещают 50,45 мг глюфосината аммония, добавляют 30 — 35 см3 0,015 М раствора водного аммиака, перемешивают до полного растворения вещества и доводят объем до метки этим же растворителем. Раствор A хранится в холодильнике не более одного месяца.

7.2.3.2. Стандартный раствор B с концентрацией 3-метилфосфино-пропионовой кислоты 1 мг/см3.

В мерную колбу вместимостью 50 см3 помещают 42 мг 3-метилфосфино-пропионовой кислоты, добавляют 30 — 35 см3 0,015 М раствора водного аммиака, перемешивают до полного растворения вещества и доводят объем до метки этим же растворителем. Раствор B хранится в холодильнике не более одного месяца.

7.2.3.3. Стандартный раствор C с концентрацией глюфосината аммония и его метаболита по 10,0 мкг/см3.

Из стандартного раствора A отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 100 см3. Из стандартного раствора B отбирают пипеткой 1 см3 и помещают в ту же колбу объемом 100 см3, доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор C используется для хроматографического исследования и внесения в контрольные образцы и хранится в холодильнике не более одного месяца.

7.3 Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации дериватов глюфосината аммония и его метаболита в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,2; 0,4; 1,0; 2,0 мкг/см3.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.2. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

7.4 Дериватизация

Из стандартного раствора C (п. 7.2.3.3), содержащего по 10 мкг/см3 глюфосината аммония и его метаболита, отбирают 0,5 см3, помещают в концентратор объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

К сухому остатку в концентраторе приливают 3 см3 ледяной уксусной кислоты, перемешивают содержимое и помещают, концентратор на 1 мин в ультразвуковую ванну. Затем в колбу добавляют 12 см3 триметилортоацетата и снова помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 4,5 ч. К охлажденной реакционной смеси добавляют три порции по 15 см3 каждая толуола и каждый раз выпаривают содержимое на ротационном вакуумном испарителе (для полного удаления реакционной смеси) при температуре не выше 40 °C до объема 1 — 2 см3. Содержимое концентратора переносят в мерную пробирку и доводят объем до 4 см3 толуолом. Пробу возвращают в концентратор объемом 100 см3, добавляют 4 см3 метилацетата, перемешивают содержимое и помещают концентратор в ультразвуковую ванну на 1 мин. Затем 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.

Примечание: При проведении дериватизации посуда и реактивы должны быть сухими.

7.5 Подготовка концентрирующих патронов № 2 для очистки

экстрактов и проверка хроматографического поведения глюфосината аммония и его метаболита на них

7.5.1 Подготовка концентрирующих патронов № 2 для очистки

экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин (1 — 2 кап./с).

Патрон № 2 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 см3 0,01 М раствора гидроокиси натрия, 10 см3 воды. Элюаты отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.5.2 Проверка хроматографического поведения глюфосината

аммония и его метаболита на концентрирующих патронах № 2

Из стандартного раствора C (п. 7.2.3.3), содержащего 10 мкг/см3, отбирают 0,5 см3, помещают в концентратор объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 20 см3 воды, тщательно обмывая стенки концентратора, выдерживают 1 — 2 мин в ультразвуковой ванне и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 50 °C. Патрон промывают четырьмя-пятью порциями по 10 см3 каждая 40%-го водного раствора муравьиной кислоты. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 50 °C.

Патрон промывают 20 см3 воды, элюат отбрасывают. Затем патрон промывают четырьмя-пятью порциями по 10 см3 каждая 0,015 М раствора водного аммиака. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 50 °C.

Пробы подвергают дериватизации (п. 7.4) и анализируют на содержание дериватов глюфосината аммония и метаболита по п. 9.2.

Определяют фракции, содержащие дериваты глюфосината аммония и его метаболита, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Изучение поведения дериватов глюфосината аммония и его метаболита на концентрирующих патронах № 2 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.

7.6 Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки

экстрактов и проверка хроматографического поведения дериватов глюфосината аммония и его метаболита на них

7.6.1 Подготовка концентрирующих патронов № 1

для очистки экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин (1 — 2 кап./с).

Патрон № 1 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 см3 смеси метилацетата с толуолом в соотношении 1:1, элюат отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.6.2 Проверка хроматографического поведения дериватов

глюфосината аммония и его метаболита на концентрирующих патронах № 1

Из стандартного раствора № 3 (п. 7.2.2.3), содержащего 10 мкг/см3, отбирают 0,5 см3, помещают в концентратор объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 4 см3 толуола, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 4 см3 метилацетата, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см3. Промывают патрон последовательно 5 см3 метилацетата, затем четырьмя-пятью порциями по 5 см3 каждая смеси метилацетата с метанолом в соотношении 1:1. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 см3, упаривают до объема 0,5 — 1 см3 на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C.

Содержимое концентраторов переносят в мерную пробирку. Концентратор обмывают двумя порциями по 1,5 см3 метилацетата, смывы объединяют в пробирке. Доводят объем в пробирке до 5 см3 и 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие дериваты глюфосината аммония и его метаболита, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Изучение поведения дериватов глюфосината аммония и его метаболита на концентрирующих патронах № 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.

8. Отбор проб и хранение

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», № 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ 27853-88 «Овощи соленые и квашеные, плоды и ягоды моченые. Приемка, отбор проб», ГОСТ 13341-77 «Свежие и свежемороженые овощи, картофель, бахчевые, фрукты, ягоды, грибы. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ 7176-85 «Картофель свежий продовольственный, заготовляемый и поставляемый. Технические условия».

Пробы клубней картофеля хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °C.

9. Выполнение определения

9.1 Клубни картофеля

9.1.1 Экстракция

Образец измельченных клубней картофеля массой 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 см3, приливают 50 см3 дистиллированной воды и помещают на 15 мин на аппарат для встряхивания проб. По окончании экстракции пробу центрифугируют в течение 10 мин на скорости 3 000 оборотов в минуту. Экстракт фильтруют через фильтр низкой плотности в коническую колбу объемом 250 см3. Экстракцию повторяют еще один раз, используя 50 см3 дистиллированной воды и помещая на 15 мин на аппарат для встряхивания проб, центрифугируют и фильтруют в ту же коническую колбу.

9.1.2 Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 2

Из экстракта, полученного по п. 9.1.1, отбирают аликвоту объемом 20 см3, наносят на подготовленный концентрирующий патрон № 2.

Метаболит глюфосината аммония элюируют с патрона 40 см3 40%-го водного раствора муравьиной кислоты. Элюат собирают в концентратор объемом 250 см3.

Патрон промывают 20 см3 воды, элюат отбрасывают. Элюируют глюфосинат аммония 40 см3 0,015 М раствора водного аммиака, элюат объединяют с предыдущим в тот же концентратор объемом 100 см3. Объединенные элюаты выпаривают досуха при температуре 55 — 60 °C. Для удаления остатков воды в концентратор добавляют 5 — 10 мл этилацетата.

9.1.3 Дериватизация

К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.2, приливают 3 см3 ледяной уксусной кислоты, перемешивают содержимое и проводят дериватизацию как указано в п. 7.4.

9.1.4 Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1

Раствор, полученный в п. 9.1.3, наносят на заранее подготовленный концентрирующий патрон № 1, элюат отбрасывают. Патрон промывают 5 см3 метилацетата, элюат отбрасывают.

Дериваты глюфосината аммония и его метаболита элюируют с патрона 15 см3 смеси метилацетата с метанолом в соотношении 1:1. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см3 и упаривают до объема 0,5 — 1,0 см3 на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C.

Содержимое концентратора переносят в мерную пробирку. Концентратор обмывают двумя порциями по 1,5 см3 метилацетата, смывы объединяют в пробирке. Доводят объем в пробирке до 5 см3 и 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.

9.2 Условия хроматографирования

Хроматографическая система, включающая:

• хроматограф газовый с термоионным детектором (ТИД) с пределом детектирования по фосфору в Паратион-метиле 3 x 10-14 г/см3 и снабженный приспособлениями для капиллярной колонки;
• компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ.

Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла, с внутренний диаметром 0,32 мм, длиной 15 м, с неподвижной фазой, содержащей 50% фенила и 50% метилполисилоксана и толщиной пленки 0,25 мкм.

Температура термостата колонки программированная: начальная температура — 130 °C, выдержка 2 мин, нагрев колонки по 25 °C в минуту до 270 °C, выдержка 5 мин. Температура испарителя — 230 °C, детектора — 300 °C.

Газ 1 — гелий (газ-носитель), регулятор расхода гелия — РРГ-10; давление на входе — 80 кПа, линейная скорость — 34,352 см/с, давление на выходе — 101,3 кПа; поток через колонку — 1,756 см3/мин; мертвое время — 1,46 мин.

Газ 2 — гелий (сброс пробы), регулятор расхода гелия — РРГ-11, режим — сплитлесс, расход во время анализа — 10 см3/мин, деление потока — 1:30, начало сброса 1 мин, длительность сброса — 2 мин.

Газ 4 — азот (поддув в детектор), расход во время анализа — 25 см3/мин.

Газ 5 — водород, расход во время анализа — 11,5 см3/мин.

Газ 6 — воздух, расход — 200 см3/мин.

Продувка детектора и испарителя азотом после анализа — по 35 см3/мин в течение 3 мин при температуре колонки 270 °C.

Время удерживания: первым с колонки выходит дериват метаболита (V), а затем дериват глюфосината аммония (IV).

Объем вводимой пробы: 1 мм3.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,2 — 2,0 нг.

10. Обработка результатов анализа

Содержание глюфосината аммония или его метаболита в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота в пробах клубней картофеля по пикам дериватов рассчитывают отдельно по формуле:

X = \frac{S_{\text{пр}} \cdot A \cdot V}{100 \cdot S_{\text{ст}} \cdot m} \cdot P , где

X — содержание глюфосината аммония или его метаболита в пробе, мг/кг;

Sст — высота (площадь) пика стандартов дериватов глюфосината аммония или его метаболита, мВ;

Sпр — высота (площадь) пика образца, мВ;

A — концентрация стандартных растворов дериватов глюфосината аммония или его метаболита, мкг/см3;

V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;

m — масса анализируемого образца, г (см3);

P — содержание дериватов глюфосината аммония или его метаболита в аналитическом стандарте, %.

Общее содержание глюфосината аммония определяют путем простого суммирования полученных результатов.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r , где (1)

X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг или мг/дм3;

r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 \times \sigma_{r} .

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов.

Результат анализа представляют в виде:

(\overline{X} \pm \Delta)\text{мг}/\text{кг} при вероятности P = 0,95, где

\overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг;

\Delta = \frac{\delta \cdot \overline{X}}{100} , где

\delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее 0,25 мг/кг». <*>

<*> — 0,25 мг/кг — предел обнаружения.

13. Контроль качества результатов измерений.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1 Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

Контроль стабильности градуировочной характеристики для дериватов глюфосината аммония и его метаболита проводят при смене основных градуировочных растворов № 1 и 2 каждые 6 месяцев, при смене основных градуировочных растворов № 3 — каждые 3 месяца, при смене основных градуировочных растворов № 4, 5, 6 и 7 — каждый месяц, а также в начале и окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание дериватов глюфосината аммония и его метаболита в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,2 до 2,0 мкг/см3.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

A = \frac{|X - C| \cdot 100}{C} \leq 10,38 для глюфосината аммония и 2,90 — для его метаболита;

X — концентрация глюфосината аммония и его метаболита (по дериватам) контрольного измерения, мкг/см3;

C — известная концентрация градуировочных растворов дериватов глюфосината аммония и его метаболита в метилацетате, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;

10,38 или 2,90 — погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (A) превышает 10,38% (или 2,90%), делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов дериватов глюфосината аммония и его метаболита, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 7.3.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:

C_{\text{д}} \geq \Delta_{\text{л},X} + \Delta_{\text{л},X\prime} , где

\pm \Delta_{\text{л},X}( \pm \Delta_{\text{л},X\prime}) — характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta , где

\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг;

\Delta = \frac{\delta \cdot \overline{X}}{100} , где

\delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:

\text{К}_{\text{к}} = \overline{X}\prime - \overline{X} - C_{\text{д}} , где

\overline{X}\prime , \overline{X} , Cд — среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

\text{К } = \sqrt{\Delta_{\text{л},X\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},X}^{2}}

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

|Кк| <= К, (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R , где (3)

X₁, X₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Приложение 1

ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ДЕРИВАТА ГЛЮФОСИНАТА АММОНИЯ (IV) ИЗ КЛУБНЕЙ КАРТОФЕЛЯ (5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ, P = 0,95)

Приложение 2

ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ДЕРИВАТА МЕТАБОЛИТА ГЛЮФОСИНАТА АММОНИЯ (V) ИЗ КЛУБНЕЙ КАРТОФЕЛЯ (5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ, P = 0,95)