МУК 4.1.2771-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение массовых концентраций формальдегида, ацетальдегида, пропионового альдегида, масляного альдегида и ацетона в желчи методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.2771-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение массовых концентраций формальдегида, ацетальдегида, пропионового альдегида, масляного альдегида и ацетона в желчи методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.2771-10. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2771-10
(утв. Роспотребнадзором 22.11.2010)
Примечание
Документ введен в действие с 22 ноября 2010 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
22 ноября 2010 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ ФОРМАЛЬДЕГИДА, АЦЕТАЛЬДЕГИДА, ПРОПИОНОВОГО АЛЬДЕГИДА, МАСЛЯНОГО АЛЬДЕГИДА И АЦЕТОНА В ЖЕЛЧИ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.2771-10
с момента утверждения
1. Разработаны Федеральным государственным учреждением науки «Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения» Роспотребнадзора.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 14.10.2010 № 2).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 22 ноября 2010 г.
1. Общие положения и область применения
Свидетельство о метрологической аттестации № 223.1.11.11.95/2009.
1.1. Методические указания по определению массовых концентраций альдегидов (формальдегида, ацетальдегида, пропионового альдегида, масляного альдегида) и ацетона в желчи предназначены для использования территориальными органами и подведомственными организациями Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, лечебными и научными учреждениями, осуществляющими деятельность в области профпатологии и экологии человека, научно-исследовательскими институтами, занимающимися вопросами гигиены окружающей среды.
1.2. Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля за содержанием альдегидов и ацетона в биологических средах у населения, проживающего в районах с повышенным уровнем загрязнения окружающей среды.
1.3 Формальдегид (HCHO), молекулярная масса 30,03.
Формальдегид (муравьиный альдегид, метаналь) — бесцветный газ с резким раздражающим запахом. Температура кипения: -19,2 °C, плотность: 0,8153 г/куб. см. Хорошо растворим в воде, спиртах и других полярных растворителях. При низких температурах смешивается с неполярными растворителями (толуолом, диэтиловым эфиром, этилацетатом) [пункт 5 Приложения к настоящему МУК] <*>. Обладает раздражающим, сенсибилизирующим и кожно-резорбтивным действием, оказывает гепатотропный эффект, относится к веществам, обуславливающим канцерогенную опасность [3].
<*> Далее по тексту ссылка на номер пункта Приложения указывается одним номером в квадратных скобках.
1.4 Ацетальдегид (CH CHO), молекулярная масса 44,05.
3
Ацетальдегид (уксусный альдегид) — бесцветная жидкость с удушающим запахом. Температура кипения: 20,16 °C, плотность: 0,778 г/куб. см. Смешивается во всех соотношениях с водой и большинством органических растворителей [1]. Оказывает наркотическое, раздражающее, мутагенное и канцерогенное действие [3].
1.5 Пропионовый альдегид (CH CH CHO), молекулярная масса 58,08.
3 2
Пропионовый альдегид (пропаналь) — бесцветная жидкость с характерным запахом. Температура кипения: 48,8 °C, плотность: 0,8058 г/куб. см. Растворим в воде, смешивается со многими органическими растворителями [4]. Оказывает наркотическое действие, вызывает изменения со стороны дыхательной системы, паренхиматозных органов, угнетает гемопоэз [3].
1.6 Масляный альдегид (CH (CH ) CHO), молекулярная масса 72,11.
3 2 2
Масляный альдегид (бутаналь) — бесцветная прозрачная жидкость с резким запахом. Температура кипения: 75,7 °C, плотность: 0,817 г/куб. см [2]. Растворим в воде, смешивается со многими органическими растворителями. Оказывает наркотическое, раздражающее и кожно-резорбтивное действие [3].
1.7 Ацетон (CH COCH ), молекулярная масса 58,08.
3 3
Ацетон (диметилкетон) — летучая бесцветная жидкость с характерным запахом. Температура кипения: 56,1 °C, плотность: 0,792 г/куб. см [1]. Смешивается с водой и органическими растворителями (эфиром, хлороформом, бензолом, четыреххлористым углеродом). Обладает наркотическим и кожно-резорбтивным действием, угнетает репродуктивную функцию. Преимущественно действует на центральную нервную систему [3].
1.8. Диапазон измерений массовых концентраций альдегидов и ацетона приведен в табл. 1.
НАЗВАНИЕ ОПРЕДЕЛЯЕМОГО ВЕЩЕСТВА И ДИАПАЗОНЫ ИЗМЕРЕНИЙ
| Название определяемого вещества | Диапазон измерений, мкг/куб. см |
|---|---|
| Формальдегид | От 0,001 до 0,1 включ. |
| Ацетальдегид | -«- 0,001 -»- 0,1 -«-» |
| Пропионовый альдегид | -«- 0,001 -»- 0,1 -«-» |
| Масляный альдегид | -«- 0,001 -»- 0,1 -«-» |
| Ацетон | -«- 0,01 -»- 2,0 -«-» |
2. Приписанные характеристики погрешности измерений
Методика обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в табл. 2.
ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ, ЗНАЧЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ТОЧНОСТИ,
ПОВТОРЯЕМОСТИ, ВНУТРИЛАБОРАТОРНОЙ ПРЕЦИЗИОННОСТИ,
ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ
| Диапазон измерений, мкг/куб. см | Показатель повторяемости (относительное значение среднеквадратического отклонения повторяемости), сигма , % r | Показатель внутрилабораторной прецизионности (относительное значение среднеквадратического отклонения внутрилабораторной прецизионности), сигма , % Rл | Показатель воспроизводимости (относительное значение среднеквадратического отклонения воспроизводимости), сигма , R % | Показатель точности <*> (границы относительной погрешности при вероятности P = 0,95), +/- дельта, % |
| От 0,001 до 0,01 включ. | 6 | 12 | 15 | 30 |
| Св. 0,01 -«- 0,1 -»- | 5 | 8 | 10,5 | 21 |
| -«- 0,1 -»- 2 -«-» | 4 | 5 | 6 | 12 |
| <*> Соответствует относительной расширенной неопределенности измерений при коэффициенте охвата 2 | ||||
3. Сущность метода
Методика основана на предварительном переводе альдегидов и ацетона в производные 2,4-динитрофенилгидразина, концентрировании продуктов дериватизации из биологического материала экстракцией гексаном и количественном определении полученных гидразонов альдегидов и ацетона на жидкостном хроматографе с УФ-детектором.
Измерению не мешают спирты, органические кислоты, кетоны и другие альдегиды.
4. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, растворы и реактивы
При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы:
4.1. Средства измерений
Жидкостный хроматограф с УФ-детектором
Весы лабораторные ВЛР-200 аналитические ГОСТ 24104-01
Термометр стеклянный ГОСТ 28498-90
Микрошприцы МШ-1, МШ-10 ТУ 2.833.106-00
Цилиндр мерный вместимостью 50 куб. см ГОСТ 1770-74
Пипетки градуированные вместимостью 1, 2, 5 куб. см ГОСТ 29227-91
Пипетка градуированная вместимостью 0,1 куб. см ГОСТ 20292-74
Колбы мерные вместимостью 100, 200, 500, 1000, 2000 куб. см
Термостойкий стакан вместимостью 2000 куб. см
Пробирки мерные вместимостью 10 куб. см ГОСТ 1770-74
Редуктор кислородный ТУ 26-05-236-73
Формальдегид в воде с концентрацией
1,0 мг/куб. см ГСО 7347-96 Ацетон в воде с концентрацией 1,0 мг/куб. см ГСО 8460-2003
4.2. Вспомогательные устройства
Колонка хроматографическая металлическая (длина 80 мм, внутренний диаметр 2 мм) с сорбентом Диасорб С зернением 5 — 6 - 7 мкм 16
Предколонка металлическая 12 x 1,5 мм, заполненная сорбентом Диасорб С 16
Центрифуга ЦЛМН-Р10-01-"Элекон" ТУ 9443-001-245.23530-97 Дистиллятор ТУ 61-1-721-79 Сушильный шкаф ШСС-80 П УХЛ 4.2 ТУ 16.531.743-83
Дефлегматор длиной 300 мм ГОСТ 25336-82
Холодильник шариковый ХШ-300 (6 шар.) ГОСТ 1770-74
Холодильник прямой ХПТ-3-300 ГОСТ 1770-74
Воронка Шотта (пор 16) ГОСТ 25336-82
Воронки делительные вместимостью 100 куб. см ГОСТ 23932-90
Бюксы СВ 19/9 ТУ 92-891.029-91
Колбы для перегонки круглодонные вместимостью 1,0; 2,0 куб. дм ГОСТ 25336-82
Стакан термостойкий вместимостью 2 куб. дм ГОСТ 25336-82
Пробирки центрифужные пропиленовые с завинчивающейся крышкой вместимостью 15 куб. см
Фильтры обеззоленные "Синяя лента" ТУ 2642-001-42624157-98 Универсальная индикаторная бумага pH 1,0 - 10,0 ПНД 50-975-84
4.3. Реактивы
Гексан для хроматографии, ос.ч. ТУ 6-09-4521-77 Ацетонитрил для жидкостной хроматографии, ос.ч. ТУ 6-09-14-2167-84
Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72
Ацетальдегид для хроматографии, чистота не менее 99,5%
Пропионовый альдегид для хроматографии, чистота не менее 99,5%
Масляный альдегид для хроматографии, чистота не менее 99,5% 2,4-динитрофенилгидразин (2,4-ДНФГ), ч. ТУ-6-09-2394-77
Кислота хлористоводородная (плотность 1,19), х.ч. ГОСТ 3118-77
Перманганат калия, ч. ГОСТ 20490-75
Спирт этиловый, ректификованный, из пищевого сырья ГОСТ Р 51652-2000
Калий двухромовокислый, ч.д.а. ГОСТ 4220-75
Уксусная кислота, х.ч. ГОСТ 61-75
Диэтиламин, ч., перегнанный для хроматографии ТУ 6-09-68-89
4.4. Материалы
Гелий газообразный ТУ 51-940-80
Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования, химических реактивов и материалов по метрологическим и техническим характеристикам, не уступающим перечисленным.
5. Требования безопасности
5.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности по ГОСТ 12.1.007-76 [6] и ГОСТ 12.1.005-88 [7].
5.2. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают меры безопасности, указанные в «Руководстве по правилам эксплуатации прибора», правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 [8], противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 [9] и имеют средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83 [10].
5.3 Помещение должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией.
5.4. При работе с биологическими средами необходимо соблюдать правила в соответствии с требованиями СП 1.3.2322-08 от 01.05.2008 [11].
5.5. При выполнении измерений на приборе соблюдают правила, указанные в Руководстве по правилам эксплуатации жидкостного хроматографа.
6. Требования к квалификации оператора
К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика с опытом работы на жидкостном хроматографе, освоившие метод анализа и уложившиеся в нормативы оперативного контроля при выполнении процедур контроля погрешности анализа.
7. Условия измерений
7.1 При подготовке проб к анализу и приготовлении растворов соблюдают следующие условия:
- температура воздуха 15 — 25 °C;
- атмосферное давление 630 — 800 мм рт. ст.;
- влажность воздуха не более 80% при температуре 25 °C.
7.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.
8. Подготовка к выполнению измерений
Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка посуды и растворителей, приготовление растворов, подготовка хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.
8.1. Подготовка посуды
Используемую посуду замочить на 1 ч в хромовой смеси, промыть проточной водопроводной водой, ополоснуть дистиллированной водой и просушить при температуре 120 °C.
8.2. Подготовка растворителей
8.2.1 Очистка ацетонитрила от примесей. В колбу вместимостью 2 куб. дм
помещают 1 куб. дм ацетонитрила и 20 г KMnO , кипятят с шариковым 4
холодильником в течение 1 ч, затем перегоняют с дефлегматором при температуре 81,6 °C, отбирая фракции по 200 куб. см. Когда в колбе останется около 200 куб. см продукта, перегонку прекращают. Остаток можно смешивать с новой порцией растворителя. Первую фракцию (200 куб. см) отбрасывают, а остальные проверяют на поглощение в УФ-области (оптическая
плотность при 200 нм не должна превышать 0,05 о.е./см).
8.2.2. Очистка диэтиламина от примесей. В колбу вместимостью 1,0 куб. дм помещают 0,5 куб. дм диэтиламина и перегоняют с прямым холодильником. Первые и последние порции (50 куб. см) отбрасывают, оставляют среднюю порцию. Перегнанный раствор должен быть бесцветным.
8.2.3. Очистка этилового спирта от альдегидов и кетонов. К 1 куб. дм 96%-ного спирта добавляют 2 г 2,4-динитрофенилгидразина, 0,5 куб. см концентрированной хлористоводородной кислоты и кипятят с шариковым холодильником 1 ч. Перегоняют с дефлегматором в приборе со стеклянными шлифами, отбрасывая первые и последние 100 куб. см, после этого отгоняют вторично.
8.3. Приготовление растворов
8.3.1. Хромовая смесь. В термостойкий стакан вместимостью 2 куб. дм насыпают 50 г хромовокислого калия, осторожно приливают по палочке частями, тщательно перемешивая, 1 куб. дм концентрированной серной кислоты.
8.3.2. Элюент для хроматографии. 600 куб. см ацетонитрила смешивают с 400 куб. см дистиллированной воды. Смесь фильтруют через воронку Шотта (пор 16) и дегазируют барботированием гелия в течение 5 мин. со скоростью 50 — 60 куб. см/мин. Добавляют 25 куб. см уксусной кислоты и 10 куб. см диэтиламина и перемешивают содержимое колбы. Срок хранения элюента 5 дней в стеклянной посуде с притертой пробкой в темном месте.
8.3.3. Хлористоводородная кислота, 2 моль/куб. дм. В мерную колбу вместимостью 1 куб. дм, наполненную до половины объема дистиллированной водой, прибавляют 61,0 куб. см концентрированной хлористоводородной кислоты (плотность 1,19 г/куб. см), доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.
8.3.4. 2,4-динитрофенилгидразин, 0,2%-ный раствор в 2 М растворе хлористоводородной кислоты. 0,2 г 2,4-динитрофенилгидразина вносят в мерную колбу на 100 куб. см и доводят до метки 2 М раствором хлористоводородной кислоты.
8.3.5 Исходный раствор альдегидов для градуировки (раствор A).
В мерную колбу объемом 500 куб. см, содержащую 450 куб. см дистиллированной воды, добавляют 5 куб. см 0,2%-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина, переносят 4 куб. см ГСО формальдегида с концентрацией 1,0 мг/куб. см (4,0 мг) и реактивы по п. 4.3 в количестве 5,0 куб. мм (3,9 мг) ацетальдегида, 5,0 куб. мм (4,03 мг) пропионового альдегида, 5,0 куб. мм (4,08 мг) масляного альдегида и доводят дистиллированной водой до метки.
Градуировочные растворы готовят с предварительным охлаждением альдегидов и дистиллированной воды, которые выдерживают при температуре (-10 +/- 2) °C в течение 20 мин. Используют свежеприготовленный раствор. Содержание альдегидов в растворе A составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества): формальдегида — 8,0 мкг/куб. см; ацетальдегида — 7,8 мкг/куб. см; пропионового альдегида — 8,1 мкг/куб. см; масляного альдегида — 8,2 мкг/куб. см.
Исходный раствор ацетона для градуировки (раствор B). В мерную колбу объемом 200 куб. см, содержащую 180 куб. см дистиллированной воды, добавляют 5 куб. см 0,2%-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина, переносят 5,0 куб. см (3,96 мг) ГСО ацетона и доводят водой до метки. Используют свежеприготовленный раствор. Содержание ацетона в растворе B составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества) 19,8 мкг/куб. см.
8.3.6. Получение 2,4-динитрофенилгидразонов альдегидов и ацетона. В колбу с притертой пробкой вместимостью 500 куб. см вносят 300 куб. см 0,2%-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина в 2 М хлористоводородной кислоте, прибавляют 0,17 г формальдегида (для получения 2,4-ДНФгидразона ацетальдегида прибавляют 0,24 г ацетальдегида, пропионового альдегида — 0,38 г, масляного альдегида — 0,46 г, ацетона — 0,32 г), перемешивают и оставляют смесь на 12 часов. После выпадения окрашенного осадка 2,4-динитрофенилгидразона соответствующего альдегида или ацетона его отфильтровывают через фильтр «Синяя лента», промывают 100 куб. см 2 М раствора хлористоводородной кислоты, дистиллированной водой до нейтральной реакции среды, которую проверяют по индикаторной бумаге, высушивают на воздухе. Проверяют качество производного методом ВЭЖХ, приемлемый уровень чистоты 99,0% и выше. Если уровень чистоты неудовлетворительный, перекристаллизовывают гидразон из этилового спирта и повторяют проверку качества.
8.4. Подготовка хроматографической колонки
Колонку устанавливают на хроматограф и подают элюент, приготовленный в соответствии с п. 8.3.2, со скоростью 100 куб. мм/мин. до установления равновесия колонки, которое определяют по стабильности нулевой линии детектора.
8.5. Установление градуировочной характеристики
8.5.1. Строят две зависимости площади хроматографического пика от концентрации альдегидов и ацетона в желчи в диапазонах 0,001 — 0,020 мкг/куб. см и 0,02 — 0,50 мкг/куб. см — для альдегидов; 0,005 — 0,10 мкг/куб. см и 0,1 — 2,0 мкг/куб. см — для ацетона. Градуировочные характеристики устанавливают по пяти сериям растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из трех растворов, готовят из растворов A и B.
8.5.2. Для приготовления градуировочных смесей отбирается проба желчи объемом 125 куб. см (при сборе желчь хранится при температуре не выше 0 °C). В соответствии с п. 9 проводят анализ пробы желчи на содержание альдегидов. При наличии анализируемых веществ в холостой пробе вычитают их фоновое содержание при построении калибровки.
8.5.3. Градуировочные растворы готовят в мерных пробирках вместимостью 10 куб. см. Для этого в каждую колбу вносят микрошприцем или микропипеткой растворы A и B в соответствии с табл. 3 и 4, доводят объем до 5 куб. см желчью и перемешивают. Анализируют свежеприготовленные растворы.
РАСТВОРЫ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ ХАРАКТЕРИСТИКИ
ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ В ЖЕЛЧИ АЛЬДЕГИДОВ В ДИАПАЗОНЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ
0,001 — 0,020 МКГ/КУБ. СМ И АЦЕТОНА В ДИАПАЗОНЕ
КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,01 — 0,10 МКГ/КУБ. СМ
| Номер раствора | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
|---|---|---|---|---|---|
| Объем раствора A, куб. мм | 0,6 | 1,2 | 2,6 | 6,0 | 12,0 |
| Массовая концентрация формальдегида, мкг/куб. см | 0,001 | 0,002 | 0,004 | 0,010 | 0,020 |
| Массовая концентрация ацетальдегида, мкг/куб. см | 0,001 | 0,002 | 0,004 | 0,010 | 0,020 |
| Массовая концентрация пропионового альдегида, мкг/куб. см | 0,001 | 0,002 | 0,004 | 0,010 | 0,020 |
| Массовая концентрация масляного альдегида, мкг/куб. см | 0,001 | 0,002 | 0,004 | 0,010 | 0,020 |
| Объем раствора B, куб. мм | 2,6 | 5,0 | 12,6 | 20,0 | 25,0 |
| Массовая концентрация ацетона, мкг/куб. см | 0,01 | 0,02 | 0,05 | 0,08 | 0,10 |
РАСТВОРЫ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ ХАРАКТЕРИСТИКИ
ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ В ЖЕЛЧИ АЛЬДЕГИДОВ В ДИАПАЗОНЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ
0,02 — 0,1 МКГ/КУБ. СМ И АЦЕТОНА В ДИАПАЗОНЕ
КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,1 — 2,0 МКГ/КУБ. СМ
| Номер раствора | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
|---|---|---|---|---|---|
| Объем раствора A, куб. мм | 12,0 | 24,0 | 36,0 | 48,0 | 60,0 |
| Массовая концентрация формальдегида, мкг/куб. см | 0,02 | 0,04 | 0,06 | 0,08 | 0,10 |
| Массовая концентрация ацетальдегида, мкг/куб. см | 0,02 | 0,04 | 0,06 | 0,08 | 0,09 |
| Массовая концентрация пропионового альдегида, мкг/куб. см | 0,02 | 0,04 | 0,06 | 0,08 | 0,10 |
| Массовая концентрация масляного альдегида, мкг/куб. см | 0,02 | 0,04 | 0,06 | 0,08 | 0,10 |
| Объем раствора B, куб. мм | 25,0 | 50,0 | 125,0 | 250,0 | 500,0 |
| Массовая концентрация ацетона, мкг/куб. см | 0,1 | 0,2 | 0,5 | 1,0 | 2,0 |
В делительную воронку объемом 100 куб. см помещают 2,0 куб. см градуировочного раствора, разводят дистиллированной водой до объема 40 куб. см, добавляют 2,0 куб. см 0,2%-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина в 2 М растворе хлористоводородной кислоты, 2 капли концентрированной хлористоводородной кислоты, 5 куб. см гексана и экстрагируют 15 мин. После расслоения жидкостей верхний слой переносят в центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой и центрифугируют 5 мин. со скоростью 2800 об./мин., затем 2 куб. см гексана переносят в бюкс и высушивают в потоке воздуха до сухого остатка. Высушенный остаток растворяют в 0,4 куб. см элюента и анализируют аликвотную часть (10 куб. мм) в условиях:
элюент — раствор, приготовленный по п. 8.3.2;
скорость движения элюента 100 куб. мм/мин.; длина волны УФ-детектора 358 нм;
2,4-динитрофенилгидразона формальдегида 4,1 +/- 0,2 мин.; 2,4-динитрофенилгидразона ацетальдегида 5,0 +/- 0,2 мин.; 2,4-динитрофенилгидразона ацетона 6,2 +/- 0,2 мин.; 2,4-динитрофенилгидразона пропионового альдегида 7,5 +/- 0,2 мин.; 2,4-динитрофенилгидразона масляного альдегида 8,5 +/- 0,2 мин.
Градуировочный коэффициент рассчитывают по формуле:
n
SUM C / S
i=1 i i
C — концентрация вещества в градуировочном растворе, мкг/куб. см; i
S — среднее значение пяти измерений площади пика i-ой концентрации, i расхождение между минимальным и максимальным значением которых не должно превышать 4% относительно среднего значения S ; i
n — количество градуировочных смесей (n = 5).
8.5.4 Контроль стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят 1 раз в квартал в анализируемой серии измерений. Образцами для контроля стабильности являются градуировочные растворы, выбранные таким образом, чтобы массовая концентрация альдегида (ацетона) соответствовала нижней, верхней границам и середине диапазона построения градуировочной характеристики. Градуировка признается стабильной при выполнении условия:
C — заданная концентрация альдегида (ацетона) в градуировочном растворе;
X — результат измерения массовой концентрации альдегида (ацетона) в градуировочном растворе.
При невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики эксперимент повторяют с другим градуировочным раствором. При повторном невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики.
8.6. Отбор проб
Отбор проб желчи в объеме не менее 4 куб. см проводят в чистую пробирку с притертой пробкой. Срок хранения пробы в холодильнике 2 дня.
9. Выполнение измерений
9.1. Выполняют два параллельных измерения образца желчи. В делительную воронку 100 куб. см помещают 2,0 куб. см желчи, разбавляют дистиллированной водой до объема 40 куб. см, добавляют 2,0 куб. см 0,2%-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина в 2 М растворе хлористоводородной кислоты, 2 капли концентрированной хлористоводородной кислоты, 5 куб. см гексана и экстрагируют 15 мин. После отстаивания верхний слой переносят в центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой и центрифугируют 5 мин. со скоростью 2800 об./мин. После расслоения жидкостей 2 куб. см гексанового экстракта переносят в бюкс и высушивают в потоке воздуха до сухого остатка. Высушенный остаток растворяют в 0,4 куб. см элюента, вводят в хроматограф аликвотную часть (10 куб. мм) и анализируют в условиях, указанных в п. 8.5.3.
9.2. Идентификацию хроматографических пиков 2,4-динитрофенилгидразонов формальдегида, ацетальдегида, пропионового и масляного альдегидов и ацетона проводят путем сравнения времен удерживания хроматографических пиков в анализируемой пробе и в растворах 2,4-динитрофенилгидразонов альдегидов и ацетона, полученных согласно п. 8.3.6.
10. Обработка (вычисление) результатов измерений
10.1 Массовые концентрации альдегидов и ацетона в желчи (мкг/куб. см) вычисляют по формуле:
X — массовая концентрация вещества в анализируемой пробе, мкг/куб. см;
S — площадь пика соответствующего 2,4-динитрофенилгидразона альдегида l (или ацетона) на хроматограмме, е.о.п.;
K — градуировочный коэффициент. _
10.2. За результат измерения X принимают среднее арифметическое значение двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости X , X (параллельных определений), для которых выполняется условие: 1 2 X + X 1 2 |X - X | <= 0,01 x r x -------, (1) 1 2 2 где r - предел повторяемости. Значения предела повторяемости приведены
в табл. 5.
ВЕРОЯТНОСТИ P = 0,95
| Диапазон измерений, мкг/куб. см | Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории в условиях повторяемости), r, % | Критический диапазон (относительное значение допускаемого расхождения между наибольшим и наименьшим четырех результатов измерений, полученных в одной лаборатории в условиях повторяемости), CR (4), % 0,95 | Предел воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях), R, % |
|---|---|---|---|
| От 0,001 до 0,01 включ. | 17 | 34 | 42 |
| Св. 0,01 -«- 0,1 -»- | 14 | 22 | 29 |
| -«- 0,1 -»- 2 -«-» | 11 | 14 | 17 |
При невыполнении условия (1) получают дополнительно еще два результата измерений. За результат измерений принимают среднее арифметическое четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, для которых выполняется условие:
X + X + X + X
1 2 3 4
|X - X | <= 0,01 x CR (4) x -----------------, (2)
max,4 min,4 0,95 4
где CR (4) - критический диапазон. Значения критического диапазона
0,95
приведены в табл. 5.
При невыполнении условия (2) в качестве окончательного результата измерений принимают медиану четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (параллельных определений). Дополнительно выявляют и устраняют причины, приводящие к невыполнению условия (1).
10.3. Расхождение между результатами измерений, полученными в двух лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости:
_ _
X + X
_ _ 1 2
|X - X | <= 0,01 x R x -------, (3)
1 2 2
_ _
где X и X - результаты измерений массовых концентраций альдегидов и
1 2
ацетона, полученные в разных лабораториях, - средние арифметические двух
результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, для которых
выполняется условие (1).
При выполнении условия (3) приемлемы оба результата измерений, и в качестве окончательного может быть использовано их среднее арифметическое значение. Значения предела воспроизводимости приведены в табл. 5.
11. Оформление результатов измерений
_
Результат измерения представляют в виде (X + ДЕЛЬТА), мкг/куб. см, где ДЕЛЬТА - характеристика погрешности, мкг/куб. см, при P = 0,95, значение
ДЕЛЬТА рассчитывают по формуле:
_
дельта x X
где значение дельта приведено в табл. 2.
В случае, если содержание компонента меньше нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «содержание альдегида < 0,001 мкг/куб. см, содержание ацетона < 0,01 мкг/куб. см».
12. Контроль стабильности результатов измерений в пределах лаборатории
Контроль стабильности результатов измерений в пределах лаборатории организуют и проводят в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-6 [12] и РМГ 76-2004 ГСИ [13].
Периодичность получения результатов контрольных процедур и формы их регистрации приводят в документах лаборатории, устанавливающих порядок и содержание работ по организации методов контроля стабильности результатов измерений в пределах лаборатории.
13. Алгоритм оперативного контроля процедуры измерений с использованием метода добавок
Оперативный контроль процедуры измерений проводят путем сравнения результата отдельно взятой контрольной процедуры K с нормативом контроля
к
K.
Результат контрольной процедуры K рассчитывают по формуле: к
_ _ K = |X' - X - C |, к д
X' - результат измерений массовой концентрации альдегида (или ацетона) в пробе с известной добавкой - среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми
удовлетворяет условию (1); _
X — результат измерений массовой концентрации альдегида (или ацетона) в
исходной пробе - среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми
удовлетворяет условию (1).
Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
_________________________
/ 2 2 K = \/ДЕЛЬТА + ДЕЛЬТА , л,X' л,X ср ср 2 2 где ДЕЛЬТА , ДЕЛЬТА - значения характеристики погрешности л,X' л,X ср ср результатов измерений, установленные в лаборатории при реализации методики, соответствующие массовой концентрации альдегида (или ацетона) в
пробе с известной добавкой и в исходной пробе соответственно.
Примечание. Допустимо характеристику погрешности результатов измерений при внедрении методики в лаборатории устанавливать на основе выражения: ДЕЛЬТА = 0,84 x ДЕЛЬТА, с последующим уточнением по мере накопления
л
информации в процессе контроля стабильности результатов измерений.
Процедуру измерений признают удовлетворительной при выполнении условия:
При невыполнении условия (4) контрольную процедуру повторяют. При повторном невыполнении условия (4) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
14. Алгоритм проведения контрольной процедуры при контроле внутрилабораторной прецизионности
Контрольные процедуры при контроле промежуточной прецизионности получают с использованием рабочих проб желчи.
При реализации контрольной процедуры получают два результата _ _ контрольных измерений (первичного X и повторного X ) массовой концентрации 1 2
альдегида (или ацетона) в условиях внутрилабораторной прецизионности.
Результат контрольной процедуры признают удовлетворительным при выполнении следующего условия:
_ _
X + X
_ _ 1 2
|X - X | <= 0,01 x R x -------. (5)
1 2 л 2
Значения предела внутрилабораторной прецизионности приведены в табл. 6.
ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ ВЕРОЯТНОСТИ P = 0,95
| Диапазон измерений, мкг/куб. см | Предел внутрилабораторной прецизионности (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории в условиях внутрилабораторной прецизионности), R , % л |
|---|---|
| От 0,001 до 0,01 включ. | 34 |
| Св. 0,01 -«- 0,1 -»- | 22 |
| -«- 0,1 -»- 2 -«-» | 14 |
1. Химическая энциклопедия/ Под. ред. И.Л. Кнунянц. М.: «Советская энциклопедия», 1988. Т. 1.
2. Химическая энциклопедия/ Под. ред. И.Л. Кнунянц. М.: «Советская энциклопедия», 1990. Т. 2.
3. Филов В.А., Тиунов Л.А. Справ.: Вредные химические вещества. Галоген- и кислородсодержащие органические соединения. С.-П.: «Химия», 1994.
4. Химическая энциклопедия/ Под. ред. Н.С. Зефирова. М.: «Большая российская энциклопедия», 1995. Т. 4.
5. Химическая энциклопедия/ Под. ред. Н.С. Зефирова. М.: «Большая российская энциклопедия», 1999. Т. 5.
6. ГОСТ 12.1.007-76 «Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
7. ГОСТ 12.1.005-88 «Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны».
8. ГОСТ 12.1.019-79 «Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
9. ГОСТ 12.1.004-91 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования».
10. ГОСТ 12.4.009-90 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
11. Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3.2322-08 от 01.05.2008 «Безопасность работы с микроорганизмами III — IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».
12. ГОСТ Р ИСО 5725-6 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13. РМГ 76-2004 «ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа».