МУК 4.1.2853-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Мезотриона в кукурузном масле методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 31.03.2011)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 31 марта 2011 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
31 марта 2011 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ МЕЗОТРИОНА В КУКУРУЗНОМ МАСЛЕ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.2853-11
с момента утверждения
1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом — МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 28.12.2010 № 3).
3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 31.03.2011.
4. Введены в действие с момента утверждения.
Общие положения и область применения
Свидетельство об аттестации методики от 01.12.2010 № 0063.30.11.10.
Настоящие методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств Мезотриона в кукурузном масле в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг.
Название действующего вещества по ИЮПАК: 2-(4-мезил-2-нитробензоил)циклогексан-1,3-дион.
Структурная формула (не приводится).
Эмпирическая формула: C H NO S. 14 13 7
Химически чистый Мезотрион представляет собой бледно-желтый порошок без запаха. -3
Давление паров: 5,69 x 10 мПа при 20 °C.
Температура плавления: 165,3 °C.
Растворимость (г/куб. дм, при 20 °C): 1,2-дихлорэтан — 66,3; этилацетат — 18,6; метанол — 4,6; толуол — 3,1.
Растворимость в воде (г/куб. дм, при 20 °C): 2,2 (при pH 4,8), 15 (при pH 6,9), 22 (при pH 9).
Стабилен к гидролизу в стерильных условиях при pH 5 — 9 и фотолизу в воде.
Быстро разлагается в почве с ДТ от 2 до 14 дней. 50
Краткая токсикологическая характеристика: Мезотрион относится к малоопасным веществам по острой пероральной (ЛД для крыс более 5000
50
мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД для кроликов более 2000 мг/кг), но к 50 умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК (4 ч) для 50 крыс более 5000 мг/куб. м). Побочные отрицательные эффекты не обнаружены.
Область применения: Мезотрион применяется для борьбы со всеми основными однолетними широколистными и некоторыми злаковыми сорняками в посевах кукурузы при нормах расхода 100 — 225 г/га (до всходов) и 70 — 150 г/га (по всходам).
В России для Мезотриона установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД — 0,5 мг/кг массы тела человека; МДУ в зерне кукурузы — 0,1 мг/кг.
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ДЛЯ МЕЗОТРИОНА
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности) +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Масло кукурузы | 0,01 — 0,1 | 50 | 3,87 | 10,77 | 12,82 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
ДЛЯ МЕЗОТРИОНА
| Анализируемый объект | Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20 | ||||
| предел обнаружения, мг/кг | диапазон определяемых концентраций, мг/кг | полнота извлечения вещества, % | стандартное отклонение S, % | доверительный интервал среднего результата, +/-, % | |
| Масло кукурузы | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 83,36 | 2,36 | 1,11 |
2. Метод измерений
Метод основан на определении Мезотриона методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием детектора по захвату электронов (ДПР, ДЭЗ) после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, гидролиза Мезотриона до 4-(метилсульфонил)-2-нитробензойной кислоты (MNBA) с целью получения метилового эфира этой кислоты.
Идентификацию вещества проводят по времени удерживания путем сравнения с аналитическим стандартом. Количественное определение — методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора капиллярной колонки и условий программирования температуры.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
3.1. Средства измерений
Весы аналитические «OHAUS», ЕР 114 с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г, класс точности по ГОСТ 24104-2001 — специальный (I)
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г «ACCULAB» V600, соответствуют классу точности по ГОСТ 24104-2001 — средний (III) Колбы мерные на 25, 50, 100, 500 и 1000 куб. см ГОСТ 1770-74
Микрошприц для газовой хроматографии «Hamilton, 1700», объем 10 куб. мм, фирма «SUPELCO», кат. № 20972
Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 куб. см ГОСТ 29227-91 Хроматограф газовый «Кристалл 2000м» с детектором по захвату электронов (ЭЗД) с пределом детектирования по Линдану -14
4 x 10 г/куб. см и приспособлениями для капиллярной колонки Номер в Государственном
реестре средств
измерений 14516-95
Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 куб. см ГОСТ 1770-74
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Мезотрион, CAS 104206-82-8, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,7%, фирма «Dr. Ehreustorfer GmbH», аккредитованный по ИСО-9001-2000
Ангидрид хромовый, ч. ГОСТ 3776-78
Ацетон, ос.ч. ТУ 6-09-3513-86 Ацетонитрил, ос.ч., УФ-200 нм ТУ 6-09-2167-84
Вода бидистиллированная (бидистиллят), деионизированная или перегнанная над KMnO ГОСТ 6709-72 4
Гелий, очищенный марки "A" ТУ 51-940-80 n-Гексан, х.ч. ТУ 6-09-3818-89
Калий гидроокись, ч.д.а. ГОСТ 24363-80
Калий марганцовокислый, х.ч. ГОСТ 20490-75
Кальций хлористый, ч. ТУ 6-09-4711-81
Карбамид (мочевина), ч.д.а. ГОСТ 6691-77
Кислота серная, х.ч. ГОСТ 4204-77
Кислота соляная, х.ч. ГОСТ 857-95
Концентрирующие патроны Диапак С и Диапак С16 (0,6 г), фирма «БиоХим Мак СТ» ТУ 4215-002-05451931-94
Медь серно-кислая 5-водная, ч.д.а. ГОСТ 4165-78
Метиламин гидрохлорид, ч., CAS 593-51-1, фирма Acros, каталожный номер 15678
Натрий азотистокислый, х.ч. ГОСТ 4168-79
Метилен хлористый, х.ч. ТУ 6-09-2662-77
Натрий сернокислый безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76
Натрий хлористый, х.ч. ГОСТ 4233-77
Натрия гидроокись, х.ч. ГОСТ 4328-77
Натрия нитрит, ч.д.а. ГОСТ 4197-74
Толуол, ч.д.а. ГОСТ 5789-78
Этилацетат, ч.д.а. ГОСТ 22300-76
Эфир диэтиловый, ФС 42-3643-98
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.3. Вспомогательные устройства и материалы
Аппарат для встряхивания проб «SKLO UNION TYP LT1»
Банки с крышками для экстракции на 250 куб. см, полипропилен, кат. № 3120-0250, фирма «NALGENE»
Блок нагревательный для виал, Dri-Block DB-3, фирма «Tecam», или песчаная баня
Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная ГОСТ 5556-81
Виалы (пузырьки) с тефлоновыми прокладками емкостью 40 куб. см, кат. № Z 27,702-9, фирма «Aldrich»
Воронки делительные на 250 и 500 куб. см ГОСТ 25336-82
Воронки лабораторные стеклянные ГОСТ 25336-82
Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной баней B-480, фирма «Buchi»
Колба с тубусом с взаимозаменяемыми конусами (Бунзена) ГОСТ 8682-93
Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1000 куб. см ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100, 250 куб. см и 4000 куб. см ТС ТУ 92-891.029-91
Колонка хроматографическая, капиллярная кварцевая HP-1 (Crosslinked Methyl Siloxane), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирма «Hewlett Packerd»
Насос водоструйный ГОСТ 25336-82
Насос диафрагменный FT.19, фирма «KNF Neu Laboport»
Палочки стеклянные ТУ 9464-001-52876351-2000
Пипетки Пастера одноразовые, длина 225 мм, фирма «Aldrich»
Стаканы стеклянные термостойкие объемом 100 — 2000 куб. см ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 куб. см и приемной конической колбой объемом 1000 куб. см
Фильтры бумажные «красная лента» ТУ 6-09-1678-86
Холодильник спиралевидный с внутренним охлаждением, обратимый ГОСТ 25336-82
Эксикатор вакуумный ГОСТ 25336-82
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению измерений
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов для анализа, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов Диапак С и Диапак С16 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на концентрирующих патронах Диапак С и Диапак С16, установление градуировочной зависимости.
7.1. Подготовка органических растворителей
7.1.1 Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см аппарата для перегонки растворителей.
Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °C, отбрасывают.
7.1.2 Очистка ацетона
Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм.
Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C, отбрасывают.
7.1.3 Приготовление бидистиллированной воды
Дистиллят помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 ч.
Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.
7.2. Приготовление растворов для проведения анализа
7.2.1 Приготовление рабочих растворов
7.2.1.1 Приготовление реактива Джонса.
53,6 г хромового ангидрида переносят в мерную колбу на 250 куб. см, куда предварительно наливают 150 куб. см дистиллированной воды, перемешивают и добавляют 14 куб. см концентрированной серной кислоты. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой). Хранить раствор при комнатной температуре.
7.2.1.2 Приготовление реактива A.
10 г сульфата меди переносят в мерную колбу на 250 куб. см, куда предварительно наливают 150 куб. см дистиллированной воды, перемешивают и добавляют 14 куб. см концентрированной серной кислоты. В полученный раствор добавляют 80 г сульфата натрия, перемешивают содержимое колбы и доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой). Хранить раствор при комнатной температуре.
7.2.1.3 Приготовление 5%-го раствора гидрокарбоната натрия.
50 г гидрокарбоната натрия переносят в мерную колбу на 1000 куб. см, добавляют 200 — 300 куб. см дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки.
7.2.1.4 Приготовление 40%-го раствора гидроокиси калия.
40 г гидроокиси калия переносят в мерную колбу на 100 куб. см, куда предварительно наливают около 40 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).
7.2.1.5 Получение N-нитрозо-N-метилмочевины.
При отсутствии коммерческого препарата нитрозометилмочевины осуществляют его синтез.
При получении нитрозометилмочевины соблюдать осторожность и обязательно работать под тягой.
В круглодонную колбу на шлифе вместимостью 1000 куб. см, снабженную обратным холодильником, помещают 80 г метиламина гидрохлорида и 300 г мочевины, растворяют содержимое в 400 куб. см воды и нагревают 3 ч с обратным холодильником. После этого добавляют в раствор 110 г нитрита натрия, охлаждают в бане со льдом до -10 °C и медленно при перемешивании вливают в смесь 600 г льда и 60 куб. см концентрированной серной кислоты, помещенную в стакан вместимостью 2000 куб. см, охлаждаемый снаружи смесью льда с поваренной солью. Выпавшее нитрозосоединение немедленно отфильтровывают на воронке Бюхнера, хорошо отсасывают под вакуумом и промывают на фильтре ледяной водой.
ВНИМАНИЕ! Нитрозометилмочевину хранят в темной склянке в холодильнике, т.к. под действием света и тепла она может взорваться.
Продукт без дальнейшей очистки может быть использован для получения диазометана.
7.2.1.6 Получение раствора диазометана (метилирующей смеси).
ВНИМАНИЕ! Диазометан взрывоопасен и очень ядовит. При получении раствора диазометана, а также при работе с этим раствором необходимо соблюдать осторожность и обязательно работать под тягой.
В коническую колбу на 100 куб. см вносят 20 куб. см 40%-го раствора гидроокиси калия и 50 куб. см диэтилового эфира, колбу помещают в баню со льдом и охлаждают до температуры 2 — 5 °C. Затем, постоянно встряхивая колбу, небольшими порциями прибавляют 5 г нитрозометилмочевины. Через 10 мин. после внесения последней порции сливают эфирный раствор диазометана и сушат его 3 ч над небольшим количеством твердого едкого калия.
Полученный раствор диазометана годен в течение 1 — 2 суток при хранении в холодильнике в неплотно закрытом сосуде.
7.2.2 Приготовление градуировочных растворов
7.2.2.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией Мезотриона 1,0 мг/куб. см.
Взвешивают 50 мг Мезотриона в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Раствор хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.
7.2.2.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией Мезотриона 10,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Раствор может храниться в холодильнике не более 30 суток.
7.2.2.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией Мезотриона 5,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 3 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Раствор может храниться в холодильнике не более 30 суток.
7.2.2.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией Мезотриона 2,5 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 4 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Раствор может храниться в холодильнике не более 30 суток.
7.2.2.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией Мезотриона 1,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 5 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Раствор может храниться в холодильнике не более 30 суток.
7.2.2.6. Стандартные растворы с концентрацией Мезотриона 5,0, 2,0, 1,0 и 0,5 мкг/куб.см для внесения в контрольные образцы.
Методом последовательного разведения ацетоном готовят растворы, содержащие по 5,0; 2,0; 1,0 и 0,5 мкг/куб. см, и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы масла. Стандартные растворы для внесения в контрольные образцы хранятся в холодильнике не более 30 суток.
7.3. Гидролиз стандартных растворов и проб
Из полученных стандартных растворов Мезотриона отбирают по 1 куб. см и помещают в виалы с плотно закрывающимися крышками, имеющими тефлоновые прокладки. Содержимое виал высушивают в токе теплого воздуха, затем в каждую добавляют по 2 куб. см реактива Джонса (п. 7.2.1.1), закрывают виалы крышками и перемешивают содержимое, обмывая стенки виал. Помещают виалы в Dri-Block, нагретый до температуры 88 — 89 °C, и выдерживают их в течение 13 мин. Через 5 мин. после начала гидролиза содержимое виал быстро перемешивают еще раз и продолжают гидролиз. (Внимание! При гидролизе температура не должна опускаться ниже 85 °C.)
По окончании гидролиза виалы охлаждают при комнатной температуре. В каждую виалу добавляют по 10 куб. см бидистиллированной воды, 2 — 3 г сульфата натрия и 10 куб. см этилацетата, плотно закрывают крышками, встряхивают содержимое виал в течение 30 с и оставляют на 5 мин. для полного разделения слоев. Из верхнего слоя этилацетата пипеткой отбирают 8 — 9 куб. см и переносят в чистую виалу. (Следить за тем, чтобы конец пипетки не касался нижнего слоя! Использовать каждый раз чистые пипетки!)
К отобранной порции этилацетата добавляют 2 куб. см реактива A (п. 7.2.1.2), закрывают виалу крышкой, встряхивают 20 с и оставляют на 5 мин. Из верхнего слоя отбирают 6 — 7 куб. см этилацетата, переносят в чистую виалу, добавляют 2 куб. см реактива A, встряхивают 30 с и оставляют на 5 мин. Затем отбирают из верхнего слоя 5 куб. см этилацетата и переносят в концентратор емкостью 100 куб. см. Этилацетат выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 25 — 30 °C.
При гидролизе Мезотриона получают 4-(метилсульфонил)-2-нитробензойную кислоту — MNBA.
Гидролиз проб, содержащих Мезотрион, проводится аналогичным образом.
7.4. Метилирование стандартных растворов и проб
Для получения метилового эфира MNBA (MNBA-Me) к сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 7.4, добавляют 2 куб. см раствора диазометана (метилирующей смеси), плотно закрывают концентратор, перемешивают содержимое, обмывая стенки концентратора, и оставляют при комнатной температуре на 30 мин. По окончании метилирования эфир из концентратора удаляют током воздуха или азота. Сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 куб. см ацетона.
Метилирование проб, содержащих MNBA, проводится аналогичным образом.
7.5. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Мезотриона в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки MNBA-Me с концентрациями по Мезотриону 0,05, 0,10, 0,25 и 0,50 мкг/куб. см.
В инжектор хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора Мезотриона и хроматографируют в условиях, указанных в п. 9.2. Проводят не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение площади хроматографического пика дня каждой концентрации.
8. Отбор и хранение проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» от 21.08.1979 № 2051-79, а также в соответствии с ГОСТ 8808-2000 «Масло кукурузное. ТУ», ГОСТ 5471-83 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб».
Пробы кукурузного масла хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °C не более 10 суток.
9. Подготовка проб и выполнение измерений
9.1. Масло кукурузы
9.1.1 Экстракция
Из пробы кукурузного масла отбирают в стакан навеску массой 10 г, растворяют ее в 40 куб. см гексана и переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Мезотрион экстрагируют тремя порциями ацетонитрила объемом по 50, 40 и 40 куб. см, каждый раз встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор объемом 250 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
9.1.2 Очистка экстракта перераспределением в системе
несмешивающихся растворителей
Сухой остаток в концентраторе, полученный по п. 9.1.1, растворяют в 5 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, добавляют 30 куб. см 5%-го раствора бикарбоната натрия, перемешивают содержимое и переносят в делительную воронку. Исходный концентратор обмывают 50 куб. см дистиллированной воды и переносят в делительную воронку. Насыпают в делительную воронку 5 г хлористого натрия, перемешивают содержимое воронки до полного растворения соли, приливают 30 куб. см диэтилового эфира и встряхивают воронку в течение 2 мин. После разделения фаз нижний водный слой сливают в чистый стакан объемом 250 куб. см, а эфир отбрасывают. Водную фазу из стакана возвращают в делительную воронку и повторяют промывку эфиром еще два раза, добавляя по 30 куб. см диэтилового эфира и встряхивая каждый раз делительную воронку в течение 2 мин.
Водную фазу переносят в стакан и доводят pH раствора до значения 2 с помощью концентрированной соляной кислоты. Полученный раствор переносят в чистую делительную воронку объемом 250 куб. см и осторожно дегазируют. Мезотрион экстрагируют тремя порциями этилацетата по 50 куб. см, каждый раз встряхивая воронку 2 мин. После разделения фаз нижнюю водную фазу сливают в стакан объемом 250 куб. см, а этилацетат собирают через безводный сульфат натрия в концентратор объемом 250 куб. см. Объединенный в концентраторе этилацетат выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 30 °C.
9.1.3 Гидролиз
Сухой остаток в концентраторе, полученный по п. 9.1.2, растворяют в 2 куб. см ацетона, тщательно обмывают стенки концентратора. Раствор переносят в виалу объемом 40 куб. см с помощью пипетки Пастера. Процедуру повторяют еще два раза, обмывая исходный концентратор по 2 куб. см ацетона, ацетон объединяют в виале, а затем удаляют током теплого воздуха.
Далее проводят гидролиз, как указано в п. 7.3.
9.1.4 Метилирование
К сухому остатку в концентраторе, полученному после гидролиза по п. 9.1.3, добавляют 2 куб. см метилирующей смеси и подвергают метилированию, как указано в п. 7.4.
Сухой остаток растворяют в 10 куб. см гексана, и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.2. Условия хроматографирования
Хроматограф газовый «Кристалл 2000м» с электроннозахватным детектором с -14
пределом детектирования по Линдану 4 x 10 г/куб. см и приспособлениями для капиллярной колонки. Номер в государственном реестре средств измерений
14516-95.
Колонка капиллярная кварцевая HP-1 (Crosslinked Methyl Siloxane), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм.
Температура термостата колонки программированная. Начальная температура — 180 °C, выдержка 2 мин.; нагрев колонки по 8 град./мин. до температуры 230 °C, выдержка 7 мин.
Температура испарителя — 250 °C, детектора — 320 °C.
Газ-носитель — гелий (Г1). Тип регулятора расхода гелия — РРГ-11, линейная скорость — 22 см/с, давление на входе — 98,26 кПа.
Газ 2 (Г2) — гелий, расход 0,5 куб. см/мин., сброс 1:40, начало сброса — 10 с, длительность сброса — 2 мин.
Газ 3 (ГЗ) — азот (поддув в детектор), расход во время анализа — 35 куб. см/мин.
Продувка системы после анализа при температуре 260 °C в течение 4 мин.: продувка испарителя гелием — 50 куб. см/мин.; продувка детектора азотом — 65 куб. см/мин.
Абсолютное время удерживания Мезотриона: 8 мин. 51 с +/- 2%.
Объем вводимой пробы: 1 куб. мм.
Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,05 — 0,5 нг.
10. Обработка результатов
Содержание Мезотриона в пробах пера и репки лука рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
S x A x V
пр
X = ------------- x P, 100 x S x m ст
X — содержание Мезотриона в пробе, мг/кг;
S — высота (площадь) пика стандарта, мВ; ст
S — высота (площадь) пика образца, мВ; пр
A — концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m — масса анализируемого образца, г (куб. см);
P — содержание Мезотриона в аналитическом стандарте, %.
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(X + X )
1 2
X , X - результаты параллельных определений, мг/кг; 1 2
r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 x сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
_
(X +/- ДЕЛЬТА) мг/кг при вероятности P = 0,95,
X — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг; _
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг» <*>.
<*> 0,01 мг/кг — предел обнаружения.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки C должна удовлетворять условию: д
C = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,X л,X'
+/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности (абсолютная л,X л,X' погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с
добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг; _
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результат контроля процедуры K рассчитывают по формуле: к
_ _ K = X' - X - C , к д
_ _ где X', X, С - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле: _____________________
/ 2 2 K = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,X' л,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K ) с нормативом
к
контроля (K).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(X + X )
1 2
X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг; 1 2
R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
14. Разработчики
Российский государственный аграрный университет — МСХА им. К.А. Тимирязева.
Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов».
| Среда | Внесено, мг/кг | Обнаружено, мг/кг | Полнота определения, % |
| Масло кукурузы | 0,01 | 0,0085 | 84,9 |
| 0,02 | 0,0163 | 82,4 | |
| 0,05 | 0,0418 | 83,6 | |
| 0,10 | 0,0825 | 82,5 |