МУК 4.1.2852-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Квинмерака в воде, почве, семенах и масле рапса методом газожидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором РФ 31.03.2011)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 31 марта 2011 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
31 марта 2011 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ КВИНМЕРАКА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
с момента утверждения
1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом — МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 28.12.2010 № 3).
3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 31.03.2011.
4. Введены в действие с момента утверждения.
Общие положения и область применения
Свидетельство об аттестации методики от 06.10.2010 № 0048.27.09.10.
Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации Квинмерака в воде в диапазоне 0,0005 — 0,005 мг/куб. дм, в почве — 0,01 — 0,1 мг/кг, а также уровня остаточных количеств в семенах и масле рапса в диапазоне 0,05 — 0,5 мг/кг.
Название по ИЮПАК: 7-хлор-3-метилхинолинил-8-карбоновая кислота.
Структурная формула (не приводится).
Эмпирическая формула: C H ClNO . 11 8 2
Агрегатное состояние: кристаллы.
Цвет, запах: бесцветный, без запаха.
Давление паров: < 0,01 мПа при 20 °C.
Коэффициент распределения октанол-вода при 20 °C: K log P = 1,11 ow (pH 7).
Растворимость в воде г/куб. дм (при 20 °C): 240.
Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм, 20 °C): в ацетоне, хлористом метилене — 2,0, этаноле — 1,0, n-гексане, этилацетате — < 1,0.
Стабилен при нагревании и на свету и в водной среде при pH 3 — 9.
Квинмерак — слабая кислота: pKa — 4,32 (при 20 °C).
Умеренно стабилен в почве с ДТ 12 — 38 дней в полевых условиях и 50 умеренно подвижен с K — 86 куб. см/г. oc
Краткая токсикологическая характеристика: Квинмерак относится к веществам малоопасным по острой пероральной (ЛД для крыс более 5000
50
мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД для крыс более 2000 мг/кг), но к 50 умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК (4 ч) для 50 крыс более 5400 мг/куб. м воздуха). Не оказывает раздражающего действия на кожу и глаза кроликов.
Область применения: Квинмерак — синтетический ауксин (аналог индолилуксусной кислоты), индуцирующий образование в растениях этилена и абцизовой кислоты, избыток которых приводит к нарушению водного баланса и последующей гибели растений. Хорошо проникает в растение через корни и листья. Эффективно подавляет двудольные однолетние сорняки в посевах сахарной свеклы и рапса при норме расхода до 1,5 г д.в./га.
В России для Квинмерака установлены следующие гигиенические нормативы: МДУ в семенах рапса — 0,1 мг/кг.
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ДЛЯ КВИНМЕРАКА
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
| Вода | менее 0,005 | 150 | 11 | 30 | 36 |
| 0,005 — 0,01 вкл. | 100 | 6 | 16 | 22 | |
| Почва | 0,01 — 0,1 вкл. | 50 | 9 | 25 | 30 |
| Семена рапса | 0,1 — 1,0 вкл. | 25 | 4,0 | 11,2 | 13,4 |
| 0,01 — 0,1 вкл. | 50 | 5,0 | 14,0 | 20,0 | |
| Масло рапса | 0,1 — 1,0 вкл. | 25 | 4,5 | 12,6 | 15,0 |
| 0,01 — 0,1 вкл. | 50 | 6 | 16 | 22 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
ДЛЯ КВИНМЕРАКА
| Анализируемый объект | Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20 | ||||
| предел обнаружения, мг/кг | диапазон определяемых концентраций, мг/кг | полнота извлечения вещества, % | стандартное отклонение, S, % | доверительный интервал среднего результата, +/-, % | |
| Вода | 0,0005 | 0,0005 — 0,005 | 87,1 | 7,47 | 3,07 |
| Почва | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 85,6 | 8,87 | 3,55 |
| Семена рапса | 0,05 | 0,05 — 0,5 | 78,7 | 5,2 | 1,92 |
| Масло рапса | 0,05 | 0,05 — 0,5 | 74,4 | 4,0 | 1,39 |
2. Метод измерения
Метод основан на определении Квинмерака в виде метилового эфира методом газожидкостной хроматографии с использованием детектора по захвату электронов после его экстракции из образцов ацетонитрилом (ацетоном), очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, метилирования и дополнительной очистки полученного метилового эфира Квинмерака на колонках с Флоризилом.
Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора колонки и изменения температуры колонки.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
3.1. Средства измерений
Весы аналитические «OHAUS», ЕР 114 с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г, класс точности по ГОСТ 24104-2001 — специальный (I)
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г «ACCULAB» V600, соответствуют классу точности по ГОСТ 24104-2001 — средний (III)
Колбы мерные на 10, 25, 50, 100, 500 и 1000 куб. см ГОСТ 1770-74
Микрошприц для газовой хроматографии «Hamilton, 1700», объем 10 куб. мм, фирма «SUPELCO», кат. № 20972
Пипетки мерные на 1,0, 2,0, 5,0 и 10 куб. см ГОСТ 29227-91
Микрошприц для газовой хроматографии, объем 10 куб. мм, фирма «Хроматэк», кат. № SO400
Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 куб. см ГОСТ 29227-91 pH-метр/милливольтметр pH-150 0 — 14 pH; +/- 1999 мВ, номер госрегистрации 10663
Хроматограф газовый «Кристалл 2000м» с детектором по захвату электронов (ЭЗД) с пределом детектирования по Линдану -14 4 x 10 г/куб. см и приспособлениями для капиллярной колонки. Номер в государственном реестре средств измерений 14516-95
Хроматограф газовый «Цвет-560» с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов (ДПР) с пределом детектирования по Линдану -10 не менее 4 x 10 г/куб. см Номер в государственном реестре средств измерений 14516-95
Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 куб. см ГОСТ 1770-74
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Квинмерак, CAS 90717-03-6, аналитический стандарт с содержанием д.в. не менее 98,0%, фирма «Dr. Ehreustorfer GmbH», аккредитованная по ИСО-9001-2000
Ацетон, ос.ч. ТУ 6-09-3513-86 Ацетонитрил, ос.ч., УФ-200 нм ТУ 6-09-2167-84
Вода бидистиллированная (бидистиллят), деионизированная или перегнанная над KMnO ГОСТ 6709-72 4
Гелий очищенный, марки «А» ТУ 51-940-80
Калий гидроокись, ч.д.а. ГОСТ 24363-80
Калий марганцовокислый, ч.д.а. ГОСТ 20490-75
Калий фосфорнокислый двузамещенный, 3-водный, ч.д.а. ГОСТ 2493-75
Кальций хлористый безводный, ч. ТУ 6-09-4711-81
Карбамид (мочевина), ч.д.а. ГОСТ 6691-77
Кислота муравьиная, ч.д.а. ГОСТ 5848-73
Кислота серная, х.ч. ГОСТ 4204-77
Кислота соляная, х.ч. ГОСТ 3118-77
Метиламин гидрохлорид, ч., CAS 593-51-1, фирма «Acros», кат. № 15678
Метилен хлористый, х.ч. ТУ 6-09-2662-77
Натрий азотистокислый, х.ч. ГОСТ 4168-79
Натрий сернокислый, безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76
Натрий углекислый, кислый, х.ч. ГОСТ 4201-79
Натрий хлористый, х.ч. ГОСТ 4233-77
Натрия гидроокись, х.ч. ГОСТ 4328-77
Натрия нитрит, ч.д.а. ГОСТ 4197-74
н-Гексан, х.ч. ТУ 6-09-3818-89
Фаза неподвижная Хроматон-супер с 5% OV-17 (0,16 — 0,20 мм), Хемапол, Чехия
Фаза неподвижная Хроматон N-AW с 5% XE-60 (0,20 — 0,25 мм), Хемапол, Чехия
Флоризил (R) (Магния силикат, 99%, CAS 1343-88-0) для колоночной хроматографии, зернение 60/100 меш, фирма «Acros Organics»
Хлороформ, х.ч. ТУ 2631-001-29483781-04
Этилацетат, ч.д.а. ГОСТ 22300-76
Эфир диэтиловый, ФС 42-3643-98
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.3 Вспомогательные устройства и материалы
Аппарат для встряхивания проб «SKLO UNION TYP LT1»
Банки с крышками для экстракции на 250 куб. см, полипропилен, кат. № 3120-0250, фирма «NALGENE»
Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная ГОСТ 5556-81
Виалы (пузырьки) с тефлоновыми прокладками емкостью 40 куб. см, кат. № Z 27,702-9, фирма «Aldrich»
Воронки делительные на 250 и 500 куб. см ГОСТ 25336-82
Воронки лабораторные, стеклянные ГОСТ 25336-82
Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной баней В-480, фирма «Buchi»
Колба с тубусом с взаимозаменяемыми конусами (Бунзена) ГОСТ 8682-93
Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1000 куб. см ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100, 250 куб. см, 1000 и 4000 куб. см ТС ТУ 92-891.029-91
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-5 (Crosslinked 5% фенилсилоксана и 95% метилсилоксана), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирма «HP»
Колонка хроматографическая стеклянная, длиной 3 м, внутренним диаметром 3 мм
Насос водоструйный ГОСТ 25336-82
Насос диафрагменный FT.19, фирма «KNF Neu Laboport»
Палочки стеклянные ТУ 9464-001-52876351-2000
Сито лабораторное с полотном из латуни или нержавеющей стали с размером ячеек 1 мм ГОСТ 3826-82 и ГОСТ 6613-86
Стаканы стеклянные термостойкие объемом 100 — 2000 куб. см ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 куб. см и приемной конической колбой объемом 1000 куб. см
Фильтры бумажные «красная лента» ТУ 6-09-1678-86
Холодильник спиралевидный с внутренним охлаждением, обратимый ГОСТ 25336-82
Центрифуга MPW-350e с числом оборотов 4000 об./мин. и с набором полипропиленовых банок емкостью 200 куб. см
Эксикатор вакуумный ГОСТ 25336-82
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к определению
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка колонок с Флоризилом для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонке с Флоризилом, построение калибровочной кривой.
7.1. Подготовка органических растворителей
7.1.1 Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 — 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см аппарата для перегонки растворителей.
Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °C, отбрасывают.
7.1.2 Очистка ацетона
Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм.
Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C, отбрасывают.
7.1.3 Приготовление бидистиллированной воды
Дистиллят помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 ч.
Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.
7.2. Приготовление растворов для проведения анализа
7.2.1 Приготовление рабочих растворов
7.2.1.1. Приготовление 0,05 М раствора двузамещенного фосфорнокислого калия.
5,7 г K HPO x 3H O и 50 г NaCl переносят в мерную колбу на 500 куб. 2 4 2 см, добавляют 200 - 300 куб. см бидистиллированной воды, перемешивают до полного растворения солей, проверяют pH полученного раствора. Если pH
раствора менее 9, доводят его до указанного значения с помощью 1 М раствора гидроокиси натрия, контролируя pH. После достижения нужного значения pH объем доводят водой до метки.
7.2.1.2 Приготовление 1 М раствора гидроокиси натрия.
20 г гидроксида натрия переносят в мерную колбу на 500 куб. см, добавляют 200 — 300 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).
7.2.1.3 Приготовление 6 М раствора соляной кислоты.
Мерным цилиндром отбирают 246 куб. см концентрированной соляной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 500 куб. см, куда предварительно наливают около 100 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).
7.2.1.4 Приготовление подкисленного ацетонитрила.
К ацетонитрилу пипеткой добавляют концентрированную соляную кислоту до pH ~ 1. При приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой.
7.2.1.5 Приготовление 4 Н раствора серной кислоты.
Мерным цилиндром отбирают 112 куб. см концентрированной серной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 1000 куб. см, куда предварительно наливают около 300 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).
7.2.1.6 Приготовление 5%-го раствора гидрокарбоната натрия.
50 г гидрокарбоната натрия переносят в мерную колбу на 1000 куб. см, добавляют 200 — 300 куб. см дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки.
7.2.1.7 Приготовление 40%-го раствора гидроокиси калия.
40 г гидроокиси калия переносят в мерную колбу на 100 куб. см, куда предварительно наливают около 40 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).
7.2.1.8 Получение N-нитрозо-N-метилмочевины.
При отсутствии коммерческого препарата нитрозометилмочевины осуществляют его синтез.
При получении нитрозометилмочевины соблюдать осторожность и обязательно работать под тягой.
В круглодонную колбу на шлифе вместимостью 1000 куб. см, снабженную обратным холодильником, помещают 80 г метиламина гидрохлорида и 300 г мочевины, растворяют содержимое в 400 куб. см воды и нагревают 3 ч с обратным холодильником. После этого добавляют в раствор 110 г нитрита натрия, охлаждают в бане со льдом до -10 °C и медленно при перемешивании вливают в смесь 600 г льда и 60 куб. см концентрированной серной кислоты, помещенную в стакан вместимостью 2000 куб. см, охлаждаемый снаружи смесью льда с поваренной солью. Выпавшее нитрозосоединение немедленно отфильтровывают на воронке Бюхнера, хорошо отсасывают под вакуумом и промывают на фильтре ледяной водой.
ВНИМАНИЕ! Нитрозометилмочевину хранят в темной склянке в холодильнике, т.к. под действием света и тепла она может взорваться.
Продукт без дальнейшей очистки может быть использован для получения диазометана.
7.2.1.9 Получение раствора диазометана (метилирующей смеси).
ВНИМАНИЕ! Диазометан взрывоопасен и очень ядовит. При получении раствора диазометана, а также при работе с этим раствором необходимо соблюдать осторожность и обязательно работать под тягой.
В коническую колбу на 100 куб. см вносят 20 куб. см 40%-го раствора гидроокиси калия и 50 куб. см диэтилового эфира, колбу помещают в баню со льдом и охлаждают до температуры 2 — 5 °C. Затем, постоянно встряхивая колбу, небольшими порциями прибавляют 5 г нитрозометилмочевины. Через 10 мин. после внесения последней порции сливают эфирный раствор диазометана и сушат его 3 ч над небольшим количеством твердого едкого калия.
Полученный раствор диазометана годен в течение 1 — 2 суток при хранении в холодильнике в неплотно закрытом сосуде.
7.2.2 Приготовление градуировочных растворов
7.2.2.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией Квинмерака 1,0 мг/куб. см.
Взвешивают 50 мг Квинмерака в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и построения калибровочной кривой.
7.2.2.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией Квинмерака 10,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов для построения калибровочной кривой.
7.2.2.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией метилового эфира Квинмерака 1,0 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 10 куб. см, удаляют растворитель током теплого воздуха и проводят метилирование, как указано в п. 7.3. Сухой остаток после метилирования растворяют в 10 куб. см гексана. Стандартный раствор № 3 используется для построения калибровочной кривой.
7.2.2.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией метилового эфира Квинмерака 0,5 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор № 4 используется для построения калибровочной кривой.
7.2.2.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией метилового эфира Квинмерака 0,2 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 2 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор № 5 используется для построения калибровочной кривой.
7.2.2.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией метилового эфира Квинмерака 0,1 мкг/куб. см.
Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор № 6 используется для построения калибровочной кривой.
7.2.2.7. Стандартные растворы Квинмерака с концентрацией 5,0; 2,5; 2,0; 1,0; 0,5; 0,4 и 0,2 мкг/куб. см для внесения в образцы.
Методом последовательного разведения ацетоном стандартного раствора № 2 готовят растворы, содержащие по 5,0; 2,5; 2,0; 1,0; 0,5; 0,4 и 0,2 мкг/куб. см, и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы.
7.3. Метилирование
К сухому остатку в концентраторе прибавляют 2 куб. см раствора диазометана (метилирующей смеси), полученного по п. 7.2.1.9. Концентратор плотно закрывают крышкой и оставляют при комнатной температуре на 1 ч. По истечении этого времени концентратор высушивают током прохладного воздуха (под тягой!).
7.4. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Квинмерака в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см.
В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм (для капиллярной колонки) или 5 куб. мм (для набивной колонки) каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.
7.5. Подготовка колонки с Флоризилом для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения метилового эфира Квинмерака
7.5.1 Подготовка колонки с Флоризилом
для очистки экстракта
В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 4 г Флоризила с зернением 60/100 меш и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. На слой Флоризила наносят слой безводного сернокислого натрия толщиной 1 см.
Непосредственно перед использованием колонку промывают 20 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1, затем 10 куб. см гексана и высушивают при комнатной температуре.
7.5.2 Проверка хроматографического поведения метилового
эфира Квинмерака на колонке с Флоризилом
В концентратор объемом 100 куб. см вносят 1 куб. см стандартного раствора метилового эфира Квинмерака в гексане с концентрацией 1,0 мкг/см и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 5 куб. см гексана, тщательно обмывают стенки концентратора и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 куб. см и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °C.
Исходную колбу обмывают сначала 10 куб. см гексана, затем 10 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 2:1, а затем еще двумя порциями смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1 объемом 10 куб. см каждая и последовательно вносят их на колонку. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы объемом по 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 куб. см гексана и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Определяют фракции, содержащие Квинмерак, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.
Изучение поведения Квинмерака на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии Флоризила.
8. Отбор проб и хранение
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» от 21.08.1979 № 2051-79, а также ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 17.4.3.01-83 «Почвы. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 28168-89 «Почвы. Отбор проб», ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ 8988-2002 «Масло рапсовое. ТУ».
Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °C; пробы почвы — в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °C.
Отобранные пробы семян рапса подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.
Пробы масла рапса хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 0 — 4 °C.
9. Подготовка проб и выполнение измерений
9.1. Вода
9.1.1 Экстракция
Пробу воды объемом 400 куб. см помещают в делительную воронку объемом 500 куб. см, прибавляют туда 1 куб. см муравьиной кислоты и перемешивают. Квинмерак экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 70, 50 и 50 куб. см, встряхивая каждый раз делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см, собирая его через слой безводного сульфата натрия. Экстракт выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Отдувают муравьиную кислоту током теплого воздуха.
9.1.2 Метилирование
К сухому остатку в концентраторе, полученному в п. 9.1.1, добавляют 2 куб. см метилирующей смеси и подвергают метилированию, как указано в п. 7.3. После метилирования растворитель отдувают током прохладного воздуха (под тягой!).
Сухой остаток растворяют в 5 куб. см гексана и 5 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.2. Почва
9.2.1 Экстракция
Пробу почвы весом 50 г помещают в коническую колбу объемом 250 куб. см, прибавляют туда 20 куб. см 5%-го водного раствора гидрокарбоната натрия. Квинмерак экстрагируют 70 куб. см этанола в течение 1 ч на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют методом декантации в концентратор объемом 250 куб. см через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 куб. см этанола и помещая каждый раз на 1 ч на аппарат для встряхивания проб. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
9.2.2 Очистка экстракта перераспределением в системе
несмешивающихся растворителей
К сухому остатку в концентраторе, полученному в п. 9.2.1, прибавляют 5 куб. см ацетона, 50 куб. см дистиллированной воды и 2,5 куб. см муравьиной кислоты, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Туда же прибавляют 10 г сухого хлорида натрия и интенсивно перемешивают до полного растворения соли. Полученную водную фракцию промывают 20 куб. см гексана, встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а водную фракцию переносят в делительную воронку.
Квинмерак экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 20, 20 и 10 куб. см, каждый раз интенсивно встряхивая воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой хлористого метилена объединяют в химическом стакане объемом 100 куб. см, верхний (водный) слой отбрасывают. Хлористый метилен возвращают в делительную воронку и экстрагируют Квинмерак тремя порциями 5%-го раствора гидрокарбоната натрия объемом по 20, 20 и 10 куб. см, интенсивно встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) отбрасывают. Объединенную водную фракцию переносят в делительную воронку, добавляют 3 куб. см муравьиной кислоты (до pH 3 — 3,5) и дегазируют. Полученную водную фракцию промывают 20 куб. см гексана, встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а водную фракцию переносят в чистую делительную воронку.
Квинмерак экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 20, 20 и 10 куб. см, каждый раз интенсивно встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой хлористого метилена объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
9.2.3 Метилирование
К сухому остатку в концентраторе, полученному в п. 9.2.2, добавляют 2 куб. см метилирующей смеси и подвергают метилированию, как указано в п. 7.3. После метилирования растворитель отдувают током прохладного воздуха (под тягой!).
9.2.4 Очистка экстракта на колонке с Флоризилом
Сухой остаток, полученный в п. 9.2.3, растворяют в 5 куб. см гексана, тщательно обмывают стенки концентратора и вносят на заранее подготовленную колонку с Флоризилом, элюат отбрасывают. Исходную колбу обмывают сначала 10 куб. см гексана, затем 10 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 2:1, элюаты отбрасывают. Квинмерак элюируют 15 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Сухой остаток растворяют в 5 куб. см гексана и 5 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.3. Семена рапса
9.3.1 Экстракция
Образец измельченных семян рапса массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 куб. см, прибавляют 50 куб. см ацетона и помещают на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб, а затем на 10 мин. в ультразвуковую ванну. Пробу центрифугируют в течение 10 мин. при скорости 4000 об./мин. и экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 50 куб. см ацетона и помещая на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб, а затем на 10 мин. в ультразвуковую ванну. Пробы центрифугируют в течение 10 мин. при скорости 4000 об./мин., супернатант фильтруют. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см. Экстракт упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
9.3.2 Очистка экстракта перераспределением
в системе несмешивающихся растворителей
К масляному остатку в концентраторе, полученному в п. 9.3.1, прибавляют 5 куб. см ацетона, тщательно обмывают стенки концентратора и помещают на 5 мин. в ультразвуковую ванну. В концентратор двумя порциями добавляют 100 куб. см гексана, ополаскивая стенки концентратора, и переносят в делительную воронку.
Квинмерак экстрагируют тремя порциями щелочного буфера pH 9 объемом по 30 куб. см каждая, осторожно встряхивая воронку в течение 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний (водный) слой с эмульсией собирают в коническую колбу объемом 250 куб. см, куда предварительно насыпают около 5 г хлорида натрия. Гексановый слой отбрасывают. Водную фракцию переносят в делительную воронку и промывают двумя порциями гексана по 50 куб. см каждая, встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а водную фракцию собирают в коническую колбу объемом 250 куб. см. Затем содержимое колбы подщелачивают 1 М раствором гидроокиси натрия до pH 9. Водную фракцию возвращают в делительную воронку и промывают двумя порциями хлороформа объемом по 50 куб. см каждая и 50 куб. см эфира, встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке хлороформ и эфир отбрасывают, а водную фракцию собирают в коническую колбу объемом 250 куб. см, подкисляют 6 М соляной кислотой до pH 3, дегазируют и переносят в чистую делительную воронку.
Квинмерак экстрагируют тремя порциями эфира объемом по 50, 30, 30 куб. см, каждый раз интенсивно встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (эфир) объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
После упаривания сухой остаток растворяют в 5 куб. см диэтилового эфира и, тщательно обмывая стенки концентратора, переносят в виалу. Процедуру повторяют дважды, используя по 5 куб. см диэтилового эфира. Эфир высушивают под током теплого воздуха (под тягой!) и проводят метилирование, как указано в п. 9.2.3 «Метилирование».
Сухой остаток в виале растворяют в 10 куб. см гексана и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.4. Масло рапса
9.4.1 Экстракция
Из пробы рапсового масла отбирают в стакан навеску массой 10 г и переносят ее в делительную воронку объемом 250 куб. см двумя порциями гексана объемом по 25 куб. см. Квинмерак экстрагируют тремя порциями подкисленного ацетонитрила объемом по 50, 30 и 30 куб. см, встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Верхний слой (гексан) отбрасывают.
9.4.2 Очистка экстракта перераспределением
в системе несмешивающихся растворителей
К масляному остатку в концентраторе, полученному в п. 9.4.1, прибавляют 5 куб. см ацетона, тщательно обмывают стенки концентратора и помещают на 5 мин. в ультразвуковую ванну. В концентратор двумя порциями добавляют 60 куб. см 5%-го раствора гидрокарбоната натрия, ополаскивая стенки концентратора, и переносят в делительную воронку. Водную фракцию промывают тремя порциями диэтилового эфира объемом по 30 куб. см каждая, встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (эфир) отбрасывают, а водную фракцию собирают в коническую колбу объемом 250 куб. см, подкисляют 4 Н серной кислотой до pH 1, дегазируют и переносят в чистую делительную воронку.
Квинмерак экстрагируют тремя порциями эфира объемом по 30 куб. см каждая, каждый раз интенсивно встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (диэтиловый эфир) объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
После упаривания сухой остаток растворяют в 5 куб. см диэтилового эфира и, тщательно обмывая стенки концентратора, переносят в виалу. Процедуру повторяют дважды, используя по 5 куб. см диэтилового эфира. Эфир высушивают под током теплого воздуха (под тягой!) и проводят метилирование, как указано в п. 9.2.3 «Метилирование».
Сухой остаток в виале растворяют в 10 куб. см гексана, и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.5. Условия хроматографирования
9.5.1 Вода, почва (набивная колонка)
Хроматограф «Цвет-550» с детектором постоянной скорости рекомбинации -14 ионов с пределом детектирования по Линдану не выше 4 x 10 г/куб. см. 10
Рабочая шкала электрометра 16 x 10 . Скорость движения ленты самописца 200 мм/ч.
Колонка стеклянная спиральная, длина 3 м, внутренний диаметр 3 мм, заполненная 5% OV-17 на Хроматоне-супер (0,16 — 0,20 мм).
Температура: испарителя — 250 °C, термостата колонки — 240 °C, детектора — 340 °C.
Газовый режим: азот — 35 мл/мин.
Абсолютное время удерживания Квинмерака — 7 мин. 55 с.
Объем вводимой пробы — 5 куб. мм.
Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,4 — 10,0 нг.
Альтернативная фаза: 5% XE-60 на Хроматоне N-AW (0,20 — 0,25 мм), длина колонки 3 м. 10
Рабочая шкала электрометра 32 x 10 . Скорость движения ленты самописца 200 мм/ч.
Температура: термостата колонки — 210 °C, детектора — 340 °C, испарителя — 240 °C.
Газовый режим: азот — 30 мл/мин.
Абсолютное время удерживания Квинмерака — 2 мин. 34 с.
Объем вводимой пробы — 5 куб. мм.
Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,4 — 10,0 нг.
9.5.2 Семена и масло рапса (капиллярная колонка)
Хроматограф газовый «Кристалл 2000 м» с электроннозахватным детектором -14
с пределом детектирования по Линдану 4 x 10 г/куб. см и приспособлениями для капиллярной колонки. Номер в государственном реестре средств измерений
14516-95.
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-5, (Crosslinked 5% фенилсилоксана и 95% метилсилоксана), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирмы «HP».
Температура термостата колонки программированная. Начальная температура — 140 °C, выдержка 2 мин.; нагрев колонки по 10 град./мин. до температуры 200 °C.
Температура: детектора — 320 °C, испарителя — 250 °C.
Газ 1: тип регулятора расхода газа РРГ-11, режим нормальный, скорость 26 см/с, давление 110,92 кПа.
Газ 2 (гелий) — 5 мл/мин.: расход 0,5 мл/мин., сброс 1:10.
Газ 3 (азот, поддув детектора) — 45 мл/мин.
Продувка: температура колонки 230 °C, Газ 2 — 60 мл/мин., Газ 3 — 60 мл/мин., время 3 мин.
Абсолютное время удерживания Квинмерака — 10 мин. 40 с +/- 2%.
Линейность детектирования сохраняется в пределах — 0,05 — 0,5 нг.
10. Обработка результатов
Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа «Хроматэк Аналитик», версия 1.20.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание Квинмерака рассчитывают по формуле:
S x A x V
пр
X = ------------- x P, 100 x S x m ст
X — содержание Квинмерака в пробе, мг/кг;
S — высота (площадь) пика стандарта, мВ; ст
S — высота (площадь) пика образца, мВ; пр
A — концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m — масса анализируемого образца, г;
P — содержание Квинмерака в аналитическом стандарте, %.
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(X + X )
1 2
X , X - результаты параллельных определений, мг/кг; 1 2
r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 x сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
_
(X +/- ДЕЛЬТА) мг/кг при вероятности P = 0,95,
X — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг» <*>.
<*> 0,01 мг/кг — предел обнаружения.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки C должна удовлетворять условию: д
C = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,X л,X' где +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности л,X л,X' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг; _
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результат контроля процедуры K рассчитывают по формуле: к
_ _ K = X' - X - C , к д
_ _ X', X, С - среднее арифметическое результатов параллельных определений
д
(признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле: _____________________
/ 2 2 K = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,X' л,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K ) с нормативом
к
контроля (K).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(X + X )
1 2
X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг; 1 2
R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
14. Разработчики
Российский государственный аграрный университет — МСХА им. К.А. Тимирязева.
Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов».
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ КВИНМЕРАКА ИЗ ВОДЫ, ПОЧВЫ, СЕМЯН
И МАСЛА РАПСА (5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ
КОНЦЕНТРАЦИИ, P = 0,95)
| Среда | Внесено, мг/кг (куб. дм/кг) | Обнаружено, мг/кг (куб. дм/кг) | Полнота определения, % |
| Вода | 0,005 | 0,0044 +/- 0,00024 | 87,4 |
| 0,002 | 0,0017 +/- 0,0001 | 85,0 | |
| 0,001 | 0,00086 +/- 0,00008 | 85,9 | |
| 0,0005 | 0,00045 +/- 0,00006 | 90,0 | |
| Почва | 0,1 | 0,084 +/- 0,005 | 84,3 |
| 0,05 | 0,0043 +/- 0,0046 | 85,5 | |
| 0,02 | 0,0017 +/- 0,002 | 81,3 | |
| 0,01 | 0,009 +/- 0,00097 | 91,4 | |
| Семена рапса | 0,5 | 0,41 +/- 0,0065 | 82,3 |
| 0,2 | 0,165 +/-0,0029 | 82,3 | |
| 0,1 | 0,077 +/- 0,0011 | 77,4 | |
| 0,05 | 0,036 +/- 0,0006 | 73,0 | |
| Масло рапса | 0,5 | 0,376 +/- 0,0082 | 75,2 |
| 0,2 | 0,157 +/- 0,0022 | 78,5 | |
| 0,1 | 0,071 +/- 0,0013 | 71,4 | |
| 0,05 | 0,036 +/- 0,0006 | 72,5 |