МУК 4.1.2858-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Топрамезона в воде, почве, зеленой массе, зерне и масле кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.2858-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Топрамезона в воде, почве, зеленой массе, зерне и масле кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.2858-11. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2858-11
(утв. Роспотребнадзором 31.03.2011)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 31 марта 2011 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
31 марта 2011 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТОПРАМЕЗОНА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ, ЗЕРНЕ И МАСЛЕ КУКУРУЗЫ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.2858-11
с момента утверждения
1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом — МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 28.12.2010 № 3).
3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 31.03.2011.
4. Введены в действие с момента утверждения.
Общие положения и область применения
Свидетельство об аттестации методики от 01.12.2010 № 0059.29.11.10.
Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации Топрамезона в воде в диапазоне 0,005 — 0,05 мг/куб. дм и в почве в диапазоне 0,01 — 0,10 мг/кг, а также уровня его остаточных количеств в зеленой массе кукурузы в диапазоне 0,05 — 0,50 мг/кг, в зерне и масле кукурузы в диапазоне 0,01 — 0,10 мг/кг.
Название действующего вещества по ИЮПАК: 3-(4,5-дигидро-1,2-оксазол-3-ил)-4-мезил-о-толилметанон.
Структурная формула (не приводится).
Эмпирическая формула: C H № O S. 16 17 3 5
Агрегатное состояние: порошок.
Цвет, запах: химически чистый Топрамезон представляет собой белый кристаллический порошок. -7
Давление паров: 1,00 x 10 мПа(при 25 °C).
Температура плавления: 221,6 °C.
Коэффициент распределения октанол-вода (pH 7, 20 °C): 1,52.
Константа диссоциации (рКа) (при 25 °C): 4,06 (слабая кислота).
Растворимость в воде (при 20 °C): 100 г/куб. дм.
Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм, при 20 °C): ацетон — 10, гексан — 10, толуол — 10, этилацетат — 10.
Топрамезон стабилен в водных растворах (период полураспада при pH 5,0 — 9,0, при 20 °C составляет 30 дней).
Период полураспада в воде при фотолизе составляет 72 дня (в природной воде), в буферном растворе при pH в диапазоне 5 — 9 стабилен.
Топрамезон долго сохраняется в почве с периодом полураспада в лаборатории 186 дней, в поле — 45 дней. Может повреждать последующие культуры севооборота (соя).
Краткая токсикологическая характеристика: Топрамезон относится к веществам малоопасным по острой пероральной (ЛД для крыс 2000 мг/кг) и
50
дермальной (ЛД для крыс 2000 мг/кг) токсичности, но к умеренно опасным 50 веществам по ингаляционной токсичности (ЛК для крыс (4 ч) 5400 мг/куб. 50 м). Раздражает глаза и кожные покровы. Имеются подозрения относительно канцерогенности.
Область применения: Топрамезон — системный селективный гербицид листового действия из группы ингибиторов синтеза каратиноидов, эффективно подавляет рост и развитие двудольных однолетних и некоторых злаковых сорняков в посевах кукурузы.
В России предлагается в качестве смесевого гербицида в посевах кукурузы с нормой расхода 240 г д.в./га.
МДУ Топрамезона (в импортируемой продукции): зерно и масло кукурузы — 0,01 мг/кг.
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ДЛЯ ТОПРАМЕЗОНА
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
| Вода | 0,005 — 0,01 вкл. | 100 | 1,35 | 3,75 | 4,47 |
| 0,01 — 0,05 вкл. | 50 | 1,48 | 4,12 | 4,90 | |
| Почва | 0,01 — 0,1 вкл. | 50 | 0,81 | 2,24 | 2,67 |
| Зеленая масса | 0,05 — 0,1 вкл. | 50 | 1,78 | 4,94 | 5,88 |
| кукурузы | 0,1 — 0,5 вкл. | 25 | 1,63 | 4,53 | 5,39 |
| Зерно кукурузы | 0,01 — 0,1 вкл. | 50 | 1,90 | 5,29 | 6,30 |
| Масло кукурузы | 0,01 — 0,1 вкл. | 50 | 1,82 | 5,07 | 6,03 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
ДЛЯ ТОПРАМЕЗОНА
| Анализируемый объект | Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20 | ||||
| предел обнаружения, мг/кг | диапазон определяемых концентраций, мг/кг | полнота извлечения вещества, % | стандартное отклонение, S, % | доверительный интервал среднего результата, +/-, % | |
| Вода | 0,005 | 0,005 — 0,05 | 84,06 | 3,98 | 1,56 |
| Почва | 0,01 | 0,01 — 0,10 | 81,53 | 4,21 | 1,61 |
| Зеленая масса кукурузы | 0,05 | 0,05 — 0,50 | 77,08 | 3,25 | 1,17 |
| Зерно кукурузы | 0,01 | 0,01 — 0,10 | 78,81 | 5,86 | 2,16 |
| Масло кукурузы | 0,01 | 0,01 — 0,10 | 88,04 | 4,65 | 1,91 |
2. Метод измерений
Метод основан на определении Топрамезона методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, на концентрирующих патронах Диапак Амин, Диапак П и Диапак Диол.
Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
3.1. Средства измерений
Весы аналитические «OHAUS», EP 114 с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г, класс точности по ГОСТ 24104-2001 — специальный (I)
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г «ACCULAB» V600, соответствуют классу точности по ГОСТ 24104-2001 — средний (III)
Колбы мерные на 10, 25, 50, 100, 500 и 1000 куб. см ГОСТ 1770-74
Микрошприц для жидкостной хроматографии «Hamilton, 1700», объем 10 куб. мм, фирма «SUPELCO», кат. № 26281
Пипетки мерные на 1,0, 2,0, 5,0 куб. см ГОСТ 29227-91 pH-метр/милливольтметр pH-150 0 — 14 pH; +/- 1999 мВ, номер госрегистрации 10663
Хроматограф жидкостной Waters 510 с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу,
номер госрегистрации 15311-02
Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 куб. см ГОСТ 1770-74
Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы и материалы
Топрамезон, CAS 210631-68-8, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,8%, фирма «Dr. Ehreustorfer GmbH», аккредитованная по ИСО-9001-2000
Аммоний уксуснокислый (аммония ацетат) безводный (98%, CAS 631-61-8), фирма «Acros Organics»
Ацетон, ос.ч. ТУ 6-09-3513-86 Ацетонитрил, ос.ч., УФ-200 нм ТУ 6-09-2167-84
Вода дистиллированная и (или) бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости) ГОСТ 6709-72
Гелий очищенный, марки "А" ТУ 51-940-80 n-Гексан, х.ч. ТУ 6-09-3818-89
Калий марганцово-кислый, ч.д.а. ГОСТ 20490-75
Кальций хлористый, ч. ТУ 6-09-4711-81
Концентрирующие патроны Диапак Амин, Диапак Диол и Диапак П (0,6 г), фирма «БиоХимМак СТ» ТУ 4215-002-05451931-94
Кислота муравьиная, ч.д.а. ГОСТ 5848-73
Кислота соляная, х.ч. ГОСТ 857-95
Кислота уксусная ледяная, х.ч. ГОСТ 61-75
Метилен хлористый, х.ч. ТУ 6-09-2662-77
Натрий фосфорно-кислый однозамещенный, 2-водный, ч.д.а. ГОСТ 245-76
Натрий фосфорнокислый двузамещенный, 12-водный, х.ч. ГОСТ 4172-76
Натрий сернокислый, безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76
Натрий хлористый, х.ч. ГОСТ 4233-77
Натрия гидроокись, х.ч. ГОСТ 4328-77
Спирт метиловый (метанол), х.ч. ГОСТ 6995-77
Хлороформ, х.ч. ГОСТ 20015-88
Этилацетат, ч.д.а. ГОСТ 22300-76
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.3. Вспомогательные устройства и материалы
Алонж прямой с отводом для вакуума (АО-14/23) для работы с концентрирующими патронами Диапак Амин и Диапак С16 ГОСТ 25336-82
Аппарат для встряхивания проб «SKLO UNION TYP LT1»
Банки с крышками для экстракции на 250 куб. см, полипропилен, кат. № 3120-0250, фирма «NALGENE»
Ванна ультразвуковая «UNITRA» UNIMA OLSZTYN UM-4
Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная ГОСТ 5556-81
Воронки делительные на 250 и 500 куб. см ГОСТ 25336-82 Воронки лабораторные стеклянные ГОСТ 25336-82
Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной баней B-480, фирма «Buchi»
Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1000 куб. см ГОСТ 25336-82
Колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, Symmetry Shield RPI8, зернение 5 мкм, фирма «Waters»
Насос диафрагменный FT.19, фирма «KNF Neu Laboport»
Предколонка хроматографическая стальная Simmetry C18, 20 мм x 3,9 мм, зернение 5 мкм, фирма «Waters»
Сито лабораторное с полотном из латуни или нержавеющей стали с размером ячеек 1 мм ГОСТ 3826-82 и ГОСТ 6613-86
Стаканы стеклянные термостойкие объемом 100 — 500 куб. см ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 куб. см и приемной конической колбой объемом 1000 куб. см
Фильтры бумажные «красная лента» ТУ-6-09-1678-86
Фильтры для очистки растворителей диаметром 20 мм с отверстиями пор 20 мкм, фирма «Waters»
Центрифуга MPW-350e с числом оборотов 4000 об./мин. и с набором полипропиленовых банок емкостью 200 куб. см
Шприц инъекционный однократного применения объемом 10 куб. см ГОСТ 24861-91 (ИСО 7886-84)
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению определений
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка колонок с окисью алюминия, концентрирующих патронов Диапак Амин и Диапак С16 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонках с окисью алюминия и на концентрирующих патронах Диапак Амин и Диапак С16, установление градуировочной характеристики.
7.1. Подготовка органических растворителей
7.1.1 Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см аппарата для перегонки растворителей.
Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °C, отбрасывают.
7.1.2 Очистка ацетона
Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцово-кислый калий из расчета 1 г/куб. дм.
Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C, отбрасывают.
7.1.3 Приготовление бидистиллированной воды
Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 ч.
Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.
7.2. Приготовление растворов для проведения анализа
7.2.1 Приготовление рабочих растворов
7.2.1.1 Приготовление 1%-го раствора ацетата аммония.
10 г безводного сульфата натрия переносят в мерную колбу на 1000 куб. см, добавляют 200 — 300 куб. см очищенной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки.
7.2.1.2 Раствор однозамещенного фосфата натрия (Раствор A).
3,12 г однозамещенного фосфата натрия (NaH PO x 2H O) помещают в 2 4 2 мерную колбу объемом 100 куб. см, добавляют в 50 - 60 куб. см очищенной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до
метки.
7.2.1.3 Раствор двузамещенного фосфата натрия (Раствор B).
35,6 г двузамещенного фосфата натрия (Na HPO x 12H O) помещают в 2 4 2 мерную колбу объемом 1000 куб. см, добавляют 300 - 500 куб. см очищенной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до
метки.
7.2.1.4 Приготовление фосфатного буфера (Раствор C).
В плоскодонной колбе на 1000 куб. см смешивают 26,5 куб. см раствора A, 473,5 куб. см раствора B и 500 куб. см дистиллированной воды.
7.2.1.5 Приготовление 1 М раствора гидроокиси натрия.
20 г гидроксида натрия переносят в мерную колбу на 500 куб. см, добавляют 200 — 300 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).
7.2.2 Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ
Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанные ацетонитрил и 1%-й раствор ацетата аммония.
В плоскодонную колбу объемом 1000 куб. см помещают 800 куб. см 1%-го водного раствора ацетата аммония и 100 куб. см ацетонитрила. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 куб. см/мин. в течение 5 мин., после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин.
7.2.3 Приготовление градуировочных растворов
7.2.2.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией Топрамезона 1,0 мг/куб. см.
Взвешивают 50 мг Топрамезона в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.
7.2.2.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией Топрамезона 10,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 9:1. Стандартный раствор № 2 используется для внесения в контрольные образцы и для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике не более 30 суток.
7.2.2.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией Топрамезона 1,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 9:1. Стандартный раствор № 3 используется для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 3 хранится в холодильнике не более 30 суток.
7.2.2.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией Топрамезона 0,5 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 9:1. Стандартный раствор № 4 используется для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 4 хранится в холодильнике не более 30 суток.
7.2.2.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией Топрамезона 0,2 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 50 куб. см и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 9:1. Стандартный раствор № 5 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 5 хранится в холодильнике не более 30 суток.
7.2.2.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией Топрамезона 0,1 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 9:1. Стандартный раствор № 6 используется для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 6 хранится в холодильнике не более 30 суток.
7.2.2.7. Стандартные растворы с концентрацией Топрамезона 5,0; 2,5; 2,0; 1,0; 0,4 и 0,2 мкг/куб. см для внесения в контрольные образцы.
Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 5,0; 2,5; 2,0; 1,0; 0,4 и 0,2 мкг/куб. см, и используют эти растворы с целью внесения в контрольные образцы. Стандартные растворы для внесения в контрольные образцы хранятся в холодильнике не более 30 суток.
Для внесения в контрольные образцы масла готовят растворы Топрамезона, содержащие по 2,0; 1,0; 0,4 и 0,2 мкг/куб. см, в ацетоне.
7.3. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Топрамезона в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 1,0, 0,5, 0,2 и 0,1 мкг/куб. см.
В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.6. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
7.4. Подготовка концентрирующих патронов Диапак Амин для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения Топрамезона на них
7.4.1 Подготовка концентрирующих патронов Диапак Амин
для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. (1 — 2 кап./с).
Патрон Диапак Амин устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 куб. см ацетонитрила, а затем 5 куб. см очищенной воды. Элюат отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
7.4.2 Проверка хроматографического поведения Топрамезона
на патроне Диапак Амин
В концентратор объемом 100 куб. см помещают 50 куб. см раствора C (п. 7.2.1.4), прибавляют туда 1 куб. см стандартного раствора Топрамезона в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/куб. см. Доводят pH раствора до значения 1,4 при помощи 6 М раствора соляной кислоты и порционно наносят на подготовленный концентрирующий патрон Диапак Амин. Весь элюат собирают в чистый концентратор объемом 100 куб. см и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Сухой остаток растворяют в 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Определяют фракции, содержащие Топрамезон, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Изучение поведения Топрамезона на концентрирующих патронах Диапак Амин проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.
7.5. Подготовка концентрирующих патронов Диапак П для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения Топрамезона на них
7.5.1 Подготовка концентрирующих патронов Диапак П
для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. (1 — 2 кап./с).
Патрон Диапак П устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 куб. см ацетонитрила, а затем 5 куб. см очищенной воды. Элюат отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
7.5.2 Проверка хроматографического поведения
Топрамезона на патроне Диапак П
В концентратор объемом 100 куб. см помещают 1 куб. см стандартного раствора Топрамезона в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/куб. см и упаривают досуха. Сухой остаток в концентраторе растворяют в 20 куб. см очищенной воды и доводят pH раствора до значения 1,4 при помощи 6 М раствора соляной кислоты, наносят на патрон, элюат собирают в чистый концентратор объемом 100 куб. см и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Исходный концентратор обмывают сначала 5 куб. см 0,1%-го водного раствора муравьиной кислоты, а затем пятью порциями по 10 куб. см каждая 0,1%-го раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле. Полученные растворы последовательно вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Определяют фракции, содержащие Топрамезон, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Изучение поведения Топрамезона на концентрирующих патронах Диапак П проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.
7.6. Подготовка концентрирующих патронов Диапак Диол для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения Топрамезона на них
7.6.1 Подготовка концентрирующих патронов Диапак Диол
для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. (1 — 2 кап./с).
Патрон Диапак Диол устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 куб. см метилового спирта, а затем 5 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 1:1. Элюаты отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
7.6.2 Проверка хроматографического поведения
Топрамезона на патроне Диапак Диол
В концентратор объемом 100 куб. см помещают 1 куб. см стандартного раствора Топрамезона в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/куб. см и упаривают досуха. Сухой остаток в концентраторе растворяют в 2 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 2 куб. см гексана и полученный раствор наносят на предварительно кондиционированный патрон Диапак Диол. Элюат собирают в чистый концентратор объемом 100 куб. см и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Исходный концентратор обмывают сначала 10 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 1:1, затем 10 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 3:7, затем тремя порциями по 10 куб. см каждая 0,1%-го раствора уксусной кислоты в метаноле, полученные растворы последовательно вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Определяют фракции, содержащие Топрамезон, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.
Изучение поведения Топрамезона на концентрирующих патронах Диапак П проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.
7.7. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии
Хроматографическую колонку Symmetry Shield RP18 с предколонкой Simmetry C18 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 30 °C и скорости потока подвижной фазы 1 куб. см/мин. 3 — 4 ч.
8. Отбор проб и хранение
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» от 21.08.1979 № 2051-79, а также в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 17.4.3.01-83 «Почвы. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 28168-89 «Почвы. Отбор проб», ГОСТ 13586.3-83 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950-79) «Зерновые. Отбор проб зерна», ГОСТ 27262-87 «Корма растительного происхождения. Методы отбора проб», ГОСТ 8808-2000 «Масло кукурузное, ТУ», ГОСТ 5471-83 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб».
Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °C; пробы почвы — в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °C.
Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в темной таре в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.
Пробы зеленой массы кукурузы хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 — 4 °C в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранятся в морозильной камере при температуре -18 °C.
Отобранные пробы зерна подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.
Пробы кукурузного масла хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °C; пробы почвы — в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °C.
9. Подготовка проб и выполнение измерений
9.1. Вода
9.1.1 Экстракция
Пробу воды объемом 100 куб. см помещают в коническую колбу объемом 250 куб. см, прибавляют туда 1 куб. см 1 М водного раствора соляной кислоты до значения pH 1,4 и перемешивают.
9.1.2 Очистка пробы воды на концентрирующих
патронах Диапак П
Раствор, полученный по п. 9.1.1, наносят на заранее подготовленный патрон Диапак П, элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 5 куб. см 0,1%-го водного раствора муравьиной кислоты и также наносят на патрон, элюат отбрасывают.
Топрамезон элюируют 40 куб. см 0,1%-го раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле, элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Сухой остаток после упаривания растворяют в 5 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.2. Почва
9.2.1 Экстракция
Пробу почвы весом 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 куб. см, прибавляют туда 50 куб. см смеси метанола с фосфатным буфером (раствор C, п. 7.2.1.4) в соотношении 1:1. Пробу помещают на 5 мин. в ультразвуковую ванну, а затем на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин. при скорости 4000 об./мин. Супернатант фильтруют через фильтр «красная лента» в концентратор объемом 250 см. Экстракцию повторяют еще один раз, используя 50 куб. см смеси метанола с фосфатным буфером в соотношении 1:1 и помещая пробу сначала на 5 мин. в ультразвуковую ванну, а затем на 30 мин на аппарат для встряхивания. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см и упаривают до водного остатка (~ 50 куб. см) на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
9.2.2 Очистка экстракта на концентрирующих
патронах Диапак Амин
Водный остаток из концентратора, полученный по п. 9.2.1, переносят в мерный цилиндр объемом 100 куб. см и доводят объем раствора до метки 50 куб. см очищенной водой. Доводят pH раствора до значения 1,4 при помощи 6 М раствора соляной кислоты и наносят на подготовленный патрон Диапак Амин. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и подвергают дальнейшей очистке на концентрирующих патронах Диапак П, как указано в п. 9.1.2.
9.2.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах
Диапак Диол
Сухой остаток в концентраторе, полученный после очистки экстракта на патронах Диапак П, растворяют в 2 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, добавляют 2 куб. см гексана и наносят на подготовленный патрон Диапак Диол, элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают сначала 10 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 1:1, а затем 10 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 3:7, элюаты также отбрасывают.
Топрамезон элюируют 20 куб. см 1%-го раствора уксусной кислоты в метаноле, элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Сухой остаток после упаривания растворяют в 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.3. Зерно кукурузы
9.3.1 Экстракция
Образец измельченного зерна кукурузы массой 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 куб. см, прибавляют 50 куб. см этилацетата и помещают на 5 мин. в ультразвуковую ванну, затем на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин. при скорости 4000 об./мин. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 куб. см этилацетата и помещая на 5 мин. в ультразвуковую ванну, а затем на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Пробы центрифугируют, фильтруют, экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °C.
Далее проводят очистку экстракта на концентрирующих патронах Диапак Диол, как указано в п. 9.2.3.
Сухой остаток после очистки растворяют в 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.4. Масло кукурузы
9.4.1 Экстракция
Из пробы кукурузного масла отбирают в стакан навеску массой 20 г и переносят ее в делительную воронку объемом 250 куб. см тремя порциями гексана объемом по 50 куб. см. Прибавляют 25 куб. см фосфатного буфера (раствор C, п. 7.2.1.4), который предварительно подщелачивают до pH 9 с помощью 1 М раствора гидроокиси натрия. Воронку осторожно встряхивают 2 мин. После разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой помещают в плоскодонную колбу объемом 100 куб. см. Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 25 куб. см фосфатного буфера с pH 9. Далее гексан отбрасывают, а водный экстракт объединяют в плоскодонной колбе объемом 100 куб. см. Затем экстракт отфильтровывают через фильтр «красная лента» в делительную воронку и отделяют остатки гексана. Водный экстракт собирают в стакан объемом 100 куб. см.
Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.3 «Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак Диол» и по п. 9.1.2 «Очистка пробы воды на концентрирующих патронах Диапак П».
Сухой остаток после очистки растворяют в 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.5. Зеленая масса кукурузы
9.5.1 Экстракция
Образец измельченной зеленой массы кукурузы массой 5 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 куб. см, прибавляют туда 50 куб. см смеси метанола с фосфатным буфером (раствор C, п. 7.2.1.4) в соотношении 1:1 и помещают на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 куб. см смеси метанола с фосфатным буфером и помещая на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка при температуре не выше 35 °C.
9.5.2 Очистка экстракта перераспределением
в системе несмешивающихся растворителей
Полученный в п. 9.5.1 водный остаток подкисляют 6 Н соляной кислотой до pH 1 и переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Топрамезон экстрагируют четырьмя порциями хлороформа объемом по 40 куб. см, каждый раз встряхивая делительную воронку по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка при температуре не выше 35 °C.
Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.3 «Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак Диол» и по п. 9.2.2 «Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак Амин».
Сухой остаток после очистки растворяют в 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.6. Условия хроматографирования
Хроматограф жидкостной Waters 510 с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу, номер госрегистрации 15311-02, или другой с аналогичными характеристиками.
Колонка стальная Symmetry Shield RP18, 250 мм x 4,6 мм, зернение 5 мкм, фирма «Waters».
Предколонка стальная Symmetry C18, 20 мм x 3,9 мм, зернение 5 мкм, фирма «Waters».
Подвижная фаза: ацетонитрил — 1%-й водный раствор ацетата аммония в соотношении 10:80.
Время удерживания Топрамезона: 11,9 +/- 2%, мин.
Чувствительность: не менее 0,005 AUFS (единиц абсорбции на шкалу).
Объем вводимой пробы: 20 куб. мм.
Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 — 20 нг.
10. Обработка результатов
Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа Millenium 3.05.01.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание Топрамезона рассчитывают по формуле:
S x A x V
пр
X = ------------- x P, 100 x S x m ст
X — содержание Топрамезона в пробе, мг/кг;
S — высота (площадь) пика стандарта, мм; ст
S — высота (площадь) пика образца, мм; пр
A — концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m — масса анализируемого образца, г (куб. см);
P — содержание Топрамезона в аналитическом стандарте, %.
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(X + X )
1 2
X , X - результаты параллельных определений, мг/кг; 1 2
r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 x сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
_
(X +/- ДЕЛЬТА) мг/кг при вероятности P = 0,95,
X — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг; _
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг» <*>.
<*> 0,01 мг/кг — предел обнаружения.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки C должна удовлетворять условию: д
C = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,X л,X'
где +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности л,X л,X' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг; _
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результат контроля процедуры K рассчитывают по формуле: к
_ _ K = X' - X - C , к д
_ _ где X', X, C - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле: _____________________
/ 2 2 K = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,X' л,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K ) с нормативом
к
контроля (K).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(X + X )
1 2
X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг; 1 2
R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
14. Разработчики
Российский государственный аграрный университет — МСХА им. К.А. Тимирязева.
Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов».
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ТОПРАМЕЗОНА ИЗ ВОДЫ, ПОЧВЫ, ЗЕЛЕНОЙ
МАССЫ, ЗЕРНА И МАСЛА КУКУРУЗЫ (5 ПОВТОРНОСТЕЙ
ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ, P = 0,95)
| Среда | Внесено Топрамезона, мг/кг | Обнаружено Топрамезона, мг/кг | Полнота извлечения, % |
| Вода | 0,005 | 0,0041 +/- 0,0001 | 81,2 |
| 0,010 | 0,0087 +/- 0,0001 | 87,2 | |
| 0,020 | 0,0174 +/- 0,0002 | 87,2 | |
| 0,050 | 0,0403 +/- 0,0007 | 80,6 | |
| Почва | 0,01 | 0,0083 +/- 0,0001 | 83,4 |
| 0,02 | 0,0152 +/- 0,0002 | 76,0 | |
| 0,05 | 0,0411 +/- 0,0004 | 82,1 | |
| 0,10 | 0,0846 +/- 0,0004 | 84,6 | |
| Зерно кукурузы | 0,01 | 0,0075 +/- 0,0001 | 75,2 |
| 0,02 | 0,0166 +/- 0,001 | 83,1 | |
| 0,05 | 0,0416 +/- 0,0003 | 83,3 | |
| 0,10 | 0,0736 +/- 0,0017 | 73,6 | |
| Масло кукурузы | 0,01 | 0,0086 +/- 0,0002 | 86,4 |
| 0,02 | 0,0182 +/- 0,0004 | 91,0 | |
| 0,05 | 0,0414 +/- 0,0004 | 82,8 | |
| 0,10 | 0,0920 +/- 0,0014 | 92,0 | |
| Зеленая масса кукурузы | 0,05 | 0,0399 +/- 0,0007 | 79,8 |
| 0,10 | 0,0788 +/- 0,0017 | 78,8 | |
| 0,20 | 0,1498 +/- 0,0030 | 74,9 | |
| 0,50 | 0,3744 +/- 0,0048 | 74,9 |