МУК 4.1.2866-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Хлорантранилипрола в плодовых (косточковых) культурах, перце, огурцах, томатах, ягодах и соке винограда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.2866-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Хлорантранилипрола в плодовых (косточковых) культурах, перце, огурцах, томатах, ягодах и соке винограда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.2866-11. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2866-11
(утв. Роспотребнадзором 31.03.2011)
Примечание
Документ введен в действие с 31 марта 2011 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
31 марта 2011 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ХЛОРАНТРАНИЛИПРОЛА В ПЛОДОВЫХ (КОСТОЧКОВЫХ) КУЛЬТУРАХ, ПЕРЦЕ, ОГУРЦАХ, ТОМАТАХ, ЯГОДАХ И СОКЕ ВИНОГРАДА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
с момента утверждения
1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом — МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 28.12.2010 № 3).
3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 31 марта 2011 г.
4. Введены в действие с момента утверждения.
Общие положения и область применения
Свидетельство об аттестации методики от 28.09.2010 № 0050.27.09.10.
Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовых концентраций Хлорантранилипрола в плодовых косточковых культурах, перце, огурцах, томатах, ягодах винограда и виноградном соке в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг.
Структурная формула (не приводится).
Название действующего вещества по ИЮПАК: 3-Бром-N-[4-хлор-2-метил-6-(метилкарбамоил)фенил]-1-(3-хлорпиридин-2-ил)-1H-пиразол-5-карбоксамид.
Эмпирическая формула: C H BrCl N O . 18 14 2 5 2
Порошок белого цвета без запаха. Температура плавления 208 - 210 °С. -12 -11 Давление паров 6,3 х 10 Па при 20 °С; 2,1 х 10 Па при 25 °С. Растворимость в органических растворителях при 20 °С (в г/куб. дм): ацетон
- 3,446; ацетонитрил — 0,711; диметилформамид — 124; дихлорметан — 2,476; этилацетат — 1,144; метанол — 1,714; толуол — 0,32; н-октанол — 0,386; н-гексан < 0,0001. Растворимость в воде при 20 °С (в мг/куб. дм): 0,972 (pH
4), 0,880 (pH 7), 0,971 (pH 9). Коэффициент распределения н-октанол/вода K log P = 2,76.
ow
Краткая токсикологическая характеристика: Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс и мышей - более 5000 мг/кг; острая дермальная
50
токсичность (LD ) для крыс — более 5000 мг/кг; острая ингаляционная 50 токсичность (LC ) для крыс — более 5,1 г/куб. дм (4 ч). 50
Область применения: Хлорантранилипрол — инсектицид широкого спектра действия класса антранилдиамидов, эффективно подавляет развитие вредителей из отряда чешуекрылых, жесткокрылых (колорадский жук), двукрылых (минеры).
МДУ Хлорантранилипрола (в импортируемой продукции) в винограде, перце, плодовых (косточковых) — 1,0 мг/кг, томатах — 0,3 мг/кг, огурцах — 0,2 мг/кг.
1. Метрологические характеристики
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , r % | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Плодовые (косточковые) культуры | от 0,01 до 0,1 вкл. | 50 | 3,6 | 10 | 12 |
| Перец | от 0,01 до 0,1 вкл. | 50 | 3,9 | 11 | 13 |
| Огурцы | от 0,01 до 0,1 вкл. | 50 | 3,4 | 10 | 12 |
| Томаты | от 0,01 до 0,1 вкл. | 50 | 3,6 | 10 | 12 |
| Ягоды винограда | от 0,01 до 0,1 вкл. | 50 | 2,9 | 8 | 10 |
| Виноградный сок | от 0,01 до 0,1 вкл. | 50 | 2,6 | 7 | 8 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 2.
| Анализируемый объект | Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20 | ||||
| Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Полнота извлечения вещества, % | Стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего результата, +/-, % | |
| Плодовые (косточковые) культуры | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 87,47 | 2,9 | 1,5 |
| Перец | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 84,45 | 3,6 | 1,9 |
| Огурцы | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 90,70 | 3,2 | 1,7 |
| Томаты | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 87,29 | 3,0 | 1,6 |
| Ягоды винограда | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 87,09 | 3,6 | 1,9 |
| Виноградный сок | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 91,33 | 2,7 | 1,4 |
2. Метод измерений
Метод основан на определении Хлорантранилипрола с использованием обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после извлечения вещества из анализируемых образцов ацетонитрилом, очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с флорисилом.
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
3.1. Средства измерений
Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны фирмы «Agilent» Номер Госреестра 16193-06
Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104-2001
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г ГОСТ 24104-2001
Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-500-2, 2-1000-2 ГОСТ 1770-74
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 куб. см ГОСТ 29227-91
Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой вместимостью 5 и 10 куб. см ГОСТ 1770-74
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, 50, 100, 250, 500 и 1000 куб. см ГОСТ 1770-74
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Хлорантранилипрол, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества 99,7% (CAS No. 563-12-2)
Ацетонитрил для хроматографии, хч ТУ 6-09-14-2167-84
Вода для лабораторного анализа (деионизованная, бидистиллированная) ГОСТ Р 52501-2005
н-Гексан (гексан) для ВЭЖХ ТУ 6-09-06-657-84
Калий марганцово-кислый (перманганат калия), хч ГОСТ 20490-75
Калий углекислый (карбонат калия, поташ), хч, прокаленный ГОСТ 4221-76
Кальций хлористый (хлорид кальция), хч, насыщенный водный раствор ГОСТ 450-77
Кислота ортофосфорная, хч, 85% ГОСТ 6552-80
Кислота серная концентрированная, хч ГОСТ 4204-77
Метилен хлористый (дихлорметан), хч ГОСТ 12794-80
Натрий сернокислый (сульфат натрия) безводный, хч ГОСТ 4166-76
Натрий углекислый (карбонат натрия), хч ГОСТ 83-79
Натрий хлористый, хч, насыщенный водный раствор ГОСТ 4233-77
Флорисил для колоночной хроматографии (60 — 100 меш) фирм «SERVA», «MERK» (Германия) или аналогичный
Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид, пентоксид фосфора) ТУ 6-09-4173-85
Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат), хч ГОСТ 22300-76
Допускается использование реактивов иных производителей с более высокой квалификацией, не требующих выполнения п. 7.1 (очистка растворителей).
3.3. Вспомогательные устройства, материалы
Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с ТУ 64-1-2851-78
Баня ультразвуковая фирмы «Донау» (Швейцария)
Бумажные фильтры «красная лента» обеззоленные или фильтры из хроматографической бумаги Ватман 3ММ ТУ 2642-001-05015242-07
Воронка делительная вместимостью 250 и 1000 куб. см ГОСТ 9737-93
Воронки стеклянные конусные типа В-36-80 ХС и В-56-80 ХС ГОСТ 25336-82
Груша резиновая ТУ 9398-05-0576-9082-2003
Колбы конические (плоскодонные) вместимостью 100, 250, 300 куб. см ГОСТ 23932-90
Колбы круглодонные на шлифе (для упаривания) вместимостью 10, 150 и 500 куб. см ГОСТ 9737-93
Колонка стеклянная для препаративной хроматографии длиной 25 см, внутренним диаметром 10 — 12 мм
Мембранные фильтры микропористые марки ММК капроновые диаметром 50 мм, размер пор 0,45 мкм ТУ 9471-002-10471723-2003
Набор для фильтрации растворителей через мембрану
Насос водоструйный вакуумный ГОСТ 25336-82
Стаканы химические вместимостью 100, 500 куб. см ГОСТ 25336-82
Ректификационная колонна с числом теоретических тарелок не менее 30
Ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы «Buchi», Швейцария
Установка для перегонки растворителей Хроматографическая колонка стальная длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Eclipse XDB С18, зернение 5 мкм
Центрифуга роторная, скорость вращения до 3500 об./мин., с центрифужными стаканами объемом 100 куб. см
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50 — 100 куб. мм
Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004-90.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе, освоивших данную методику и подтвердивших экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению измерений
Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление градуировочных растворов, раствора внесения, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, приготовление смесей растворителей для очистки экстрактов на колонке, подготовка колонки с флорисилом, проверка хроматографического поведения Хлорантранилипрола на ней.
7.1. Очистка органических растворителей
7.1.1 Ацетонитрил
Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 куб. дм ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 куб. дм ацетонитрила 10 г карбоната калия).
Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над прокаленным карбонатом калия.
7.1.3 Хлористый метилен и этилацетат
7.1.3.1. Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5%. Навеску (25 +/- 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 куб. см, растворяют в бидистиллированной воде, доводят водой до метки, перемешивают.
7.1.3.2. Очистка растворителей. Каждый растворитель промывают последовательно 5%-ным водным раствором натрия углекислого, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над прокаленным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.
7.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ
7.2.1. Приготовление раствора ортофосфорной кислоты с массовой долей 0,2% (0,2%-ный раствор). В мерную колбу вместимостью 500 куб. см помещают 250 — 300 куб. м бидистиллированной воды, вносят 1 куб. см ортофосфорной кислоты, доводят водой до метки, перемешивают.
7.2.2. Приготовление подвижной фазы. В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 500 куб. см ацетонитрила, вносят 500 куб. см 0,2%-го раствора ортофосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.
7.3. Кондиционирование хроматографической колонки
Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2) при скорости подачи растворителя 0,8 куб. см/мин. до установления стабильной базовой линии.
7.4. Приготовление градуировочных растворов
7.4.1. Исходный раствор Хлорантранилипрола для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г Хлорантранилипрола, растворяют в 50 — 70 куб. см ацетонитрила, доводят до метки этим же растворителем, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.
Градуировочные растворы № 2 — 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.
7.4.2. Раствор № 1 Хлорантранилипрола для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10,0 куб. см исходного раствора Хлорантранилипрола с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.4.1), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают.
Раствор хранится в холодильнике не более месяца.
Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом «внесено-найдено».
7.4.3. Рабочие растворы № 2 — 5 Хлорантранилипрола для градуировки (концентрация 0,1 — 1,0 мкг/куб. см).
В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0; 2,0; 5,0 и 10 куб. см раствора № 1 Хлорантранилипрола с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.4.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2 — 5 с концентрацией Хлорантранилипрола 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/куб. см соответственно.
Растворы хранятся в холодильнике не более недели.
7.5. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площадей пиков (мЕА х с) от концентрации Хлорантранилипрола в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки № 2 — 5.
В инжектор хроматографа вводят 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений.
Градуировочную характеристику проверяют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Если значение площади отличается более чем на 12% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.
7.6. Приготовление смесей гексан — этилацетат для очистки экстрактов на колонке с флорисилом
7.6.1. Смесь гексан — этилацетат (объемное соотношение 9:1). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 90 куб. см гексана и 10 куб. см этилацетата, перемешивают.
7.6.2. Смесь гексан — этилацетат (объемное соотношение 8:2). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 80 куб. см гексана и 20 куб. см этилацетата, перемешивают.
7.6.3. Смесь гексан — этилацетат (объемное соотношение 7:3). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 70 куб. см гексана и 30 куб. см этилацетата, перемешивают.
7.7. Подготовка колонки с флорисилом для очистки экстрактов
Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 10 — 12 мм уплотняют тампоном из стекловаты, выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г флорисила в 30 куб. см гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента, на который помещают слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают смесью гексан — этилацетат в объемном соотношении 7:3, затем гексаном порциями по 30 куб. см, скорость прохождения растворителя 1 — 2 капли в секунду. Колонка готова к работе.
7.8. Проверка хроматографического поведения Хлорантранилипрола на колонке с флорисилом
В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,5 куб. см раствора № 1 Хлорантранилипрола с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.4.2), упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С. Сухой остаток растворяют в 3 куб. см смеси гексан — этилацетат (9:1, по объему), помещая на ультразвуковую баню на 40 — 60 с, и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.7. Колбу обмывают дважды этой же смесью растворителей порциями по 3 куб. см, которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку — 1 - 2 капли в секунду. Промывают колонку 50 куб. см гексана, смесями гексан — этилацетат в объемном соотношении 9:1, затем 8:2 порциями по 30 куб. см, элюат отбрасывают.
Затем колонку промывают 50 куб. см смеси гексан — этилацетат (7:3, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в секунду. Фракционно (по 10 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 2 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ, анализируют содержание Хлорантранилипрола по п. 9.3.
Фракции, содержащие Хлорантранилипрол, объединяют и вновь анализируют.
Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.
Примечание: Проверку хроматографического поведения Хлорантранилипрола следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.
8. Отбор и хранение проб
Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТами: 21920-76 «Слива и алыча крупноплодная свежие. ТУ»; 21833-76 «Персики свежие. ТУ»; 21921-76 «Вишня свежая. ТУ»; 21922-76 «Черешня свежая. ТУ»; 21832-76 «Абрикосы свежие. ТУ»; 21405-75 «Алыча мелкоплодная свежая. ТУ»; 1725-85 «Томаты свежие. ТУ»; Р 51810-2001 «Томаты свежие, реализуемые в розничной торговой сети. ТУ»; 1726-85 «Огурцы свежие. ТУ»; 13908-68 «Перец сладкий свежий. ТУ»; 25896-83 «Виноград свежий столовый. ТУ», 28472-90 «Виноград свежий ручной уборки для консервирования. Требования при заготовках и поставках»; 26313-84 «Продукты переработки плодов и овощей»; «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (от 21.08.1979 № 2051-1979).
Отобранные пробы плодов косточковых культур, огурцов, томатов, перца, винограда, сока хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более 5 дней. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °С.
Перед анализом образцы плодов косточковых культур, огурцов, томатов, перца, ягод винограда измельчают с помощью гомогенизатора.
9. Выполнение определения
9.1. Плодовые косточковые культуры, огурцы, томаты, перец, ягоды винограда
9.1.1 Экстракция
Образец измельченных с помощью гомогенизатора плодов косточковых культур, огурцов, томатов, перца, ягод винограда массой 20 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 — 300 куб. см, вносят 20 куб. см бидистиллированной воды, помещают на аппарат для встряхивания на 20 мин. Добавляют 80 куб. см ацетонитрила, интенсивно встряхивают (или гомогенизируют) в течение 1 мин., затем помещают на аппарат для встряхивания на 30 мин.
Пробам дают отстояться, затем надосадочную жидкость фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной фильтр «красная лента». Растительный остаток повторно экстрагируют 100 куб. см ацетонитрила при встряхивании в течение 30 мин., раствор фильтруют на воронке Бюхнера. Объединенный отфильтрованный экстракт переносят в колбу для упаривания на 500 куб. см и упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С до объема 10 — 15 куб. см. Очищают перераспределением в системе несмешивающихся растворителей по п. 9.1.2, затем на колонке с флорисилом по п. 9.1.3.
9.1.2 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
Водный остаток в колбе, полученный по п. п. 9.1.1 или 9.2.1, переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, колбу дополнительно обмывают 40 куб. см воды, которую также переносят в воронку, вносят 20 куб. см насыщенного раствора хлористого натрия, перемешивают. Затем в воронку вносят 30 куб. см дихлорметана, интенсивно встряхивают в течение 1 мин., после полного разделения фаз нижний дихлорметановый слой переносят в коническую колбу на 250 — 300 куб. см. Экстракцию Хлорантранилипрола повторяют еще дважды порциями дихлорметана объемом 30, затем 20 куб. см. Для обеспечения лучшего расслаивания проб раствор переносят в центрифужный стакан и центрифугируют 5 мин. при 3000 об./мин. Объединенный дихлорметановый экстракт фильтруют через слой (около 2 см) безводного сульфата натрия, помещенный на бумажном фильтре в химическую воронку, в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 150 куб. см, упаривают досуха и дополнительно очищают на колонке с флорисилом по п. 9.1.3.
9.1.3 Очистка экстракта на колонке с флорисилом
Остаток, полученный по п. 9.1.2, находящийся в круглодонной колбе, растворяют в 3 куб. см смеси гексан — этилацетат (9:1, по объему), помещая на ультразвуковую баню на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.7. Колбу обмывают дважды смесью гексан — этилацетат (9:1, по объему) порциями по 3 куб. см, которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку — 1 - 2 капли в секунду. Промывают колонку 50 куб. см гексана, 30 куб. см смеси гексан — этилацетат в объемном соотношении 9:1, затем 30 куб. см смеси гексан — этилацетат в объемном соотношении 8:2, элюат отбрасывают.
Хлорантранилипрол элюируют с колонки 40 куб. см смеси гексан — этилацетат в объемном соотношении 7:3 со скоростью 1 — 2 капли в секунду, собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 150 куб. см, раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °С, остаток растворяют в 2 куб. см подвижной фазы и анализируют на содержание Хлорантранилипрола по п. 9.3.
9.2. Виноградный сок
9.2.1 Экстракция
Пробу сока массой 20 г помещают в коническую колбу на 250 — 300 куб. см, добавляют 20 куб. см насыщенного раствора хлористого натрия, перемешивают, вносят 80 куб. см бидистиллированной воды, интенсивно встряхивают (или гомогенизируют) в течение 1 мин., затем помещают на аппарат для встряхивания на 30 мин.
Пробу переносят в делительную воронку на 250 куб. см, после полного разделения слоев нижний водный слой собирают в колбу, в которой находилась проба, верхний переносят в колбу для упаривания на 500 куб. см, фильтруя через бумажный фильтр, помещенный в химическую воронку. В коническую колбу с пробой вносят новую порцию ацетонитрила объемом 100 куб. см и повторно экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 30 мин. Затем раствор переносят в делительную воронку на 250 куб. см, после полного разделения слоев нижний водный слой отбрасывают, верхний фильтруют через бумажный фильтр, помещенный в химическую воронку, и переносят в колбу для упаривания, объединяя с первой порцией экстракта.
Объединенный отфильтрованный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С до объема 10 — 15 куб. см. Очищают перераспределением в системе несмешивающихся растворителей по п. 9.1.2, затем на колонке с флорисилом по п. 9.1.3.
9.3. Условия хроматографирования
Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны.
Рабочие длины волн: 260 и 245 нм <*>.
<*> Хроматографирование пробы при двух длинах волн повышает надежность идентификации.
Хроматографическая колонка стальная длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Eclipse XDB С18, зернение 5 мкм.
Подвижная фаза: ацетонитрил — 0,2%-ная ортофосфорная кислота (50:50, по объему).
Скорость потока элюента: 0,8 куб. см/мин.
Объем вводимой пробы: 20 куб. мм.
Ориентировочное время выхода Хлорантранилипрола: 6,97 — 7,15 мин.
Линейный диапазон детектирования 2 — 20 нг.
Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площади пиков вещества (в мЕА х с), находят среднее значение, с помощью градуировочной характеристики определяют концентрацию Хлорантранилипрола в хроматографируемом растворе.
Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2, не более чем в 50 раз.
10. Обработка результатов анализа
Содержание Хлорантранилипрола в пробе (Х, мг/кг) рассчитывают по формуле:
С х V
С — концентрация Хлорантранилипрола, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/куб. см;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m — масса анализируемого образца, г.
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 х |Х - Х | х 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(Х + Х )
1 2
где:
Х , Х - результаты параллельных определений, мг/кг;
1 2
r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
_
(Х +/- ДЕЛЬТА), мг/кг, при вероятности P = 0,95,
где:
_
Х - среднее арифметическое результатов определений, признанных
приемлемыми, мг/кг; ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание Хлорантранилипрола в пробе менее 0,01 мг/кг» <*>.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки С должна удовлетворять условию: д
С >= ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,Х л,Х' где +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности л,Х л,Х' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном определяемых концентраций, табл. 1), %.
Контрольный параметр процедуры (К ) рассчитывают по формуле: к
_ _ К = Х' - Х - С , к д _ _ где Х', Х, С - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2 К = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,Х' л,Х Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
к
контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 х |Х - Х | х 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(Х + Х )
1 2
где:
Х , Х - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном определяемых
концентраций, табл. 1), %.
14. Разработчики
ФГУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора.