МУК 4.1.2911-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Римсульфурона в плодах томата и томатном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 12.07.2011)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 12 июля 2011 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
12 июля 2011 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ РИМСУЛЬФУРОНА В ПЛОДАХ ТОМАТА И ТОМАТНОМ СОКЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
с момента утверждения
1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 № 1).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.
4. Введены в действие с момента утверждения.
Свидетельство о метрологической аттестации № 0068.03.12.10 от 08.12.2010.
Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств Римсульфурона в диапазоне 0,02 — 0,2 мг/кг в плодах томата и в томатном соке.
Название действующего вещества по ИЮПАК: 1-(4,6-диметокси-пиримидин-2-ил)-3-(3-этилсульфонил-2-пиридилсульфонил)мочевина:
Структурная формула (не приводится).
Эмпирическая формула: C H № O S . 14 17 5 7 2
Агрегатное состояние: бесцветные кристаллы.
Цвет, запах: химически чистый Римсульфурон представляет собой белый порошок без запаха. -3
Давление паров 1,5 x 10 мПа (при 25 °C). Коэффициент распределения октанол-вода (25 °C): K log P = 0,288
ow
(pH 5) — 1,47 (pH 7).
Температура плавления: 176 — 178 °C.
Растворимость в воде (25 °C): 0,135 мг/куб. дм (pH 5), 7,3 мг/куб. дм (pH 7), 5,56 мг/куб. дм (pH 9).
В воде гидролизуется (при 25 °C): DT 4,6 дня (pH 5), 7,2 дня (pH 7), 50 0,3 дня (pH 9).
Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм при 25 °C): ацетон — 14,8, ацетонитрил — 17,2, этилацетат — 2,85, гексан < 0,01, метанол — 1,55, N,N-диметилформамид — 241,0, хлористый метилен — 35,5.
Римсульфурон быстро разлагается в почве. Подвергается, главным образом,
химическому гидролизу и в очень малой мере микробиологической деградации. Скорость деградации зависит от pH, так как соединение стабильно в нейтральной среде и быстрее разлагается в щелочных и кислых почвах. DT в
50
почве составляет 10 — 20 дней (в лабораторных условиях).
В растениях разлагается в течение нескольких часов: DT в кукурузе 50
- 6 ч.
Краткая токсикологическая характеристика: Римсульфурон относится к малоопасным по острой пероральной (ЛД для крыс более 5000 мг/кг) и
50
дермальной токсичности (ЛД для кроликов более 2000 мг/кг), но к умеренно 50 опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК для крыс (4 ч) 50 5400 мг/куб. м). Не вызывает покраснения кожи, слабо раздражает слизистую оболочку глаз.
Область применения препарата: Римсульфурон — гербицид системного действия, проникающий через корни и листья растений и ингибирующий биосинтез изолейцина и валина. Рекомендуется как послевсходовый гербицид для контроля однолетних и многолетних трав и некоторых широколистных сорняков на посевах кукурузы. Также используется на посадках картофеля и томатов. Хорошо подавляет развитие чувствительных к нему сорняков при норме расхода 15 г д.в./га.
Римсульфурон применяют также в виде смесевых препаратов с комбинации с клопиралидом, флуметсуламом, никосульфуроном, атразином, тифенсульфурон-метилом, метрибузином, тербутилазином.
В России для Римсульфурона установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД — 0,02 мг/кг массы тела человека; ПДК в воде водоемов — 0,002 мг/куб. дм; ПДК в воде рыбохозяйственных водоемов — 0,5 мг/куб. дм; МДУ (мг/кг): в кукурузе и картофеле — 0,01; в томатах и томатном соке — 0,05.
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ДЛЯ РИМСУЛЬФУРОНА
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
| Плоды томата | 0,02 — 0,1 вкл. | 50 | 1,10 | 3,05 | 3,63 |
| 0,1 — 0,2 вкл. | 25 | 0,85 | 2,37 | 2,82 | |
| Томатный сок | 0,02 — 0,1 вкл. | 50 | 0,68 | 1,97 | 2,34 |
| 0,1 — 0,2 вкл. | 25 | 0,71 | 1,88 | 2,24 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА ДЛЯ РИМСУЛЬФУРОНА
| Анализируемый объект | Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20 | ||||
| Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Полнота извлечения вещества, % | Стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего результата, +/-, % | |
| Плоды томата | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 75,13 | 3,02 | +/- 1,06 |
| Томатный сок | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 74,24 | 1,35 | +/- 0,47 |
2. Метод измерений
Метод основан на определении Римсульфурона методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием диодно-матричного детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, на колонках с окисью алюминия и концентрирующих патронах Диапак С и Диапак С16.
Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
3.1. Средства измерений
Весы аналитические «OHAUS», EP 114 с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г, класс точности по ГОСТ 24104-2001 — специальный (I)
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г «ACCULAB» V600, соответствуют классу точности по ГОСТ 24104-2001 — средний (III)
Колбы мерные на 10, 25, 50, 100, 500 и 1000 куб. см ГОСТ 1770-74
Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 куб. см ГОСТ 29227-91 pH-метр/милливольтметр pH-150 0 — 14 pH; +/- 1999 мВ, номер госрегистрации № 10663
Хроматограф жидкостный Agilent 1200 LCMS с диодно-матричным детектором G1315B, снабженный термостатом для колонок с диапазоном температур от 15 до 80 °C и стандартным автосамплером для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему (1200 Series Autosampler с дозирующим объемом от 0,1 до 100 куб. мм); номер госрегистрации 16193-06
Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 куб. см ГОСТ 1770-74
Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Римсульфурон, CAS 122931-48-0, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,9%, фирма Dr. Ehreustorfer GmbH, аккредитованная по ИСО 9001:2000
Ацетон, ос.ч. ТУ 6-09-3513-86 Ацетонитрил, ос.ч., УФ-200 нм ТУ 6-09-2167-84
Вода дистиллированная и (или) бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости) ГОСТ 6709-72
Гелий очищенный марки "А" ТУ 51-940-80 n-Гексан, х.ч. ТУ 6-09-3818-89
Калий марганцовокислый, ч.д.а. ГОСТ 20490-75
Кальций хлористый, ч. ТУ 6-09-4711-81
Кислота муравьиная, ч.д.а. ГОСТ 5848-73
Кислота соляная, х.ч. ГОСТ 3118-77
Кислота уксусная ледяная ГОСТ 61-75
Концентрирующие патроны Диапак С и
Диапак С16 (0,6 г), фирма "БиоХимМак СТ" ТУ 4215-002-05451931-94 Метилен хлористый, х.ч. ТУ 6-09-2662-77
Натрий сернокислый, безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76
Натрий хлористый, х.ч. ГОСТ 4233-77
Натрия гидрокарбонат, х.ч. ГОСТ 2156-76
Хлороформ, х.ч. ГОСТ 20015-88
Этилацетат, х.ч. ГОСТ 22300-76
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.3. Вспомогательные устройства и материалы
Алонж прямой с отводом для вакуума (АО-14/23) для работы с концентрирующими патронами Диапак С и Диапак С16 ГОСТ 25336-82
Аппарат для встряхивания проб «SKLO UNION TYP LT1»
Банки с крышками для экстракции на 250 куб. см, полипропилен, кат. № 3120-0250, фирма «NALGENE»
Ванна ультразвуковая «UNITRA» UNIMA OLSZTYN UM-4
Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная ГОСТ 5556-81
Воронки делительные на 250 куб. см ГОСТ 25336-82
Воронки лабораторные стеклянные ГОСТ 25336-82
Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной баней В-480, фирма «Buchi»
Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1000 куб. см ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100, 250 куб. см и 4000 куб. см ТС ТУ 92-891.029-91
Колонка хроматографическая стальная длиной 250 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм Symmetry Shield RP18, зернение 5 мкм, фирма «Waters»
Насос диафрагменный FT.19, фирма «KNF Neu Laboport»
Предколонка хроматографическая стальная Zorbax Eclipse XDB-C8 длиной 12,5 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, зернение 5 мкм, фирма «Agilent»
Стаканы стеклянные термостойкие объемом 100 — 500 куб. см ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 куб. см и приемной конической колбой объемом 1000 куб. см
Фильтры бумажные «красная лента» ТУ-6-09-1678-86
Фильтры для очистки растворителей диаметром 20 мм с отверстиями пор 20 мкм, фирма «Waters»
Центрифуга MPW-350e с числом оборотов 4000 об./мин. и с набором полипропиленовых банок емкостью 200 куб. см
Шприц инъекционный однократного применения объемом 10 куб. см ГОСТ 24861-91 (ИСО 7886-84)
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению определений
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка колонок с окисью алюминия, концентрирующих патронов Диапак С и Диапак С16 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонках с окисью алюминия и на концентрирующих патронах Диапак С и Диапак С16, установление градуировочной характеристики.
7.1. Подготовка органических растворителей
7.1.1 Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см аппарата для перегонки растворителей.
Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °C, отбрасывают.
7.1.2 Очистка ацетона
Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм.
Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C, отбрасывают.
7.1.3 Приготовление бидистиллированной воды
Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 ч.
Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.
7.2. Приготовление растворов для проведения анализа
7.2.1 Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ
В плоскодонную колбу объемом 1000 куб. см помещают 400 куб. см ацетонитрила и 600 куб. см 0,1%-го раствора муравьиной кислоты. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 куб. см/мин. в течение 5 мин., после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин.
7.2.2 Приготовление рабочих растворов
7.2.2.1 Приготовление 0,1%-го раствора муравьиной кислоты.
В мерную колбу объемом 1000 куб. см помещают 500 куб. см очищенной воды, 1 куб. см концентрированной муравьиной кислоты, перемешивают, после чего доводят объем до метки очищенной водой.
7.2.2.2. Приготовление 0,05 М раствора двузамещенного фосфорнокислого калия.
В мерную колбу на 500 мл переносят 5,7 г K HPO x 3H O, добавляют 2 4 2 200 - 300 мл бидистиллированной воды, перемешивают до полного растворения
осадка, доводят водой до метки, проверяют pH полученного раствора с помощью потенциометра. Если pH раствора менее 9, доводят его до указанного значения с помощью 1 М раствора едкого натра, контролируя pH с помощью потенциометра.
7.2.2.3 Приготовление 6 М раствора соляной кислоты.
Мерным цилиндром отбирают 246 куб. см концентрированной соляной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 500 куб. см, куда предварительно наливают около 100 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой). Готовый раствор хранят при комнатной температуре не более 30 суток.
7.2.3 Приготовление градуировочных растворов
7.2.3.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией Римсульфурона 1,0 мг/куб. см.
Взвешивают 50 мг Римсульфурона в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.
7.2.3.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией Римсульфурона 10,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 2 используется для внесения в контрольные образцы и для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике не более 30 суток.
7.2.3.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией Римсульфурона 1,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 3 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 3 хранится в холодильнике не более 30 суток.
7.2.3.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией Римсульфурона 0,5 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 4 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 4 хранится в холодильнике не более 30 суток.
7.2.3.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией Римсульфурона 0,2 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 50 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 5 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 5 хранится в холодильнике не более 30 суток.
7.2.3.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией Римсульфурона 0,1 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 6 используется для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 6 хранится в холодильнике не более 30 суток.
7.2.3.7. Стандартные растворы Римсульфурона с концентрацией 2,0; 1,0; 0,4 и 0,2 мкг/куб. см для внесения в контрольные образцы.
Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 2,0; 1,0; 0,4 и 0,2 мкг/куб. см, и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы.
7.3. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Римсульфурона в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см.
В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
7.4. Подготовка концентрирующих патронов Диапак С для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения Римсульфурона на них
7.4.1 Подготовка концентрирующих патронов Диапак С
для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. (1 — 2 кап./с).
Патрон Диапак С устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 куб. см этилацетата, 5 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 8:2. Элюаты отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
7.4.2 Проверка хроматографического поведения Римсульфурона
на концентрирующем патроне Диапак С
Из стандартного раствора Римсульфурона в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см этилацетата, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 куб. см гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 40:60 и хроматографируют. Исходный концентратор обмывают последовательно 20 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 8:2, затем двумя порциями по 10 куб. см 0,1%-й муравьиной кислоты в этилацетате, тщательно обмывая стенки концентратора, вносят на патрон.
Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в концентраторы объемом по 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 40:60 и хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие Римсульфурон, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Изучение поведения Римсульфурона на концентрирующих патронах Диапак С проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.
7.5. Подготовка концентрирующих патронов Диапак С16 для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения Римсульфурона на них
7.5.1 Подготовка концентрирующих патронов Диапак С16
для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. (1 — 2 кап./с).
Патрон Диапак С16 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 куб. см ацетонитрила, затем 15 куб. см воды. Элюаты отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
7.5.2 Проверка храматографического поведения Римсульфурона
на концентрирующих патронах Диапак С16
Из стандартного раствора Римсульфурона в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 5 куб. см 0,05 М раствора двузамещенного фосфата калия, помещают на 10 с на ультразвуковую ванну, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 40:60 и хроматографируют.
Исходный концентратор обмывают последовательно 10 куб. см 0,005% уксусной кислоты, затем двумя порциями по 5 куб. см 0,1% уксусной кислоты в ацетонитриле, полученные растворы последовательно вносят на патрон.
Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие Римсульфурон, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Изучение поведения Римсульфурона на концентрирующих патронах Диапак С16 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.
7.6. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии
Хроматографическую колонку Symmetry Shield RP18 с предколонкой Zorbax Eclipse устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 30 °C и скорости потока подвижной фазы 1 куб. см/мин. 3 — 4 ч.
8. Отбор проб и хранение
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», № 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ Р 51810-2001 «Томаты свежие, реализуемые в розничной торговой сети» и ГОСТ Р 52183-2003 «Консервы. Соки овощные. Сок томатный. ТУ».
Пробы плодов томата хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 — 4 °C не более суток.
Для длительного хранения пробы плодов томата замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре -18 °C до 2 лет.
Пробы соков хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °C не более 10 суток.
9. Подготовка проб и выполнение измерений
9.1. Плоды томата
9.1.1 Экстракция и очистка полученного экстракта
Образец измельченных плодов томата массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 куб. см, прибавляют 50 куб. см ацетонитрила и помещают на 5 мин. на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в делительную воронку объемом 250 куб. см через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 куб. см ацетонитрила и помещая каждый раз на 5 мин. на аппарат для встряхивания проб. Экстракты объединяют в делительной воронке объемом 250 куб. см.
К ацетонитрильному экстракту прибавляют 50 куб. см гексана и встряхивают делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а нижний (ацетонитрильный) слой возвращают в делительную воронку и повторяют процедуру еще раз, используя 50 куб. см гексана. Нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор объемом 250 куб. см и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °C.
9.1.2 Очистка экстракта перераспределением в системе
несмешивающихся растворителей
К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.1, прибавляют 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 40:60, тщательно обмывают стенки концентратора, затем прибавляют 50 куб. см дистиллированной воды, 5 г хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Полученную водную фракцию промывают двумя порциями гексана по 30 куб. см, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а водную фракцию переносят в чистую делительную воронку и доводят pH до значения 3,5 с помощью 6 М HCl.
Римсульфурон экстрагируют тремя порциями хлороформа объемом по 30 куб. см, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлороформ) собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия толщиной 1 см и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °C.
9.1.3 Очистка экстракта на концентрирующих
патронах Диапак С
Сухой остаток, полученный в п. 9.1.2, растворяют в 2 куб. см этилацетата, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 куб. см гексана, перемешивают и вносят на патрон. Исходный концентратор обмывают 20 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 8:2 и вносят на патрон. Элюаты отбрасывают, а патрон сушат под вакуумом 2 мин. Римсульфурон элюируют 10 куб. см 0,1%-й муравьиной кислоты в этилацетате. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
9.1.4 Вторая очистка экстракта перераспределением
в системе несмешивающихся растворителей
К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.3, прибавляют 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 40:60, тщательно обмывают стенки колбы, затем прибавляют 30 куб. см дистиллированной воды, 3 г хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Полученную водную фракцию промывают двумя порциями гексана по 10 куб. см, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а водную фракцию переносят в чистую делительную воронку и доводят pH до значения 3,5 с помощью 6 М HCl.
Римсульфурон экстрагируют тремя порциями хлороформа объемом по 10 куб. см, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлороформ) собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия толщиной 1 см и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °C.
9.1.5 Очистка экстракта на концентрирующих
патронах Диапак С16
Сухой остаток, полученный в п. 9.1.4, растворяют в 5 куб. см 0,05 М раствора двузамещенного фосфата калия, помещают на 10 с на ультразвуковую ванну, перемешивают и вносят на патрон. Исходный концентратор обмывают 10 куб. см раствора 0,005% уксусной кислоты. Элюаты отбрасывают, а патрон сушат под вакуумом 2 мин. Римсульфурон элюируют 5 куб. см 0,1%-й уксусной кислоты в ацетонитриле. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 40:60 и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.2. Томатный сок
9.2.1 Экстракция
Образец томатного сока массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 куб. см, доводят pH до значения 3,5 с помощью 6 М HCl, прибавляют 30 куб. см хлористого метилена и помещают на 5 мин. на аппарат для встряхивания проб. После экстракции пробу центрифугируют 5 мин. при скорости 4000 об./мин. Экстракт переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Нижний слой (хлористый метилен) собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Верхний слой сливают в банку для экстракции и центрифугирования, повторяют экстракцию еще два раза, используя по 30 куб. см хлористого метилена и помещая на 5 мин. на аппарат для встряхивания проб. Пробы центрифугируют, экстракты переносят в делительную воронку, хлористый метилен объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см, выпаривают досуха при температуре не выше 30 °C.
9.2.2 Очистка экстракта перераспределением в системе
несмешивающихся растворителей
Сухой остаток, полученный по п. 9.2.1, растворяют в 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 40:60 и проводят очистку экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, как указано в п. 9.1.2.
9.2.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах
Диапак С и Диапак С16
Сухой остаток, полученный по п. 9.2.2, растворяют в 2 куб. см этилацетата и очищают на концентрирующих патронах Диапак С, как указано в п. 9.1.3, и на концентрирующих патронах Диапак С16, как указано в п. 9.1.5.
После очистки элюат выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 40:60 и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.3. Условия хроматографирования
Хроматограф жидкостной Agilent 1200 LCMS с диодно-матричным детектором G1315B с изменяемой длиной волны, снабженный термостатом для колонок с диапазоном температур от 15 до 80 °C и стандартным автосамплером для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему (1200 Series Autosampler с дозирующим объемом от 0,1 до 100 куб. мм).
Колонка стальная Symmetry Shield RP18, 250 мм х 4,6 мм, зернение 5 мкм, фирма «Waters».
Предколонка стальная Zorbax Eclipse XDB-C8, 12,5 мм х 2,1 мм, зернение 5 мкм, фирма «Agilent».
Подвижная фаза: ацетонитрил — 0,1%-я муравьиная кислота в соотношении 400:600.
Время удерживания Римсульфурона: 9,707 мин. +/- 3%.
Объем вводимой пробы: 20 куб. мм.
Чувствительность не менее 10 mAU (миллиединиц абсорбции) на шкалу.
Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 — 20 нг.
10. Обработка результатов
Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа Agilent Technologies ChemStation for LC 3D.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание Римсульфурона рассчитывают по формуле:
S x A x V
пр
X = ------------- x P, 100 x S x m ст
X — содержание Римсульфурона в пробе, мг/кг;
S — высота (площадь) пика стандарта, мм; ст
S — высота (площадь) пика образца, мм; пр
A — концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m — масса анализируемого образца, г (куб. см);
P — содержание Римсульфурона в аналитическом стандарте, %.
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(X + X )
1 2
X , X - результаты параллельных определений, мг/кг; 1 2
r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 x сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
_
(X +/- ДЕЛЬТА) при вероятности P = 0,95,
X — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
дельта x X
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,02 мг/кг» <*>.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки C должна удовлетворять условию: д
C = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,X л,X' где +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности л,X л,X' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
дельта x X
где сигма — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результат контроля процедуры K рассчитывают по формуле: к
_ _ K = X' - X - C , к д
_
где X', X, C — среднее арифметическое параллельных определений д (признанных приемлемыми по п. 11), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2 K = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,X' л,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K ) с нормативом
к
контроля (K).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(X + X )
1 2
X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг; 1 2
R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
табл. 1), %.
14. Разработчики
Российский государственный аграрный университет — МСХА имени К.А. Тимирязева.
Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов». 127550, Москва, Тимирязевская ул., д. 53/1. Телефон: (499)976-37-68, факс: (499)976-43-26.