МУК 4.1.2403-08. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств этабоксама в воде, почве, ботве и клубнях картофеля, ягодах винограда и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 17.07.2008)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 1 января 2012 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
17 июля 2008 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ЭТАБОКСАМА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, БОТВЕ И КЛУБНЯХ КАРТОФЕЛЯ, ЯГОДАХ ВИНОГРАДА И ВИНОГРАДНОМ СОКЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.2403-08
1 сентября 2008 года
1. Разработаны сотрудниками Всероссийского НИИ защиты растений.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия населения (протокол № 2 от 03.07.2008).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия населения, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 17 июля 2008 г.
1. Вводная часть
Торговое наименование: LGC-30473.
Фирма производитель: Саммит Агро Европа, Лимитед.
Действующее вещество: Этабоксам.
Структурная формула (не приводится).
(RS)-(альфа-циано-2-тиэнил)-4-этил-2-(этиламино)-1,3-тиазол-5-карбоксамид (IUPAC).
N-(циано-2-тиенилметил)-4-этил-2-(этиламино)-5-тиазолкарбоксамид (CAS).
Брутто формула: C H N OS . 14 16 4 2 Химически чистый этабоксам представляет собой белый кристаллический
-2
порошок с температурой плавления 185 °С, давлением паров 8,1 х 10 мРа (25 °С).
Коэффициент распределения в системе н-октанол — вода K lg P = 2,89 ow (20 °С, рН 7).
Растворимость в воде 4,8 мг/куб. дм (20 °С), 5,2 мг/куб. дм (25 °С, рН 7).
Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм, 20 °С): н-гептан — 0,000392; ксилол — 0,136; 1,2-дихлорэтан — 2,90; метанол — 17,6; н-октанол — 0,374; ацетон — 39,7; этилацетат — 10,6. Стабилен в водных растворах при рН 4 — 9.
LD для крыс > 5000 мг/кг. Не ирритант для кожи и глаз (кролики). 50 Ингаляционная активность LC > 4,89 мг/куб. дм. Не показал мутагенной 50 активности в микробиологических тестах и тестах на животных.
Область применения: профилактический, лечебный, трансламинарный и системный фунгицид, применяется для контроля оомицетов, таких как пушистая плесень на винограде и картофеле с нормой расхода 125 — 250 г/га. Ингибитор роста и спороношения грибов.
Гигиенические нормативы для этабоксама в России не установлены.
2. Методика определения этабоксама в воде, почве, ботве и клубнях картофеля, ягодах винограда и виноградном соке методом ВЭЖХ
2.1. Основные положения
2.1.1 Область применения и принцип метода
Настоящий документ устанавливает методику определения остаточных количеств этабоксама в воде в диапазоне концентраций 0,002 — 0,02 мг/кг, почве — 0,01 — 0,1 мг/кг, ботве картофеля — 0,02 — 0,2 мг/кг, клубнях картофеля — 0,01 — 0,1 мг/кг, ягодах винограда — 0,004 — 0,04 мг/кг, виноградном соке — 0,004 — 0,04 мг/кг.
Методика основана на определении этабоксама методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после его извлечения из образцов органическим растворителем с последующей очисткой перераспределением между двумя несмешивающимися растворителями и на колонке с силикагелем.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1, для соответствующих диапазонов концентраций.
| Объект анализа | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности) +/- дельта, % | Стандартное отклонение повторяемости сигма , % r | Предел повторяемости r, % | Предел воспроизводимости R, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Вода | 0,002 — 0,01 | 100 | 5,2 | 14,6 | 22,6 |
| Вода | 0,01 — 0,02 | 50 | 5,0 | 14,0 | 21,7 |
| Почва | 0,01 — 0,1 | 50 | 5,7 | 16,0 | 24,8 |
| Виноград (ягоды) | 0,004 — 0,005 | 100 | 5,6 | 15,7 | 24,3 |
| Виноград (ягоды) | 0,005 — 0,04 | 50 | 5,2 | 14,6 | 22,6 |
| Виноград (сок) | 0,004 — 0,005 | 100 | 5,5 | 15,4 | 23,9 |
| Виноград (сок) | 0,005 — 0,04 | 50 | 5,1 | 14,3 | 22,2 |
| Картофель (ботва) | 0,02 — 0,1 | 50 | 5,3 | 14,8 | 22,9 |
| Картофель (ботва) | 0,1 — 0,2 | 25 | 5,2 | 14,6 | 22,6 |
| Картофель (клубни) | 0,01 — 0,1 | 50 | 5,1 | 14,3 | 22,2 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.
| Анализируемый объект | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение S, % | Доверительный интервал среднего результата +/-, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Вода | 0,002 | 0,002 — 0,02 | 87,3 | 4,4 | 4,0 |
| Почва | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 85,4 | 4,8 | 4,4 |
| Виноград (ягоды) | 0,004 | 0,004 — 0,04 | 83,0 | 4,3 | 3,9 |
| Виноград (сок) | 0,004 | 0,004 — 0,04 | 85,6 | 4,7 | 4,3 |
| Картофель (ботва) | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 80,5 | 4,5 | 4,1 |
| Картофель (клубни) | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 83,0 | 4,3 | 3,9 |
2.1.3 Избирательность метода
Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографического анализа.
2.2. Реактивы и материалы
Ацетонитрил для ВЭЖХ, «В-230НМ».
Бумажные фильтры «красная лента», ТУ 6.091678-86.
Вода бидистиллированная, деионизированная, ГОСТ 6709-79.
Диэтиловый эфир, ч., ОСТ 84-2006-88.
Железо (II) сернокислое, х.ч., ГОСТ 4148-78.
Калий углекислый, х.ч., ГОСТ 4221-76.
Калия перманганат, ГОСТ 20490-75.
Кальция хлорид, х.ч., ГОСТ 4161-77.
Кислота ортофосфорная, имп. (Ferak, Германия) или х.ч., ГОСТ 6552-80; 2М и 0,025М водные растворы.
Кислота серная, х.ч., ГОСТ 4204-77.
Натрий сернокислый безводный, ч., ГОСТ 4166-76, свежепрокаленный.
Натрий хлористый, ч.д.а., ГОСТ 4233-77.
Натрия гидроксид, х.ч., ГОСТ 4328-77.
н-Гексан, х.ч., ТУ 2631-003-05807999-98, свежеперегнанный.
Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрил — 0,025М ортофосфорная кислота (25:75, по объему).
Силикагель для колоночной хроматографии 60 (0,040 — 0,063 mm) (Merck, Германия).
Фосфора пентоксид, ч., МРТУ 6-09-5759-69.
Элюент № 1 для колоночной хроматографии: смесь гексан — диэтиловый эфир (50:50, по объему).
Элюент № 2 для колоночной хроматографии: смесь гексан — диэтиловый эфир (25:75, по объему).
Этабоксам, аналитический стандарт с содержанием д.в. 98%.
2.3. Приборы и посуда
Жидкостный хроматограф «Альянс» фирмы «Waters» с УФ-детектором (Waters 2487) с дегазатором и автоматическим пробоотборником или аналогичный.
Колонка Symmetry C-18 (250 х 4,6) мм, 5 мкм (Waters, USA) или аналогичная.
Предколонка Waters Symmetry C-18.
Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 24104-2001, или аналогичные.
Гомогенизатор, МРТУ 42-1505-63.
Установка ультразвуковая «Серьга», ТУ 3.836.008.
Ротационный испаритель вакуумный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, или аналогичный.
рН-метр универсальный ЭВ-74, ГОСТ 22261-76.
Насос водоструйный, МРТУ 42861-64.
Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС, ГОСТ 10384-72.
Колбы круглодонные на шлифах КШ50 29-32 ТС, ГОСТ 10384-72.
Воронки лабораторные В-75-110, ГОСТ 25336-82.
Воронки делительные ВД-3-250, ГОСТ 8613-75.
Цилиндры мерные на 100, 250 и 1000 куб. см, ГОСТ 1774-74.
Колбы мерные на 25, 50, 100 и 1000 куб. см, ГОСТ 1770-74.
Пипетки на 1, 2, 5, 10 куб. см, ГОСТ 22292-74.
Колонки стеклянные (25 х 1) см.
2.4. Отбор и хранение проб
Отбор проб почвы производится в соответствии с ГОСТ 28168-89 «Почвы. Отбор проб»; воды - ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб»; картофеля - ГОСТ 7194-81 «Картофель свежий. Правила приемки и методы определения качества»; винограда - ГОСТ 25896-83 «Виноград свежий столовый. Технические условия». Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствии прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм. Пробы ботвы и клубней картофеля, ягод винограда хранят до анализа в морозильной камере при температуре не выше -18 °С в течение месяца. Перед анализом их гомогенизируют. Пробы воды и виноградного сока хранят в холодильнике при температуре 0 — 4 °С в течение недели.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1 Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 куб. см растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре +40 °С до объема 1,0 куб. *см* и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей
очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.
Гексан встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания свежей порции кислоты, затем промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего его сушат над
гидроксидом натрия и перегоняют. Диэтиловый эфир (1 куб. дм) предварительно
встряхивают с 20 куб. см свежеприготовленного раствора железного купороса
(30 г сульфата железа в 55 куб. см воды с добавлением 1,5 г
концентрированной серной кислоты). Затем диэтиловый эфир последовательно
промывают 0,5%-ным раствором перманганата калия, 5%-ным раствором
гидроксида натрия и водой, после чего сушат над хлористым кальцием и
перегоняют. Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 куб.
дм ацетона 10 г KMnO и 2 г K CO ).
4 2 3
2.5.2 Кондиционирование колонки
Перед началом анализа колонку (Symmetry C-18) кондиционируют в потоке подвижной фазы (1 куб. см/мин.) до стабилизации нулевой линии в течение 1 — 2 часов.
2.5.3 Приготовление растворов
Для приготовления 2М раствора ортофосфорной кислоты 200 г 98% (или 225 г 87%) кристаллической H PO помещают в мерную колбу объемом 1000 куб. см, 3 4 растворяют в 600 куб. см дистиллированной воды и доводят объем до метки
дистиллированной водой.
Для приготовления 0,025М раствора ортофосфорной кислоты 12,5 куб. см 2М
раствора H PO вносят в мерную колбу на 1000 куб. см и доводят до метки
3 4
деионизированным бидистиллятом.
Для получения 50%-го водного ацетона в колбе емкостью 1 куб. дм смешивают 500 куб. см ацетона с 500 куб. см дистиллированной воды.
Для получения 25%-го водного ацетона в колбе емкостью 1 куб. дм смешивают 250 куб. см ацетона с 750 куб. см дистиллированной воды.
Для приготовления насыщенного раствора хлорида натрия 380 г NaCl растворяют при нагревании в 1 л дистиллированной воды, полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр «красная лента».
Для приготовления подвижной фазы смешивают ацетонитрил с 0,025М раствора ортофосфорной кислоты в соотношении 25:75 по объему, используя мерные цилиндры.
Для приготовления элюента № 1 в колбе на 1000 куб. см смешивают 500 куб. см н-гексана и 500 куб. см диэтилового эфира.
Для приготовления элюента № 2 в колбе на 1000 куб. см смешивают 250 куб. см н-гексана и 750 куб. см диэтилового эфира.
Приготовление стандартного и градуировочных растворов:
Берут точную навеску этабоксама (50 мг), переносят в мерную колбу на 100 куб. см, растворяют навеску в ацетонитриле и доводят до метки (стандартный раствор с концентрацией 0,5 мг/куб. см). Градуировочные растворы с концентрациями 0,1, 0,2, 0,5, 1,0 и 2,0 мкг/куб. см готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы (смесь ацетонитрил — 0,025М ортофосфорная кислота (25:75, по объему).
Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 — 4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы — в течение суток.
При изучении полноты открывания этабоксама в воде, почве, ботве и клубнях картофеля, ягодах винограда и виноградном соке используют ацетонитрильные растворы вещества. Растворы внесения с концентрациями 0,1 и 1,0 мкг/куб. см готовят из стандартного раствора с концентрацией 0,5 мг/куб. см методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.
2.5.4 Построение градуировочного графика
Для построения градуировочного графика (площадь пика — концентрация этабоксама в растворе) в хроматограф вводят по 50 куб. мм градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации этабоксама в градуировочном растворе (мкг/куб. см).
2.5.5 Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта
В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 30 куб. см смеси гексан — диэтиловый эфир (50:50, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку последовательно промывают 30 куб. см элюента № 2 и 30 куб. см элюента № 1 со скоростью 1 — 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.
2.5.6 Проверка хроматографического поведения этабоксама на колонке с силикагелем
В круглодонную колбу емкостью 10 куб. см отбирают 0,1 куб. см стандартного раствора этабоксама с концентрацией 10 мкг/куб. см. Отдувают растворитель током теплого воздуха (температура не выше 40 °С), остаток растворяют в 5 куб. см элюента № 1 и наносят на колонку. Колбу обмывают еще 5 куб. см элюента № 1 и также вносят на колонку. Промывают колонку 30 куб. см элюента № 1, которые отбрасывают, затем 100 куб. см элюента № 2 со скоростью 1 — 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 куб. см каждая, выпаривают, остаток растворяют в 2 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.3) и анализируют на содержание этабоксама (п. 2.6.5).
Фракции, содержащие этабоксам, объединяют, выпаривают досуха, остаток растворяют в 2 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют (п. 2.6.5). Рассчитывают содержание этабоксама в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для этого объем элюента.
Примечание: параметры удерживания этабоксама и сопутствующих экстрактивных веществ могут меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.
2.6. Проведение определения
2.6.1 Извлечение этабоксама из проб воды и виноградного сока
Перед проведением анализа пробу виноградного сока объемом 50 куб. см доводят до объема 100 куб. см дистиллированной водой. Пробу воды или разбавленного сока объемом 100 куб. см помещают в коническую колбу емкостью 250 куб. см и экстрагируют этабоксам диэтиловым эфиром трижды порциями по 50 куб. см, встряхивая смесь каждый раз в течение 2 — 3 мин. и собирая верхний эфирный слой <*>. Объединенный экстракт промывают в делительной воронке 0,025М раствором NaOH дважды порциями по 25 куб. см, встряхивая смесь каждый раз в течение 2 — 3 мин. и собирая верхний эфирный слой. Экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия (2 г), осушитель промывают 10 — 15 куб. см диэтилового эфира. После этого экстракт выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. При необходимости проводят дополнительную очистку экстракта на колонке с силикагелем по пункту 2.6.4.
<*> В случае образования сравнительно стойких эмульсий для сокращения времени расслоения (на стадии переэкстракции из водного раствора в диэтиловый эфир) в делительную воронку можно добавить насыщенный раствор хлорида натрия (15 — 20 куб. см).
Сухой остаток растворяют в 2 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ и 50 куб. мм раствора вводят в жидкостный хроматограф.
Внимание! Отделение водного слоя следует производить только после полного расслоения жидкостей в делительной воронке.
2.6.2 Извлечение этабоксама из проб ягод винограда
Гомогенизированные пробы ягод винограда массой 50 г помещают в коническую колбу емкостью 250 куб. см и экстрагируют этабоксам 50 куб. см 75%-ного водного ацетона на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Суспензию фильтруют через бумажный фильтр «красная лента». Осадок с фильтра количественно переносят назад в колбу. Экстракцию проводят еще дважды. Объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С до полного удаления ацетона (объем 50 — 60 куб. см). Объем экстракта доводят до 100 куб. см добавлением дистиллированной воды. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр «красная лента». Раствор помещают в делительную воронку объемом 250 куб. см и экстрагируют этабоксам диэтиловым эфиром трижды порциями по 50 куб. см, встряхивая смесь каждый раз в течение 2 — 3 мин. и собирая верхний эфирный слой <*>. Объединенный экстракт промывают в делительной воронке 0,025М раствором NaOH дважды порциями по 25 куб. см, встряхивая смесь каждый раз в течение 2 — 3 мин. и собирая верхний эфирный слой. Экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия (2 г), осушитель промывают 10 — 15 куб. см диэтилового эфира. После этого экстракт выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пункту 2.6.4.
Внимание! Отделение водного слоя следует производить только после полного расслоения жидкостей в делительной воронке.
2.6.3 Извлечение этабоксама из проб почвы, ботвы и клубней картофеля
Гомогенизированные пробы клубней картофеля, воздушно-сухой почвы массой 20 г или ботвы картофеля массой 10 г помещают в коническую колбу емкостью 250 куб. см и экстрагируют этабоксам 50 куб. см 50%-ного водного ацетона на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Суспензию фильтруют через бумажный фильтр «красная лента». Осадок с фильтра количественно переносят назад в колбу. Экстракцию проводят еще дважды. Объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С до полного удаления ацетона (объем 70 — 75 куб. см). Объем экстракта доводят до 100 куб. см добавлением дистиллированной воды. Раствор помещают в делительную воронку объемом 250 куб. см и экстрагируют этабоксам диэтиловым эфиром трижды порциями по 50 куб. см, встряхивая смесь каждый раз в течение 2 — 3 мин. и собирая верхний эфирный слой <*>. Объединенный экстракт промывают в делительной воронке 0,025М раствором NaOH дважды порциями по 25 куб. см, встряхивая смесь каждый раз в течение 2 — 3 мин. и собирая верхний эфирный слой. Экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия (2 г), осушитель промывают 10 — 15 куб. см диэтилового эфира. После этого экстракт выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пункту 2.6.4.
Внимание! Отделение водного слоя следует производить только после полного расслоения жидкостей в делительной воронке.
2.6.4 Очистка на колонке с силикагелем
Сухой остаток в колбе, полученный по п. п. 2.6.1 - 3, количественно переносят двумя порциями по 5 куб. см смеси гексан — диэтиловый эфир (50:50, по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку (п. 2.5.5). Промывают колонку 30 куб. см элюента № 1, который отбрасывают. Этабоксам элюируют 75 куб. см элюента № 2, собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 250 куб. см. Раствор выпаривают досуха в вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ и 50 куб. мм раствора вводят в жидкостный хроматограф.
2.6.5 Условия хроматографирования
Жидкостный хроматограф «Альянс» фирмы «Waters» с УФ-детектором (Waters 2487), снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки, или другой с аналогичными характеристиками.
Колонка Symmetry C18 (250 х 4,6) мм, зернение 5 мкм (Waters, USA), или аналогичная.
Температура колонки 30 +/- 1 °С.
Предколонка Symmetry C18 для защиты аналитической колонки.
Подвижная фаза: ацетонитрил — 0,025М ортофосфорная кислота в объемном соотношении 25:75.
Скорость потока элюента: 1 куб. см/мин.
Объем вводимой пробы 50 куб. мм.
Время удерживания этабоксама 11,6 +/- 0,2 мин.
Линейный диапазон детектирования 0,1 — 2,00 мкг/куб. см.
2.6.6 Обработка результатов анализа
Количественное определение проводят методом абсолютной градуировки, содержание этабоксама в образцах воды, почвы, ботвы и клубнях картофеля, ягодах винограда и виноградном соке (Х, мг/кг) вычисляют по формуле:
S х С х V
2
где:
S - площадь пика этабоксама в стандартном растворе, мм;
1
S - площадь пика этабоксама в анализируемой пробе, мм;
2
V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа,
куб. см; Р — навеска анализируемого образца, г, для воды и виноградного сока — объем в куб. см; С — концентрация стандартного раствора этабоксама, мкг/куб. см.
Содержание остаточных количеств этабоксама в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2-х параллельных определений.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор этабоксама 2 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.
3. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 х |Х - Х | х 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(Х + Х )
1 2
где:
Х , Х - результаты параллельных определений, мг/кг;
1 2
r - значение предела повторяемости (r = 2,8 сигма ).
r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
4. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
_
(Х +/- ДЕЛЬТА) мг/кг при вероятности Р = 0,95,
где:
_
Х - среднее арифметическое результатов определений, признанных
приемлемыми, мг/кг;
ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе „менее нижней границы определения“ (например: менее 0,005 мг/кг <*>).»
<*> 0,005 мг/кг — предел обнаружения.
5. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6.2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
5.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
5.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
Величина добавки С должна удовлетворять условию: д
С = ДЕЛЬТА + ДЕЛЬТА , д л,Х л,Х' где +/- ДЕЛЬТА (+/- ДЕЛЬТА ) - характеристика погрешности л,Х л,Х' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг:
дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле: к
К = Х' - Х - С , к д где Х', Х, С - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 4) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2 К = \/ДЕЛЬТА + ДЕЛЬТА . л,Х' л,Х Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
к
контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.
5.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 х |Х - Х | х 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(Х + Х )
1 2
где:
Х , Х - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном
концентраций), %.
6. Требования техники безопасности
При проведении работы необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005-88).
При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.
Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.
7. Требования к квалификации оператора
Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 5.