МУК 4.1.3142-13. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Метод обнаружения фенилбутазона в пищевых продуктах животного происхождения. Методические указания

(утв. Роспотребнадзором 26.11.2013)

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

МЕТОД ОБНАРУЖЕНИЯ ФЕНИЛБУТАЗОНА В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

1. Разработаны ФГБУ «НИИ питания» РАМН (О.И. Передеряев, М.Н. Богачук, А.Д. Малинкин, И.Б. Перова, М.А. Макаренко, В.В. Бессонов, К.И. Эллер).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому надзору Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Протокол от 29 октября 2013 г. № 3).

3. Утверждены вр.и.о. руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главного государственного санитарного врача Российской Федерации А.Ю. Поповой 26 ноября 2013 г.

4. Введены впервые.

Настоящие методические указания устанавливают порядок качественного определения фенилбутазона в мясе и субпродуктах убойных животных и птицы, а также продуктах их переработки методом высокоэффективной жидкостной хроматографии тандемной масс-спектрометрией (предел обнаружения 0,05 мг/кг).

Методические указания носят рекомендательный характер.

Название действующего вещества по ИСО: фенилбутазон.

Название действующего вещества по ИЮПАК: 4-бутил-1,2-дифенил-3,5-пиразолидин-3,5-дион.

CAS N: 50-33-9.

Молекулярная масса: 308,37.

Фенилбутазон является производным пиразолона и относится к нестероидным противовоспалительным средствам. Применяется в медицинской практике как противовоспалительное, анальгезирующее и жаропонижающее средство. Доступен в России как лекарственное средство под торговым наименованием бутадион.

Фенилбутазон также применяется в ветеринарии как нестероидное противовоспалительное и обезболивающее лекарственное средство. В пищевых продуктах фенилбутазон не должен обнаруживаться в пределах обнаружения метода (0,05 мг/кг). Обнаружение фенилбутазона в пищевых продуктах связано с несоблюдением регламента его использования.

Физические свойства: белый кристаллический порошок, без запаха, температура плавления 105 °C, растворимость в воде (~0,7 мг/см3), в этаноле (~50 мг/см3), свободно растворим в диэтиловом эфире и ацетоне. Максимум поглощения в подкисленном этаноле 239,5 нм (коэффициент экстинкции 15488).

1. Метод измерений

Метод основан на определении фенилбутазона методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с тандемной масс-спектрометрией.

2. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

2.1 Средства измерений

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

2.2 Реактивы

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

2.3 Вспомогательные устройства, материалы

Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными и лучшими техническими характеристиками.

3. Требования техники безопасности

3.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф и масс-спектрометрический детектор.

3.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004-90.

4. Требования к квалификации персонала

5. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

• процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
• выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

6. Отбор проб

Для учета специфики отбора проб отдельных видов продуктов следует руководствоваться действующей нормативно-технической документацией по отбору проб для определения токсичных элементов для каждого конкретного вида продукции.

7. Подготовка к определению

7.1 Приготовление основного раствора стандарта

Навеску фенилбутазона массой 0,010 г, взвешенную с погрешностью не более 0,0001 г, помещают в мерную колбу вместимостью 200 см3, добавляют 120 см3 этанола, перемешивают до полного растворения, доводят объем до метки этанолом и тщательно перемешивают.

Приготовленный раствор хранят при температуре 18 °C в течение 12 месяцев.

7.2 Приготовление рабочего раствора стандарта

Мерной пипеткой переносят 2 см3 основного раствора стандарта фенилбутазона в мерную колбу на 100 см3, доводят объем до метки этанолом и перемешивают.

Приготовленный раствор хранят при температуре 18 °C в течение 3 месяцев.

7.3 Приготовление компонента A подвижной фазы

В стакан объемом 500 см3 добавляют 400 см3 дистиллированной воды и, тщательно перемешивая, прибавляют 0,5 см3 муравьиной кислоты. Содержимое переносят в мерную колбу на 500 см3, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.

7.4 Приготовление 7,5%-го раствора аммиака

В стакан объемом 50 см3 мерным цилиндром вместимостью 50 см3 вносят 15 см3 25%-го раствора аммиака и 35 см3 дистиллированной воды.

7.5 Приготовление 6 Н соляной кислоты

7.6 Приготовление смеси тетрагидрофуран/гексан (60/240)

В цилиндр объемом 500 см3 отмеривают 240 см3 гексана и доводят объем до 300 см3 тетрагидрофураном.

7.7 Приготовление смеси ацетонитрил-водный раствор

В мерную колбу вместимостью 50 см3 мерным цилиндром вместимостью 25 см3 отмеривают 25 см3 ацетонитрила, пипеткой вместимостью 1 см3 отмеривают 0,2 см3 муравьиной кислоты, доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.

8. Извлечение фенилбутазона

А. Измельчение и гомогенизация пробы

• Подвергают измельчению в лабораторной мельнице 150 г образца пищевого продукта.

• В пробирку объемом 50 см3 отвешивают 5,0 г (навеска с точностью 0,1 г) гомогенизированной пробы.
• Добавляют 5 см3 дистиллированной воды и 0,5 см3 7,5%-го раствора аммиака и встряхивают в течение 20 с.
• В пробирку добавляют 10 см3 диэтилового эфира, закрывают и встряхивают в течение 10 с.
• В пробирку добавляют 10 см3 петролейного эфира, закрывают и встряхивают в течение 30 с.
• Пробирку центрифугируют с силой центрифугирования 3000 в течение 5 мин при комнатной температуре.
• Органический слой отбрасывают, оставшееся содержимое пробирки встряхивают в течение 10 с.
• Добавляют 1 см3 6 Н соляной кислоты и перемешивают.
• Добавляют 20 мл смеси тетрагидрофуран/гексан (60/240) и встряхивают на шейкере 10 мин.
• Пробирку центрифугируют с силой центрифугирования 3000 в течение 5 мин при комнатной температуре.
• Упаривают 10 см3 полученного экстракта под вакуумом досуха при температуре 50 °C.
• Сухой остаток перерастворяют в 500 мкл смеси ацетонитрил-водный раствор муравьиной кислоты (1:1).
• Получившийся раствор центрифугируют в течение 5 мин при 10000, надосадочную жидкость отделяют и исследуют.

9. Обнаружение фенилбутазона

9.1 Условия проведения ВЭЖХ

Таблица 1

9.2 Условия детектирования на тандемном

Условия детектирования на тандемном масс-спектрометрическом детекторе приведены в табл. 2.

9.3 Идентификация фенилбутазона

Рис. Хроматограмма исследуемого образца с добавлением фенилбутазона на уровне 0,100 мг/кг (верхняя линия — переход 309,4 — 160,3,

10. Обработка результатов измерения

При обнаружении в предлагаемых условиях на обоих предлагаемых переходах пиков, соответствующих по времени удерживания стандартному образцу фенилбутазона, делается вывод о его наличии в исследуемом образце.

11. Оформление результатов измерений

Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде следующей записи: «В исследуемом образце(ах)... фенилбутазон не обнаружен (предел обнаружения метода 0,05 мг/кг)» или «В исследуемом образце(ах)... обнаружен фенилбутазон (предел обнаружения метода 0,05 мг/кг)».

Документ или запись удостоверяет лицо, проводившее измерения, а при необходимости — руководитель организации (предприятия), подпись которого заверяют печатью организации (предприятия).