МУК 4.1.2954-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение массовой концентрации диметилового эфира терефталевой кислоты (диметилтерефталата) в моче методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.2954-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение массовой концентрации диметилового эфира терефталевой кислоты (диметилтерефталата) в моче методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.2954-11. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2954-11
(утв. Роспотребнадзором 29.07.2011)
Примечание
Документ введен в действие с 29 июля 2011 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
29 июля 2011 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАССОВОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ ДИМЕТИЛОВОГО ЭФИРА ТЕРЕФТАЛЕВОЙ КИСЛОТЫ (ДИМЕТИЛТЕРЕФТАЛАТА) В МОЧЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.2954-11
с момента утверждения
1. Разработаны Федеральным бюджетным учреждением науки «Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения» Роспотребнадзора.
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации» Г.Г. Онищенко 27 июля 2011 г.
3. Введены в действие с момента утверждения.
1. Общие положения и область применения
Свидетельство об аттестации № 223.1.0244/01.00258/2010.
1.1. Методические указания по определению массовой концентрации диметилового эфира терефталевой кислоты (диметилтерефталата) в моче предназначены для использования органами, осуществляющими государственный санитарно-эпидемиологический надзор и организациями Роспотребнадзора, лечебными и научными учреждениями, осуществляющими деятельность в области профпатологии и экологии человека, научно-исследовательскими институтами, занимающимися вопросами гигиены окружающей среды.
Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля за содержанием диметилового эфира терефталевой кислоты в биологических средах (моче) у населения, проживающего в условиях с повышенным уровнем загрязнения окружающей среды.
1.2. Физико-химические и токсические свойства диметилового эфира терефталевой кислоты.
Структурная формула (не приводится).
Диметиловый эфир терефталевой кислоты (диметилтерефталат) - бесцветные кристаллы призматической формы, молекулярная масса 194,19, t = 141 - 142
пл
°С, d(20 °С) = 1,63. Растворяется в воде, этиленгликоле, метаноле, хлороформе, ксилоле, бензоле. Температура воспламенения диметилтерефталата 577,85 °С, температура самовоспламенения 853 °С, температура вспышки 146
°С, пылевоздушная смесь взрывоопасна.
Диметилтерефталат обладает умеренно выраженным кумулятивным и слабым раздражающим действиями, вызывает умеренную анемию и ретикулоцитоз, лейкопению, лимфоцитоз, влияет на сердечно-сосудистую систему.
2.1. Метод измерений массовой концентрации диметилового эфира терефталевой кислоты (диметилтерефталата) основан на извлечении диметилтерефталата из мочи твердофазной экстракцией на полимерном сорбенте Oasis HLB и анализе экстракта на жидкостном хроматографе в градиентном режиме элюирования с использованием флуориметрического детектора.
2.2. Определению не мешают диметиловый эфир фталевой кислоты, диметиловый эфир изофталевой кислоты, монометиловые эфиры изомеров фталевой кислоты, диэтиловые эфиры изомеров фталевой кислоты, фталевая, изофталевая и терефталевая кислоты.
2.3. Диапазон измерений массовой концентрации диметилового эфира терефталевой кислоты в моче — 0,001 — 1,0 мкг/куб. см.
3. Приписанные характеристики показателей точности измерений
Погрешность измерений, соответствует характеристикам, приведенным в табл. 1.
ПРЕЦИЗИОННОСТИ, ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ
| Диапазон измерений, мкг/куб. см | Показатели прецизионности (относительные значения) | Показатель точности (границы | ||
| Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Стандартное отклонение внутрилабораторной прецизионности, сигма , R % | Стандартное отклонение воспроизводимости, сигма , % R | относительной погрешности при P = 0,95), +/- дельта <1>, % | |
| от 0,001 до 1 включ. | 7 | 11 | 12 | 24 |
| <1> Соответствует расширенной относительной неопределенности при коэффициенте охвата k = 2. | ||||
материалы, растворы и реактивы
При выполнении измерений применяют следующие средства измерении, вспомогательные устройства, материалы и реактивы.
4.1 Средства измерений
Жидкостный хроматограф, оснащенный
термостатом колонок, 2-х или 4-х канальным Государственный реестр насосом, устройством для дегазации элюента, средств измерений флуориметрическим детектором N 16193-06
Весы лабораторные специального класса точности с ценой наименьшего деления 0,1 мг, наибольшим пределом взвешивания 210 г ГОСТ Р 53228
Колбы мерные вместимостью 25, 100 куб. см ГОСТ 1770
Пипетки градуированные вместимостью 0,5; 1; 5 куб. см ГОСТ 29227
Микрошприцы МШ-10 ТУ 2.833.106 Редуктор кислородный ТУ 26-05-236
4.2 Вспомогательные устройства
Колонка металлическая 2,1 х 150 мм, заполненная сорбентом Eclipse XDB-C зернением 5 мкм 18
Предколонка Eclipse XDB-C зернением 5 мкм 18 2,1 х 12,5 мм
Картриджи для твердофазной экстракции с сорбентом Oasis HLB 3cc (90 мг) «Waters»
Центрифуга ЦЛМН-Р10-01-"Элекон" ТУ 9443-001-245.23530 Сушильный шкаф ШСС-80 ТУ 16.531.743
Устройство для твердофазной экстракции: (Waters) камера с регулировкой вакуумного давления, в которую помещается штатив с картриджами Oasis (от 1 до 20 шт.), соединенная с вакуумным насосом (давление от 0 до 30 х 100 кПа)
Стаканы для взвешивания (бюксы) СВ 19/9 ГОСТ 25336
Шприц медицинский одноразовый типа «Луер» вместимостью 1 куб. см ГОСТ Р ИСО 7886-1
Фильтры капроновые с диаметром пор не более 5 мкм
Стеклянные виалы объемом 2 куб. см
Пробирки конические вместимостью 15 куб. см
ПП градуированные с завинчивающейся крышкой CTS-151H
4.3 Реактивы
Ацетонитрил для жидкостной хроматографии, осч ТУ 6-09-14-2167 Спирт метиловый для жидкостной хроматографии, осч ТУ 6-09-2192
Спирт этиловый ректификованный ГОСТ Р 51652
Вода дистиллированная ГОСТ 6709
Диметиловый эфир терефталевой кислоты, тех. ГОСТ 11363
4.4 Материалы
4.5 Растворы
Исходный раствор диметилтерефталата для градуировки (раствор № 1)
Разбавленный раствор диметилтерефталата для градуировки (раствор № 2)
1. Допускается использование других средств измерений утвержденных типов, обеспечивающих измерения с установленной точностью.
2. Допускается использование другого оборудования, материалов и реактивов с метрологическими и техническими характеристиками, аналогичными указанным.
5.1 Требования безопасности при работе
с химическими веществами
При работе с реактивами соблюдают требования безопасности по ГОСТ 12.1.007-76 и 12.1.005-88.
5.2 Общие требования безопасности
5.2.1. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают меры безопасности, указанные в «Руководстве по правилам эксплуатации» прибора, правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79, противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004, и имеют средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83.
5.2.2 Помещение оборудуется приточно-вытяжной вентиляцией.
5.2.3. При работе с биологическими средами необходимо соблюдать правила в соответствии с требованиями СП 1.3.2322-08.
6. Требования к квалификации оператора
К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика с опытом работы на жидкостном хроматографе, освоившие метод анализа и получившие удовлетворительные результаты оперативного контроля процедуры выполнения измерений.
7.1. При подготовке к проведению измерений и приготовлении растворов соблюдают следующие условия (ГОСТ 15150):
7.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией к прибору.
8. Подготовка к выполнению измерений
Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка посуды, приготовление растворов, подготовка хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.
8.1 Подготовка посуды
Используемую посуду вымыть мыльным раствором, промыть проточной водопроводной водой, ополоснуть дистиллированной водой, обработать этиловым спиртом и высушить при температуре 50 °С.
8.2 Приготовление растворов
8.2.1. Элюент для хроматографии. Смесь ацетонитрила с дистиллированной водой в соотношении 25:75 (объемная доля). Состав элюента задают на двух каналах насоса.
8.2.2. Раствор ацетонитрила 20%-й (объемная доля). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 20,0 куб. см ацетонитрила, доводят дистиллированной водой до метки, перемешивают и дегазируют содержимое колбы барботированием гелия в течение 2 — 3 мин. со скоростью 50 — 60 куб. см/мин. Срок хранения раствора 5 дней.
8.2.3. Исходный раствор диметилового эфира терефталевой кислоты для градуировки (раствор № 1). Навеску диметилтерефталата массой (50,0 +/- 0,12) мг вносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доводят метанолом до метки. Массовая концентрация диметилтерефталата в исходном растворе составляет 0,5 мг/куб. см. Срок хранения раствора 7 суток при комнатных условиях.
8.2.4. Рабочий раствор диметилового эфира терефталевой кислоты для градуировки (раствор № 2). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,1 куб. см раствора № 1 и доводят метанолом до метки. Концентрация диметилтерефталата в разбавленном растворе составляет 0,5 мкг/куб. см. Используют свежеприготовленный раствор.
8.2.5. Стандартный раствор для идентификации диметилтерефталата. В мерную колбу вместимостью 25 куб. см вносят 10 куб. мм исходного раствора диметилового эфира терефталевой кислоты для градуировки (раствор № 1) и доводят содержимое колбы ацетонитрилом до метки. Концентрация диметилтерефталата составляет 0,2 мкг/куб. см. Срок хранения раствора 7 суток при комнатных условиях.
8.3 Подготовка хроматографической колонки
Колонку устанавливают в хроматограф и подают элюент со скоростью 1,0 куб. см/мин. до установления равновесия колонки, которое определяют по стабильности нулевой линии детектора.
8.4 Установление градуировочной характеристики
8.4.1. Строят две зависимости площади хроматографического пика от массовой концентрации диметилтерефталата в моче в диапазонах 0,001 — 0,020 мкг/куб. см и 0,02 — 1,00 мкг/куб. см. Градуировочную характеристику в каждом диапазоне устанавливают по шести сериям растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из трех растворов, готовят из растворов для градуировки (N 1 и 2), приготовленных по пунктам 8.2.3 - 8.2.4 настоящих МУ.
8.4.2. Для приготовления градуировочных смесей отбирают пробу мочи объемом не менее 900 куб. см. В соответствии с п. 9 проводят анализ пробы мочи на содержание диметилтерефталата. При наличии анализируемого вещества в холостой пробе вычитают его фоновое содержание при построении градуировочного графика.
8.4.3. Градуировочные растворы готовят в мерных колбах вместимостью 25,0 куб. см. Для этого в каждую колбу вносят растворы для градуировки № 1 и 2 в соответствии с табл. 2, доводят объем колбы до метки мочой и перемешивают. Одновременно готовят холостую пробу, не содержащую исследуемого вещества. Анализируют свежеприготовленные растворы.
В МОЧЕ В ДИАПАЗОНЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,001 — 1,00 МКГ/КУБ. СМ
| Номер раствора | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Объем раствора № 1 (C = 500 мкг/куб. см), куб. см | - | - | - | - | - | - | - | - | 0,005 | 0,012 | 0,025 |
| Объем раствора № 2 (C = 0,5 мкг/куб. см), куб. см | 0,05 | 0,10 | 0,15 | 0,25 | 0,50 | 1,00 | 2,5 | 5,0 | - | - | - |
| Количество диметилтерефталата в градуировочном растворе, мкг | 0,025 | 0,050 | 0,075 | 0,125 | 0,250 | 0,500 | 1,25 | 2,5 | 5,0 | 12,0 | 25,0 |
| Массовая концентрация диметилтерефталата в моче, мкг/куб. см | 0,001 | 0,002 | 0,003 | 0,005 | 0,010 | 0,020 | 0,05 | 0,1 | 0,2 | 0,48 | 1,0 |
8.4.4. Переносят 15,0 куб. см каждого градуировочного раствора в коническую пробирку вместимостью 15 куб. см и центрифугируют со скоростью 2000 об./мин. в течение 5 мин. Для получения одного измерения отбирают 3 куб. см верхнего слоя мочи и проводят твердофазную экстракцию. Для этого пропускают под вакуумом через картридж с сорбентом Oasis HLB 3cc 1 куб. см ацетонитрила, 1 куб. см дистиллированной воды, 3 куб. см отцентрифугированной мочи, 3 куб. см дистиллированной воды, 2 куб. см 20%-го раствора ацетонитрила. Скорость потока не должна превышать 1 куб. см/мин. Затем переносят патрон с сорбентом в накопительный сосуд (бюкс) и пропускают через сорбент 1,0 куб. см ацетонитрила. Полученный экстракт фильтруют через капроновый фильтр, используя медицинский шприц «Луер», в стеклянную виалу и аликвотную часть (10 куб. мм) анализируют на приборе.
8.4.5 Условия хроматографирования:
Колонка 2,1 х 150 мм, заполненная сорбентом Eclipse XDB-C ; 18
подвижная фаза — смесь ацетонитрила и воды в соотношении 25:75;
градиент: 10 мин. подача подвижной фазы (25% ацетонитрила и 75% воды), увеличение ацетонитрила с 25 до 90% в течение 5 мин., 5 мин. подача 90% ацетонитрила, снижение ацетонитрила до 25% в течение 5 мин., подача 25% ацетонитрила до уравновешивания колонки (10 мин.);
скорость движения элюента 1,0 куб. см/мин.; температура термостата колонки 27 °С;
длина волны возбуждения 246 нм; длина волны эмиссии 330 нм; время удерживания диметилтерефталата: (8,6 +/- 0,1) мин.
8.4.6 Градуировочный коэффициент рассчитывают по формуле:
n
SUM C / S
i=1 i i
где:
C - концентрация диметилтерефталата в градуировочном растворе,
i
мкг/куб. см; S — среднее значение трех измерений площади пика диметилтерефталата i i-й концентрации, расхождение между минимальным и максимальным значением из которых не должно превышать 4% относительно среднего значения S единицы i оптической плотности (е.о.п.); n — количество градуировочных смесей (n = 6).
8.4.7 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят 1 раз в квартал в анализируемой серии измерений. Образцами для контроля стабильности являются градуировочные растворы, выбранные таким образом, чтобы массовая концентрация диметилтерефталата соответствовала нижней, верхней границам и середине диапазона построения градуировочной характеристики. Градуировка признается стабильной при выполнении условия:
C — заданная массовая концентрация диметилтерефталата в градуировочном растворе;
X — результат измерения массовой концентрации диметилтерефталата в градуировочном растворе.
При невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики эксперимент повторяют с другим градуировочным раствором. При повторном невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики.
8.5 Отбор проб
Отбирают мочу объемом не менее 20 куб. см в стеклянную посуду с крышкой. Срок хранения проб в холодильнике 6 ч.
Выполняют два параллельных измерения образца мочи. В коническую пробирку вместимостью 15 куб. см переносят 5,0 куб. см мочи и центрифугируют со скоростью 2000 об./мин. в течение 5 мин., отбирают 3 куб. см верхнего слоя и проводят твердофазную экстракцию, последовательно пропуская под вакуумом через картридж с сорбентом Oasis HLB 3cc 1 куб. см ацетонитрила, 1 куб. см дистиллированной воды, 3 куб. см мочи, 3 куб. см дистиллированной воды, 2 куб. см 20%-го водного раствора ацетонитрила. Скорость потока не должна превышать 1 куб. см/мин. Затем переносят патрон с сорбентом в накопительный сосуд (бюкс) и пропускают через сорбент 1,0 куб. см ацетонитрила. Полученный экстракт фильтруют через капроновый фильтр, используя медицинский шприц типа «Луер», в стеклянную виалу и аликвотную часть (10 куб. мм) анализируют в условиях, указанных в п. 8.4.5 настоящих МУ.
Идентификацию диметилтерефталата проводят путем сравнения времен удерживания хроматографических пиков в анализируемой пробе и стандартном растворе.
10. Обработка (вычисление) результатов измерений
10.1 Массовую концентрацию диметилтерефталата в моче (мкг/куб. см) вычисляют по формуле:
где:
X - массовая концентрация диметилтерефталата в анализируемой пробе,
мкг/куб. см; S — площадь пика диметилтерефталата на хроматограмме, е.о.п.; i K — градуировочный коэффициент. _
10.2. За результат измерения X принимают среднее арифметическое значение двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости X , X (параллельных определений), для которых выполняется условие: 1 2 X + X 1 2 |X - X | <= 0,01 х r х -------, (1) 1 2 2 где r - предел повторяемости. Значения предела повторяемости приведены
в табл. 3.
При невыполнении условия (1) получают дополнительно еще два результата
измерений. За результат измерений принимают среднее арифметическое четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, для которых
выполняется условие:
X + X + X + X
1 2 3 4
|X - X | <= 0,01 х CR (4) х -----------------, (2)
max,4 min,4 0,95 4
где CR (4) - критический диапазон. Значения критического диапазона
0,95
приведены в табл. 3.
При невыполнении условия (2) в качестве окончательного результата измерений принимают медиану четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (параллельных определений). Дополнительно выявляют и устраняют причины, приводящие к невыполнению условия (1).
10.3. Расхождение между результатами измерений, полученными в двух лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости:
_ _
X + X
1 2
|X - X | <= 0,01 х R х -------, (3)
1 2 2
_ _
где X и X - результаты измерений массовой концентрации
1 2
диметилтерефталата, полученные в разных лабораториях - средние
арифметические двух результатов измерений, полученных в условиях
повторяемости, для которых выполняется условие (1).
При выполнении условия (3) приемлемы оба результата измерений, и в качестве окончательного может быть использовано их среднее арифметическое значение. Значения предела воспроизводимости приведены в табл. 3.
ВЕРОЯТНОСТИ P = 0,95
| Диапазон измерений, мкг/куб. см | Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории в условиях повторяемости), r, % | Критический диапазон (относительное значение допускаемого расхождения между наибольшим и наименьшим четырех результатов измерений, полученных в одной лаборатории в условиях повторяемости), CR (4), 0,95 % | Предел воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях), R, % |
|---|---|---|---|
| от 0,001 до 1 включ. | 20 | 25 | 34 |
11. Оформление результатов измерений
_
Результат измерения представляют в виде (X +/- ДЕЛЬТА) мкг/куб. см, где ДЕЛЬТА — характеристика погрешности, мкг/куб. см, при P = 0,95, значение ДЕЛЬТА рассчитывают по формуле:
_
дельта х X
где значение дельта приведено в табл. 1.
12. Процедуры обеспечения достоверности измерений
Контроль стабильности результатов измерений в пределах лаборатории организуют и проводят в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 и РМГ 76-2004 ГСИ.
Периодичность получения результатов контрольных процедур и формы их регистрации приводят в документах лаборатории, устанавливающих порядок и содержание работ по организации методов контроля стабильности результатов измерений в пределах лаборатории.
12.1 Алгоритм оперативного контроля процедуры измерений
с использованием метода добавок
Оперативный контроль процедуры измерений проводят путем сравнения результата отдельно взятой контрольной процедуры K с нормативом контроля
к
K.
Результат контрольной процедуры K рассчитывают по формуле: к
_ _ K = |X' - X - C |, к д
где:
_
X' - результат измерений массовой концентрации диметилтерефталата в пробе с известной добавкой - среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми
удовлетворяет условию (1); _
X - результат измерений массовой концентрации диметилтерефталата в исходной пробе - среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми
удовлетворяет условию (1); C — величина добавки к пробе, мкг/куб. см. Величина добавки должна д составлять не менее 40% от содержания диметилтерефталата в рабочей пробе.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
________________________
/ 2 2 K = \/ДЕЛЬТА + ДЕЛЬТА , л,X' л,X ср ср где ДЕЛЬТА , ДЕЛЬТА - значения характеристики погрешности л,X' л,X ср ср
результатов измерений, установленные в лаборатории при реализации методики, соответствующие массовой концентрации диметилтерефталата в пробе с известной добавкой и в исходной пробе соответственно.
Примечание. Допустимо характеристику погрешности результатов измерений при внедрении методики в лаборатории устанавливать на основе выражения: ДЕЛЬТА = 0,84 х ДЕЛЬТА, с последующим уточнением по мере накопления
л
информации в процессе контроля стабильности результатов измерений.
Процедуру измерений признают удовлетворительной, при выполнении условия:
При невыполнении условия (4) контрольную процедуру повторяют. При повторном невыполнении условия (4) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
12.2 Алгоритм проведения контрольной процедуры при контроле
внутрилабораторной прецизионности
Контрольные процедуры при контроле промежуточной прецизионности получают с использованием рабочих проб мочи.
При реализации контрольной процедуры получают два результата _ _ контрольных измерений (первичного X и повторного X ) массовой концентрации 1 2
диметилтерефталата в условиях внутрилабораторной прецизионности.
Результат контрольной процедуры признают удовлетворительным при выполнении следующего условия:
_ _
X + X
_ _ 1 2
|X - X | <= 0,01 х R х -------. (5)
1 2 л 2
Значение предела внутрилабораторной прецизионности (R , %) не превышает л
31%.
«Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения» Роспотребнадзора.