МУК 4.1.2544-09. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств мандипропамида в воде, почве, клубнях картофеля, ягодах винограда, плодах томата, огурцов и луке-репке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 03.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.2544-09. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств мандипропамида в воде, почве, клубнях картофеля, ягодах винограда, плодах томата, огурцов и луке-репке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.2544-09. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2544-09
(утв. Роспотребнадзором 09.09.2009)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 1 декабря 2009 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
9 сентября 2009 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ МАНДИПРОПАМИДА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, КЛУБНЯХ КАРТОФЕЛЯ, ЯГОДАХ ВИНОГРАДА, ПЛОДАХ ТОМАТА, ОГУРЦОВ И ЛУКЕ-РЕПКЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.2544-09
1 декабря 2009 года
1. Разработаны: Российским государственным аграрным университетом — МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 июня 2009 г. № 2).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 9 сентября 2009 г.
4. Введены в действие с 1 декабря 2009 г.
Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации мандипропамида в диапазоне 0,005 — 0,05 мг/куб. дм в воде, 0,01 — 0,1 мг/кг в почве, 0,02 — 0,2 мг/кг в клубнях картофеля, ягодах винограда и виноградном соке, плодах томата, огурцов и луке-репке.
Название действующего вещества по ИЮПАК:
2-(4-хлорфенил)-N-[3-метокси-4-(проп-2-инилокси)фенэтил]-2-(проп-2-инилокси)ацетамид.
Структурная формула: (не приводится).
Эмпирическая формула: C H ClNO . 23 22 4
Агрегатное состояние: порошок.
Цвет, запах: светло-бежевый цвет. -4
Давление паров < 9,4 x 10 Ра (при 25 °C). Коэффициент распределения октанол-вода: K log P = 2,1 при pH 7,0.
Температура плавления: 96,4 — 97,3 °C.
Растворимость в воде: 4,2 мг/куб. дм (25 °C).
Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм): ацетон — 300; этилацетат — 120; толуол — 29; дихлорметан — 400.
Устойчив к гидролизу в диапазоне pH 4 - 9. Разрушается при фотолизе в воде с ДТ - 4 дня.
50
В почве вещество нестабильно с ДТ 13,6 дней в полевых условиях. 50
Краткая токсикологическая характеристика. Препарат относится к малоопасным веществам по острой пероральной (ЛД для крыс составляет >
50
5000 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД для крыс составляет более > 2000 50
мг/кг) и к умеренно опасным веществам по острой ингаляционной токсичности (СК для крыс более 5000 мг/куб. м). Не вызывает покраснения кожных
50 покровов и глаз кроликов. Не обладает мутагенными, канцерогенными и тератогенными свойствами.
Мандипропамид — фунгицид системного действия, проникает в растения через листья. Эффективен как ингибитор мицелиального роста и споруляции, препятствует развитию спор. Адсорбируется восковым слоем растений, что препятствует его смыванию дождями. Поскольку мандипропамид попадает в ткани растений, он защищает и нижнюю поверхность листьев.
Мандипропамид используют для борьбы с оомицетами на растениях винограда, картофеля и томатов, бахчевых культур с нормой расхода 100 — 150 г/га.
В России предлагается для применения в качестве фунгицида в посадках картофеля, томатов, посевах огурца, лука и на виноградниках с нормой расхода 0,4 — 0,6 л/га по препарату при четырехкратной обработке.
В России установлены следующие гигиенические нормативы:
ДСД для человека — 0,03 мг/кг/сут.;
ПДК в воде водоема — 0,05 мг/куб. дм;
ВМДУ (мг/кг): томаты — 1,0, ягоды винограда — 2,0, лук-репка — 0,1, огурцы — 0,2;
МДУ (мг/кг) клубни картофеля — 0,1.
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ДЛЯ МАНДИПРОПАМИДА
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
| Вода | 0,005 — 0,01 | 100 | 3,5 | 9,8 | 11,7 |
| Почва | более 0,01 — 0,05 | 50 | 4,0 | 11,2 | 13,4 |
| 0,01 — 0,1 вкл. | 50 | 5,0 | 14,0 | 20,0 | |
| Клубни картофеля | 0,02 — 0,1 вкл. | 50 | 4,5 | 12,6 | 15,0 |
| более 0,1 — 0,2 | 25 | 5,0 | 14,0 | 20,0 | |
| Ягоды винограда | 0,02 — 0,1 вкл. | 50 | 4,0 | 11,2 | 13,4 |
| более 0,1 — 0,2 | 25 | 5,0 | 14,0 | 20,0 | |
| Плоды томата | 0,01 — 0,1 | 50 | 1,4 | 3,92 | 4,7 |
| 0,1 — 1,0 | 25 | 0,9 | 2,52 | 3,0 | |
| Плоды огурца | 0,01 — 0,1 | 50 | 1,4 | 3,92 | 4,7 |
| 0,1 — 1,0 | 25 | 1,1 | 3,1 | 3,7 | |
| Лук-репка | 0,01 — 0,1 | 50 | 1,2 | 3,36 | 4,0 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
РЕЗУЛЬТАТА ДЛЯ МАНДИПРОПАМИДА
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, P = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Вода | 0,005 | 0,005 — 0,05 | 95,5 | 1,8 | 0,85 |
| Почва | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 80,3 | 4,3 | 0,97 |
| Клубни картофеля | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 87,8 | 2,2 | 1,26 |
| Ягоды винограда | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 83,8 | 2,4 | 0,63 |
| Плоды томата | 0,02 | 0,01 — 0,1 | 87,0 | 1,8 | 0,72 |
| Плоды огурца | 0,02 | 0,01 — 0,1 | 83,43 | 1,3 | 0,52 |
| Лук-репка | 0,02 | 0,01 — 0,1 | 86,3 | 1,5 | 1,38 |
2. Метод измерений
Метод основан на определении мандипропамида с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового или диодно-матричного детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистке перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, очистки экстракта на колонках с окисью алюминия, с Флоризилом, концентрирующих патронах Диапак C и Диапак C16.
Идентификация вещества проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
3.1. Средства измерений
Весы аналитические «OHAUS», СИГМА 11140
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г «ACCULAB» V600
Колбы мерные на 25, 50 и 100 куб. см ГОСТ 1770-74
Микрошприц для жидкостного хроматографа на 50 — 100 куб. мм
Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 куб. см ГОСТ 20292-74
Хроматограф жидкостной Уотерс 510 с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу или другой аналогичного типа Номер госрегистрации 15311-02
Хроматограф жидкостной Waters 515 HPLC Pump с диодно-матричным детектором фирмы Agilent Technologies G1315B Номер госрегистрации 16193-06
Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Мандипропамид, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,2%, фирма Сингента
Алюминий окись L 40/250, нейтральная для хроматографии, Lachema
Ацетонитрил, ос.ч., УФ-200 нм ТУ 6-09-2167-84 Кальций хлористый, х.ч. ГОСТ 4161-76 Вода бидистиллированная*, деионизированная ГОСТ 7602-72 Гексан, х.ч. для спектроскопии ТУ 6-09-06-657-84
Калий марганцовокислый, ч.д.а. ГОСТ 20490-75
Кальций хлористый, х.ч. ГОСТ 4161-76
Кислота серная концентрированная, ч. ГОСТ 4204-77
Метилен хлористый ГОСТ 19433-88
Натрий сернокислый безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76
Натрий хлористый, х.ч. ГОСТ 4233-77
Концентрирующие патроны Диапак C (0,6 г) ТУ 4215-002-05451931-94 Концентрирующие патроны Диапак C16 (0,6 г) ТУ 4215-002-05451931-94
Флоризил для колоночной хроматографии с размером частиц 60 — 80 меш, фирма «Мерк» или аналогичный
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.3. Вспомогательные устройства и материалы
Алонж прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами Диапак C8
Аппарат для встряхивания проб «SKLO UNION TYP LT1»
Банки с крышками для экстракции на 250 куб. см, полипропилен, кат. № 3120-0250, NALGENE
Ванна ультразвуковая «UNITRA» UNIMA OLSZTYN UM-4
Воронки химические для фильтрования стеклянные ГОСТ 8613-75 Воронки делительные на 250 куб. см ГОСТ 10054-75
Дегазатор вакуумный DG2, фирма Waters
Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной баней
Колбы конические плоскодонные на 100 и 250 куб. см, КПШ-100, КПШ-250 ГОСТ 10394-72
Колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, Symmetry Shield RP18, зернение 5 мкм, фирма Waters
Колбы конические плоскодонные объемом 250, 500 и 1000 куб. см ГОСТ 9737-70
Концентраторы грушевидные и круглодонные объемом 100 и 250 куб. см ГОСТ 10394-75
Насос диафрагменный FT.19 фирмы KNF Neu Laboport
Предколонка хроматографическая стальная, Symmetry Shield C18, длиной 20 мм, внутренним диаметром 3,9 мм, зернение 5 мкм, фирма Waters
Стаканы стеклянные объемом 100 — 500 куб. см ГОСТ 25366-80Е
Установка для перегонки растворителей
Фильтры бумажные «красная лента» ТУ-6-09-1678-86
Фильтры для очистки растворителей диаметром 20 мм, с отверстиями пор 20 мкм, фирма Waters
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению определений
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов Диапак C8 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на патронах, построение калибровочной кривой.
7.1. Подготовка органических растворителей
7.1.1 Очистка ацетонитрила. Ацетонитрил перегоняют.
7.1.2. Очистка гексана. Гексан встряхивают с концентрированной серной кислотой, промывают бледно-розовым раствором перманганата калия до тех пор, пока раствор не перестанет обесцвечиваться, затем промывают водой, сушат над безводным хлористым кальцием и перегоняют (А. Гордон, Р. Форд. Спутник химика, Москва, 1976 г., с. 441).
7.1.3. Очистка бидистиллированной воды. Бидистиллят кипятят в течение 6 ч с марганцовокислым калием, добавленным из расчета 1 г/л, и затем перегоняют.
7.1.4. Очистка этилового эфира уксусной кислоты. Этиловый эфир уксусной кислоты промывают равным объемом 5% раствора соды, сушат над безводным хлористым кальцием (Беккер Г. и др. Органикум, Москва, 1979 г., с. 372), кипятят в течение 1 ч с прокаленным сульфатом магния и затем перегоняют.
7.2. Приготовление растворов для проведения анализа
7.2.1. Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ. Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанные ацетонитрил и очищенную воду.
В плоскодонную колбу объемом 1 куб. дм помещают 600 куб. см ацетонитрила и 400 куб. см очищенной воды. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 куб. см/мин. в течение 5 мин., после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин.
7.2.2 Приготовление градуировочных растворов.
7.2.2.1. Стандартный раствор с концентрацией мандипропамида 1,0 мг/куб. см. Взвешивают 50 мг мандипропамида в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.
7.2.2.2. Стандартный раствор с концентрацией мандипропамида 10,0 мкг/куб. см. Из стандартного раствора мандипропамида с концентрацией 1,0 мг/куб. см отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании.
7.2.2.3. Стандартные растворы мандипропамида с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см для построения калибровочной кривой и внесения в образцы. Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см, и используют эти растворы для хроматографического исследования и для внесения в образцы.
7.3. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации мандипропамида в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см.
В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений.
7.4. Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки экстракта
7.4.1. Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки экстракта. В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 5 г окиси алюминия с зернением 40/250 меш и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента высотой примерно 5 см. Непосредственно перед использованием колонку промывают 10 куб. см ацетонитрила.
7.4.2. Проверка хроматографического поведения мандипропамида на колонке с окисью алюминия. В концентратор объемом 50 куб. см вносят 1 куб. см стандартного раствора мандипропамида в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/куб. см и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 10 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в концентратор и упаривают досуха при температуре не выше 30 °C. Исходную колбу обмывают еще двумя порциями ацетонитрила объемом 10 куб. см каждая и последовательно вносят их на колонку. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Определяют фракции, содержащие мандипропамид, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюата.
Изучение поведения мандипропамида на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии окиси алюминия.
7.5. Подготовка концентрирующего патрона Диапак C для очистки экстрактов
7.5.1. Подготовка концентрирующего патрона Диапак C для очистки экстракта. Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин.
Патрон Диапак C устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1, затем 10 куб. см гексана. Элюат отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
7.5.2. Проверка хроматографического поведения мандипропамида на концентрирующем патроне Диапак C. Из стандартного раствора мандипропамида в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в круглодонную колбу объемом 100 куб. см и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см этилацетата, прибавляют 8 куб. см гексана, перемешивают и смыв вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см, упаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют. Исходный концентратор обмывают 5 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1 и полученный раствор вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 куб. см, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют. Исходный концентратор обмывают тремя порциями смеси гексан-этилацетат в соотношении 2:1 объемом по 5 куб. см и последовательно вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции собирают в отдельный концентратор объемом 100 куб. см, упаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.
Определяют фракции, содержащие мандипропамид, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюата.
7.6. Подготовка концентрирующего патрона Диапак C16 для очистки экстрактов
7.6.1. Подготовка концентрирующего патрона Диапак C16 для очистки экстракта. Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин.
Патрон Диапак C16 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1, затем 10 куб. см воды. Элюаты отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
7.6.2. Проверка хроматографического поведения мандипропамида на концентрирующем патроне Диапак C16. Из стандартного раствора мандипропамида в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 100 куб. см и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 куб. см воды, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют. Исходный концентратор обмывают последовательно 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4, затем 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и полученные растворы последовательно вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие мандипропамид, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюата.
7.7. Подготовка колонки с флоризилом для очистки экстрактов
7.7.1. Подготовка колонки с флоризилом. В стеклянную или пластмассовую колонку длиной 15 см, диаметром 1,5 см помещают на дно стекловату и заполняют колонку флоризилом на высоту 10 см. На слой флоризила насыпают слой безводного сернокислого натрия толщиной 1,0 см. В день очистки экстракта колонку промывают последовательно 10 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1 и 20 куб. см гексана. После промывки колонка готова к работе.
7.7.2. Проверка хроматографического поведения мандипропамида на колонке с флоризилом. При отработке методики или поступлении новой партии сорбента (флоризил) проводят изучение поведения мандипропамида на колонке.
Для этого в концентратор (или пробирку) вносят 1 куб. см стандартного раствора мандипропамида концентрацией 1 мкг/мл, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 30 °C или в токе теплого воздуха.
Затем растворяют мандипропамид в 2 куб. см этилацетата, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 куб. см гексана, перемешивают и вносят на подготовленную, как указано выше, колонку. Промывают колонку 15 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 2:1, смыв отбрасывают. Затем пропускают через колонку 20 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 2:3, отбирая последовательно по 5 куб. см элюента. Каждую фракцию собирают отдельно в концентраторы объемом 100 куб. см, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие мандипропамид, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюата.
7.8 Подготовка и кондиционирование колонки
для жидкостной хроматографии
Хроматографическую колонку Symmetry Shield RP18 с предколонкой Symmetry Shield C18 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 25 °C и скорости потока подвижной фазы 1 куб. см/мин. 3 — 4 ч.
8. Отбор проб и хранение
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 1743.01-83 «Почвы. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 26950-89 «Почвы. Отбор проб», ГОСТ 7176-85 «Картофель свежий продовольственный, заготовляемый и поставляемый. ТУ», ГОСТ 26832-86 «Картофель свежий для переработки на продукты питания. ТУ», ГОСТ 25896-83 «Виноград свежий столовый. ТУ», ГОСТ Р 51810-2001 «Томаты свежие, реализуемые в розничной торговой сети», ГОСТ Р 1726-85 «Огурцы свежие. ТУ» и ГОСТ Р 51783-2001 «Лук репчатый свежий, реализуемый в розничной торговой сети. ТУ».
Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре +4 °C не более 10 суток. Пробы винограда, клубней картофеля, томатов, огурцов и лука хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 — 4 °C не более 3 суток. Для длительного хранения пробы клубней картофеля, винограда, томатов, огурцов и лука замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °C до 2 лет.
Пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.
9. Проведение определений
9.1. Вода
9.1.1. Экстракция. Пробу воды объемом 100 куб. см помещают в делительную воронку объемом 250 куб. см и экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 30 куб. см, встряхивая каждый раз делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см, собирая его через слой безводного сульфата натрия. Экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
9.1.2. Очистка на концентрирующих патронах Диапак C16. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 куб. см воды, перемешивают и вносят на патрон, подготовленный по п. 7.6.1. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4, элюат отбрасывают, мандипропамид элюируют 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.
9.2. Почва
9.2.1. Экстракция. Пробу почвы весом 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 250 куб. см, прибавляют 10 куб. см воды, тщательно перемешивают содержимое и добавляют 70 куб. см смеси ацетонитрил-вода в соотношении 9:1. Банку помещают в ультразвуковую ванну и выдерживают в течение 10 мин. По истечении срока банку дополнительно встряхивают 10 мин. на механическом встряхивателе. Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин. на скорости 4000 оборотов в минуту. Супернатант фильтруют через фильтр «красная лента» в коническую колбу объемом 250 куб. см с 5 г хлорида натрия.
Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 70 куб. см смеси ацетонитрил-вода в соотношении 9:1 и помещая каждый раз на 10 мин. в ультразвуковую ванну и дополнительно на 10 мин. на механический встряхиватель. Супернатант каждый раз фильтруют через фильтр «красная лента» в ту же коническую колбу объемом 250 куб. см с 5 г хлорида натрия. Экстракты объединяют в конической колбе объемом 250 куб. см с 5 г хлорида натрия, перемешивают и выдерживают 10 мин. при комнатной температуре. Объединенный экстракт из колбы переносят в делительную воронку (нерастворившуюся соль оставляют в колбе) объемом 250 куб. см, оставляют до полного разделения слоев и нижний водный слой отбрасывают. Верхний ацетонитрильный слой собирают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 куб. см и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °C.
9.2.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.2.1, прибавляют 5 куб. см этилацетата, обмывают стенки колбы, затем прибавляют 100 мл дистиллированной воды, 5 мл насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Мандипропамид экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 30 куб. см, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Объединенный экстракт выпаривают досуха при температуре не выше 30 °C.
9.2.3. Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия и на концентрирующих патронах Диапак C и Диапак C16. Сухой остаток, полученный по п. 9.2.2, растворяют в 10 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора и наносят на подготовленную по п. 7.4.1 колонку с окисью алюминия. Элюат собирают в концентратор. Исходную колбу обмывают 10 куб. см ацетонитрила и вносят на колонку. Элюаты объединяют и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Сухой остаток растворяют в 2 куб. см этилацетата, прибавляют 8 куб. см гексана, перемешивают и смыв вносят на патрон Диапак C, подготовленный по п. 7.5.1. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 5 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1 и полученный раствор вносят на патрон, элюат отбрасывают. Мандипропамид элюируют 15 мл смеси гексан-этилацетат в соотношении 2:1 в чистый концентратор. Раствор выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 куб. см воды, перемешивают и вносят на патрон Диапак C16, подготовленный по п. 7.6.1. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают последовательно 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4, элюат отбрасывают. Мандипропамид элюируют 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1. Элюат собирают в чистый концентратор объемом 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.3. Клубни картофеля и ягоды винограда, плоды томата и огурца
9.3.1. Экстракция. Образец измельченных клубней картофеля (или ягод винограда) массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 куб. см, прибавляют 10 куб. см дистиллированной воды, 50 куб. см ацетонитрила и помещают на 5 мин. в ультразвуковую ванну, а затем на 5 мин. на механический встряхиватель. Экстракт фильтруют в коническую колбу объемом 250 куб. см с 5 г хлорида натрия через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 куб. см ацетонитрила и помещая на 5 мин. в ультразвуковую ванну, а затем на 5 мин. на механический встряхиватель. Экстракты объединяют в конической колбе объемом 250 куб. см с 5 г хлорида натрия, перемешивают и выдерживают 10 мин. при комнатной температуре.
Затем объединенный экстракт из колбы переносят в делительную воронку (нерастворившуюся соль оставляют в колбе) объемом 250 куб. см, оставляют до полного разделения слоев и нижний водный слой отбрасывают. Верхний ацетонитрильный слой собирают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 куб. см и упаривают досуха при температуре не выше 30 °C.
Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и п. 9.2.3. Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия и на концентрирующих патронах Диапак C и Диапак C16.
После очистки элюат выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
9.4. Лук-репка
9.4.1. Экстракция. Образец измельченного лука-репки массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 куб. см, прибавляют 50 куб. см ацетонитрила и помещают на 5 мин. в ультразвуковую ванну. Экстракт фильтруют в коническую колбу объемом 250 куб. см с 5 г хлорида натрия через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 куб. см ацетонитрила и помещая на 5 мин. в ультразвуковую ванну. Экстракты объединяют в конической колбе объемом 250 куб. см с 5 г хлорида натрия, перемешивают и выдерживают 10 минут при комнатной температуре. Затем объединенный экстракт из колбы переносят в делительную воронку (нерастворившуюся соль оставляют в колбе) объемом 250 куб. см, оставляют до полного разделения слоев и нижний водный слой отбрасывают. Верхний ацетонитрильный слой собирают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 куб. см и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °C.
9.4.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.2.1, прибавляют 5 куб. см ацетонитрила, обмывают стенки колбы, затем прибавляют 100 мл дистиллированной воды, 5 мл насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Мандипропамид экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 30 куб. см, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Объединенный экстракт упаривают досуха при температуре не выше 30 °C.
9.4.3. Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия. Сухой остаток, полученный по п. 9.6.2, растворяют в 10 куб. см ацетонитрила и очищают на колонке с окисью алюминия п. 9.2.3. Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия.
После очистки элюат упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.
9.4.4. Очистка экстракта на колонке с флоризилом. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см этилацетата, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 куб. см гексана, перемешивают и вносят на колонку с флоризилом, подготовленную по п. 7.7.1. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 15 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 2:1, элюат отбрасывают. Мандипропамид элюируют 15 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 2:3. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.
9.5. Условия хроматографирования
1. Хроматограф «Waters» с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу или другой с аналогичными характеристиками.
Колонка стальная Symmetry Shield RP18, 4,6 мм x 25 см, зернением 5 мкм.
Предколонка стальная Symmetry C8, 3,9 мм x 2 см, зернением 5 мкм.
Подвижная фаза: ацетонитрил-вода в соотношении 60:40.
Время удерживания мандипропамида 10,82 +/- 0,16 мин.
Чувствительность 0,005 ед. оптической плотности на шкалу.
Объем вводимой пробы 20 куб. мм.
Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 — 20 нг.
2. Хроматограф жидкостной Waters 515 HPLC Pump с диодно-матричным детектором фирмы Agilent Technologies G1315B или другой с аналогичными характеристиками.
Колонка стальная Symmetry Shield RP18, 4,6 мм x 250 мм, зернением 5 мкм.
Предколонка стальная Symmetry Shield C18, 3,9 мм x 20 мм, зернением 5 мкм.
Подвижная фаза: ацетонитрил-вода в соотношении 60:40.
Время удерживания мандипропамида 7,313 мин. +/- 3%.
Чувствительность не менее 10 mAU (миллиединиц абсорбции) на шкалу.
Объем вводимой пробы 20 куб. мм.
Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 — 20 нг.
10. Обработка результатов
Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа Millenium 3.05.01 или Agilent Technologies ChemStation for LC 3D.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание мандипропамида рассчитывают по формуле:
S x A x V
ПР
X = ------------- x P, 100 x S x m СТ
где: X — содержание мандипропамида в пробе, мг/кг или мг/куб. дм; S — высота (площадь) пика стандарта, мм; СТ S — высота (площадь) пика образца, мм; ПР A — концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см; V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см; m — масса анализируемого образца, г (куб. см); P — содержание мандипропамида в аналитическом стандарте, %.
11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(X + X )
1 2
X , X - результаты параллельных определений, мг/кг;
1 2
r — значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
_
где: _ X — среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг; ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг; _ дельта x X
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,02 мг/кг» <*>.
<*> 0,02 мг/кг — предел обнаружения.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки C должна удовлетворять условию: д
C = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д п,X п,X' где +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности п,X п,X' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
дельта x X
где дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.
Результат контроля процедуры K рассчитывают по формуле: к
_ _ K = X' - X - C , к д _ _ где X', X, C - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
______________________
/ 2 2 K = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ . п,X' п,X Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K ) с нормативом
к
контроля (K).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
|K | <= K, (2) к процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(X + X )
1 2
X , X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
табл. 1), %.
14. Разработчики
Российский государственный аграрный университет — МСХА имени К.А. Тимирязева.
Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов».
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ МАНДИПРОПАМИДА ИЗ ПЛОДОВ ТОМАТОВ,
ОГУРЦОВ И ЛУКА-РЕПКИ (5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ
КОНЦЕНТРАЦИИ, P = 0,95)
| Среда | Предел обнаружения, мг/кг (куб. дм) | Среднее значение определения, мг/кг (куб. дм) | Полнота определения, % | Стандартное отклонение SD, % | Доверительный интервал среднего результата, +/- SE, % |
| Плоды томатов | 0,02 | 0,0171 | 85,3 | 1,1 | 0,51 |
| 0,04 | 0,0346 | 86,5 | 1,6 | 0,71 | |
| 0,10 | 0,0878 | 87,8 | 1,0 | 0,43 | |
| 0,20 | 0,1768 | 88,4 | 0,7 | 0,33 | |
| Плоды огурцов | 0,02 | 0,0168 | 84,2 | 1,1 | 0,48 |
| 0,04 | 0,0334 | 83,5 | 1,7 | 0,73 | |
| 0,10 | 0,0828 | 82,8 | 1,0 | 0,45 | |
| 0,20 | 0,1664 | 83,2 | 1,3 | 0,56 | |
| Лук-репка | 0,02 | 0,0170 | 85,2 | 0,9 | 0,4 |
| 0,04 | 0,0344 | 86,0 | 1,6 | 0,71 | |
| 0,10 | 0,0870 | 87,0 | 1,2 | 0,51 | |
| 0,20 | 0,1740 | 87,0 | 1,2 | 0,55 | |
| Вода | 0,005 | 0,0047 | 94 | 1,8 | 0,79 |
| 0,010 | 0,0096 | 96 | 0,8 | 0,83 | |
| 0,020 | 0,0192 | 96 | 2,1 | 0,93 | |
| 0,500 | 0,4800 | 96 | 2,4 | 1,1 | |
| Почва | 0,01 | 0,077 | 77 | 3,0 | 1,3 |
| 0,02 | 0,0156 | 78 | 2,7 | 1,2 | |
| 0,05 | 0,0417 | 83,4 | 1,5 | 0,56 | |
| 0,10 | 0,0826 | 82,6 | 3,2 | 1,4 | |
| Клубни картофеля | 0,02 | 0,0172 | 86 | 1,6 | 0,73 |
| 0,04 | 0,0339 | 84,8 | 3,6 | 1,63 | |
| 0,10 | 0,0849 | 84,9 | 1,7 | 0,77 | |
| 0,20 | 0,1909 | 95,4 | 1,9 | 0,83 | |
| Ягоды винограда | 0,02 | 0,0166 | 83 | 3,4 | 1,90 |
| 0,04 | 0,0334 | 83,5 | 2,3 | 1,04 | |
| 0,10 | 0,0846 | 84,6 | 2,4 | 1,08 | |
| 0,20 | 0,1680 | 84 | 1,6 | 0,73 | |
| Виноградный сок | 0,02 | 0,0170 | 85 | 2,3 | 1,06 |
| 0,04 | 0,0342 | 85,5 | 1,6 | 0,73 | |
| 0,10 | 0,0855 | 85,5 | 1,03 | 0,66 | |
| 0,20 | 0,1780 | 89 | 2,2 | 1,0 |