МУК 4.1.2247-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение массовых концентраций N-[[(гексагидроциклопента[с]пиррол-2(1Н)-ил)амино]карбонил]-4-метилбензенсульфонамида (ГЛИКЛАЗИД) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 17.08.2007)
Примечание
Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 № 01/14262-8-32). Документ введен в действие с 17 августа 2007 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
17 августа 2007 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ИЗМЕРЕНИЕ МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ N-[[(ГЕКСАГИДРОЦИКЛОПЕНТА[С]ПИРРОЛ-2(1Н)-ИЛ) АМИНО]КАРБОНИЛ]-4-МЕТИЛБЕНЗЕНСУЛЬФОНАМИДА (ГЛИКЛАЗИД) В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ (ВЭЖХ)
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.2247-07
1. Подготовлены: ГУ НИИ медицины труда РАМН.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол № 2 от 21.06.2007).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко.
Сборник методических указаний «Измерение концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны» (выпуск 49) разработан с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочным безопасным уровням воздействия (ОБУВ) и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.
Включенные в данный сборник методические указания по контролю вредных веществ в воздухе рабочей зоны разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 ССБТ «Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования», ГОСТ Р 8.563-96 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений», ГОСТ Р ИСО 5725 (части 1 — 6) «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
Методики выполнены с использованием современных методов исследования, метрологически аттестованы и дают возможность контролировать концентрации химических веществ на уровне и ниже их ПДК и ОБУВ в воздухе рабочей зоны, установленных в гигиенических нормативах ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны» и ГН 2.2.5.1314-03 «Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны» и дополнениях к ним.
Методические указания по измерению массовых концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны предназначены для центров Госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий промышленных предприятий при осуществлении контроля за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны, а также научно-исследовательских институтов и других заинтересованных министерств и ведомств.
Настоящие Методические указания устанавливают методику количественного химического анализа воздуха рабочей зоны для определения в нем гликлазида методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в диапазоне массовых концентраций 0,1 — 1,0 мг/куб. м.
2.1 Структурная формула (не приводится).
2.2 Эмпирическая формула: C H № O S.
15 21 3 3
2.3 Молекулярная масса: 323,4.
2.4 Регистрационный номер CAS: 21187-98-4.
2.5 Физико-химические свойства
Гликлазид — порошок белого цвета без запаха, температура плавления 168 °С, нерастворим в воде, этиловом спирте 96%, хорошо растворим в ацетонитриле, ацетоне, хлористом метилене.
Агрегатное состояние в воздухе — аэрозоль.
2.6 Токсикологическая характеристика
Гликлазид — малоопасное вещество, при поступлении внутрь не оказывает раздражающего действия на слизистые оболочки глаза и кожу, не проявляет способности к резорбции через кожу, обладает слабыми кумулятивными свойствами, оказывает специфическое влияние на углеводный обмен.
Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) гликлазида в воздухе рабочей зоны 0,2 мг/куб. м.
При соблюдении всех регламентных условий и проведении анализа в точном соответствии с прописью методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций гликлазида с метрологическими характеристиками, не превышающими значений, представленных в табл. 1 (при доверительной вероятности P = 0,95).
| Диапазон измерений, мг/куб. м | Границы расширенной неопределенности (точности), +/- U, мг/куб. м | Повторяемость, сигма , r мг/куб. м | Воспроизводимость, сигма , R мг/куб. м | Границы систематической погрешности (правильности), +/- дельта, мг/куб. м | Суммарная стандартная неопределенность пробоотбора, +/- u, % |
| От 0,1 до 1,0 | 0,15С | 0,041С | 0,11С | 0,12С | 5,5 |
| С — результат измерения массовой концентрации гликлазида, мг/куб. м. | |||||
Измерение массовой концентрации гликлазида выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с УФ-детектированием при длине волны 230 нм.
Отбор проб проводят с концентрированием на бумажный обеззоленный фильтр «синяя лента».
Нижний предел измерения содержания гликлазида в анализируемом объеме раствора пробы — 0,02 мкг.
Нижний предел измерения массовой концентрации гликлазида в воздухе 0,1 мг/куб. м (при отборе 100 куб. дм воздуха).
Метод специфичен в условиях приготовления препаративных форм на основе гликлазида. Измерению не мешают сопутствующие вещества: мальтодекстрин, магния стеарат, крахмал, аэросил, гидрофосфат кальция, гидроксипропилметилцеллюлоза.
При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы, растворы.
5.1 Средства измерений, вспомогательные
устройства, материалы
Хроматограф жидкостный фирмы Хьюлетт-Паккард, модель HP-1050 с градиентной системой элюирования, автосэмплером и УФ-детектором 190 — 400 нм типа «диодная матрица», № 14612-95 в Государственном реестре средств измерений
Колонка аналитическая Диасорб С -Т, 7 мкм (150 х 4) мм 16
Аспирационное устройство ПУ-4Э, ЗАО «ХИМКО», № 14531-03 в Государственном реестре средств измерений
Фильтродержатель ТУ 95-72-05-77
Весы лабораторные ВЛА-200 ГОСТ 24104-2001
Фильтры бумажные обеззоленные «синяя лента» ТУ 6-09-1678-77
Колбы мерные 2-25-2, 2-100-2 ГОСТ 1770-74
Пипетки 1-1-2-1, 1-1-2-2, 1-1-2-5, 1-1-2-10 ГОСТ 29227-91
Пробирки мерные с притертыми пробками П-2-10-0,1ХС ГОСТ 1770-74
Фильтры бумажные обеззоленные «белая лента» ТУ 6-09-1678-77
Бюксы стеклянные СВ 19/9, СВ 24/10 ГОСТ 25336-82
Цилиндры мерные 3-100 ГОСТ 1770-74
Палочки стеклянные ГОСТ 25336-82
Воронки химические В-30-50 ХС ГОСТ 25336-82
5.2 Реактивы, растворы
Гликлазид с содержанием основного вещества не менее 99,0% в пересчете на сухое вещество НД 42-10252-99
Ацетонитрил, о.с.ч., для ВЭЖХ ТУ 6-09-5437-91 Вода бидистиллированная ГОСТ 7602-72
Состав элюента: ацетонитрил:бидистиллированная вода в соотношении 40:60 (об.)
Допускается применение других средств измерения, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками не хуже приведенных в разделе.
6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.
6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и необходимо иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90.
6.3. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.
К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой хроматографического анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы оперативного контроля при проведении процедур контроля погрешности анализа.
8.1. Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 84 — 106 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.
8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовку посуды, приготовление растворов, подготовку жидкостного хроматографа, установление градуировочной характеристики, отбор проб.
Подготовка посуды проводится общепринятым методом с использованием хромовой смеси.
9.1 Приготовление растворов
9.1.1. Основной стандартный раствор гликлазида с массовой концентрацией 1000 мкг/куб. см готовят растворением 0,0250 г гликлазида в ацетонитриле в мерной колбе вместимостью 25 куб. см. Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.
9.1.2. Рабочий стандартный раствор гликлазида № 1 с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см готовят соответствующим разведением основного стандартного раствора гликлазида ацетонитрилом.
Для этого берут 2,5 куб. см основного стандартного раствора гликлазида, помещают в мерную колбу вместимостью 25 куб. см и доводят до метки ацетонитрилом. Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.
9.1.3 Приготовление элюента:
В мерной колбе вместимостью 100 куб. см смешивают 40 куб. см ацетонитрила и 60 куб. см бидистиллированной воды.
Элюент хранят в герметичной стеклянной посуде в холодильнике в течение месяца.
9.2 Подготовка прибора
Подготовку жидкостного хроматографа проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.
Контроль качества разделительной колонки проводится не реже 1 раза в квартал по стандартному раствору антрацена в ацетонитриле с концентрацией 0,01 мкг/куб. см путем его анализа при длине волны 250 нм с элюентом ацетонитрил:бидистиллированная вода в соотношении 70:30 (об.). Скорость потока элюента 0,8 куб. см/мин. Эффективность колонки, рассчитанная при этих условиях, должна быть не менее 4000 теоретических тарелок.
9.3 Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пиков (приборные единицы) от содержания гликлазида в градуировочном объеме раствора, устанавливают по методу абсолютной калибровки по пяти сериям растворов. Каждую серию, состоящую из шести градуировочных растворов и холостой пробы, готовят в мерных колбах вместимостью 25 куб. см. Для этого в соответствии с таблицей № 2 в каждую колбу вносят соответствующий объем рабочего стандартного раствора гликлазида № 1 с концентрацией 100 мкг/куб. см и доводят объем раствора до метки ацетонитрилом.
| № градуировочного раствора | Объем рабочего стандартного раствора гликлазида № 1 с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см, куб. см | Объем ацетонитрила, куб. см | Массовая концентрация гликлазида в градуировочном растворе, мкг/куб. см | Содержание гликлазида в хроматографируемом объеме градуировочных растворов, мкг |
|---|---|---|---|---|
| 1 | 0,0 | 25,0 | 0,0 | 0,0 |
| 2 | 0,25 | 24,75 | 1,0 | 0,02 |
| 3 | 0,5 | 24,5 | 2,0 | 0,04 |
| 4 | 1,0 | 24,0 | 4,0 | 0,08 |
| 5 | 1,25 | 23,75 | 5,0 | 0,1 |
| 6 | 2,0 | 23,0 | 8,0 | 0,16 |
| 7 | 2,5 | 22,5 | 10,0 | 0,2 |
Градуировочные растворы устойчивы в течение трех суток.
Инжектируют в хроматограф по 0,02 куб. см каждого из градуировочных растворов.
По полученным данным строят градуировочную характеристику зависимости площади пика (приборные единицы) от содержания гликлазида в хроматографируемом объеме (мкг).
Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб.
ацетонитрил:бидистиллированная вода 40:60 (об.) Скорость подачи элюента 0,8 куб. см/мин. Длина волны детектора 230 нм Объем вводимой пробы 0,02 куб. см Время удерживания гликлазида 5 мин. 12 с.
За время удерживания гликлазида принимается время удерживания пика стандарта гликлазида, полученного при анализе стандартного раствора, с погрешностью +/- 5%.
Градуировку во всем диапазоне измеряемых концентраций проводят не реже 1 раза в квартал, а также при смене колонки и/или реактивов; после проведения ремонта или поверки прибора; после длительного простоя хроматографа (2 недели и более); при изменении эффективности хроматографической системы и/или чувствительности детектора.
9.4 Отбор пробы воздуха
Отбор проб следует проводить с учетом требований ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны» и Руководства Р 2.2.2006-05 (прилож. 9, обязательное) «Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны», п. 2 контроль соответствия максимальным ПДК.
Воздух с объемным расходом 10 куб. дм/мин. аспирируют через фильтр «синяя лента», помещенный в фильтродержатель.
Для измерения 1/2 ОБУВ гликлазида необходимо отобрать 100 куб. дм воздуха. Отобранные пробы можно хранить в бюксах в холодильнике в течение недели.
После отбора пробы фильтр помещают в химический бюкс и экстрагируют 5,0 куб. см ацетонитрила, помешивая при этом стеклянной палочкой в течение 5 — 7 минут, затем фильтр тщательно отжимают, раствор сливают в другой бюкс. Фильтр повторно экстрагируют 5,0 куб. см ацетонитрила, снова тщательно отжимают и удаляют. Экстракты последовательно фильтруют на химической воронке через бумажный фильтр «белая лента». Хроматографический анализ выполняют в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов.
Регистрируют не менее двух хроматограмм для каждой пробы, соблюдая все условия, требуемые для градуировки хроматографической системы. Степень десорбции гликлазида с фильтра 97%.
Количественное определение содержания гликлазида (в мкг) в анализируемом объеме раствора пробы проводят по предварительно построенной градуировочной характеристике.
Массовую концентрацию гликлазида в воздухе рабочей зоны С (мг/куб. м) вычисляют по формуле:
а х В
С = ---------------, сигма х V х К 20
где:
а - содержание вещества в анализируемом объеме раствора пробы,
найденное по градуировочной характеристике, мкг; В — общий объем раствора пробы, куб. см; сигма — хроматографируемый объем раствора пробы, куб. см; V — объем воздуха, отобранный для анализа (куб. дм) и приведенный к 20 стандартным условиям (см. прилож. 1 — не приводится). К — степень десорбции вещества с фильтра, К = 0,97.
Результат количественного химического анализа представляют в виде:
С — значение результатов измерения массовой концентрации гликлазида, мг/куб. м;
+/- U — границы расширенной неопределенности (точности) результата измерения по таблице 1, мг/куб. м.
В случае если полученный результат анализа ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерения, то результат следует указать: массовая концентрация гликлазида менее 0,1 мг/куб. м (более 1,0 мг/куб. м).
13.1 Контроль правильности
При проведении контроля правильности следует использовать концентрации стандартных растворов, которые входят в серию растворов, используемых при построении градуировочной характеристики.
Образцом для контроля правильности является бумажный фильтр «синяя лента», на который наносят 0,1 — 0,5 куб. см рабочего стандартного раствора гликлазида № 1 в ацетонитриле. Принятое опорное значение содержания гликлазида в образце для контроля, аттестованное по процедуре приготовления (m , мкг), составляет 10,0 — 50,0 мкг. RM
Проводят анализ образца в соответствии с разделом 10 данной методики. Результат контрольной процедуры признают удовлетворительным при выполнении условия:
где:
m - значение результата контрольного измерения, мкг;
k
LCL (UCL) — нижний (верхний) предел контроля правильности по табл. 3.
При отрицательном результате контроля правильности выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.
13.2 Контроль повторяемости
Контроль повторяемости проводят при каждом измерении.
Образцом для контроля повторяемости служит экстракт реальной пробы воздуха рабочей зоны, полученный при обработке фильтра.
Выполняют два единичных измерения в условиях повторяемости (измерение идентичных образцов выполняет один и тот же оператор на одном экземпляре прибора практически в одно и то же время и т.д.).
Результат контроля повторяемости признают удовлетворительным при выполнении условия:
|m - m | <= CL , 1 2 r
где:
m - значение результатов измерений содержания гликлазида в пробе,
1, 2
полученные в условиях повторяемости, мкг; CL — предел контроля повторяемости, приведенный в табл. 3, мкг, в виде r зависимости от среднего арифметического результатов двух измерений, полученных в условиях повторяемости, мкг.
При положительном заключении о контроле повторяемости результаты измерений, выполненные в условиях повторяемости, признают приемлемыми.
За результат измерения (m , мкг) принимают значение среднего ср арифметического результатов двух измерений, полученных в условиях повторяемости.
При отрицательном заключении о контроле повторяемости дополнительно получают еще один результат измерений.
Если при этом расхождение |m - m | из результатов трех измерений max min равно или меньше предела повторяемости для трех измерений (Р = 0,95),
рассчитанного по формуле:
CL (3) = 3,3 х сигма , r r где сигма - значение характеристики повторяемости, приведенное в
r
табл. 1, выраженное в абсолютных единицах, то в качестве результата фиксируется среднее арифметическое значение результатов трех измерений.
При превышении предела повторяемости для трех измерений в качестве результата измерения фиксируется медиана трех измерений, т.е. выбирается второе по значению измерение в ряду расположенных по возрастанию значений.
13.3 Контроль промежуточной прецизионности
Образцом для контроля прецизионности служит экстракт реальной пробы воздуха рабочей зоны, полученный при обработке фильтра.
Выполняют два измерения в условиях промежуточной прецизионности с участием одной лаборатории. Пробы анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа (время между измерениями, оборудование и его калибровка, партии реактивов, оператор и др.) при соблюдении вышеуказанных условий.
Результат контроля воспроизводимости признают удовлетворительным при выполнении условия:
|m - m | <= CL , 1 2 R
где:
m , m - среднеарифметическое значение результатов параллельных
1 2
определений содержания гликлазида в пробе, полученное в условиях
внутрилабораторной (промежуточной), мкг; CL — предел контроля воспроизводимости, приведенный в табл. 3, мкг. R
При отрицательном результате контроля прецизионности выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.
| Диапазон измерений содержания гликлазида в образце для контроля, мкг | Предел контроля повторяемости, CL , r мкг (n = 2, Р = 0,95) | Предел контроля воспроизводимости, CL , мкг R (n = 2, Р = 0,95) | Пределы контроля правильности для диапазона 10 — 50 мкг в контрольном образце (Р = 0,90) | |
| нижний LCL, мкг | верхний UCL, мкг | |||
| от 10 до 100 | _ 0,11m | _ 0,32m | m — 0,12m RM RM | m + 0,12m RM RM |
_
m — значение среднего арифметического результатов двух единичных измерений, выполненных в условиях повторяемости, мкг; _
m — значение среднего арифметического результатов двух измерений, выполненных в условиях воспроизводимости, мкг;
m — принятое опорное значение содержания гликлазида в образце для RM контроля, мкг.
Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 2 ч 30 мин.
Методические указания разработаны ОАО «Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ» («ВНЦ БАВ»).