МУК 4.1.2284-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств индоксакарба в воде, почве, яблоках, ягодах винограда, яблочном и виноградном соках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 31.10.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.2284-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств индоксакарба в воде, почве, яблоках, ягодах винограда, яблочном и виноградном соках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.2284-07. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2284-07
(утв. Роспотребнадзором 09.10.2007)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 № 01/14262-8-32). Документ введен в действие с 9 декабря 2007 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
9 октября 2007 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ИНДОКСАКАРБА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЯБЛОКАХ, ЯГОДАХ ВИНОГРАДА, ЯБЛОЧНОМ И ВИНОГРАДНОМ СОКАХ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.2284-07
9 декабря 2007 года
1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом — МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-гигиеническому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол № 2 от 21.06.2007).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 9 октября 2007 г.
4. Введены в действие с 9 декабря 2007 г.
Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации Индоксакарба в диапазоне 0,02 — 0,2 мг/кг в яблоках, ягодах винограда, яблочном и виноградном соке, 0,01 — 0,1 мг/кг в почве и 0,005 — 0,05 мг/куб. дм в воде.
Фирма производитель: Дюпон де Немур Интернешнл С.А.
Название действующего вещества по ИСО: Индоксакарб.
Название по ИЮПАК: (S)-N-[7-хлоро-2,3,4а,5-тетрагидро-4а-(метоксикарбонил)индено=[1,2-е][1,3,4]оксадиазин-2-илкарбонил]-4'-(трифторметокси)карбанилат.
Структурная формула (не приводится).
Эмпирическая формула: C H ClF N O . 22 17 3 3 7
Агрегатное состояние: порошок.
Давление насыщенного пара: 2,5 х 10 мПа (25 °С). Коэффициент распределения в системе октанол/вода при 25 °С: K log Р =
ow
4,65.
Температура плавления: 88,1 °С.
Растворимость в воде: 0,2 мг/куб. дм. Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм при 20 °С): ацетон — более 250, ацетонитрил — 139, метанол — 103, н-октанол — 14,5.
Гидролитически стоек в кислой и нейтральной среде с ДТ более 30 дней 50 (pH 5), 38 дней (pH 7), но быстро разрушается в щелочном растворе (ДТ — 1 50 день при pH 9).
Индоксакарб среднестоек в почве и малоподвижен.
Краткая токсикологическая характеристика: Индоксакарб относится к опасным веществам по острой пероральной (ЛД для крыс - 268 мг/кг) и по
50
ингаляционной (ЛК для крыс — 2000 мг/куб. м воздуха) и к мало опасным 50 веществам по накожной (ЛД для кроликов > 5000 мг/кг) токсичности. Не 50 вызывает покраснения кожи и глаз у кроликов.
В России гигиенические нормативы не установлены.
Область применения: Индоксакарб — инсектицид из класса оксадиазинов контактного и кишечного действия, блокирует натриевые каналы нервных клеток. Он эффективно подавляет развитие вредителей из отряда Lepidoptera.
Проходит регистрационные испытания в России под торговым названием Авант, КС, 150 г/л в качестве инсектицида для борьбы с вредителями яблоневых садов и виноградников с нормой расхода 0,4 — 0,5 л/га и 5-ю обработками за сезон.
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ДЛЯ ИНДОКСАКАРБА
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, Р = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
| Вода | 0,005 — 0,01 | 100 | 3,5 | 9,8 | 11,7 |
| Более 0,01 — 0,05 | 50 | 4,0 | 11,2 | 13,4 | |
| Почва | 0,01 — 0,1 вкл. | 50 | 5,0 | 14,0 | 20,0 |
| Яблоки | 0,02 — 0,1 вкл. | 50 | 5,0 | 14,0 | 20,0 |
| Более 0,1 — 0,2 | 25 | 3,5 | 9,8 | 11,7 | |
| Яблочный сок | 0,02 — 0,1 | 50 | 3,5 | 9,8 | 11,7 |
| 0,1 — 0,2 | 25 | 4,0 | 11,2 | 13,4 | |
| Ягоды винограда | 0,02 — 0,1 вкл. | 50 | 4,0 | 11,2 | 13,4 |
| Более 0,1 — 0,2 | 25 | 5,0 | 14,0 | 20,0 | |
| Виноградный сок | 0,02 — 0,1 вкл. | 50 | 3,5 | 9,8 | 11,7 |
| Более 0,1 — 0,2 | 25 | 4,0 | 11,2 | 13,4 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.
ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА ДЛЯ ИНДОКСАКАРБА
| Анализируемый объект | Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20 | ||||
| Предел обнаружения, мг/кг (мг/куб. дм) | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего результата, +/-, % | |
| Вода | 0,005 | 0,005 — 0,05 | 89,2 | 4,4 | 1,8 |
| Почва | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 85,8 | 3,0 | 1,2 |
| Яблоки | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 85,5 | 2,9 | 1,2 |
| Яблочный сок | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 90,8 | 2,3 | 1,0 |
| Ягоды винограда | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 89,2 | 2,1 | 0,9 |
| Виноградный сок | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 89,7 | 2,1 | 0,9 |
2. Метод измерений
Метод основан на определении Индоксакарба с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистке перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на концентрирующих патронах на основе силикагеля (Диапак Нитрил и Диапак С16).
Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
3.1. Средства измерений
Весы аналитические «OHAUS», СИГМА 11140.
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г «ACCULAB» V600.
Колбы мерные на 25, 50 и 100 куб. дм, ГОСТ 1770-74.
Микрошприц для жидкостного хроматографа на 50 — 100 куб. мм.
Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 куб. см, ГОСТ 20292-74.
Хроматограф жидкостной Уотерс 510 с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу или другой аналогичного типа, номер госрегистрации 15311-02.
Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 куб. см, ГОСТ 1770-74.
Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Индоксакарб, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества 99,6% (фирма Дюпон де Немур Интернешнл, С.А.).
Ацетон, осч., ТУ 2633-00-4-11291058-94.
Ацетонитрил, осч., УФ-205 нм, ТУ 6-09-2167-84.
Вода бидистиллированная, деионизированная, ГОСТ 7602-72.
Гексан, х.ч. д/спектроскопии, ТУ 6-09-06-657-84.
Калий марганцовокислый, ч.д.а., ГОСТ 20490-75.
Кальций хлористый, х.ч., ГОСТ 4161-76.
Натрий сернокислый, безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.
Натрий хлористый, х.ч., ГОСТ 4233-77.
Эфир диэтиловый, ГОСТ 6265-74.
Концентрирующие патроны Диапак Нитрил (0,6 г), ТУ 4215-002-05451931-94.
Концентрирующие патроны Диапак С16 (0,6 г), ТУ 4215-002-05451931-94.
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.3. Вспомогательные устройства и материалы
Аллонж прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами Диапак С, Диапак Нитрил и Диапак С16.
Аппарат для встряхивания проб «SKLO UNION TYP LT1».
Банки с крышками для экстракции на 250 мл, полипропилен, кат. № 3120-0250, NALGENE.
Ванна ультразвуковая «UNITRA» UNIMA OLSZTYN UM-4.
Воронки химические для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75.
Воронки делительные на 250 куб. см, ГОСТ 10054-75.
Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi или ИР-1М, ТУ 25-11-917-74 с водяной баней.
Колбы конические плоскодонные на 100 и 250 куб. см, КПШ-100, КПШ-250, ГОСТ 10394-72.
Колонка хроматографическая стальная длиной 250 мм с внутренним диаметром 4,6 мм, Symmetry Shield RP18, зернение 5 мкм, фирма Уотерс.
Колбы конические плоскодонные объемом 250, 500 и 1000 куб. см, ГОСТ 9737-70.
Концентраторы грушевидные и круглодонные объемом 100 и 250 куб. см, ГОСТ 10394-75.
Насос диафрагменный FT.19 фирмы KNF Neu Laboport.
Предколонка хроматографическая стальная, Symmetry С18 длиной 20 мм, внутренним диаметром 3,9 мм, зернение 5 мкм, фирма Уотерс.
Стаканы стеклянные объемом 100 — 500 куб. см, ГОСТ 25366-80Е.
Установка для перегонки растворителей.
Фильтры бумажные «красная лента», ТУ-6-09-1678-86.
Фильтры для очистки растворителей диаметром 20 мм с отверстиями пор 20 мкм, фирма Уотерс.
Центрифуга MPW-350е с набором полипропиленовых банок емкостью 200 мл.
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению определений
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов Диапак С, Диапак С16 и Диапак Нитрил для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на патронах, построение калибровочной кривой.
7.1. Подготовка органических растворителей
7.1.1 Очистка ацетона
Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия (А. Гордон, Р. Форд, Спутник химика, Москва, 1976 г., с. 438 — 439).
7.1.2 Очистка ацетонитрила
7.1.3 Очистка гексана
Гексан встряхивают с концентрированной серной кислотой, промывают бледно-розовым раствором перманганата калия до тех пор, пока раствор не перестанет обесцвечиваться, затем промывают водой, сушат над безводным хлористым кальцием и перегоняют (А. Гордон, Р. Форд, Спутник химика, Москва, 1976 г., с. 441).
7.1.4 Очистка бидистиллированной воды
Бидистиллят кипятят в течение 6 часов с марганцовокислым калием, добавленным из расчета 1 г/л, и затем перегоняют.
7.1.5 Очистка диэтилового эфира
7.2. Приготовление растворов для проведения анализа
7.2.1 Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ
Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанные ацетонитрил и очищенную воду.
В плоскодонную колбу объемом 1 куб. дм помещают 700 куб. см ацетонитрила и 300 куб. см очищенной воды. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 куб. см/мин. в течение 5 минут, после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 минуту.
7.2.2 Приготовление градуировочных растворов
7.2.2.1 Стандартный раствор с концентрацией Индоксакарба 200,0 мкг/куб. см
Взвешивают 10 мг Индоксакарба в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.
7.2.2.2 Стандартный раствор с концентрацией Индоксакарба 10,0 мкг/куб. см
Из стандартного раствора Индоксакарба с концентрацией 200,0 мг/куб. см отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании.
7.2.2.3. Стандартные растворы Индоксакарба с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см для построения калибровочной кривой и внесения в растительные образцы, воду и почву
Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см, и используют эти растворы для хроматографического исследования.
7.3. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Индоксакарба в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см.
В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.6. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений (рисунок 1 — не приводится).
7.4. Подготовка концентрирующих патронов Диапак Нитрил и Диапак С16 для очистки экстрактов
7.4.1 Подготовка концентрирующего патрона Диапак Нитрил для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин.
Патрон Диапак Нитрил устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают последовательно 10 куб. см смеси гексан — ацетон в соотношении 9:2. Элюат отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.
7.4.1.1 Проверка хроматографического поведения Индоксакарба на концентрирующем патроне Диапак Нитрил
Из стандартного раствора Индоксакарба в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в круглодонную колбу объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С.
Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 куб. см гексана, смесь перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, упаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют. Тот же концентратор обмывают двумя порциями по 10 куб. см смеси гексан — ацетон в соотношении 9:2 и последовательно вносят на патрон. Элюаты после прохождения каждой порции собирают в отдельные концентраторы, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие Индоксакарб, объединяют их и рассчитывают объем растворителя, необходимого для вымывания вещества из патрона.
7.4.2 Подготовка концентрирующего патрона Диапак С16 для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. При работе на патронах Диапак С16 используют очищенную воду.
Патрон Диапак С16 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 куб. см смеси ацетонитрил — вода в соотношении 7:3 и 20 куб. см воды. Элюат отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона!
7.4.2.1 Проверка хроматографического поведения Индоксакарба на концентрирующем патроне Диапак С16
Из стандартного раствора Индоксакарба в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в круглодонную колбу объемом 100 куб. см и добавляют туда 9 куб. см воды, перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.
Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси ацетонитрил — вода в соотношении 1:4 и вносят на патрон. Элюат выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.
Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси ацетонитрил — вода в соотношении 1:2 и вносят на патрон. Элюат выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографируют.
Исходный концентратор обмывают двумя порциями по 10 куб. см смеси ацетонитрил — вода в соотношении 7:3 и вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции упаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие Индоксакарб, объединяют их и рассчитывают объем растворителя, необходимого для вымывания вещества из патрона.
7.5. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии
Хроматографическую колонку Symmetry Shield RP18 с предколонкой Symmetry С18 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 25 °С и скорости потока подвижной фазы 1 куб. см/мин. 3 — 4 часа.
8. Отбор проб и хранение
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 1743.01-83 «Почвы. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 26950-89 «Почвы. Отбор проб», ГОСТ 25896-83 «Виноград свежий столовый. ТУ», ГОСТ 25892-83Е «Сок виноградный натуральный. ТУ», ГОСТ 27572-87 «Яблоки свежие для промышленной переработки. ТУ», ГОСТ 656-79 «Соки плодовые и ягодные натуральные».
Пробы воды и соков хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре +4 °С не более 10 суток. Пробы винограда и яблок хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 — 4 °С не более суток. Для длительного хранения пробы яблок и винограда замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °С до 2-х лет.
Пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.
9. Проведение определений
9.1. Вода
9.1.1 Экстракция
Пробу воды объемом 100 куб. см помещают в делительную воронку объемом 250 куб. см, прибавляют 5 г сухого хлорида натрия и интенсивно встряхивают до полного растворения соли.
Затем в ту же делительную воронку помещают 30 мл гексана и интенсивно встряхивают 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой помещают в химический стакан объемом 150 куб. см, верхний гексановый слой собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Водную фазу возвращают в делительную воронку и экстрагируют Индоксакарб еще двумя порциями гексана объемом по 30 куб. см в тех же условиях. Гексановый экстракт объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см, собирая его через слой безводного сульфата натрия. Осушитель затем обмывают 10 куб. см гексана, смыв, объединяют с основным экстрактом, и экстракт выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой экстракт очищают на концентрирующих патронах Диапак С16.
9.1.2 Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С16
Сухой остаток, полученный по 9.1.1, растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 куб. см воды, смесь перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси ацетонитрил — вода в соотношении 1:4 и вносят на патрон. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси ацетонитрил — вода в соотношении 1:2 и вносят на патрон. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси ацетонитрил — вода в соотношении 7:3 и вносят на патрон. Элюат собирают в чистый концентратор и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 — 5 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.
9.2. Почва
9.2.1 Экстракция
Образец почвы массой 20 г помещают в центрифужный флакон объемом 200 куб. см, прибавляют 50 куб. см смеси ацетонитрил — вода в соотношении 9:1 и помещают в ультразвуковую ванну на 5 минут. Затем банку встряхивают 5 минут на механическом встряхивателе при комнатной температуре, и содержимое банки центрифугируют 4 минуты при скорости 4000 об./мин. Супернатант фильтруют через фильтр «красная лента» в колбу объемом 250 мл с 5 г сухого хлорида натрия.
К остатку в центрифужном флаконе прибавляют 50 куб. см смеси ацетонитрил — вода в соотношении 9:1, перемешивают содержимое флакона до гомогенного состояния стеклянной палочкой и повторяют экстракцию в ранее описанных условиях. Супернатанты объединяют в конической колбе с хлоридом натрия, перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 10 минут. Затем содержимое колбы (без нерастворившейся соли) переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см и выдерживают 5 минут. Выделившуюся нижнюю водную фазу отбрасывают, а верхнюю ацетонитрильную собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.
9.2.2 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.2.1, прибавляют 3 куб. см ацетона и обмывают стенки колбы. Туда же прибавляют 100 мл дистиллированной воды, 5 г сухого хлорида натрия и перемешивают до полного растворения соли. Затем содержимое концентратора переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см, прибавляют туда 30 куб. см гексана и встряхивают делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой помещают в химический стакан объемом 150 куб. см, а верхний гексановый слой собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Водный слой возвращают в делительную воронку и повторяют экстракцию двумя порциями гексана объемом по 30 куб. см. Гексановые фракции объединяют в концентраторе, осушитель обмывают 10 куб. см гексана, объединяют с основным экстрактом и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С. Водную фазу отбрасывают. Сухой остаток растворяют в 2 мл ацетона и очищают на концентрирующих патронах Диапак Нитрил.
9.2.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак Нитрил и Диапак С16
Сухой остаток, полученный по п. 9.2.2, растворяют в 2 куб. см ацетона, обмывая стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 куб. см гексана, смесь перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси гексан — ацетон в соотношении 9:2 и также вносят на патрон. Элюаты собирают, объединяют, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С, растворяют в 1 куб. см ацетонитрила и подвергают дальнейшей очистке на патронах Диапак С16, как указано в п. 9.1.2. После очистки элюат выпаривают досуха, растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.
9.3. Яблоки
9.3.1 Экстракция
Образец измельченных плодов яблок массой 10 г помещают в коническую колбу объемом 250 куб. см, прибавляют 50 куб. см ацетонитрила и помещают в ультразвуковую ванну на 5 минут. Затем экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см с 5 г сухого хлорида натрия. Экстракцию повторяют еще два раза в тех же условиях, используя по 50 куб. см ацетонитрила. Экстракты объединяют в конической колбе с хлоридом натрия, перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 10 минут. Затем содержимое колбы (без нерастворившейся соли) переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см и выдерживают 5 минут. Выделившуюся нижнюю водную фазу отбрасывают, а верхнюю ацетонитрильную собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха при температуре не выше 30 °С.
9.3.2 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.3.1, прибавляют 3 куб. см ацетона и обмывают стенки колбы. Туда же прибавляют 100 мл дистиллированной воды, 5 г сухого хлорида натрия и перемешивают до полного растворения соли. Затем содержимое концентратора переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см, прибавляют туда 30 куб. см диэтилового эфира и встряхивают делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (эфир) с эмульсией собирают в концентратор объемом 250 куб. см. Водный слой возвращают в делительную воронку. Экстракцию повторяют двумя порциями диэтилового эфира объемом по 30 куб. см в тех же условиях. Объединенный эфирный экстракт упаривают досуха при температуре не выше 30 °С.
9.3.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак Нитрил и Диапак С16
Очистку экстракта проводят по п. 9.2.3.
9.4. Ягоды винограда
Экстракцию, очистку экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на концентрирующих патронах Диапак Нитрил и Диапак С16 проводят так же, как описано в пп. 9.3.1, 9.3.2 и 9.3.3 (яблоки).
9.5. Яблочный и виноградный соки
9.5.1 Экстракция
Образец виноградного сока объемом 10 куб. см помещают в делительную воронку объемом 250 куб. см. Туда же прибавляют 5 г сухого хлорида натрия, 100 куб. см дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения соли. Индоксакарб экстрагируют 30 куб. см диэтилового эфира, встряхивая каждый раз делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (эфир) с эмульсией собирают в химический стакан объемом 150 куб. см. Водный слой возвращают в делительную воронку. Экстракцию повторяют двумя порциями диэтилового эфира объемом по 30 куб. см в тех же условиях. Эфирный экстракт с эмульсией объединяют в химическом стакане объемом 150 куб. см.
9.5.2 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
Эфирный экстракт возвращают в делительную воронку, прибавляют туда же 100 мл дистиллированной воды и интенсивно встряхивают 2 минуты. После полного разделения фаз нижний водный слой отбрасывают, а верхний эфирный слой собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия, осушитель обмывают 10 куб. см эфира, объединяют с основным экстрактом и упаривают досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл ацетона и очищают на концентрирующих патронах Диапак Нитрил и Диапак С16.
9.5.3 Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак Нитрил и Диапак С16
Очистку экстракта на концентрирующих патронах Диапак Нитрил и Диапак С16 проводят так же, как описано в пп. 9.3.1, 9.3.2 и 9.3.3 (яблоки).
9.6. Условия хроматографирования
Хроматограф «Waters» или другой с аналогичными характеристиками с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны.
Колонка стальная Symmetry Shield RP18, 4,6 мм х 25 см, зернением 5 мкм.
Предколонка стальная Symmetry С18, 3,9 мм х 2 см, зернением 5 мкм.
Подвижная фаза: ацетонитрил — вода в соотношении 70:30.
Время удерживания Индоксакарба — 9,07 — 9,44 мин.
Чувствительность: 0,005 ед. оптической плотности на шкалу.
Объем вводимой пробы: 20 куб. мм.
Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 — 20 нг.
10. Обработка результатов
Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа Millenium 3.05.01.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание Индоксакарба рассчитывают по формуле:
Sпр х А х V
Х = ------------- х Р, 100 х Sст х m
Х — содержание Индоксакарба в пробе, мг/кг или мг/куб. дм;
Sст — высота (площадь) пика стандарта, мм;
Sпр — высота (площадь) пика образца, мм;
А — концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m — масса анализируемого образца, г (куб. см);
Р — содержание Индоксакарба в аналитическом стандарте, %.
11. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6.2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
12. Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 х |Х - Х | х 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(Х + Х )
1 2
где:
Х , Х - результаты параллельных определений, мг/кг;
1 2
r — значение предела повторяемости (таблица 1), при этом r = 2,8 сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
13. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
_
(Х +/- ДЕЛЬТА) мг/кг при вероятности Р = 0,95,
где:
_
Х - среднее арифметическое результатов определений, признанных
приемлемыми, мг/кг; ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг» <*>.
<*> 0,01 мг/кг — предел обнаружения.
14. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
14.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
14.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки С должна удовлетворять условию: д
С = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,Х л,Х' где +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности л,Х л,Х' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.
Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле: к
_ _ К = Х' - Х - С , к д _ _ где Х', Х, С - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
____________________
/ 2 2 К = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,Х' л,Х Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
к
контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
14.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 х |Х - Х | х 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(Х + Х )
1 2
где:
Х , Х - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
таблица 1), %.