МУК 4.1.2985-12. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств ацетамиприда в плодах и соке яблок методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 31.10.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.2985-12. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств ацетамиприда в плодах и соке яблок методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.2985-12. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2985-12
(утв. Роспотребнадзором 19.03.2012)
Примечание
Документ введен в действие с 19 марта 2012 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
19 марта 2012 года
с момента утверждения
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ АЦЕТАМИПРИДА В ПЛОДАХ И СОКЕ ЯБЛОК МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.2985-12
1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22.12.2012 № 2).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 19 марта 2012 г.
3. Введены в действие с момента утверждения.
Свидетельство о метрологической аттестации от 10.06.2011 № 01.5.04.009/01.00043/2011.
Настоящий документ устанавливает методику определения остаточных количеств ацетамиприда в плодах и соке яблок в диапазоне концентраций 0,005 — 0,1 мг/кг.
Название действующего вещества по ИСО: ацетамиприд.
Название действующего вещества по ИЮПАК: (E) - N^{1} - [(6 - \text{хлор} - 3 - \text{пиридил})\text{метил}] - N^{2} - \text{циано} - N^{1} - \text{метилацетамидин} .
Химически чистое вещество представляет собой белый кристаллический порошок.
Температура плавления: 98,9 °C.
Давление пара: <1 \times 10^{- 3}\text{м}Pa (25 °C).
Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода: K_{ow}logP = 0,80 (25 °C).
Растворимость в воде (мг/дм3, 25 °C): 4250.
Растворимость в органических растворителях: растворим в ацетоне, метаноле, этаноле, дихлорметане, хлороформе, ацетонитриле и тетрагидрофуране.
Стабилен в буферных при pH 4, 5, 7. Медленно разлагается при pH 9 и 45 °C. Устойчив к воздействию света.
Краткая токсикологическая характеристика
Острая оральная токсичность LD_{50} 2148 мг/кг (крысы). При подкожном введении LD_{50} 4166 мг/кг (кролики). Ингаляционная токсичность LC_{50} более 3,0 мг на 1 дм3 воздуха (крысы, период наблюдения 4 ч). Практически не раздражает кожу и слизистую глаз у кроликов.
Системный инсектицид — агонист никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, влияющий на синапсы центральной нервной системы насекомых.
Механизм действия: трансламинарная активность контактного и желудочного действия.
Используется для подавления развития тли Hemiptera, Thysanoptera и Lipidoptera посредством обработки почвы и листьев растений во фруктовых садах при нормах расхода 100 — 700 г/га.
В России для ацетамиприда установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД — 0,01 мг/кг массы человека; ОДК в почве — 0,6 мг/кг; ПДК в воде водоемов — 0,02 мг/дм3; МДУ (мг/кг) картофель и зерно пшеницы — 0,5, огурцы и томаты — 0,3.
Нормативы для плодов и сока яблок не установлены.
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.
Полнота извлечения ацетамиприда, стандартное отклонение,
доверительный интервал среднего результата
для n = 20, P = 0,95
2. Метод измерения
Методика основана на определении ацетамиприда методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после его экстракции водным ацетоном и очисткой проб перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на концентрирующем патроне, заполненном силикагелем.
Идентификация ацетамиприда проводится по времени удерживания, количественное определение — методом абсолютной калибровки.
Полнота извлечения ацетамиприда, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для n = 20, P = 0,95.
Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
3.1 Средства измерений
| Жидкостный хроматограф «ACQUITY» фирмы «Waters» с быстросканирующим УФ-детектором, снабженным дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки | |
|---|---|
| Весы аналитические ВЛА-200 | ГОСТ 24104-01 |
| Весы технические ВЛКТ-500 | ГОСТ 24104-01 |
| Колбы мерные на 10, 100 и 1000 см3 | ГОСТ 23932-90 |
| Микродозаторы Ленпипет переменного объема от 200 до 1000 мм3 и от 1 до 5 см3 | ТУ 9452-002-33189998-02 |
| Пипетки градуированные | ГОСТ 29227-91 |
| Цилиндры мерные на 50 и 100 см3 | ГОСТ 23932-90 |
Примечание. Допускается использование средств измерения иных производителей с аналогичными характеристиками.
3.2 Реактивы
| Ацетамиприд с содержанием основного вещества 100% (Nippon Soda Co., Ltd.) | |
|---|---|
| Ацетонитрил для ВЭЖХ, «В-230НМ» или хч | ТУ 6-09-3534-87 |
| Ацетон, ОП-2 ОСЧ 9-5 | ТУ 2633-039-4449317 |
| Вода бидистиллированная, деионизированная | ГОСТ 6709-79 |
| Гексан, хч | ТУ 2631-003-05807999-98 |
| Кислота ортофосфорная, хч | ГОСТ 6552-80 |
| Метилен хлористый, хч | ТУ 2631-019-44493179-98 с изм. 1, 2, 3 |
| Натрий гидроокись, хч | ГОСТ 4238-77 |
| Сульфат натрия безводный, хч | ГОСТ 4166-76 |
| Хлорид натрия, чда | ГОСТ 4233-77 |
| Этилацетат, хч, ОКП 26 3471 5023 09 | ГОСТ 22300-76 |
3.3 Вспомогательные устройства и материалы
4.1. При проведении работы необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, 12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.
При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.
4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны».
5. Требования к квалификации операторов
Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.
6. Условия измерений
При выполнении измерений выполняют следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к определению
7.1 Кондиционирование колонки
Перед началом анализа колонку (Acquity BEH C18) кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1 — 0,2 см3/мин) до стабилизации нулевой линии.
7.2 Приготовление растворов
7.2.1. Приготовление 0,005%-го раствора ортофосфорной кислоты: (0,5 +/- 0,01) г 98%-й ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу вместимостью 1 дм3, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки. Перемешивают.
7.2.2. Приготовление 2 М раствора хлорида натрия: в мерную колбу вместимостью 1 дм3 помещают 117 г хлорида натрия. Растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки. Перемешивают.
7.2.3. Приготовление 0,01 М раствора гидроксида натрия: в мерную колбу вместимостью 1 дм3 помещают 0,4 г гидроксида натрия. Растворяют в 0,5 дм3 бидистиллированной воды и доводят объем до метки. Перемешивают.
7.2.4. Для приготовления подвижной фазы: смешивают ацетонитрил и 0,005 М раствор ортофосфорной кислоты в соотношении 25:75 по объему, используя мерные цилиндры.
7.2.5 Приготовление элюентов для твердофазной экстракции:
Элюент 1: В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 25 см3 гексана и доводят объем до метки этилацетатом. Перемешивают. Элюент хранят в вытяжном шкафу и используют свежеприготовленным.
Элюент 2: В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 10 см3 гексана и доводят объем до метки этилацетатом. Перемешивают. Элюент хранят в вытяжном шкафу и используют свежеприготовленным.
7.3 Приготовление основного и градуировочных растворов
7.3.1. Основной раствор с концентрацией 0,5 мг/см3: точную навеску ацетамиприда (50 +/- 0,5) мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки тем же растворителем.
Градуировочные растворы ацетамиприда с концентрациями 0,05, 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления по объему основного раствора подвижной фазы.
7.3.2. Раствор № 1 с концентрацией ацетамиприда 1,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,2 см3 основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой.
7.3.3. Раствор № 2 с концентрацией ацетамиприда 0,5 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 5 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
7.3.4. Раствор № 3 с концентрацией ацетамиприда 0,2 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 2,0 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
7.3.5. Раствор № 4 с концентрацией ацетамиприда 0,1 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 1,0 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
7.3.6. Раствор № 5 с концентрацией ацетамиприда 0,05 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 0,5 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 — 4 °C в течение месяца, градуировочные растворы — в течение недели.
При изучении полноты определения ацетамиприда в плодах и соке яблок используют ацетонитрильные растворы ацетамиприда. Растворы с концентрациями 1,0 и 10,0 мкг/см3 готовят из основного раствора с концентрацией 0,5 мг/см3 методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.
7.4 Построение градуировочного графика
Для установления градуировочной характеристики (площадь пика — концентрация ацетамиприда в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации ацетамиприда в градуировочном растворе.
Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (K) в уравнении линейной регрессии:
Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.
Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.
Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:
C — аттестованное значение массовой концентрации ацетамиприда в градуировочном растворе;
C_{\text{к}} — результат контрольного измерения массовой концентрации ацетамиприда в градуировочном растворе;
\lambda_{\text{контр}.} — норматив контроля градуировочного коэффициента, % ( \lambda_{\text{контр}.} = 10\% при P = 0,95).
7.5 Подготовка концентрирующих патронов Силикагель 60
Непосредственно перед употреблением через патрон пропускают 2 см3 элюата 1.
8. Отбор проб и хранение
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.1979) или в соответствии с ГОСТ 27572-87 «Яблоки свежие для промышленной переработки».
Плоды яблок хранят до анализа в морозильной камере при температуре -18 °C. Пробы сока хранят в холодильнике при температуре 0 — 4 °C в течение 3 суток, при температуре -18 °C — в течение месяца (в пластиковых бутылях).
9. Проведение определения
9.1 Определение ацетамиприда в соке яблок
На воронке Бюхнера фильтруют 20 см3 сока и доводят объем фильтрата до 100 см3 водой. Полученный раствор помещают в делительную воронку вместимостью 250 см3 и промывают двумя порциями гексана по 25 см3. Органический слой отделяют и отбрасывают. К водному остатку прибавляют 50 см3 2 М раствора хлорида натрия и экстрагируют ацетамиприд 25 см3 хлористого метилена, встряхивая воронку в течение 2 мин. Отделяют нижний органический слой и дважды повторяют экстракцию. Объединенный экстракт промывают 20 см3 0,01 М раствора гидроксида натрия, водный слой отделяют и отбрасывают, а органический пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 1,5 см3 этилацетата, прибавляют 0,5 см3 гексана и количественно переносят пробу в подготовленный концентрирующий патрон Силикагель 60. Промывают 8 см3 элюента 1. Промывку отбрасывают. Ацетамиприд элюируют 10 см3 элюента 2. Элюат упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 1 см3 подвижной фазы и 10 мм3 полученного раствора вводят в хроматограф.
9.2 Определение ацетамиприда в плодах яблок
В коническую колбу вместимостью 250 см3 помещают 20 г измельченных плодов, прибавляют 10 см3 воды. 40 см3 ацетона и экстрагируют в течение 10 мин в ультразвуковой ванне. Суспензию фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют. Объединенный экстракт упаривают на вакуумном ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °C до полного удаления ацетона. Объем водного остатка доводят водой до 100 см3 и далее обрабатывают пробу по п. 9.1.
9.3 Условия хроматографирования
Ультраэффективный жидкостный хроматограф «ACQUITY» фирмы Waters с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка ACQUITY UPLC BEH C18 (2,1 x 100) мм, 1,7 мкм (Waters). Температура колонки (30 +/- 1) °C. Подвижная фаза: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 25:75. Скорость потока элюента: 0,2 см3/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора 245 нм. Объем вводимой пробы 10 мм3.
Время удерживания ацетамиприда (3,4 +/- 0,1) мин.
Линейный диапазон детектирования сохраняется в интервале концентраций 0,05 — 1,0 мкг/см3.
10. Обработка результатов анализа
Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание ацетамиприда в плодах и соке яблок (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
S_{x} — площадь пика ацетамиприда на хроматограмме испытуемого образца, мм2 (AU);
K — градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости;
V — объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3:
P — навеска анализируемого образца, г;
f — полнота извлечения ацетамиприда, приведенная в табл. 2, %.
Содержание остаточных количеств ацетамиприда в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор ацетамиприда с концентрацией 1,0 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:
X_{1} и X_{2} — результаты параллельных определений, мг/кг;
r — значение предела повторяемости (r = 2,8\sigma_{r}) .
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
(\overline{X} \pm \Delta)\text{мг}/\text{кг} при вероятности P = 0,95, где
\overline{X} — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/кг:
\delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание ацетамиприда в пробах плодов и сока яблок менее 0,005 мг/кг» <*>.
<*> — 0,005 мг/кг — предел обнаружения ацетамиприда в пробах плодов и соке яблок.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
Величина добавки C_{\text{д}} должна удовлетворять условию:
\pm \Delta_{\text{л},X}( \pm \Delta_{\text{л},X'}) — характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг; при этом
\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta , где
\delta — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
Результат контроля процедуры K_{\text{к}} рассчитывают по формуле:
X', X, C_{\text{д}} — среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
K = \sqrt{\Delta_{\text{л},X\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},X}^{2}}
Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K_{\text{к}}) с нормативом контроля (K).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
X_{1} и X_{2} — результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.
14. Разработчики
Долженко В.И., Цибульская И.А., Журкович И.К., Луговкина Н.В., Ковров Н.Г. (ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, Санкт-Петербург).