МУК 4.1.2169-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Метамитрона в ботве и корнеплодах столовой и кормовой свеклы методом газожидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.2169-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Метамитрона в ботве и корнеплодах столовой и кормовой свеклы методом газожидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.2169-07. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2169-07
(утв. Роспотребнадзором 15.02.2007)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 1 мая 2007 года.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека
Г. Г. Онищенко
15 февраля 2007 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ, ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ МЕТАМИТРОНА В БОТВЕ И КОРНЕПЛОДАХ СТОЛОВОЙ И КОРМОВОЙ СВЕКЛЫ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.2169-07
1 мая 2007 года
1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.
Настоящие Методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в ботве и корнеплодах столовой и кормовой свеклы массовой концентрации Метамитрона в диапазоне 0,03 — 0,5 мг/кг.
Метамитрон — действующее вещество препарата Голтикс; СП, 700 г/кг, фирма-производитель: Мактешим Аган (Израиль).
Название действующего вещества по ИЮПАК: 4-амино-3-метил-6-фенил-1,2,4-триазин-5-он.
Структурная формула (не приводится).
Эмпирическая формула: C H № O . 10 10 4 2
Агрегатное состояние: кристаллическое вещество.
Цвет, запах: бесцветный, без запаха.
Температура плавления: 166,6 °С.
-4 -4 Летучесть (давление паров): 8,6 х 10 мПа (при 20 °С) и 2 х 10 мПа
(при 25 °С).
Растворимость в воде при 20 °С: 1,7 г/куб. см; растворимость в органических растворителях: дихлорметане — 30 — 50; циклогексане — 10 — 50; изопропаноле — 5,7; толуоле — 2,8; гексане — < 0,1; метаноле — 23; этаноле
- 1,1; хлороформе — 29 г/куб. см при 20 °С.
Метамитрон стабилен в кислой среде, быстро гидролизуется сильными щелочами (рН > 10); DT (при 22 °С) - 410 дней (рН 4), 740 часов (рН 7),
50
230 часов (рН 9).
Коэффициент распределения в системе октанол/вода при 25 °С: K log P = ow 0,83.
Очень быстро разлагается в воде водоемов и почве.
Краткая гигиеническая характеристика:
Метамитрон относится к малоопасным веществам по острой оральной (ЛД 50 для крыс — 2000 и мышей — 1450 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД для 50 крыс > 4000 мг/кг), но к опасным по ингаляционной токсичности (ЛС для 50 крыс 330 мг/куб. м).
Не раздражает кожу и слизистую оболочку глаз.
В России установлены следующие гигиенические нормативы:
МДУ в сахарной и столовой свекле — 0,03 мг/кг.
Метамитрон — избирательный системный гербицид, ингибирует фотосинтез. В растения проникает через корни, но может проступать и через листья. Препарат на основе Метамитрона фирмы Мактешим Аган — Голтикс; СП, 700 г/кг — применяется для борьбы с однолетними двудольными сорняками при возделывании сахарной, столовой и кормовой свеклы при нормах расхода 1,5 — 2 кг/га путем опрыскивания почвы до посева (с заделкой), до всходов или в фазу 1 — 2-х настоящих листьев культуры.
Рекомендовано совместное использование с другими гербицидами, применяемыми в посевах свеклы, в том числе с метолахлором и фенмедифамом.
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблицах 1 и 1а для соответствующих диапазонов концентраций.
| Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, Р = 0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Ботва столовой и | 0,05 — 0,1 | 50 | 5 | 14 | 17 |
| кормовой свеклы | 0,25 — 0,5 | 25 | 4 | 11 | 13 |
| Корнеплоды столовой и | 0,03 — 0,1 | 50 | 5 | 14 | 17 |
| кормовой свеклы | 0,15 — 0,3 | 25 | 6 | 17 | 20 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблицах 2 и 2а.
ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА
| Анализируемый объект | Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20 | ||||
| Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего результата, +/-, % | |
| Ботва столовой и кормовой свеклы | 0,05 | 0,05 — 0,5 | 81,7 | 4,5 | +/- 1,7 |
| Корнеплоды столовой и кормовой свеклы | 0,03 | 0,03 — 0,3 | 80,5 | 4,7 | +/- 1,8 |
Метод основан на извлечении Метамитрона из ботвы и корнеплодов столовой и кормовой свеклы ацетонитрилом, переэкстракции в хлористый метилен, очистке полученного экстракта от мешающих анализу веществ на колонке, заполненной Флоризилом, и окончательном определении Метамитрона методом ГЖХ с использованием термоионного детектора.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается использованием избирательного термоионного детектора и капиллярной колонки с программированием температуры.
3.1 Средства измерений
Газовый хроматограф «Кристалл 2000м» с термоионным детектором на азот -13 (ТИД) с пределом детектирования по азоту в азобензоле 5 х 10 г/куб. см и приспособлениями для капиллярной колонки.
Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е.
Весы лабораторные технические ВЛТК-500, ГОСТ 7328.
Колбы мерные вместимостью 10, 50 и 100 куб. см, ГОСТ 1770-74.
Микрошприцы вместимостью 10 куб. мм, Гамильтон.
Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 куб. см, ГОСТ 20292-74.
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2 Реактивы
Аналитический стандарт Метамитрона с содержанием 99,5% д.в., ГСО 7659-99.
Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
Ацетонитрил, х.ч., ТУ 6-09-06-1092-83.
Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.
н-Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.
Гелий очищенный марки «А», ТУ-51-940-80.
Метилен хлористый, ч., ГОСТ 19433-88.
Натрий сернокислый безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.
Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77.
Флоризил для колоночной хроматографии с размером частиц 60 — 80 меш, фирма Мерк.
Стандартный раствор Метамитрона в ацетоне — 1 мг/куб. см (хранить в холодильнике, срок годности 120 сут.).
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.
3.3 Вспомогательные устройства, материалы
Аппарат для встряхивания проб АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.
Банки с крышками для экстракции на 250 куб. см, полипропилен, кат. № 3120-0250, NALGENE.
Воронки химические для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75.
Воронки делительные на 250 куб. см, ГОСТ 10054-75.
Вакуумный ротационный испаритель МР-1М, ТУ 25-11-917-74.
Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной баней В 461.
Колбы грушевидные (концентраторы), ГОСТ 10394-72.
Концентраторы грушевидные (конические) 250 куб. см, ГОСТ 10394-72.
Колонка хроматографическая, капиллярная кварцевая DB-1701 (14% цианопропилфенилмиликона + 86% метилсиликона), длина 15 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирма J&W Scientific.
Насос водоструйный, ГОСТ 10696-75.
Фильтры бумажные «красная лента», ТУ 6-09-2678-77.
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7.1 Подготовка колонки, заполненной Флоризилом, для очистки
экстрактов ботвы и корнеплодов столовой и кормовой свеклы
На дно пластиковой хроматографической колонки (высота 15 см, диаметр 1,5 см) помещают пробку из стекловаты и заполняют колонку Флоризилом на высоту 5 см. На слой Флоризила насыпают слой безводного сернокислого натрия толщиной 1,0 см. За день до очистки экстракта колонку промывают последовательно 20 куб. см ацетона и 10 куб. см гексана, смывы отбрасывают. После промывки колонка готова к работе.
7.2 Проверка хроматографического поведения Метамитрона
на колонках с Флоризилом
При отработке методики или поступлении новой партии Флоризила проводят изучение поведения Метамитрона на колонке. В концентратор вносят 2 куб. см стандартного раствора Метамитрона с концентрацией 3 мкг/куб. см, добавляют 8 мл гексана, перемешивают содержимое концентратора и наносят на колонку. Промывают колонку 15 куб. см гексана, смыв отбрасывают. Наносят на колонку 5 куб. см смеси гексан:ацетон — 3:2, смыв отбрасывают. Пропускают через колонку 20 куб. см смеси гексан:ацетон — 2:3, отбирая последовательно по 5 куб. см элюента. Каждую фракцию собирают отдельно в концентраторы и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха.
Сухой остаток в концентраторах растворяют в 2 куб. см ацетона и вводят в хроматограф 1 куб. мм. По результатам обнаружения Метамитрона в каждой фракции определяют объем смеси гексан:ацетон — 2:3, необходимый для полного вымывания Метамитрона.
Примечание: Проверку хроматографического поведения Метамитрона следует проводить обязательно при постановке методики и/или получении новой партии Флоризила, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.
7.3 Приготовление рабочих растворов
7.3.1 Приготовление 2%-ного раствора хлористого натрия
20 г хлористого натрия вносят в мерную колбу на 1 куб. дм, добавляют 600 — 700 куб. см бидистиллированной воды, перемешивают до полного растворения соли и доводят водой до метки.
7.4 Приготовление градуировочных растворов
50 мг Метамитрона (аналитического стандарта) взвешивают в мерной колбе вместимостью 50 куб. см, растворяют навеску в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор № 1, концентрация 1 мг/куб. см). Раствор хранится в холодильнике около 120 суток.
Методом последовательного разбавления исходного раствора № 1 ацетоном готовят рабочие растворы Метамитрона с концентрацией 0,3; 0,6; 1,5; 3,0 мкг/куб. см, которые могут храниться в холодильнике не более 30 сут.
7.5 Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Метамитрона в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 0,3; 0,6; 1,5; 3,0 мкг/куб. см.
В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.2. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» № 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ 26766-85, 1722-85 «Свекла столовая свежая. ТУ» и ГОСТ 28736-90 «Корнеплоды кормовые».
Пробы ботвы и корнеплодов столовой и кормовой свеклы хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 — 4 °С в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °С.
9.1 Ботва и корнеплоды столовой и кормовой свеклы
9.1.1 Экстракция гербицида из анализируемой пробы
Навеску измельченной ботвы и корнеплодов столовой и кормовой свеклы массой 20 г помещают в полипропиленовые банки объемом 250 куб. см, заливают 70 куб. см (для ботвы) или 50 куб. см (для корнеплодов) ацетонитрила и встряхивают в течение 30 мин. Экстракт отфильтровывают через воронку с бумажным фильтром в концентратор емкостью 250 куб. см. Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя каждый раз по 50 куб. см ацетонитрила и встряхивая смесь в течение 15 мин.
Экстракты отфильтровывают и объединяют в концентраторе. Растворитель выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С до водного остатка. (Выпаривание проводить осторожно, так как возможно вспенивание ацетонитрила.)
Добавляют в концентратор 5 куб. см ацетонитрила, обмывают стенки концентратора, приливают 50 куб. см 2%-ного раствора хлористого натрия, перемешивают содержимое и переносят в делительную воронку емкостью 250 куб. см. Приливают в делительную воронку 50 куб. см хлористого метилена и встряхивают воронку в течение 1 — 2 минут. После разделения слоев нижний слой хлористого метилена сливают в концентратор емкостью 250 куб. см через безводный сульфат натрия. Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя каждый раз по 50 куб. см хлористого метилена. Экстракты объединяют в концентраторе и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха.
9.1.2 Очистка экстракта на набивной колонке, заполненной Флоризилом
Сухой остаток в концентраторе разводят в 2 куб. см ацетона, добавляют 8 куб. см гексана, перемешивают содержимое, обмывая стенки концентратора, и наносят на колонку с Флоризилом. Промывают колонку 15 куб. см гексана, смыв отбрасывают. Наносят на колонку 5 куб. см смеси гексан:ацетон — 3:2, смыв отбрасывают. Пропускают через колонку 15 куб. см смеси гексан:ацетон — 2:3, собирая элюент в концентратор, и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха.
Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетона и вводят в хроматограф 1 куб. мм.
9.2 Условия хроматографирования
Хроматограф газовый «Кристалл 2000м» с термоионным детектором на азот -13
(ТИД) с пределом детектирования по азоту в азобензоле 5 х 10 г/куб. см и приспособлениями для капиллярной колонки или другой с аналогичными
характеристиками.
Капиллярная кварцевая колонка DB-1701 (14% цианопропилфенил — 86% метилсиликон), длина 15 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм.
Температура термостата колонки программированная: начальная температура — 180 °С, выдержка — 4 мин.; нагрев колонки по 25 °С/мин. до 270 °С; выдержка 5 мин.
Продувка детектора после анализа азотом — 65 куб. см/мин. в течение 3 минут с нагревом колонки до 280 °С.
Температура испарителя — 280 °С, детектора — 370 °С.
Регулятор расхода гелия — РРГ-11; режим — Splitless.
Газ 1 — гелий, линейная скорость — 23 см/сек., давление на входе — 32,84 кПа.
Газ 2 — гелий (продувка испарителя), расход — 1,0 куб. см/мин.; сброс 1:60.
Газ 3 — азот (поддув в детектор), расход во время анализа — 45 куб. см/мин.
Расход водорода — 16 куб. см/мин., воздуха — 180 куб. см/мин.
Абсолютное время удерживания Метамитрона — 8 мин. 49 сек.
Минимально детектируемое количество Метамитрона в анализируемом объеме — 0,3 нг.
Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,3 — 5,0 нг.
Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией Метамитрона 5,0 мкг/куб. см соответственно, разбавляют.
Количественное определение Метамитрона проводят по методу абсолютной калибровки посредством сравнения с хроматограммами стандартных растворов Метамитрона с концентрацией 0,03 — 5,0 мкг/куб. см.
Для определения содержания Метамитрона в пробах методом ГЖХ используют следующую формулу:
Sпр х А х V
Х = ------------- х Р, 100 х Sст х m
Х — содержание Метамитрона в пробе, мг/кг;
Sст — площадь пика стандарта, мВ;
Sпр — площадь пика образца, мВ;
А — концентрация стандартного раствора, мкг/мл;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m — масса анализируемого образца, г;
Р — содержание Метамитрона в аналитическом стандарте, %.
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 х |Х - Х | х 100
1 2
------------------- <= r, (1)
(Х + Х )
1 2
где:
Х , Х - результаты параллельных определений, мг/кг;
1 2
r — значение предела повторяемости (таблица 1), при этом r = 2,8 сигма . r
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
Результат анализа представляют в виде:
_
(Х +/- ДЕЛЬТА), мг/кг, при вероятности Р = 0,95,
где:
_
Х - среднее арифметическое результатов определений, признанных
приемлемыми, мг/кг; ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг;
дельта — граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.
В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе менее 0,03 мг/кг» <*>.
<*> 0,03 мг/кг — предел обнаружения.
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Величина добавки С должна удовлетворять условию: д
С = ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _ , д л,Х л,Х' где +/- ДЕЛЬТА _ (+/- ДЕЛЬТА _ ) - характеристика погрешности л,Х л,Х' (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
_
дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.
Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле: к
_ _ К = Х' - Х - С , к д _ _ где Х', Х, С - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2 К = \/ДЕЛЬТА _ + ДЕЛЬТА _. л,Х' л,Х Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом
к
контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 х |Х - Х | х 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(Х + Х )
1 2
где:
Х , Х - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,
таблица 1), %.
Российский государственный аграрный университет — МСХА имени К.А. Тимирязева. Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов».