МУК 4.1.2546-09. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств форамсульфурона в воде, почве, зеленой массе, зерне и масле кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 09.09.2009)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 1 декабря 2009 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
9 сентября 2009 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ФОРАМСУЛЬФУРОНА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ, ЗЕРНЕ И МАСЛЕ КУКУРУЗЫ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.2546-09
1 декабря 2009 года
1. Разработаны Всероссийским Научно-исследовательским институтом фитопатологии.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 июня 2009 г. № 2).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 9 сентября 2009 г.
4. Введены в действие с 1 декабря 2009 г.
Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения остаточных количеств форамсульфурона в воде в диапазоне 0,001 — 0,01 мг/куб. дм, в почве в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг, в зеленой массе кукурузы в диапазоне 0,05 — 0,5 мг/кг, в зерне и масле кукурузы в диапазоне 0,02 — 0,2 мг/кг.
Название вещества по ИСО: форамсульфурон.
Название вещества по ИЮПАК: 1-(4,6-диметоксипиримидин-2-ил)-3-[2-(диметилкарбамоил)-5-формамидофенилсульфонил]мочевина.
Структурная формула (не приводится).
Светло-бежевое вещество. Температура плавления: 199,5 °C. Давление -8
паров при 20 °C: 4,2 x 10 мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода при 20 °C: K log P = 1,44 (pH 2), 0,603 (pH 5), -0,78 (pH 7), -1,97
ow
(pH 9), 0,60 (дистиллированная вода, pH 5,5 - 5,7). Растворимость (в г/куб. дм растворителя) при 20 °C: ацетон - 1,925, ацетонитрил - 1,111, 1,2-дихлорэтан - 0,185, этилацетат - 0,362, гептан - < 0,010, метанол -
1,66; вода — 0,04 (pH 5), 3,3 (pH 7), 94,6 (pH 8).
Фотолитически стабилен, нестабилен в кислой среде (DT = 10 дней при 50 pH 5).
В биологически активных почвах в аэробных условиях форамсульфурон быстро разлагается со средним значением DT = 1,5 - 9,4 дней. Вещество и
50
его метаболиты относительно слабо передвигаются по почвенному профилю.
Краткая токсикологическая характеристика.
Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс > 5000 мг/кг; острая 50 дермальная токсичность (LD ) для крыс > 2000 мг/кг; острая ингаляционная 50
токсичность (LC ) для крыс > 5,04 мг/куб. дм воздуха. LC для рыб >
50 50
100 мг/куб. дм, EC для зеленых водорослей - 12,5 мг/куб. дм.
50
В России установлены следующие гигиенические нормативы:
ДСД — 0,02 мг/кг массы тела человека; ПДК в воде водоемов — 0,002 мг/куб. дм; ПДК в почве — 0,02 мг/кг; МДУ в зерне и масле кукурузы — 0,05 мг/кг.
Форамсульфурон — послевсходовый гербицид системного действия из класса сульфонилмочевин. Механизм его действия связан с подавлением синтеза аминокислот с разветвленной цепью (валин и изолейцин), приводящего к прекращению клеточного деления и роста. Он эффективно уничтожает злаковые (Echinochloa cruss-galli, Setaria spp., Elytrigia repens, Sorgum halepense) и широколистные сорные растения в посевах кукурузы. Избирательность действия форамсульфурона в отношении кукурузы обусловлена его быстрой детоксикацией в этой культуре.
Проходит регистрационные испытания в РФ в качестве гербицида в составе смесевых препаратов на посевах зерновых злаков и кукурузы с нормой расхода 40 — 60 г д.в./га.
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
| Вода | от 0,001 до 0,01 вкл. | 100 | 3,9 | 10,9 | 16,9 |
| Почва | от 0,01 до 0,1 вкл. | 50 | 3,5 | 9,8 | 15,2 |
| Кукуруза (зеленая масса) | от 0,05 до 0,1 вкл. | 50 | 3,9 | 10,9 | 16,9 |
| более 0,1 до 0,5 | 25 | 2,9 | 8,1 | 12,5 | |
| Кукуруза (зерно) | от 0,05 до 0,10 вкл. | 50 | 3,4 | 9,5 | 14,7 |
| более 0,10 до 0,50 | 25 | 2,0 | 5,6 | 8,7 | |
| Кукуруза (масло) | от 0,02 до 0,1 вкл. | 50 | 3,0 | 8,4 | 13,0 |
| более 0,1 до 0,2 | 25 | 2,0 | 5,6 | 8,7 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Вода | 0,001 | 0,001 — 0,01 | 91,7 | 3,6 | +/- 3,4 |
| Почва | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 84,0 | 5,4 | +/- 5,1 |
| Кукуруза (зеленая масса) | 0,05 | 0,05 — 0,5 | 80,8 | 4,7 | +/- 4,4 |
| Кукуруза (зерно) | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 80,5 | 4,5 | +/- 4,2 |
| Кукуруза (масло) | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 80,0 | 4,4 | +/- 4,1 |
2. Метод измерений
Методика основана на определении форамсульфурона с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором. Контроль форамсульфурона в образцах осуществляется по содержанию вещества после его экстракции из воды хлористым метиленом, из почвы — смесью ацетонитрила и бикарбоната натрия, из зеленой массы и зерна кукурузы — водным ацетоном, из масла кукурузы — ацетонитрилом, очистки экстракта путем распределения действующего вещества между несмешивающимися растворителями при щелочном и кислом значениях pH и на колонке с силикагелем.
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора колонки, состава подвижной фазы и условий хроматографирования.
3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
3.1. Средства измерений
Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны (фирма Waters, США) Номер Госреестра № 16848-03
Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г ГОСТ 7328
Иономер универсальный ЭВ-74 ГОСТ 22261
Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-1000-2 ГОСТ 1770
Пипетки градуированные 2 класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10,0 куб. см ГОСТ 29227
Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой вместимостью 5 куб. см ГОСТ 1770
Цилиндры мерные 2 класса точности вместимостью 25, 50, 100, 500 и 1000 куб. см ГОСТ 1770
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Форамсульфурон, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества 98,7% (Байер, Германия)
Ацетонитрил для хроматографии, х.ч. ТУ 6-09-3534-87 Вода бидистиллированная или деионизованная ГОСТ 6702 н-Гексан, х.ч. ТУ 6-09-3375
Калий фосфорнокислый двузамещенный, ч.д.а. ГОСТ 2493
Кислота ортофосфорная, х.ч., 85,6 % ГОСТ 6552
Метилен хлористый (дихлорметан), х.ч. ГОСТ 12794
Натрия сульфат безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76
Натрий углекислый кислый, х.ч. ГОСТ 4201-66
Натрий фосфорнокислый двузамещенный, двухводный, ч.д.а. ГОСТ 11773-76
Спирт метиловый, х.ч. ГОСТ 6995-77
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.
3.3. Вспомогательные устройства, материалы
Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с ТУ 64-1-2851-78
Ванна ультразвуковая, модель D-50, фирма
Вата медицинская ТУ 9393-001-00302238
Воронки делительные вместимостью 100 и 250 куб. см ГОСТ 25336
Воронки конусные диаметром 30 — 37 мм ГОСТ 25336
Дефлегматор елочный ГОСТ 9737
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 25 и 100 куб. см ГОСТ 9737
Колонка хроматографическая стеклянная длиной 25 см и внутренним диаметром 8 — 10 мм
Колонка хроматографическая стальная длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая
Диасфер 110-С18 (5 мкм) (ЗАО «БиоХимМак СТ»,
Москва) ТУ 4215-001-05451931-94 Насос водоструйный вакуумный ГОСТ 10696
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротационный вакуумный испаритель B-169 фирмы Buchi (Швейцария) ТУ 25-11-917-74
Силикагель 60 (0,063 — 0,2 мм) для колоночной хроматографии (Мерк, Германия)
Стаканы химические вместимостью 100 и 500 куб. см ГОСТ 25336
Установка для перегонки растворителей
Фильтры бумажные «красная лента», обеззоленные или фильтры из хроматографической бумаги
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 100 куб. мм, модель Microliter #1710 (Hamilton, США)
Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими веществами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя с опытом работы на жидкостном хроматографе.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению измерений
Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем.
7.1. Очистка органических растворителей
7.1.1 Очистка ацетона. Ацетон перегоняют над перманганатом калия и
поташом (на 1 л ацетона 10 г KMnO и 2 г K CO ).
4 2 3
7.1.2. Очистка ацетонитрила. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 ч, после чего перегоняют. Непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.
7.1.3. Очистка н-гексана. Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания ее в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.
7.1.4. Очистка хлористого метилена. Хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворитель последовательно промывают водой, 2% раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
7.1.5. Очистка силикагеля. Силикагель 60 (0,063 — 0,20 мм) для колоночной хроматографии встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130 °C в течение 5 ч.
7.2 Приготовление 2 М и 0,005 М растворов
ортофосфорной кислоты
Для получения 2 М раствора H PO в мерную колбу вместимостью 1000 3 4 куб. см вносят 137 куб. см 85,6% ортофосфорной кислоты, добавляют 500 - 600 куб. см деионизованной воды, перемешивают и доводят объем водой до
метки.
Для получения 0,005 М раствора H PO отбирают 2,5 куб. см 3 4 приготовленного 2 М раствора ортофосфорной кислоты, переносят в мерную колбу вместимостью 1000 куб. см, добавляют деионизованную воду до метки и
перемешивают.
7.3 Приготовление 0,1 М раствора K HPO x 3H O
2 4 2 22,8 г K HPO x 3H O растворяют в химическом стакане в 400 куб. см 2 4 2 деионизованной воды, раствор переносят в мерную колбу вместимостью
1000 куб. см, добавляют деионизованную воду до метки и перемешивают.
7.4 Приготовление 0,06 М раствора NaHCO
3
5,04 г NaHCO растворяют в химическом стакане в 400 куб. см 3 деионизованной воды, раствор переносят в мерную колбу вместимостью 1000 куб. см, добавляют деионизованную воду до метки и перемешивают.
7.5. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта
Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8 — 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г силикагеля в 30 куб. см смеси ацетон-метанол (7:3, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 20 куб. см смеси ацетон-метанол (8:2, по объему) со скоростью 1 — 2 кап./сек., после чего она готова к работе.
7.6. Проверка хроматографического поведения форамсульфурона на колонке с силикагелем
В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,1 куб. см градуировочного раствора форамсульфурона с концентрацией 10 мкг/куб. см в ацетонитриле (п. 7.9.2). Раствор упаривают досуха, остаток растворяют в 3 куб. см смеси ацетон-метанол (8:2, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.5. Промывают колонку 50 куб. см смеси ацетон-метанол (8:2, по объему) со скоростью 1 — 2 кап./сек., элюат отбрасывают. Затем колонку промывают.
100 куб. см смеси ацетон-метанол (7:3, по объему). Фракционно (по 10 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., вносят 2 куб. см подвижной фазы, подготовленной по п. 7.7, перемешивают и анализируют на содержание форамсульфурона по п. 9.4. Фракции, содержащие форамсульфурон, объединяют и вновь анализируют по п. 9.4. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.
Примечание: Профиль вымывания форамсульфурона может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.
7.7. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ
В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 400 куб. см ацетонитрила, доливают до метки 0,005 М водным раствором ортофосфорной кислоты (п. 7.2), перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр, дегазируют.
7.8. Кондиционирование хроматографической колонки
Промывают колонку подвижной фазой, приготовленной по п. 7.7, при скорости подачи растворителя 1 куб. см/мин. не менее часа до установления стабильной базовой линии.
7.9. Приготовление градуировочных растворов
7.9.1. Исходный раствор форамсульфурона для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,010 г форамсульфурона, растворяют в 40 — 50 куб. см ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.
Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °C в течение месяца.
7.9.2. Раствор форамсульфурона № 1 для градуировки (концентрация 10 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора форамсульфурона с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.9.1), разбавляют ацетонитрилом до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов № 2 — 5.
Для приготовления проб масла с внесением при оценке полноты извлечения форамсульфурона из исследуемых образцов используют ацетоновый раствор форамсульфурона с концентрацией 5 мкг/куб. см.
Градуировочный раствор № 1 хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °C в течение месяца.
7.9.3. Рабочие растворы № 2 — 5 форамсульфурона для градуировки (концентрация 0,02 — 0,20 мкг/куб. см). В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 0,2; 0,4; 1,0 и 2,0 куб. см градуировочного раствора № 1 форамсульфурона с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.9.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.7, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2 — 5 с концентрацией форамсульфурона 0,02; 0,04; 0,10 и 0,20 мкг/куб. см соответственно.
Растворы готовят непосредственно перед использованием.
7.10. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мкВ x сек.) от концентрации форамсульфурона в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.
В инжектор хроматографа вводят по 5 куб. мм каждого градуировочного раствора (п. 7.9.3) и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений.
8. Отбор и хранение проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79) и правилами, определенными ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 1743.01-83 «Почвы. Общие требования к отбору проб», 26950-89 «Почвы. Отбор проб», ГОСТ Р 50436-92 «Зерновые. Отбор проб зерна».
Пробы воды анализируют в день отбора или замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре -18 °C не более 2 недель.
Образцы почвы подсушивают на воздухе в темноте, помещают в герметичную полиэтиленовую тару и хранят в холодильнике при температуре 4 — 6 °C не более 4 недель. Для длительного хранения образцы почвы замораживают и хранят при температуре -18 °C.
Пробы зеленой массы кукурузы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более 1 дня; для длительного хранения пробы замораживают и хранят при -18 °C.
Пробы зерна высушивают до стандартной влажности и хранят в холодильнике при температуре 4 °C.
Масло хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 4 — 6 °C. В некоторых случаях масло получают из зерна кукурузы экстракцией органическими неполярными растворителями (петролейный и диэтиловый эфиры) непосредственно перед проведением анализа.
Перед анализом образцы воды фильтруют через неплотный бумажный фильтр, образцы почвы просеивают через сито с диаметром отверстий 1 мм, зерно размалывают на мельнице, а зеленую массу измельчают ножом.
9. Выполнение определения
9.1. Экстракция форамсульфурона
9.1.1 Вода. К образцу предварительно отфильтрованной воды объемом
100 куб. см добавляют 2,28 г K HPO x 3H O, перемешивают до растворения
2 4 2
соли, контролируют pH раствора с помощью ионометра и доводят до 9 с помощью
1 N раствора гидроксида калия. Полученный раствор переносят в делительную воронку емкостью 250 куб. см, приливают 25 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После расслоения органическую фазу отбрасывают, а водную фракцию еще дважды обрабатывают хлористым метиленом порциями по 15 куб. см. Водную фракцию переносят в химический стакан, подкисляют 2 М ортофосфорной кислотой до pH 3, контролируя кислотность раствора с помощью иономера. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, приливают 25 куб. см хлористого метилена,
интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения слоев органическую фазу собирают. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя по 15 куб. см хлористого метилена. Объединенную органическую фазу
пропускают через слой хлопковой ваты и упаривают на роторном испарителе досуха при температуре 40 °C. Сухой остаток растворяют в 5 куб. см
подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 7.7) и анализируют на содержание форамсульфурона по п. 9.4.
9.1.2. Почва. Навеску (20 г) воздушно-сухой почвы помещают в плоскодонную колбу емкостью 250 куб. см, приливают 80 куб. см смеси ацетонитрил - 0,06 М NaHCO (1:1, по объему), встряхивают в течение 30
3
мин. на аппарате для встряхивания. Суспензию помещают в ультразвуковую баню
на 3 мин., центрифугируют 5 мин. при 6000 g и супернатант фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. К остатку почвы в центрифужной пробирке приливают 40 куб. см смеси ацетонитрил - 0,06 М NaHCO (1:1, по объему), перемешивают и центрифугируют. Объединенный
3
экстракт упаривают до водного остатка, доводят объем водой до 40 куб. см и обрабатывают хлористым метиленом по п. 9.2.
9.1.3. Зерно. Образец размолотого зерна массой 20 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 100 куб. см смеси ацетон-вода (90:10, по объему) и помещают на встряхиватель на 30 мин. Суспензию обрабатывают в ультразвуковой бане в течение 3 мин. и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Остаток на фильтре промывают 50 куб. см смеси ацетон-вода (90:10, по объему). Объединенный экстракт упаривают до водного остатка (около 5 куб. см), добавляют 0,1 М
K HPO до объема 50 куб. см и проводят очистку по п. 9.2. 2 4
9.1.4 Зеленая масса. Образец растительного материала массой 20 г
помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 куб. см, добавляют 100 куб. см смеси ацетон-вода (90:10, по объему) и гомогенизируют 3 мин. при 10000 об./мин. Гомогенат фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 куб. см. Осадок на фильтре промывают 50 куб. см смеси ацетон-вода (90:10, по объему). Объединенный экстракт упаривают до водного остатка (около 5 куб. см) добавляют 0,1 М
K HPO до объема 50 куб. см и проводят очистку по п. 9.2. 2 4
9.1.5. Масло. Образец масла массой 5 г вносят в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 10 куб. см гексана и перемешивают. К раствору добавляют 50 куб. см ацетонитрила и содержимое интенсивно встряхивают в течение 30 мин. Верхний ацетонитрильный слой собирают после разделения фаз в делительной воронке вместимостью 250 куб. см. Операцию экстракции масляной фазы повторяют еще два раза, используя по 30 куб. см ацетонитрила.
Ацетонитрильный экстракт фильтруют через слой ваты, которую промывают после фильтрации 10 куб. см ацетонитрила. Объединенный ацетонитрильный экстракт переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, добавляют 10 куб. см гексана, насыщенного ацетонитрилом, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После расслоения фаз гексановый слой отбрасывают, а ацетонитрильную фракцию фильтруют через слой ваты в круглодонную колбу и упаривают до маслянистого остатка на ротационном
вакуумном испарителе при температуре 40 °C. Остаток растворяют в 50 куб. см
0,1 М K HPO и проводят очистку по п. 9.2.
2 4
9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
Экстракт, полученный по пп. 9.1.2, 9.1.3, 9.1.4 и 9.1.5, переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см, приливают 25 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После расслоения органическую фазу отбрасывают, а водную фракцию еще дважды обрабатывают хлористым метиленом порциями по 15 куб. см. Водную фракцию переносят в химический стакан, подкисляют 2 М ортофосфорной кислотой до pH 3, контролируя кислотность раствора с помощью иономера. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см, приливают 25 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения слоев органическую фазу фильтруют через 1 слой хлопковой ваты в мерный цилиндр вместимостью 100 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя по 15 куб. см хлористого метилена. Измеряют объем объединенной органической фазы и часть ее, эквивалентную 1 г зерна, масла и зеленой массы либо 2 г почвы, переносят в круглодонную колбу вместимостью 25 куб. см. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.3.
9.3. Очистка экстракта на колонке с силикагелем
Сухой остаток в колбе, полученный по п. 9.2, растворяют в 3 куб. см смеси ацетон-метанол (8:2, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по п. 7.5. Колбу обмывают 2 куб. см смеси ацетон-метанол (8:2, по объему), которые также наносят на колонку. Колонку последовательно промывают 45 куб. см смеси ацетон-метанол (8:2, по объему) и 10 куб. см смеси ацетон-метанол (7:3, по объему) со скоростью 1 — 2 кап./сек., элюат отбрасывают. Форамсульфурон элюируют с колонки 60 куб. см смеси ацетон-метанол (7:3, по объему), элюат собирают в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C. Сухой остаток экстрактов почвы, зерна и масла растворяют в 1 куб. см, зеленой массы — в 2,5 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ, подготовленной по п. 7.7, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание форамсульфурона по п. 9.4.
9.4. Условия хроматографирования
Жидкостной хроматограф с программным обеспечением Breeze фирмы Waters (США) с ультрафиолетовым детектором, модель 2487.
Колонка стальная длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Диасфер 110-С18, зернением 6 мкм.
Температура колонки: комнатная.
Подвижная фаза: ацетонитрил — 0,005 М ортофосфорная кислота (40:60).
Скорость потока элюента: 0,5 куб. см/мин.
Чувствительность: 0,01 ед. абсорбции на шкалу.
Объем вводимой пробы: 5 куб. мм.
Время удерживания форамсульфурона: 6,2 мин.
Линейный диапазон детектирования: 0,1 — 2,0 нг.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,2 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.
10. Обработка результатов анализа
Содержание форамсульфурона рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
S x A x V
1
где: X — содержание форамсульфурона, мг/куб. дм, мг/кг; S — площадь пика образца, мкВ x с; 1 S — площадь пика стандарта, мкВ x с; 0 A — концентрация стандартного раствора форамсульфурона, мкг/куб. см; V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см; m — масса анализируемой части образца (для воды — 100 куб. см, почвы — 2 г, зеленой массы, зерна и масла — 1 г).
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(X + X )
1 2
X и X - результаты параллельных определений, мг/кг;
1 2
R — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
_
X +/- ДЕЛЬТА мг/кг при вероятности P = 0,95,
где: _ X — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг; ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
дельта x X
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
В случае, если содержание компонента меньше нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе „менее нижней границы определения“»
< 0,001 мг/куб. дм <> для воды, < 0,01 мг/кг <> для почвы, < 0,05 мг/кг <> для зеленой массы кукурузы, < 0,02 мг/кг <****> для зерна и масла кукурузы.
<*> 0,00 мг/куб. дм — предел обнаружения для воды.
<**> 0,01 мг/кг — предел обнаружения для почвы.
<***> 0,05 мг/кг — предел обнаружения для зеленой массы кукурузы.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки C должна удовлетворять условию: д
C = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д п,X п,X' где +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности п,X п,X' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
дельта x X
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результат контроля процедуры K рассчитывают по формуле: к
_ _ K = X' - X - C , к д _ _ где X', X, C - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
______________________
/ 2 2 K = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ . п,X' п,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K ) с нормативом
к
контроля (K).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(X + X )
1 2
X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
табл. 1), %.