МУК 4.1.3063-13. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение остаточного содержания клотианидина в зеленой массе, зерне и масле кукурузы, семенах, масле и зеленой массе подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 31.10.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.3063-13. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение остаточного содержания клотианидина в зеленой массе, зерне и масле кукурузы, семенах, масле и зеленой массе подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.3063-13. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-3063-13
(утв. Роспотребнадзором 14.07.2013)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299).
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
14 июля 2013 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ИЗМЕРЕНИЕ ОСТАТОЧНОГО СОДЕРЖАНИЯ КЛОТИАНИДИНА В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ, ЗЕРНЕ И МАСЛЕ КУКУРУЗЫ, СЕМЕНАХ, МАСЛЕ И ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ ПОДСОЛНЕЧНИКА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3063-13
1. Разработаны сотрудниками ГНУ Всероссийский НИИ фитопатологии.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 30 мая 2013 г. № 1).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 14 июля 2013 г.
Свидетельство о метрологической аттестации от 14.12.2012 № 01.00225/205-78-12.
1. Назначение и область применения
Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовых концентраций клотианидина в зерне и масле кукурузы, семенах и масле подсолнечника в диапазоне 0,02 — 0,20 мг/кг, в зеленой массе кукурузы и подсолнечника в диапазоне 0,05 — 0,50 мг/кг.
Методические указания носят рекомендательный характер.
Название действующего вещества по ИСО: клотианидин.
Название действующего вещества по ИЮПАК: (E)-1-(2-хлор-1,3-тиазол-5-илметил)-3-метил-2-нитрогуанидин.
Эмпирическая формула: C H ClN O S. 6 8 5 2
Бесцветный порошок без запаха. Температура плавления: 176,8 °C. -7
Давление паров при 25 °C: 1,3 x 10 мПа. Коэффициент распределения в системе н-октанол/вода: K log P = 0,7 (при 25 °C). Растворимость (г/куб.
ow
дм) при 20 °C: ацетон — 15,2; метанол — 6,26; этилацетат — 2,03; дихлорметан — 1,32; гептан — 0,001; вода — 0,327.
В почве в аэробных условиях клотианидин разрушается очень медленно: DT = 148 - 1155 дней.
50
Краткая токсикологическая характеристика
Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс > 5000 мг/кг; острая 50 дермальная токсичность (LD ) для крыс > 2000 мг/кг; острая ингаляционная 50 токсичность (LC ) для крыс > 6141 мг/куб. м воздуха. Клотианидин не 50 оказывает раздражающего действия на кожу кролика. LC для рыб > 100 мг/ 50 куб. дм (96 ч).
Инсектицид нетоксичен для птиц, дафний, земляных червей, почвенных микроорганизмов и опасен для пчел при прямом контакте.
Клотианидин — инсектицид нервно-паралитического действия, обладает широким спектром активности против сосущих, грызущих и почвенных насекомых на овощных культурах, фруктовых и цитрусовых деревьях, рисе, кукурузе, подсолнечнике и рапсе. Вещество обладает системной активностью и может использоваться как в качестве протравителя, так и для обработки почвы и надземных органов растений.
Предлагается в России в качестве составного компонента комбинированных протравителей для предпосевной обработки семян рапса и сахарной свеклы при норме расхода 5 — 10 кг д.в./т семян, а также для обработки вегетирующих растений картофеля с нормой расхода до 12,5 г д.в./га.
2. Метрологические характеристики
При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и ее составляющих) результатов измерений не превышает значений, приведенных в таблице.
Анали- Диапазон Показатель Показатель Показатель Предел зируе- измерений точности повторяемости воспроизводи- повторяе- мый массовой (границы (относитель- мости (относи- мости, r, объект доли кло- относитель- ное средне- тельное сред- %, тианидина, ной погреш- квадратичес- неквадратичес- P = 0,95, мг/кг ности) кое отклонение кое отклонение n = 2
±\delta , % при повторяемос- воспроизводимо P = 0,95 ти), \sigma_{r} , % сти), \sigma_{R} , %
Зерно От 0,020 до 33 5 9 14 кукуру- 0,10 вкл. зы ────────────────────────────────────────────────────────────────── Св. 0,10 до 20 3 4,5 8
0,20 вкл.
Семена От 0,020 до 34 7 11 19 подсол- 0,10 вкл. нечника ────────────────────────────────────────────────────────────────── Св. 0,10 до 18 4 6 11
0,20 вкл.
Масло От 0,020 до 35 9 14 25 кукуру- 0,10 вкл. зы ────────────────────────────────────────────────────────────────── Св. 0,10 до 19 5 8 14
0,20 вкл.
Масло От 0,020 до 32 8 12 22 подсол- 0,10 вкл. нечника ────────────────────────────────────────────────────────────────── Св. 0,10 до 20 4 6 11
0,20 вкл.
Зеленая От 0,05 до 22 6 9 17 масса 0,10 вкл. кукуру- ────────────────────────────────────────────────────────────────── зы Св. 0,10 до 13 3 4,5 8
0,50 вкл.
Зеленая От 0,05 до 24 6 9 17 масса 0,10 вкл. подсол- ────────────────────────────────────────────────────────────────── нечника Св. 0,10 до 15 4 6 11
0,50 вкл.
3. Метод измерений
Метод основан на экстракции клотианидина из зерна и зеленой массы кукурузы, семян и зеленой массы подсолнечника водным раствором ацетона, из масла кукурузы и подсолнечника водным раствором метанола, очистке экстрактов, содержащих клотианидин, от коэкстрактивных компонентов перераспределением их в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с флоризилом, с последующим измерением содержания клотианидина в очищенных экстрактах на жидкостном хроматографе с ультрафиолетовым детектированием и обработкой хроматограмм методом абсолютной градуировки.
4. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
4.1. Средства измерений
Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны, снабженный дегазатором и термостатом колонки
Весы аналитические с пределом взвешивания до 110 г и допустимой погрешностью 0,0001 г ГОСТ Р 53228-08
Весы лабораторные с пределом взвешивания 160 г и допустимой погрешностью 0,005 г ГОСТ Р 53228-08
Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-1000-2 ГОСТ 1770-74
Пипетки градуированные 1-1-2-1; 1-1-2-2; 1-2-2-5; 1-2-2-10 ГОСТ 29227-91
Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой П-2-5-0,1; П-2-10-0,2 ГОСТ 1770-74
Цилиндры мерные 1-25; 1-50; 1-100; 1-500; 1-1000 ГОСТ 1770-74
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 20 — 100 куб. мм
Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
4.2. Реактивы
Клотианидин с содержанием основного вещества не менее 99,4%, аналитический стандарт
Ацетон, чистый для анализа ГОСТ 2603-79
Ацетонитрил для хроматографии, х.ч. ТУ 6-09-3534-87
Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная, деионизованная) ГОСТ Р 52501-05
н-Гексан, х.ч. ТУ 6-09-3375-78
Калий углекислый, х.ч. ГОСТ 4221-76
Метилен хлористый (дихлорметан), х.ч. ГОСТ 12794-80
Метиловый спирт (метанол), х.ч. ГОСТ 6995-77
Натрий сернокислый, безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76
Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат), ч. ГОСТ 22300-76
Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.
4.3. Вспомогательные устройства, материалы
Аппарат для встряхивания ТУ 64-1-2851-78
Вата медицинская гигроскопическая хлопковая, нестерильная ГОСТ 5556-81
Воронки делительные вместимостью 100 и 250 куб. см ГОСТ 25336-82
Воронки лабораторные, стеклянные ГОСТ 25336-82
Колба Бунзена вместимостью 250 куб. см ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 10, 100 и 250 куб. см ГОСТ 9737-93
Колбы плоскодонные вместимостью 250 куб. см ГОСТ 9737-93
Колонка хроматографическая стеклянная, длиной 25 см и внутренним диаметром 10 мм
Колонка аналитическая хроматографическая, стальная (150 x 4,6 мм), заполненная сорбентом с привитыми многофункциональными полярными группами С18 зернением 5 мкм
Мельница лабораторная электрическая ТУ 46-22-236-84 Насос водоструйный вакуумный ГОСТ 10696-75 Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М ТУ 25-11-917-76
Флоризил для колоночной хроматографии с размером частиц 60 — 100 меш.
Стаканы химические вместимостью 100 и 500 куб. см ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей с дефлегматором ГОСТ 9737-93 (ИСО 641-75)
Фильтры бумажные средней плотности ТУ 6.091678-86
Фильтры мембранные, диаметром 47 мм с размером пор 0,45 мкм
Примечание. Допускается применение других вспомогательных средств измерений и устройств аналогичного назначения, технические характеристики которых не уступают вышеуказанным, а также материалов, обеспечивающих нормативы точности при проведении измерений.
5. Требования безопасности, охраны окружающей среды
5.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, 12.1.005-88.
5.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90. Обучение работающих правилам безопасности труда проводят согласно ГОСТ 12.0.004-90.
5.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.
5.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.
6. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке их результатов допускается специалист, прошедший обучение, имеющий опыт работы в лаборатории и владеющий техникой проведения хроматографического анализа, освоивший данную методику и подтвердивший соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
7. Требования к условиям измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия.
7.1. Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу
- <a id="p100100"></a>температура воздуха (20 +/- 5) °C;
- <a id="p100101"></a>атмосферное давление (84 - 106) кПа;
- <a id="p100102"></a>относительная влажность воздуха не более 80%.
7.2. Условия хроматографического анализа
Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (20:80, в объемных соотношениях).
Скорость потока элюента: 0,8 куб. см/мин.
Чувствительность: 0,001 ед. абсорбции на шкалу.
Объем вводимой пробы: 5 куб. мм.
Линейный диапазон детектирования 0,1 — 1 нг.
8. Подготовка к выполнению измерений
Измерениям предшествуют следующие операции: приготовление растворов, подвижной фазы для высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), градуировочных растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, приготовление колонки с флоризилом и установление объема и состава элюента, необходимого для полного вымывания клотианидина из колонки с флоризилом.
8.1. Приготовление раствора углекислого калия с молярной концентрацией 0,05 моль/куб. дм
В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 6,9 г K CO , 2 3 приливают 100 куб. см деионизованной воды, перемешивают до растворения
осадка, доводят объем водой до метки, перемешивают.
8.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ
В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 200 куб. см ацетонитрила, 800 куб. см бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.
8.3. Кондиционирование хроматографической колонки
Хроматографическую колонку устанавливают в термостат хроматографа и стабилизируют при температуре 27 °C и скорости потока подвижной фазой 0,8 куб. см/мин. не менее часа до установления стабильной базовой линии (дрейф базовой линии в течение 1 ч не более 5%, а уровень шумов не более 2% от верхнего значения шкалы).
8.4. Приготовление градуировочных растворов
8.4.1 Исходный градуировочный раствор клотианидина с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают (0,010 +/- 0,0001) г клотианидина, растворяют в 40 — 50 куб. см ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.
Раствор хранят при температуре не выше -18 °C. Срок хранения — не более 3 месяцев.
8.4.2 Градуировочный раствор клотианидина с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см (раствор № 1)
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора клотианидина с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 8.4.1), разбавляют ацетонитрилом до метки. Этот раствор используют для приготовления градуировочных растворов № 2 — 5.
Для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения клотианидина методом «внесено — найдено» используется ацетоновый раствор вещества с концентрацией 10 мкг/куб. см.
Градуировочный раствор № 1 и ацетоновый раствор клотианидина хранят при температуре не выше -18 °C. Срок хранения — не более 1 месяца.
8.4.3. Градуировочные растворы клотианидина с массовой концентрацией 0,02 — 0,2 мкг/куб. см (растворы № 2 — 5)
В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 0,2, 0,4, 1,0 и 2,0 куб. см градуировочного раствора № 1 клотианидина с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см, доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 8.2, тщательно перемешивают. Получают растворы с массовой концентрацией клотианидина 0,02, 0,04, 0,1 и 0,2 мкг/куб. см соответственно.
Растворы готовят непосредственно перед использованием.
8.5. Градуировка хроматографа
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мкВ·с) от концентрации клотианидина в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.
В инжектор хроматографа вводят по 5 куб. мм каждого градуировочного раствора (п. 8.4.3) и анализируют при условиях п. 7.2. Осуществляют не менее трех параллельных определений. Расхождение между параллельными определениями не должно превышать предела повторяемости r.
По полученным данным строят градуировочную характеристику.
8.6. Контроль стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировки проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.
Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с методикой.
Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:
|S - S |
изм гр
------------ · 100 <= K ,
S гр
гр
где:
S , S - значение площади пика клотианидина в образце для контроля,
изм гр
измеренное и найденное по градуировочной характеристике соответственно,
мкВ·с; K — норматив контроля, K_{\text{гр}} = 0,5 \cdot \delta, гр где ±\delta — границы относительной погрешности, % (табл. 1).
Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то повторно анализируют этот образец для исключения результата, содержащего грубую ошибку.
Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.
8.7. Подготовка колонки с флоризилом для очистки экстракта
В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 10 мм помещают тампон из стекловаты и затем в нее всыпают 10 г сухого флоризила. Колонку промывают 30 куб. см этилацетата со скоростью 1 — 2 капли в секунду. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Через колонку пропускают 15 куб. см этилацетата со скоростью 1 — 2 капли в секунду, после чего колонка готова к работе.
8.8. Определение объема элюента, необходимого для полного вымывания клотианидина из колонки с флоризилом
При отработке методики или поступлении новой партии флоризила проводят определение объема элюента, необходимого для полного вымывания клотианидина из колонки с флоризилом.
В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,1 куб. см градуировочного раствора № 1 клотианидина с концентрацией 10 мкг/куб. см в ацетонитриле (п. 8.4.2), раствор упаривают досуха, остаток растворяют в 2 куб. см этилацетата, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с флоризилом, подготовленную по п. 8.7. Колбу обмывают 3 куб. см этилацетата, которые также вносят в колонку. Промывают колонку 50 куб. см этилацетата со скоростью 1 — 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Затем через колонку пропускают 50 куб. см смеси этилацетат-ацетонитрил с объемным соотношением компонентов 1:1, отбирая последовательно по 5 куб. см элюата. Каждую фракцию упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., вносят 2 куб. см подвижной фазы, подготовленной по п. 8.2, перемешивают и хроматографируют в соответствии с условиями п. 7.2.
По результатам обнаружения клотианидина в каждой из фракций определяют объем смеси этилацетат-ацетонитрил с объемным соотношением 1:1, необходимый для полного вымывания клотианидина из колонки.
9. Отбор и хранение проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (от 21.08.79 № 2051-79) и правилами, определенными ГОСТ Р 50436-92 «Зерновые. Отбор проб зерна», ГОСТ 13634-90 «Кукуруза. Требования при заготовке и поставке», ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ 11291-93 «Масло подсолнечника. Требования при заготовках и поставках», ГОСТ 27262-87 «Корма растительного происхождения. Методы отбора проб» и ГОСТ 27978-88 «Корма зеленые. Технические условия».
Пробы зерна кукурузы и семян подсолнечника высушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов. Пробы зеленой массы замораживают и хранят при температуре не выше -18 °C. Масло хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 0 — 4 °C. В некоторых случаях масло получают из зерна кукурузы и семян подсолнечника экстракцией органическими неполярными растворителями (петролейный и диэтиловый эфиры) непосредственно перед проведением анализа.
10. Проведение определения
10.1. Экстракция клотианидина
10.1.1. Зерно кукурузы, семена подсолнечника. Образец размолотого зерна или семян массой 10 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 100 куб. см смеси ацетон-вода с объемным соотношением компонентов 3:1, перемешивают и колбу помещают на встряхиватель на 40 мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 куб. см. Остаток на фильтре промывают 50 куб. см приведенной выше смеси. Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/2 его часть, эквивалентную 5 г образца, переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.2.
10.1.2. Зеленая масса. Образец измельченного растительного материала массой 25 г помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 куб. см, приливают 125 куб. см смеси ацетон-вода с объемным соотношением компонентов 3:1 и гомогенизируют 3 мин. при 8000 об./мин. Гомогенат фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 куб. см. Осадок на фильтре промывают 50 куб. см смеси ацетон-вода с объемным соотношением 3:1. Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/5 его часть (эквивалентную 5 г образца) переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.2.
10.1.3. Масло. Образец масла массой 5 г вносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см, добавляют 20 куб. см гексана, перемешивают. К раствору добавляют 50 куб. см смеси метанол-вода с объемным соотношением компонентов 8:2 и воронку интенсивно встряхивают в течение двух минут. После разделения фаз декантируют водно-метанольный слой в круглодонную колбу через слой ваты, помещенной в конусную воронку. Маслянистый остаток повторно обрабатывают 50 куб. см смеси метанол-вода с объемным соотношением 8:2 и водно-метанольную фазу фильтруют через вату. Вату на фильтре промывают 10 куб. см смеси метанол-вода с объемным соотношением 8:2, фильтрат объединяют с водно-метанольными экстрактами и переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 10.2.
10.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
Отобранные аликвоты экстрактов растительного материала (пп. 10.1.1, 10.1.2), а также экстракт масла (п. 10.1.3) упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка объемом 3 — 5 куб. см при температуре не выше 40 °C. К водному остатку приливают 20 куб. см деионизованной воды, перемешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. В воронку вносят 30 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз нижний органический слой собирают в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, а водную фазу экстрагируют еще дважды, используя по 30 куб. см хлористого метилена. К объединенной дихлорметановой фракции в делительной воронке вместимостью 250 куб. см приливают 25 куб. см водного раствора углекислого калия с молярной концентрацией 0,05 моль/куб. дм (п. 8.1), содержимое интенсивно встряхивают в течение двух минут. После разделения фаз нижний органический слой, содержащий клотианидин, фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу и затем упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 10.3.
10.3. Очистка экстракта на колонке с флоризилом
Сухой остаток экстрактов зерна, семян, масла или зеленой массы, полученный по п. 10.2, растворяют в 3 куб. см этилацетата, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 8.4. Колбу обмывают 3 куб. см этилацетата, который также наносят на колонку. Колонку промывают 40 куб. см этилацетата со скоростью 1 — 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Клотианидин элюируют из колонки 25 куб. см смеси этилацетат-ацетонитрил с объемным соотношением компонентов 1:1 непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток экстракта зерна, семян и масла растворяют в 5 куб. см, а зеленой массы в 12,5 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 8.2), раствор помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. и анализируют на содержание клотианидина по п. 11.
Полнота извлечения клотианидина при проведении всех операций подготовки пробы не менее 81%.
11. Выполнение измерений
11.1. В инжектор хроматографа вводят 5 куб. мм очищенного экстракта анализируемой пробы (пп. 10.1 - 10.3), анализируют при условиях (п. 7.2) и регистрируют хроматограмму. Каждый экстракт хроматографируют дважды.
11.2. Для каждого образца повторяют операции по пп. 10.1 - 10.3, 11.1.
12. Обработка результатов измерений
12.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используется программа сбора и обработки хроматографической информации.
Альтернативная обработка результатов.
По градуировочной характеристике находят значение массовой концентрации клотианидина в экстрактах, C, мкг/куб. см.
Массовую долю клотианидина X, мг/кг, в образцах зерна, семян, масла и зеленой массы рассчитывают по формуле:
C · V
экстр
где:
C - значение массовой концентрации клотианидина в экстрактах, мкг/куб.
см; V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, экстр куб. см;
m - масса анализируемой части образца, соответствующая доле экстракта, использованной для очистки на колонке с флоризилом и последующего
хроматографического определения, г; 0,81 — коэффициент извлечения клотианидина, учитывающий все процедуры подготовки пробы.
12.2. За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости:
2 · |X - X | · 100
1 2
------------------- <= r, (3)
(X + X )
1 2
где:
X , X - результаты параллельных определений массовой доли
1 2
клотианидина, мг/кг; r — значение предела повторяемости, % (табл. 1).
Если условие (3) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями МВИ.
12.3 Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:
\overline{X} \pm 0,01 \cdot \delta \cdot \overline{X},\text{при }P = 0,95,
где: \overline{X} — среднее арифметическое значение результатов n определений, признанных приемлемыми, мг/кг; ±\delta — границы относительной погрешности измерений, % (табл. 1).
В случае, если полученный результат измерений ниже нижней границы диапазона измерений, то результат анализа представляют в виде:
«массовая доля клотианидина в зерне, семенах и масле менее 0,02 мг/кг»;
«массовая доля клотианидина в зеленой массе менее 0,05 мг/кг».
Экстракты, при хроматографировании которых получают аналитический сигнал клотианидина, превышающий аналитический сигнал, получаемый при хроматографировании градуировочного раствора с массовой концентрацией 0,2 мкг/куб. см, разбавляют, но не более чем в 10 раз, и анализируют в соответствии с данной методикой.
13. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости
13.1 Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:
а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;
б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).
13.2. Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.
13.3. Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 · |X - X | · 100
1 2
------------------- <= R, (4)
(X + X )
1 2
где:
X , X - результаты измерений массовой доли клотианидина, выполненных
1 2
в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные
лаборатории), мг/кг; R — предел воспроизводимости, % (при этом R = 2,77 \cdot \sigma_{R} ).
Если предел воспроизводимости не превышен, то приемлемы все результаты измерений и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если предел воспроизводимости превышен, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (п. 5.3.3).
При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (п. 5.3.4).