МУК 4.1.2463-09. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентраций пиноксадена в воздухе рабочей зоны и смывах с кожных покровов операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 02.02.2009)
Примечание
Документ введен в действие с 29 апреля 2009 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
2 февраля 2009 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ИЗМЕРЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ ПИНОКСАДЕНА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ И СМЫВАХ С КОЖНЫХ ПОКРОВОВ ОПЕРАТОРОВ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.2463-09
29 апреля 2009 года
1. Разработаны Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 декабря 2008 г. № 3).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 февраля 2009 г.
4. Введены в действие с 2 февраля 2009 г.
Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей зоны и смывах с кожных покровов операторов концентрации пиноксадена в диапазонах соответственно 0,1 — 2,0 мг/куб. м; 0,1 — 2,0 мкг/смыв.
2,2-Диметилпропионовая кислота, 8-(2,6-диэтил-4-метилфенил)-9-оксо-1,2,4,5тетрагидро-9Н-пиразоло[1,2-d][1,4,5]оксадиазепин-7-ил эфир (IUPAC).
Структурная формула (не приводится).
Бесцветное кристаллическое вещество со сладковатым запахом. Температура -7 плавления 120,5 — 121,6 °С. Давление паров — 2,0 х 10 Па (при 20 °С), -7
4,6 х 10 Па (при 25 °С). Растворимость в органических растворителях при 25 °С (в г/куб. дм): ацетон - 250; дихлорметан - > 500; этилацетат - 130;
метанол — 260; толуол — 130; н-октанол — 140; н-гексан — 1,0. Растворимость в воде 200 мг/куб. дм (25 °С). Коэффициент распределения н-октанол — вода — log K = 3,2. ow
Гидролитическая стабильность (DT ) при 25 °С — 17,2 дня (рН 4); 17,5 50 дней (рН 5); 9,9 дней (рН 7); 0,2 дня (рН 9).
Агрегатное состояние в воздушной среде — аэрозоль.
Краткая токсикологическая характеристика.
Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс — более 5000 мг/кг; 50 острая дермальная токсичность (LD ) для кроликов — более 2000 мг/кг; 50 острая ингаляционная токсичность (LC ) для крыс (4 ч) — 4,63 мг/куб. дм 50 (самцы), 6,24 мг/куб. дм (самки).
Пиноксаден рекомендуется в качестве высокоэффективного селективного послевсходового гербицида для подавления роста широкого спектра лаковых сорняков на посевах ячменя, пшеницы, ржи и тритикале.
Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) пиноксадена в воздухе рабочей зоны — 1,0 мг/куб. м.
1. Погрешность измерений
Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей +/- 25%, при доверительной вероятности 0,95.
2. Метод измерений
Измерения концентраций пиноксадена выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.
Концентрирование пиноксадена из воздуха осуществляют на бумажный фильтр «синяя лента», экстракцию с фильтров проводят этиловым спиртом. Смыв с кожных покровов также проводят этиловым спиртом.
Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы — 1 нг. Средняя полнота извлечения с фильтров — 95,82%, с поверхности кожи — 92,28%.
3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
3.1. Средства измерений
Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым Номер в Государственном реестре детектором с переменной длиной волны средств измерений (фирмы "Perkin Elmer", США) 15311-02 Барометр-анероид М-67 ТУ 2504-1797-75
Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104
Колбы мерные 2-100-2 и 2-1000-2 ГОСТ 1770
Пипетки градуированные 2 класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 куб. см ГОСТ 29227
Пробирки градуированные вместимостью 5 или 10 куб. см ГОСТ 1770
Пробоотборное устройство ПУ-442ТЦ исп. 1 Номер в Государственном реестре (ЗАО "ОПТЭК", г. Санкт-Петербург) средств измерений 14531-03
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления 1 °С, пределы измерения 0 — 55 °С ТУ 215-73Е
Цилиндры мерные 2 класса точности вместимостью 10, 250, 500 и 1000 куб. см ГОСТ 1770
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Пиноксаден, аналитический стандарт с содержанием основного вещества 99,7% (фирмы «Сингента»)
Вода бидистиллированная, деионизованная или перегнанная над KMnO ГОСТ 6709 4
Кислота муравьиная, 85%, Panreac
Метиловый спирт (метанол), хч ГОСТ 6995
Этиловый спирт (этанол) ректификованный ГОСТ Р 51652 или ГОСТ 18300
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.
3.3. Вспомогательные устройства, материалы
Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с ТУ 64-1-2851-78
Бумажные фильтры «синяя лента» обеззоленные ТУ 6-09-2678-77
Воронки конусные диаметром 30 — 37 мм ГОСТ 25336
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 100 куб. см ГОСТ 9737
Мембранные фильтры капроновые диаметром 47 мм
Пробирки центрифужные ГОСТ 25336
Ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы «Buchi», Швейцария
Стаканы химические низкие с носиком вместимостью 150 куб. см ГОСТ 25336
Стеклянные емкости вместимостью 100 куб. см с герметичной металлической крышкой
Установка для перегонки растворителей
Набор для фильтрации растворителей через мембрану
Хроматографическая колонка стальная длиной 250 мм, внутренним диаметром 2,0 мм, содержащая Spherisorb(R) S5 ODS 2, зернением 5 мкм
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50 — 100 куб. мм
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению измерений
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, приготовление растворов для градуировки и внесения, установление градуировочной характеристики, подготовка фильтров и салфеток для отбора проб, отбор проб.
7.1. Подготовка смеси растворителей для приготовления градуировочных растворов и проб
В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 200 куб. см метанола и доводят до метки бидистиллированной или деионизованной водой, перемешивают, фильтруют и дегазируют.
7.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ
В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 250 куб. см бидистиллированной или деионизованной воды, 1 куб. см муравьиной кислоты, 750 куб. см метанола, перемешивают, фильтруют и дегазируют.
7.3. Кондиционирование хроматографической колонки
Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2) при скорости подачи растворителя 0,3 куб. см/мин. до установления стабильной базовой линии.
7.4. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения
7.4.1. Исходный раствор пиноксадена для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,0100 г пиноксадена, добавляют 50 — 70 куб. см метанола, перемешивают, доводят метанолом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3 мес.
Растворы № 1 — 6 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.
7.4.2. Раствор № 1 пиноксадена для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора пиноксадена с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.4.1), разбавляют метанолом до метки, перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом «внесено-найдено».
7.4.3. Рабочие растворы № 2 — 6 пиноксадена для градуировки (концентрация 0,05 — 1,0 мкг/куб. см). В 5 мерных колб вместимостью 100 куб. см помещают по 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 куб. см градуировочного раствора № 1 с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.4.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2 — 6 с концентрацией пиноксадена 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/куб. см соответственно.
Растворы хранятся в холодильнике в течение 7 дней.
7.5. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (относительные единицы) от концентрации пиноксадена в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки № 2 — 6.
В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.5.1. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков действующего вещества.
Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 2 растворов для градуировки различной концентрации. Если значения площадей отличаются более чем на 12% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.
7.5.1. Условия хроматографирования. Измерения выполняют при следующих режимных параметрах.
Жидкостный хроматограф «Perkin Elmer» (США) с ультрафиолетовым детектором.
Хроматографическая колонка стальная длиной 250 мм, внутренним диаметром 2,0 мм, содержащая Spherisorb(R) S5 ODS 2, зернением 5 мкм.
Температура колонки: комнатная.
Подвижная фаза: метанол — вода — муравьиная кислота (75:25:0,1 по объему).
Скорость потока элюента: 0,3 куб. см/мин.
Объем вводимой пробы: 20 куб. мм.
Ориентировочное время выхода пиноксадена: 7,7 — 8,0 мин.
Линейный диапазон детектирования: 1 — 20 нг.
7.6. Подготовка фильтров для отбора проб воздуха
Диаметр бумажного фильтра «синяя лента» должен соответствовать внутреннему диаметру фильтродержателя.
Фильтры последовательно по 3 раза промывают на воронке Бюхнера этанолом порциями 25 — 30 куб. см, сушат с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, затем на воздухе при комнатной температуре. До использования фильтры хранят в герметично закрытой стеклянной таре.
7.7. Подготовка салфеток для проведения смыва
Вырезают салфетки (лоскуты) из белой бязи размером 10 х 10 см, последовательно обрабатывают их 5%-ным раствором углекислого натрия (при кипячении), водой до нейтральной реакции промывных вод, двухкратно промывают этиловым спиртом, сушат на воздухе при комнатной температуре. До использования салфетки хранят в герметично закрытой стеклянной таре.
8. Отбор и хранение проб воздуха
Отбор проб проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны». Воздух с объемным расходом 1 — 4 куб. дм/мин. аспирируют через бумажный фильтр «синяя лента», помещенный в фильтродержатель.
Для измерения концентрации пиноксадена на уровне предела обнаружения (0,1 мг/куб. м) необходимо отобрать 2,5 куб. дм воздуха, 0,5 ОБУВ для воздуха рабочей зоны — 0,5 куб. дм воздуха. Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в морозильной камере при температуре -18 °С — 30 дней.
9. Условия проведения смыва
Смывы проводят в конце работы или после выполнения отдельных операций с открытых и закрытых спецодеждой или другими СИЗ участков тела (лоб, лицо, шея, грудь, предплечье, голень, кисти рук, включая межпальцевые промежутки).
До работы выбирают участок кожи, обрабатывают его с целью удаления загрязнений, фиксируют площадь (не менее 200 кв. см). При необходимости отбирают фоновые смывы.
Смыв проводят способом обмыва фиксированного участка кожи этиловым спиртом, помещая 20 куб. см в стеклянную емкость с металлической крышкой. Тканевой салфеткой, смоченной растворителем, с помощью пинцета (индивидуально) обмывают кожный покров сверху вниз. Операцию повторяют дважды.
Срок хранения отобранных проб смывов, помещенных в герметично закрытые емкости, в морозильной камере при температуре -18 °С — 30 дней.
10. Выполнение измерений
10.1 Воздушная среда
Экспонированный фильтр переносят в химический стакан вместимостью 150 куб. см, заливают 20 куб. см этилового спирта, помещают на встряхиватель на 10 мин. Растворитель сливают, фильтр обрабатывают новыми порциями этилового спирта объемом 10 куб. см еще дважды, выдерживая на встряхивателе по 10 мин.
Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 30 °С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. К остатку добавляют 1 куб. см метанола, выдерживают 1 мин. на ультразвуковой бане, добавляют 4 куб. см смеси растворителей (подготовленной по п. 7.1), снова выдерживают на ультразвуковой бане и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.5.1.
10.2 Смывы с кожных покровов
Пробу смыва сливают (через воронку) в колбу для упаривания, с помощью пинцета извлекают салфетку, помещают в конусную химическую воронку, установленную в муфту колбы для упаривания, тщательно отжимают и промывают этиловым спиртом дважды порциями по 10 куб. см, предварительно ополаскивая растворителем емкость, в которой находилась проба.
Объединенный раствор упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 30 °С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток последовательно растворяют в 1 куб. см метанола и 1 куб. см смеси растворителей (подготовленной по п. 7.1), выдерживая по 1 мин. на ультразвуковой бане, и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.5.1.
Пробу вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика действующего вещества, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию пиноксадена в хроматографируемом растворе.
Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой (не более чем в 50 раз).
Перед анализом опытных образцов проводят хроматографирование холостых (контрольных) проб — экстрактов неэкспонированного фильтра и салфетки.
11. Обработка результатов анализа
11.1. Воздушная среда
Концентрацию пиноксадена в пробе воздуха Х, мг/куб. м, рассчитывают по формуле:
W
где:
С - концентрация пиноксадена в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади
хроматографического пика, мкг/куб. см; W — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см; V — объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к t стандартным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 20 °С), куб. дм.
u х t
V = 0,386 х Р х ---------, t (273 + Т)
где:
Т - температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), °С;
Р - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;
u - расход воздуха при отборе пробы, куб. дм/мин.;
t - длительность отбора пробы, мин.
_
За результат анализа (Х) принимается среднее арифметическое результатов
(Х + Х )
_ 1 2
двух параллельных определений Х и Х (Х = ---------), расхождение между
1 2 2
которыми не превышает значений норматива оперативного контроля сходимости
(d):
|Х - Х | <= d, 1 2
_
Х
d = d х ---, мг/куб. м, отн 100
где:
d - норматив оперативного контроля сходимости, мг/куб. м;
d - норматив оперативного контроля сходимости, % (равен 15%).
отн
11.2. Смывы с кожных покровов
Концентрацию пиноксадена в пробе смыва Х, мкг/смыв, рассчитывают по формуле:
С — концентрация пиноксадена в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/куб. см;
W — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см.
Примечание: Идентификация и расчет концентрации пиноксадена в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.
12. Оформление результатов измерений
Результат количественного анализа представляют в виде: _
Результат анализа Х в мг/куб. м или мкг/смыв (с указанием площади смыва в кв. см), характеристика погрешности дельта, % (+/- 25%), Р = 0,95 или
_
Х +/- ДЕЛЬТА, мг/куб. м (мкг/смыв, площадь смыва, кв. см), Р = 0,95,
где ДЕЛЬТА - абсолютная погрешность.
_
дельта х Х
ДЕЛЬТА = ----------, мг/куб. м (мкг/смыв). 100
Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.
Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание пиноксадена в пробе воздуха рабочей зоны — менее 0,1 мг/куб. м; смыва — менее 0,1 мкг/смыв» <*>.
<*> 0,1 мг/куб. м; 0,1 мкг/смыв — пределы обнаружения при отборе 2,5 куб. дм воздуха рабочей зоны; в пробе смыва (фиксированная площадь смыва, 200 кв. см) соответственно.
13. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
14. Разработчики
ФГУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана Роспотребнадзора».