МУК 4.1.2172-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Тау-флувалината в зерне и соломе зерновых культур, в ягодах и соке винограда, зеленой массе пастбищных трав, семенах и масле рапса, сои методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 15.02.2007)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 1 мая 2007 года.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека
Г. Г. Онищенко
15 февраля 2007 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТАУ-ФЛУВАЛИНАТА В ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУР, В ЯГОДАХ И СОКЕ ВИНОГРАДА, ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ ПАСТБИЩНЫХ ТРАВ, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА, СОИ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.2172-07
1 мая 2007 года
1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.
Настоящие Методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации Тау-флувалината в зерне зерновых культур в диапазоне 0,01 — 0,1 мг/кг; в соломе зерновых культур в диапазоне 0,04 — 0,4 мг/кг; в ягодах и соке винограда, масле рапса (сои) в диапазоне 0,1 — 1,0 мг/кг; в зеленой массе с искусственных злаковых пастбищ и семенах рапса (сои) в диапазоне 0,05 — 0,5 мг/кг.
Фирма-производитель: Мактешим-Аган Индастриз Лтд (Израиль).
Название действующего вещества по ИСО: Тау-флувалинат.
Название по ИЮПАК: (RS)-альфа-циано-3-феноксибензил-N-(2-хлор-альфа, альфа, альфа-трифтор-p-толил-D-валинат).
Структурная формула (не приводится).
Эмпирическая формула: C H ClF N O . 26 22 3 2 3
Агрегатное состояние: вязкая жидкость.
Цвет, запах: желтоватого цвета. -8
Давление насыщенного пара: 9,0 х 10 мПа при 20 °С. Коэффициент распределения в системе октанол/вода при 25 °С: K lg Р =
ow
4,26.
Растворим в органических растворителях, практически нерастворим в воде.
Устойчив на свету. Стабилен при хранении в течение 2-х лет при температуре 20 — 28 °С.
Краткая токсикологическая характеристика: Тау-флувалинат относится к умеренно опасным веществам по острой пероральной (ЛД (крысы) 261 мг/кг),
50
к опасным веществам по ингаляционной [ЛК (4 час.) для крыс > 560 мг/куб. 50 м воздуха] и к мало опасным веществам по накожной (ЛД для кроликов > 2000 50 мг/кг) токсичности.
В России установлены следующие гигиенические нормативы:
МДУ в зерне хлебных злаков — 0,01, в винограде — 0,2, в рапсе — 0,1 мг/кг, в сое (семена и масло) — нд.
Тау-флувалинат — инсектицид из группы синтетических пиретроидов контактного и кишечного действия с выраженным акарицидным действием. Он эффективно подавляет развитие вредителей из отрядов жесткокрылых, чешуекрылых, двукрылых и плодовых клещей.
Производится фирмой Мактешим-Аган в виде водной эмульсии с содержанием действующего вещества 240 г/л.
Зарегистрирован в России под торговым названием Маврик, ВЭ, 240 г/л, для борьбы с грызущими и сосущими насекомыми с нормой расхода 0,2 — 1,6 л на га в зависимости от культуры и вредителя в посевах пшеницы, ячменя, рапса, сои, льна, в посадках картофеля, винограда, на пастбищах и в городских зеленых насаждениях.
1. МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
(СУММА ИЗОМЕРОВ ПО ДВУМ ХАРАКТЕРНЫМ ПИКАМ)
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, Р = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
| Зерно пшеницы | 0,01 — 0,1 | 50 | 4 | 11 | 13 |
| Солома пшеницы | 0,04 — 0,08 | 50 | 4 | 11 | 13 |
| 0,2 — 0,4 | 25 | 5 | 14 | 17 | |
| Семена рапса и сои | 0,05 — 0,1 | 50 | 3 | 8 | 10 |
| 0,25 — 0,5 | 25 | 3 | 8 | 10 | |
| Масло рапса и сои | 0,1 — 1,0 | 25 | 4 | 11 | 13 |
| Ягоды винограда | 0,1 — 1,0 | 25 | 3 | 8 | 10 |
| Сок винограда | 0,1 — 1,0 | 25 | 3 | 8 | 10 |
| Зеленая масса пастбищных | 0,05 — 0,1 | 50 | 3 | 8 | 10 |
| трав | 0,25 — 0,5 | 25 | 3 | 8 | 10 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, СТАНДАРТНОЕ ОТКЛОНЕНИЕ,
ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА
ДЛЯ ТАУ-ФЛУВАЛИНАТА (СУММА ИЗОМЕРОВ
ПО ДВУМ ХАРАКТЕРНЫМ ПИКАМ)
| Анализируемый объект | Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20 | ||||
| Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего результата, +/-, % | |
| Зерно пшеницы | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 89,8 | 3,7 | +/- 1,5 |
| Солома пшеницы | 0,04 | 0,04 — 0,4 | 77,9 | 4,9 | +/- 1,8 |
| Семена рапса и сои | 0,05 | 0,05 — 0,5 | 89,9 | 3,8 | +/- 1,6 |
| Масло рапса | 0,1 | 0,1 — 1,0 | 89,2 | 3,5 | +/- 1,5 |
| Ягоды винограда | 0,1 | 0,1 — 1,0 | 81,7 | 2,7 | +/- 1,0 |
| Сок винограда | 0,1 | 0,1 — 1,0 | 84,8 | 2,8 | +/- 1,1 |
| Зеленая масса пастбищных трав | 0,05 | 0,05 — 0,5 | 90,7 | 3,2 | +/- 1,4 |
2. МЕТОД ИЗМЕРЕНИЯ
Метод основан на извлечении Тау-флувалината из зерна и соломы пшеницы 70%-ным водным раствором ацетона, переэкстракции в гексан, очистке полученного экстракта от мешающих анализу веществ на колонке с Флоризилом и окончательном определении Тау-флувалината методом ГЖХ с использованием детектора по захвату электронов.
Из ягод и сока винограда Тау-флувалинат извлекают ацетонитрилом и далее проводят очистку проб по общей схеме.
Идентификация проводится по времени удерживания двух характерных пиков. Количественное определение — методом абсолютных калибровок по двум характерным пикам.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора капиллярной колонки и условий программирования температуры.
3. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, РЕАКТИВЫ, ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА И МАТЕРИАЛЫ
3.1. Средства измерений
Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е, или аналогичные.
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г, ГОСТ 19491-74.
Колбы мерные на 25; 50; 100 куб. см, ГОСТ 1770-74.
Мерные цилиндры на 10, 25 и 50 куб. см, ГОСТ 1770-74.
Микрошприц на 10 мкл, ТУ 2.833.106.
Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 куб. см, ГОСТ 20292-74.
Хроматограф газовый HP6890 с электронозахватным детектором (ECD).
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Аналитический стандарт Тау-флувалината с содержанием 91,6% д.в. (фирма Мактешим-Аган).
Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
Ацетон, х.ч., ТУ 6-09-3513-86.
Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.
Гелий очищенный марки «А», ТУ 51-940-80.
Калий марганцовокислый, ч.д.а., ГОСТ 20490-75.
Натрий сернокислый безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.
Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77.
Флоризил для колоночной хроматографии с размером частиц 60 — 100 меш, фирма «Мерк».
Этиловый эфир уксусной кислоты, ч.д.а., ГОСТ 22300-76.
Стандартный раствор Тау-флувалината в ацетоне — 1 мг/мл (хранить в холодильнике, срок годности 120 суток).
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.
3.3. Вспомогательные устройства, материалы
Аппарат для встряхивания проб АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.
Ванна ультразвуковая «Серьга», ТУ 3.836.008.
Воронки химические для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75.
Воронки делительные на 250 куб. см, ГОСТ 10054-75.
Вакуумный ротационный испаритель МР-1М, ТУ 25-11-917-74.
Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi или ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, с водяной баней.
Колбы конические плоскодонные на 100 и 250 куб. см КПШ-100, КПШ-250, ГОСТ 10394-72.
Концентраторы грушевидные (конические) 250 куб. см, ГОСТ 10394-72.
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-1, 100% метилсиликон, длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирмы Хьюлетт Паккард.
Колонки хроматографические стеклянные или пластиковые, длина 150 — 250 мм, диаметр 15 мм.
Насос водоструйный, ГОСТ 10696-75.
Мельница лабораторная электрическая, ТУ 46-22-236-84, или аналогичная.
Стаканы стеклянные на 100 куб. см, ГОСТ 6236-72.
Фильтры бумажные «красная лента», ТУ 6-09-1678-86.
Центрифуга MPW-350e с набором полипропиленовых банок емкостью 200 куб. см.
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.
5. ТРЕБОВАНИЯ К КВАЛИФИКАЦИИ ОПЕРАТОРОВ
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
6. УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. ПОДГОТОВКА К ОПРЕДЕЛЕНИЮ
7.1. Подготовка колонки, заполненной Флоризилом для очистки экстракта
На дно пластиковой хроматографической колонки (высота 15 см, диаметр 1,5 см) помещают пробочку из стекловаты и заполняют колонку Флоризилом на высоту 10 см. На слой Флоризила насыпают слой безводного сернокислого натрия толщиной 1,0 см. Колонку промывают 10 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 10:1 и высушивают при комнатной температуре. Перед нанесением пробы колонку промывают 10 куб. см гексана. Колонка готова к работе.
7.2. Проверка хроматографического поведения Тау-флувалината на колонках с Флоризилом
При отработке методики или поступлении новой партии Флоризила проводят изучение поведения Тау-флувалината на колонке. В концентратор вносят 1 куб. см стандартного раствора Тау-флувалината в ацетоне с концентрацией 1,0 мкг/куб. см и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 25 — 30 °С, добавляют 5 куб. см гексана, растворяют содержимое концентратора и наносят на колонку. Затем наносят на колонку 20 куб. см гексана и 10 куб. см смеси гексан:этилацетат в соотношении 10:1, элюаты отбрасывают. Тау-флувалинат элюируют с колонки последовательно 3-мя порциями объемом 5 куб. см каждая смеси гексана с этилацетатом в соотношении 10:1. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы и выпаривают досуха при температуре не выше 25 — 30 °С.
Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 куб. см ацетона и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.
Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый объем элюата.
7.5. Приготовление рабочих растворов
7.5.1 Приготовление 70%-ного водного раствора ацетона
700 куб. см ацетона вносят в мерную колбу на 1 куб. дм, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.
7.5.2 Приготовление 0,1%-ного раствора калия марганцовокислого
1 г калия марганцовокислого вносят в мерную колбу на 1 куб. дм, добавляют 600 — 700 куб. см дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения кристаллов и доводят водой до метки.
7.5.3 Приготовление стандартных растворов
100 мг Тау-флувалината (аналитического стандарта) вносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют навеску в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор № 1, концентрация 1 мг/куб. см). Раствор хранится в холодильнике около 120 суток.
Методом последовательного разбавления исходного раствора № 1 ацетоном готовят рабочие растворы Тау-флувалината с концентрацией: 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см, которые могут храниться в холодильнике не более 30 суток.
7.6. Построение градуировочного графика
Для построения градуировочного графика в инжектор хроматографа вводят 1 куб. мм рабочего раствора Тау-флувалината с концентрацией 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 мкг/куб. см. Проводят не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение площади хроматографического пика для каждой концентрации.
По полученным данным строят градуировочный график зависимости площади хроматографического пика в Hz от концентрации Тау-флувалината в растворе в мкг/куб. см.
8. ОТБОР ПРОБ И ХРАНЕНИЕ
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с ГОСТ 25896-83 «Виноград свежий столовый. ТУ», ГОСТ 25892-83Е «Сок виноградный. ТУ», ГОСТ 8988-77 «Масло рапсовое. ТУ», ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ 7825-96 «Масло соевое. ТУ», РСТ РСФСР 384-83 «Солома зерновых, крупяных, з/бобовых культур и трав. ТУ», ГОСТ 27978-88 «Корма зеленые. ТУ», ГОСТ 13586.3-83 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб».
Пробы ягод винограда хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 — 4 °С в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °С.
Пробы сока винограда хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 0 — 4 °С.
Пробы зерна и соломы пшеницы подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.
9. ПРОВЕДЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
9.1. Зерно пшеницы
Навеску измельченного зерна 20 г помещают в центрифужную банку объемом 250 куб. см, добавляют 50 куб. см 70%-ного водного раствора ацетона и встряхивают смесь на встряхивателе в течение 30 минут. По окончании встряхивания пробу центрифугируют 5 минут при 4000 об./мин. Фильтруют экстракт в концентратор емкостью 250 куб. см через воронку с бумажным фильтром. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 30 куб. см 70%-ного водного раствора ацетона, встряхивая смесь каждый раз по 30 минут. Объединенные экстракты выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С до водного остатка. (Выпаривание проводить осторожно, так как возможно вспенивание ацетона!)
К водному остатку в концентраторе добавляют 10 куб. см 0,1%-ного раствора калия марганцовокислого, ополаскивают стенки концентратора и переносят водную фазу в делительную воронку. В концентратор добавляют 5 куб. см ацетона, ополаскивают стенки концентратора и переносят в ту же делительную воронку. Ополаскивают стенки концентратора 70 куб. см дистиллированной воды и переносят воду в ту же делительную воронку.
Добавляют в ту же воронку 15 куб. см насыщенного раствора хлорида натрия и 30 куб. см гексана, интенсивно встряхивают смесь в течение 1 — 2 мин. После разделения слоев нижний водный слой сливают в тот же концентратор, а верхний гексановый собирают в чистый концентратор емкостью 250 куб. см, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Водную фракцию возвращают в делительную воронку. Экстракцию повторяют еще дважды, используя для этого каждый раз 30 куб. см гексана. Гексановые экстракты объединяют в концентраторе и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С досуха.
9.1.1 Очистка экстракта на колонке с «Флоризилом»
Сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 куб. см гексана, обмывая стенки концентратора, и наносят на заранее подготовленную, как указано в разделе 7.1, колонку с Флоризилом. Колонку промывают 20 куб. см гексана, смыв отбрасывают. Наносят на колонку 10 мл смеси гексан:этилацетат — 10:1, смыв отбрасывают. Пропускают через колонку 10 куб. см смеси гексан:этилацетат — 10:1, элюат собирают в концентратор емкостью 100 куб. см. Содержимое концентратора выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 25 — 30 °С.
Сухой остаток в концентраторе растворяют в 2 куб. см ацетона и 1 куб. мм вводят в хроматограф.
9.2. Солома пшеницы
Навеску измельченной соломы 5 г помещают в полипропиленовую банку объемом 250 куб. см, добавляют 100 куб. см 70%-ного водного раствора ацетона и экстрагируют Тау-флувалинат 10 на ультразвуковой ванне, затем 45 минут встряхивают на встряхивателе. По окончании встряхивания пробу центрифугируют 5 минут при 4000 об./мин. Фильтруют экстракт в концентратор емкостью 250 куб. см через воронку с бумажным фильтром. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 50 куб. см 70%-ного водного раствора ацетона, встряхивая смесь каждый раз по 30 минут. Объединенные экстракты выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С до водного остатка. (Выпаривание проводить осторожно, так как возможно вспенивание ацетона!)
Далее проводят переэкстракцию Тау-флувалината в гексан, как указано в разделе 9.1, и очистку экстракта на колонке с Флоризилом (см. раздел 9.1.1).
Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетона и вводят в хроматограф 1 куб. мм пробы.
9.3. Ягоды винограда
Навеску измельченных ягод 10 г помещают в полипропиленовую банку объемом 250 куб. см, добавляют 50 куб. см ацетонитрила и встряхивают смесь на встряхивателе в течение 30 минут. По окончании встряхивания экстракт фильтруют в плоскодонную коническую колбу емкостью 250 куб. см с 5 г хлористого натрия через воронку с бумажным фильтром. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 30 куб. см ацетонитрила, встряхивая смесь каждый раз по 30 минут. Объединенные экстракты перемешивают и переносят в делительную воронку. После разделения слоев нижний водный слой с остатками нерастворившегося хлорида натрия отбрасывают, а верхний ацетонитрильный собирают в чистый концентратор емкостью 250 куб. см, пропуская через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С досуха.
Сухой остаток в концентраторе разводят в 5 куб. см ацетонитрила, ополаскивают стенки концентратора, добавляют 100 куб. см дистиллированной воды и переносят водную фазу в делительную воронку.
Добавляют в воронку 5 г хлористого натрия и 30 куб. см гексана, интенсивно встряхивают смесь в течение 1 — 2 мин. После разделения слоев нижний водный слой сливают в тот же концентратор, а верхний гексановый собирают в чистый концентратор емкостью 250 куб. см, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Водную фракцию возвращают в делительную воронку. Экстракцию повторяют еще дважды, используя для этого каждый раз 30 куб. см гексана. Гексановые экстракты объединяют в концентраторе и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С досуха.
Далее проводят очистку пробы на колонке с Флоризилом, как указано в разделе 9.1.1.
Сухой остаток разводят в 10 куб. см гексана и вводят в хроматограф 1 куб. мм пробы.
9.4. Сок винограда
Навеску сока 10 г помещают в центрифужную банку объемом 250 куб. см, добавляют 100 куб. см дистиллированной воды и 30 куб. см гексана, встряхивают смесь на встряхивателе в течение 60 минут. По окончании встряхивания пробу центрифугируют 5 минут при 4000 об./мин. Экстракт аккуратно переносят в делительную воронку. После разделения слоев нижний водный слой возвращают в центрифужную банку, а верхний гексановый собирают в чистый концентратор емкостью 250 куб. см, пропуская через слой безводного сульфата. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 30 куб. см гексана, встряхивая смесь каждый раз по 30 минут. Объединенные гексановые экстракты выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С досуха.
Далее проводят очистку пробы на колонке с Флоризилом, как указано в разделе 9.1.1.
Сухой остаток разводят в 10 куб. см гексана и вводят в хроматограф 1 куб. мм пробы.
9.5. Зеленая масса с искусственных злаковых пастбищ
Навеску измельченной зеленой массы 10 г помещают в полипропиленовую банку объемом 250 куб. см, добавляют 75 куб. см ацетонитрила и встряхивают смесь на встряхивателе в течение 60 минут. По окончании встряхивания экстракт фильтруют в концентратор емкостью 250 куб. см через воронку с бумажным фильтром. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 50 куб. см ацетонитрила, встряхивая смесь каждый раз по 30 минут. Объединенные экстракты выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С досуха.
Сухой остаток в концентраторе разводят в 5 куб. см ацетонитрила, ополаскивают стенки концентратора, добавляют 100 куб. см дистиллированной воды и переносят водную фазу в делительную воронку.
Добавляют в воронку 5 г хлористого натрия и 30 куб. см гексана, интенсивно встряхивают смесь в течение 1 — 2 мин. После разделения слоев нижний водный слой сливают в тот же концентратор, а верхний гексановый собирают в чистый концентратор емкостью 250 куб. см, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Водную фракцию возвращают в делительную воронку. Экстракцию повторяют еще дважды, используя для этого каждый раз 30 куб. см гексана. Гексановые экстракты объединяют в концентраторе и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С досуха.
Далее проводят очистку пробы на колонке с Флоризилом, как указано в разделе 9.1.1.
Сухой остаток разводят в 5 куб. см гексана и вводят в хроматограф 1 куб. мм пробы.
9.6. Семена рапса и сои
Навеску измельченных семян рапса или сои 10 г помещают в полипропиленовую банку объемом 250 куб. см, добавляют 50 куб. см ацетонитрила и встряхивают смесь на встряхивателе в течение 60 минут. По окончании встряхивания экстракт фильтруют в концентратор емкостью 250 куб. см через воронку с бумажным фильтром. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 30 куб. см ацетонитрила, встряхивая смесь каждый раз по 30 минут. Объединенные экстракты выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С до капель масла.
Остаток в концентраторе разводят в 5 куб. см ацетонитрила, ополаскивают стенки концентратора, добавляют 100 куб. см дистиллированной воды и переносят водную фазу в делительную воронку.
Добавляют в воронку 5 г хлористого натрия и 30 куб. см гексана, интенсивно встряхивают смесь в течение 1 — 2 мин. После разделения слоев нижний водный слой сливают в тот же концентратор, а верхний гексановый собирают в чистый концентратор емкостью 250 куб. см, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Водную фракцию возвращают в делительную воронку. Экстракцию повторяют еще дважды, используя для этого каждый раз 30 куб. см гексана. Гексановые экстракты объединяют в концентраторе и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С досуха.
Далее проводят очистку пробы на колонке с Флоризилом, как указано в разделе 9.1.1.
Сухой остаток разводят в 5 мл гексана и вводят в хроматограф 1 куб. мм пробы.
9.7. Масло рапса и сои
Навеску масла 5 г растворяют в 50 куб. см гексана и переносят в делительную воронку. Добавляют в делительную воронку 50 мл ацетонитрила и встряхивают смесь в течение 2 минут. После полного разделения слоев нижний (ацетонитрильный) слой собирают в концентратор 250 куб. см. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 30 куб. см ацетонитрила, встряхивая смесь каждый раз по 2 минуты. Объединенные экстракты выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С до капель масла.
Далее проводят очистку пробы на колонке с Флоризилом, как указано в разделе 9.1.1.
Сухой остаток разводят в 5 куб. см гексана и вводят в хроматограф 1 куб. мм пробы.
9.8. Условия хроматографирования
Хроматограф газовый HP6890 Series GC System, ECD, с детектором электронного захвата, ЭЗД, в модификации с электронным управлением пневмонической системы (ЭУПС).
Температура детектора — 300 °С, поток обдува анода (азот) — 6,0 куб. см/мин., поток поддува — 59,0 куб. см/мин.
Температура испарителя — 270 °С, режим Split, тип газа гелий, давление 18,52 psi, деление потока 30:1, split поток 30,2 куб. см/мин.
Программированный нагрев колонки со 180 °С (выдержка 2 мин.) по 10 град./мин. до 270 °С (выдержка 13 мин.), режим постоянного потока, поток колонки 1,0 куб. см/мин., средняя скорость 30 см/сек.
Абсолютное время удерживания Тау-флувалината 1 — 18,376 мин. + 2%;
Тау-флувалината 2 — 18,527 мин. + 2%.
Минимально детектируемое количество Тау-флувалината в анализируемом объеме — 0,1 нг.
Линейность детектирования сохраняется в пределах — 1,0 — 0,1 нг.
Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией Тау-флувалината 1,0 мкг/куб. см соответственно, разбавляют.
Количественное определение Тау-флувалината проводят по методу абсолютной калибровки посредством сравнения с хроматограммами стандартных растворов Тау-флувалината с концентрацией 0,1 — 1,0 мкг/куб. см.
10. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА
Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа HP GC ChemStation Rev. A.06.03RUS.
Альтернативная обработка результатов.
Содержание Тау-флувалината (сумма изомеров) в пробах рассчитывают по следующей формуле:
Sпр х А х V
Х — содержание Тау-флувалината в пробе, мг/кг;
Sст — сумма высот (площадей) двух характерных пиков стандарта, мВ;
Sпр — сумма высот (площадей) двух характерных пиков образца, мВ;
А — концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m — масса анализируемого образца, г.
11. ПРОВЕРКА ПРИЕМЛЕМОСТИ РЕЗУЛЬТАТОВ ПАРАЛЛЕЛЬНЫХ ОПРЕДЕЛЕНИЙ
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 х |Х - Х | х 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(Х + Х )
1 2
где:
Х , Х - результаты параллельных определений, мг/кг;
1 2
r — значение предела повторяемости (таблица 1), при этом r = 2,8 сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
Результат анализа представляют в виде:
_
(Х +/- ДЕЛЬТА), мг/кг, при вероятности Р = 0,95,
где:
_
Х - среднее арифметическое результатов определений, признанных
приемлемыми, мг/кг; ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.
В случае если содержание компонента ниже нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг» <*>.
<*> 0,01 мг/кг — предел обнаружения.
13. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки С должна удовлетворять условию: д
С = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,Х л,Х' где +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности л,Х л,Х' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.
Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле: к
_ _ К = Х' - Х - С , к д _ _ где Х', Х, С - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2 К = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,Х' л,Х Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
к
контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 х |Х - Х | х 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(Х + Х )
1 2
где:
Х , Х - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
таблица 1), %.
14. РАЗРАБОТЧИКИ
Московская сельскохозяйственная академия имени К.А. Тимирязева.
Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов».