Библиотека
"МУК 4.1.2086-06. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств тринексапак-этила и его основного метаболита тринексапака-кислоты в воде, тринексапак-этила по метаболиту тринексапаку-кислоте в почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"

МУК 4.1.2086-06. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств тринексапак-этила и его основного метаболита тринексапака-кислоты в воде, тринексапак-этила по метаболиту тринексапаку-кислоте в почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

№ МУК 4.1.2086-06Действующий акт

Актуально на 31.10.2026.

Как цитировать: "МУК 4.1.2086-06. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств тринексапак-этила и его основного метаболита тринексапака-кислоты в воде, тринексапак-этила по метаболиту тринексапаку-кислоте в почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии". МУК 4.1.2086-06. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2086-06

(утв. Роспотребнадзором 30.07.2006)

Примечание

Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 1 сентября 2006 года.

Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко

30 июля 2006 года

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТРИНЕКСАПАК-ЭТИЛА И ЕГО ОСНОВНОГО МЕТАБОЛИТА ТРИНЕКСАПАКА-КИСЛОТЫ В ВОДЕ, ТРИНЕКСАПАК-ЭТИЛА ПО МЕТАБОЛИТУ ТРИНЕКСАПАКУ-КИСЛОТЕ В ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ КОЛОСОВЫХ КУЛЬТУР МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

МУК 4.1.2086-06

Дата введения

1 сентября 2006 года

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации тринексапак-этила и его основного метаболита тринексапака-кислоты в воде в диапазоне 0,002 — 0,02 мг/куб. дм; тринексапак-этила по метаболиту тринексапаку-кислоте в почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур в диапазонах 0,1 — 1 мг/кг; 0,05 — 0,5 мг/кг и 0,1 — 1 мг/кг соответственно.

Тринексапак-этил (CGA 163935) — действующее вещество препарата МОДУС, КЭ (250 г/л) фирма-производитель «Сингента».

4-циклопропил(гидрокси)метилен-3,5-диоксоциклогексанкарбоновая кислота, этиловый эфир (IUPAC).

Структурная формула (не приводится).

C H O . 13 16 5

Мол. масса: 252,3.

    Белое  твердое  вещество  без запаха (технический продукт с содержанием
д.в  >=  92%  - жидкость (30 °С) от желтого до красно-коричневого цвета или
полурасплавившаяся  масса  (20 °С)  со слабым  сладким запахом. Температура
плавления:  36  °С, кипения > 270 °С. Давление паров: 1,6 мПа (20 °С); 2,16
мПа  (25 °С). Коэффициент  распределения  н-октанол/вода:  K   log  Р = 1,6

ow

(pH 5,3; 25 °С).  Плотность  1,215   г/куб. см  (20  °С).  Растворимость  в
этаноле,  ацетоне,  толуоле,  н-октаноле - 100%; н-гексане  -  5%  (25 °С).
Растворимость в воде (г/куб. дм, 25 °С): 2,8 (pH 4,9); 10,2 (pH 5,5);  21,1

(pH 8,2).

Вещество стабильно к нагреванию до температуры кипения. Фотолитически и гидролитически устойчиво при нормальных условиях окружающей среды (pH 6 — 7, 25 °С), менее стабильно в щелочах. рКа 4.57.

Основным продуктом деградации тринексапак-этила является тринексапак-кислота.

Краткая токсикологическая характеристика тринексапак-этила

Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс — более 4460 мг/кг; 50 острая дермальная токсичность (LD ) для крыс — более 4000 мг/кг; острая 50 ингаляционная токсичность (LC ) для крыс — более 5300 мг/куб. м воздуха 50 (48 часов).

Тринексапак-этил не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз кроликов.

Основной метаболит тринексапак-этила: тринексапак-кислота (CGA 179500).

4-циклопропил(гидрокси)метилен-3,5-диоксоциклогексанкарбоновая кислота (IUPAC).

Структурная формула (не приводится).

C H O . 11 12 5

Мол. масса: 224,2.

Бесцветный порошок без запаха. Температура плавления: 144,4 °С, -3

кипения - 220 °С. Давление паров при 25 °С: 1,41 х 10    мПа.   Коэффициент
распределения  н-октанол/вода:  K   log  P =  1,8  (pH 2).  Плотность  1,41

ow

(20 °С). Растворимость в воде (г/куб. дм): 13 (pH 5); 200 (pH 6,8); 260 (pH 8,4).

    Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм):  ацетон  -  95,
этилацетат - 37, метанол - 84, октанол - 17. pKa  5,32; рКа  3,93.
                                                1          2

Область применения препарата

Препарат МОДУС, КЭ (250 г/л), д.в. тринексапак-этил — регулятор роста растений, рекомендуемый для применения на зерновых — пшеница, ячмень (яровые и озимые), рожь (озимая), овес, а также рапсе с нормой расхода 0:25 — 0,5 л/га (1 — 3 опрыскивания с интервалом 7 дней) для зерновых и 1,0 — 1,5 л/га для рапса.

Рекомендуемые гигиенические нормативы: ПДК в воде водоемов — 0,01 мг/куб. дм, ОДК в почве — 0,2 мг/кг, ВМДУ в зерне зерновых колосовых — 0,1 мг/кг.

1. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ

Определяемое вещество	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (куб. дм)	Показатель точности (граница относительной погрешности), +/- дельта, %, Р = 0,95	Стандартное отклонение повторяемости, сигма , % r	Предел повторяемости, r, %	Предел воспроизводимости, R, %
Вода
Тринексапакэтил	от 0,002 до 0,01 вкл.	100	6,5	18	21
Тринексапакэтил	более 0,01 до 0,02 вкл.	50	4,6	13	16
Тринексапаккислота	от 0,002 до 0,01 вкл.	100	4,7	13	15
Тринексапаккислота	более 0,01 до 0,02 вкл.	50	5,8	16	19
Почва
Тринексапаккислота	от 0,1 до 1	50	5,6	16	19
Зерно
Тринексапаккислота	от 0,05 до 0,1 вкл.	50	5,2	15	18
Тринексапаккислота	более 0,1 до 0,5 вкл.	25	4,9	14	16
Солома
Тринексапаккислота	от 0,1 до 1	25	5,7	16	19

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.

Таблица 2

Определяемое вещество	Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20
Определяемое вещество	Предел обнаружения, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Среднее значение определения, %	Стандартное отклонение, S, %	Доверительный интервал среднего результата, %
Вода
Тринексапакэтил	0,002	0,002 — 0,02	80,0	6,1	+/- 3,2
Тринексапаккислота	0,002	0,002 — 0,04	81,0	4,6	+/- 2,4
Почва
Тринексапаккислота	0,1	0,1 — 1,0	80,1	4,1	+/- 2,2
Зерно
Тринексапаккислота	0,05	0,05 — 0,5	80,8	5,3,	+/- 2,8
Солома
Тринексапаккислота	0,1	0,1 — 1,0	80,5	4,6	+/- 2,4

2. Метод измерений

Методика основана на определении веществ с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором.

Определение действующего вещества — тринексапак-этила и его метаболита тринексапака-кислоты в образцах воды включает экстракцию дихлорметаном, последующую очистку на патронах С18 Sep Pak (определение тринексапака-этила) или Oazis(R) МАХ (определение тринексапака-кислоты). Контроль тринексапак-этила в образцах почвы, зерна, соломы осуществляется по содержанию его основного метаболита тринексапака-кислоты после экстракции из анализируемого образца смесью метанол — фосфатный буфер (pH 7), последовательной очистки экстракта на концентрирующих патронах С18 Sep Pake, затем Oazis(R) MAX.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства,

реактивы и материалы

3.1 Средства измерений

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым Номер Госреестра 15945-97 детектором с переменной длиной волны (фирмы Perkin-Elmer, США)

Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104

Весы лабораторные общего назначения ГОСТ 7328 с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г

Колбы мерные вместимостью 2-100-2,2-500-2, ГОСТ 1770 2-1000-2

РН-метр модель pH-211 (фирмы HANNA Instruments, Номер Госреестра 14300-94 Германия)

Меры массы ГОСТ 7328

Пипетки градуированные 2-го класса точности ГОСТ 29227 вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 куб. см

Пробирки градуированные с пришлифованной ГОСТ 1770 пробкой вместимостью 5 и 10 куб. см

Цилиндры мерные 2-го класса точности ГОСТ 1770 вместимостью 25, 50, 100, 500 и 1000 куб. см

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2 Реактивы

Тринексапак-этил, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества 99,6% (Сингента, Швейцария)

Тринексапак-кислота (CGA 179500), аналитический стандарт с содержанием основного вещества 99% (Сингента, Швейцария)

Ацетонитрил для хроматографии, хч                           ТУ 6-09-4326-76
Вода деионизованная                                         ГОСТ 6702

Калий фосфорнокислый однозамещенный, хч ГОСТ 4198

Кислота ортофосфорная, хч, 85% ГОСТ 6552

Кислота серная, хч ГОСТ 4204

Кислота соляная (хлороводородная), хч ГОСТ 3118

Кислота уксусная, лед., хч ГОСТ 61

Метилен хлористый (дихлорметан), хч ГОСТ 12794

Метиловый спирт (метанол), хч ГОСТ 6995

Натрий гидроксид (натр едкий), хч ГОСТ 4328

Натрий сернокислый, безводный, хч ГОСТ 4166

Натрий фосфорнокислый двузамещенный, 12-водный, хч ГОСТ 4172

Натрий хлористый, хч ГОСТ 4233

Тетрабутиламмоний гидросульфат (Merck, Германия)

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3 Вспомогательные устройства, материалы

Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с ТУ 64-1-2851-78

Баня ультразвуковая фирмы Донау (Швейцария)

Бумажные фильтры «красная лента» обеззоленные или ТУ 6-09-2678-77 фильтры из хроматографической бумаги Ватман 3ММ

Воронка Бюхнера ГОСТ 25336

Воронки делительные вместимостью 150, 250 и 1500 куб. см ГОСТ 25336

Воронки конусные диаметром 30 — 37 и 60 мм ГОСТ 25336

Груша резиновая

Дефлегматор елочный ГОСТ 9773

Колба Бунзена ГОСТ 25336

Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 250 куб. см ГОСТ 9737

Колбы плоскодонные вместимостью 100, 250, 400 — 500 ГОСТ 9737 куб. см

Колбы грушевидные на шлифе вместимостью 100 — 150 ГОСТ 9737 куб. см

Мембранные фильтры капроновые диаметром 47 мм

Набор для фильтрации растворителей через мембрану

Насос водоструйный вакуумный ГОСТ 10696

Стаканы химические вместимостью 100, 500 куб. см ГОСТ 25336

Стекловата

Стеклянные палочки

Патроны для твердофазной экстракции С18 Sep Pak, Classik (Waters, США)

Патроны для твердофазной экстракции Oazis(R) MAX бсс/500 mg (Waters, США)

Ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi,

Швейцария

Установка для перегонки растворителей

Холодильник водяной обратный ГОСТ 9737

Хроматографическая колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая Кромасил 100 С18, зернением 7 мкм

Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50 — 100 куб. мм

Шприцы медицинские с разъемом Льюера вместимостью 5 ГОСТ 22090 и 10 куб. см

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;
выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка ацетонитрила (при необходимости), приготовление градуировочных растворов, растворов внесения, буферных растворов, смесей для экстракции, для приготовления градуировочных растворов и растворения образцов, подвижных фаз для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка концентрирующих патронов С18 Sep Pak и Oazis(R) MAX.

7.1 Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.2 Приготовление 1 М и 0,1 М растворов ортофосфорной кислоты

Для приготовления 1 М раствора ортофосфорной кислоты в мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 68 куб. см 85%-ной ортофосфорной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

Для приготовления 0,1 М раствора ортофосфорной кислоты в мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 100 куб. см 1 М раствора ортофосфорной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

7.3 Приготовление 0,1%-ного раствора ортофосфорной кислоты

В мерную колбу вместимостью 500 куб. см помещают 200 — 300 куб. см дистиллированной воды, вносят 0,5 куб. см ортофосфорной кислоты, перемешивают, доводят водой до метки, вновь перемешивают.

7.4 Приготовление 1 М и 0,1 М растворов гидроксида натрия

Для приготовления 1 М раствора гидроксида натрия в мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 40 г гидроксида натрия, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

Для приготовления 0,1 М раствора гидроксида натрия в мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 100 куб. см 1 М раствора гидроксида натрия, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

7.5 Приготовление 1 № и 0,1 № растворов серной кислоты

Для приготовления 1 № раствора серной кислоты в мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 300 — 400 куб. см деионизованной воды, вносят 28 куб. см концентрированной серной кислоты, перемешивают, доводят водой до метки, вновь перемешивают.

Для приготовления 0,1 № раствора серной кислоты в мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 100 куб. см 1 № раствора серной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

7.6 Приготовление 0,12 № раствора соляной кислоты

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 30 — 40 куб. см деионизованной воды, вносят 10 куб. см концентрированной соляной кислоты, перемешивают, доводят водой до метки, вновь перемешивают.

7.7 Приготовление фосфатного буферного раствора (pH 7)

    В  мерную  колбу  вместимостью 1000 куб. см помещают 14,684 г Na HPO  х
                                                                    2   4
12H O  (0,041 моль) и 3,81 КН РО  г (0,028 моль), доводят объем раствора до
   2                         2  4
метки  деионизованной  водой,  перемешивают.  Контролируют  pH  раствора  с
помощью  pH-метра,  при необходимости доводят его значение до 7 добавлением

0,1 М растворов гидроксида натрия или ортофосфорной кислоты.

7.8. Приготовление смеси растворителей для градуировочных растворов и растворения образцов при определении тринексапака-кислоты

В коническую колбу вместимостью 100 куб. см помещают 90 куб. см деионизованной воды, 5 куб. см фосфатного буферного раствора (pH 7), 5 куб. см ацетонитрила и 0,4 г тетрабутиламмоний гидросульфата, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

7.9 Приготовление водного фосфатного буферного раствора (pH 2)

В коническую колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 30 куб. см 1 М раствора ортофосфорной кислоты, 20 куб. см 1 № раствора серной кислоты, 20 куб. см 1 М раствора гидроксида натрия, 660 куб. см деионизованной воды и 4 г тетрабутиламмоний гидросульфата, перемешивают. Контролируют pH раствора с помощью pH-метра, при необходимости доводят его значение до 2 добавлением 1 М растворов гидроксида натрия или ортофосфорной кислоты.

7.10 Приготовление смеси растворителей для экстракции тринексапака-кислоты

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 30 куб. см метанола, 56 куб. см деионизованной воды и 14 куб. см фосфатного буферного раствора (pH 7), перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

7.11 Приготовление смеси растворителей для элюции тринексапак-этила с концентрирующего патрона С18 Sep Pak

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 500 куб. см ацетонитрила, 500 куб. см 0,1%-ного раствора ортофосфорной кислоты, добавляют 3 куб. см ледяной уксусной кислоты перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

7.12 Подготовка концентрирующих патронов С18 Sep Pak и Oazis(R) МАХ

Концентрирующий патрон промывают с помощью медицинского шприца 10 куб. см метанола со скоростью прохождения растворителя через патрон 1 — 2 капли в сек., затем 10 куб. см деионизированной воды. Патроны готовят непосредственно перед использованием.

7.13 Подготовка подвижной фазы № 1 для ВЭЖХ (определение тринексапак-этила)

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 500 куб. см ацетонитрила, 500 куб. см деионизованной воды, 1 куб. см ортофосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

7.14 Подготовка подвижной фазы № 2 для ВЭЖХ (определение тринексапака-кислоты)

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 720 куб. см водного фосфатного буферного раствора (pH 2) и 280 куб. см ацетонитрила, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

7.15 Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.13 или 7.14) при скорости подачи растворителя 1 куб. см/мин. не менее 2-х часов до установления стабильной базовой линии.

7.16 Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения

7.16.1 Исходные растворы тринексапак-этила и тринексапака-кислоты для градуировки (концентрация 200 мкг/куб. см)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,02 г тринексапак-этила (или тринексапака-кислоты), растворяют в 40 — 50 куб. см ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.

Растворы хранят в холодильнике при температуре 4 — 6 °С в течение 3-х месяцев.

7.16.2 Растворы тринексапак-этила и тринексапака-кислоты № 1 для градуировки (концентрация 10 мкг/куб. см)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 5 куб. см исходного раствора тринексапак-этила (или тринексапака-кислоты) с концентрацией 200 мкг/куб. см (п. 7.16.1), разбавляют ацетонитрилом до метки.

Градуировочные растворы № 1 хранят в холодильнике при температуре 4 — 6 °С в течение месяца.

Раствор тринексапак-этила с концентрацией 10 мкг/куб. см используют для приготовления проб воды с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом «внесено-найдено», а также контроле качества результатов измерений методом добавок.

7.16.3. Рабочие растворы № 2 — 5 тринексапак-этила для градуировки (концентрация 0,1 — 1,0 мкг/куб. см)

В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 куб. см градуировочного раствора № 1 тринексапак-этила с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.16.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.13, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2 — 5 с концентрацией тринексапак-этила 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/куб. см соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед употреблением.

7.16.4. Рабочие растворы № 2 — 6 тринексапака-кислоты для градуировки (концентрация 0,1 — 1,0 мкг/куб. см)

В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 куб. см градуировочного раствора № 1 тринексапака-кислоты с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.16.2), доводят до метки смесью растворителей, приготовленной по п. 7.8, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2 — 5 с концентрацией тринексапака-кислоты 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/куб. см соответственно.

Растворы хранят в холодильнике при температуре 4 — 6 °С в течение 5-ти дней.

7.16.5 Растворы внесения тринексапака-кислоты (концентрация 1 и 10 мкг/куб. см)

В 2 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 0,5 и 5 куб. см исходного раствора тринексапака-кислоты с концентрацией 200 мкг/куб. см (п. 7.16.1), доводят до метки деионизованной водой, тщательно перемешивают, получают растворы с концентрацией тринексапака-кислоты 1,0 и 10 мкг/куб. см соответственно.

Растворы хранят в холодильнике при температуре 4 — 6 °С в течение 5-ти дней.

Эти растворы используют для приготовления проб воды, почвы, зерна и соломы с внесением тринексапака-кислоты при оценке полноты извлечения вещества методом «внесено-найдено», а также контроле качества результатов измерений методом добавок.

7.17 Установление градуировочных характеристик

Градуировочные характеристики, выражающие зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации тринексапак-этила (или тринексапака-кислоты) в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3.1 или 9.3.2. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТами Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб», 1743.01-83 «Почвы. Общие требования к отбору проб», 26950-89 «Почвы. Отбор проб», 13586.3-83 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб», Р 50436-92 «Зерновые. Отбор проб зерна», 27262-87 «Корма растительного происхождения. Методы отбора проб», «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов (N 2051-79 от 21.08.79).»

Пробы воды анализируют в день отбора или замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре -18 °С.

Образцы почвы подсушивают в темноте (при температуре до 160 °С) до постоянного веса, помещают в герметичную тару и хранят в защищенном от света месте при комнатной температуре не более 6-ти месяцев.

Для длительного хранения образцы почвы замораживают и хранят при температуре -18 °С.

Зерно и солому подсушивают в темноте до постоянного веса и хранят в тканевых мешочках в сухом, защищенном от света месте при комнатной температуре не более 6-ти месяцев. Измельченные пробы зерна (аналитические образцы массой 20 г) замораживают и хранят при температуре -18 °С.

Перед анализом воду фильтруют через неплотный бумажный фильтр, почву просеивают через сито с диаметром отверстий 5 мм, зерно и солому измельчают.

9. Выполнение определения

9.1 Вода

9.1.1 Определение тринексапак-этила

9.1.1.1 Экстракция

Образец анализируемой воды объемом 750 куб. см помещают в делительную воронку вместимостью 1500 куб. см, вносят 30 куб. см насыщенного раствора хлористого натрия, перемешивают, доводят pH раствора до 3 +/- 0,1 с помощью 0,12 № соляной кислоты или 0,1 № гидроксида натрия (контролируя его значение по pH-метру). Затем в воронку добавляют 50 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний органический слой переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см, фильтруя его через 2-х см слой безводного сульфата натрия, помещенный в конусную химическую воронку диаметром 60 мм, снабженную бумажным фильтром «красная лента». Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды порциями хлористого метилена по 50 куб. см. Отстоявшийся слой хлористого метилена (нижняя фаза) фильтруют в колбу с ранее полученным экстрактом.

Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С, подвергают очистке в соответствии с п. 9.1.1.2.

9.1.1.2 Очистка экстракта

Остаток в колбе, полученный по п. 9.1.1.1, растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, помещая на 30 сек. на ультразвуковую баню, добавляют 4 куб. см деионизованной воды, вновь помещают на 30 сек. на ультразвуковую баню. Затем полученный раствор вносят с помощью медицинского шприца на концентрирующий патрон С18 Sep Pak, подготовленный по п. 7.12 со скоростью пропускания раствора 1 — 2 капли в сек. После нанесения пробы патрон промывают 5 куб. см смеси ацетонитрил:вода (1:3, по объему), элюат отбрасывают. Вещество элюируют с патрона 15 куб. см смеси ацетонитрил — 0,1% ортофосфорная кислота (8:2, по объему) + 0,3% уксусной кислоты (приготовленной по п. 7.11), собирая элюат в коническую колбу с пришлифованной пробкой, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр и анализируют содержание тринексапак-этила по п. 9.3.1.

9.1.2 Определение тринексапака-кислоты

9.1.2.1 Экстракция

Образец анализируемой воды объемом 125 куб. см <*> помещают в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, вносят 10 куб. см насыщенного раствора хлористого натрия и 5 куб. см 1 № серной кислоты, перемешивают. Затем в воронку добавляют 20 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний органический слой переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще трижды порциями хлористого метилена по 20 куб. см. Отстоявшийся слой хлористого метилена (нижняя фаза) переносят в колбу с ранее полученным экстрактом.

<*> Выбор данного объема анализируемого образца воды обеспечивает аналогичный предел обнаружения основного вещества и метаболита.

К объединенному экстракту добавляют 5 куб. см фосфатного буферного раствора (pH 7), упаривают хлористый метилен на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С, оставшийся водный раствор подвергают очистке в соответствии с п. 9.1.2.2.

9.1.2.2 Очистка экстракта

Раствор в колбе, полученный по п. 9.1.2.1, вносят с помощью медицинского шприца на концентрирующий патрон Oazis MAX, подготовленный по п. 7.12 со скоростью пропускания раствора 1 — 2 капли в сек. После нанесения пробы патрон промывают 5 куб. см смеси метанол:вода (3:7, по объему), затем 5 куб. см деионизованной воды элюаты отбрасывают. Вещество элюируют с патрона 10 куб. см 0,1 № серной кислоты, собирая элюат в делительную воронку вместимостью 150 куб. см. Вносят в воронку 5 куб. см насыщенного раствора хлористого натрия и 10 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний органический слой переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды порциями хлористого метилена по 10 куб. см. Отстоявшийся слой хлористого метилена (нижняя фаза) переносят в колбу с ранее полученным экстрактом.

Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С, остаток растворяют в 2,5 куб. см смеси растворителей, подготовленной по п. 7.11 (помещая на ультразвуковую баню на 30 — 40 сек.), фильтруют через мембранный фильтр и анализируют содержание тринексапака-кислоты по п. 9.3.2.

9.2 Почва, зерно, солома

9.2.1 Экстракция

Образец измельченного зерна массой 20 г, соломы массой 10 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 60 куб. см смеси для экстракции, приготовленной по п. 7.10, и помещают на встряхиватель на 2 часа.

Образец сухо-воздушной почвы массой 10 г помещают в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 60 куб. см смеси для экстракции, приготовленной по п. 7.10, и кипятят с обратным холодильником в течение 2-х часов.

Пробам дают отстояться 1 час, затем надосадочную жидкость фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной фильтр «красная лента». Аликвоту отфильтрованного экстракта объемом 15 куб. см (1/4 часть экстракта, эквивалентная 5 г зерна и 2,5 г соломы и почвы) переносят в коническую колбу или стакан вместимостью 100 куб. см и подвергают очистке по п. 9.2.2.

9.2.2 Очистка экстракта

Раствор в колбе, полученный по п. 9.2.1 вносят с помощью медицинского шприца на 2 последовательно соединенных концентрирующих патрона С18 Sep Pak, подготовленных по п. 7.12, со скоростью пропускания раствора 1 — 2 капли в сек.

Пропущенный через патроны раствор собирают в коническую колбу (или химический стакан) вместимостью 100 куб. см. Далее патроны (не разъединяя) промывают смесью метанол:вода (2:8, по объему) дважды порциями по 5 куб. см. Все элюаты собирают вместе в конической колбе, перемешивают и вносят с помощью медицинского шприца на концентрирующий патрон Oazis MAX, подготовленный по п. 7.12, со скоростью пропускания раствора 1 — 2 капли в сек. После нанесения пробы патрон промывают 5 куб. см смеси метанол:вода (3:7, по объему), затем 5 куб. см деионизованной воды, элюаты отбрасывают. Вещество элюируют с патрона 20 куб. см 0,1 № серной кислоты, собирая элюат в делительную воронку вместимостью 150 куб. см. Вносят в воронку 5 куб. см насыщенного раствора хлористого натрия и 25 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. Нижний органический слой переносят в круглодонную колбу вместимостью 150 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды порциями хлористого метилена по 25 куб. см. Отстоявшийся слой хлористого метилена (нижняя фаза) объединяют с ранее полученным экстрактом, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С. Остаток растворят в 2,5 куб. см смеси растворителей, подготовленной по п. 7.11 (помещая на ультразвуковую баню на 30 — 40 сек.), фильтруют через мембранный фильтр и анализируют содержание тринексапака-кислоты по п. 9.3.2.

9.3 Условия хроматографирования

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором (фирмы Perkin-Elmer, США)

Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Кромасил 100 С18, зернением 7 мкм.

Температура колонки: комнатная

Скорость потока элюента: 1 куб. см/мин.

Рабочая длина волны: 280 нм

Объем вводимой пробы: 20 куб. мм

Чувствительность: 0,005 ед. абсорбции на шкалу

9.3.1 Определение тринексапак-этила

Подвижная фаза: ацетонитрил — вода — ортофосфорная кислота (50:50:0,1, по объему)

Ориентировочное время выхода тринексапак-этила: 8,4 — 8,7 мин.

Линейный диапазон детектирования 2 — 20 нг

Образцы, дающие пики, большие чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой № 1, приготовленной по п. 7.7.

9.3.2 Определение тринексапака-кислоты

Подвижная фаза: фосфатный буфер (pH 2) — ацетонитрил (72:28, по объему) Ориентировочное время выхода тринексапака-кислоты: 10,5 — 10,9 мин.

Линейный диапазон детектирования: 2 — 20 нг

Образцы, дающие пики, большие чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 мкг/куб. см, разбавляют смесью растворителей, приготовленной по п. 7.11.

10. Обработка результатов анализа

10.1 Вода

Содержание тринексапак-этила в пробе с учетом его основного метаболита тринексапака-кислоты в эквиваленте действующего вещества (Х, мг/куб. дм) рассчитывают по формуле:

                            (А + Б х К) V

Х = -------------, W

где:

А, Б — концентрации тринексапак-этила и тринексапака-кислоты, соответственно найденные по градуировочным графикам, мкг/куб. см;

V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

W — объем анализируемого образца, куб. см.

К — коэффициент пересчета содержания тринексапака-кислоты на эквивалент тринексапак-этила по соотношению молекулярных масс (равен 1,125).

10.2 Почва, растительный материал

Содержание тринексапак-этила в пробе по его основному метаболиту тринексапаку-кислоте в эквиваленте действующего вещества (Х, мг/кг) рассчитывают по формуле:

                            Б х К х V х С

Х = -------------, m

где:

Б — концентрация тринексапака-кислоты, найденная по градуировочному графику, мкг/куб. см;

V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

m — масса анализируемого образца, г;

К — то же;

С = 4 с учетом объема экстракта, взятого для анализа.

11. Проверка приемлемости результатов

параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

                          2 х |Х  - Х | х 100
                                1    2
                          ------------------- <= r,                     (1)
                               (Х  + Х )
                                 1    2

где:

    Х , Х  - результаты параллельных определений, мг/кг (куб. дм);
     1   2

r — значение предела повторяемости (таблица 1), при этом r = 2,8 сигма . r

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:
      _

(Х +/- ДЕЛЬТА), мг/кг (куб. дм) при вероятности Р = 0,95,

где:
_
Х   -   среднее   арифметическое  результатов  определений,  признанных

приемлемыми, мг/кг (куб. дм); ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг (куб. дм);

ДЕЛЬТА = дельта х Х / 100,

дельта   -   граница  относительной  погрешности  методики  (показатель

точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе воды — менее 0,002 мг/куб. дм» <*>;

«содержание вещества в пробе зерна — менее 0,05 мг/кг» <*>;

«содержание вещества в пробе соломы и почвы — менее 0,1 мг/кг» <*>.

<*> — 0,002 мг/ куб. дм, 0,05 мг/кг и 0,1 мг/кг — пределы обнаружения в воде, зерне, соломе (почве) соответственно.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки С должна удовлетворять условию: д

                          С  = ДЕЛЬТА  _  + ДЕЛЬТА  _ ,
                           д         л,Х          л,Х'

где:

    +/-  ДЕЛЬТА       -  (+/-  ДЕЛЬТА  _ )   -  характеристика  погрешности
               л,Х                   л,Х'
(абсолютная  погрешность)  результатов  анализа, соответствующая содержанию
компонента  в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента

в образце с добавкой соответственно), мг/кг (куб. дм), при этом:

ДЕЛЬТА = +/- 0,84 ДЕЛЬТА, л где: ДЕЛЬТА — граница абсолютной погрешности, мг/кг (куб. дм);

ДЕЛЬТА = 5 х Х / 100,

дельта   -   граница  относительной  погрешности  методики  (показатель

точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

Результат контроля процедуры К рассчитывают по формуле: к

                                  _    _
                             К  = Х' - Х - С ,
                              к             д

где:

    _   _
    Х', Х, С  - среднее арифметическое результатов параллельных определений

д

(признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг (куб. дм);

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

                          _____________________

                             /     2            2
                       К = \/ДЕЛЬТА  _  + ДЕЛЬТА  _.
                                   л,Х'         л,Х

    Проводят  сопоставление результата контроля процедуры (К ) с нормативом

к

контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

|К | <= К, (2) к

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3 Проверка приемлемое результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R).

                          2 х |Х  - Х | х 100
                                1    2
                          ------------------- <= R,                     (3)
                               (Х  + Х )
                                 1    2

где:

    Х , Х   - результаты   измерений  в  двух  разных  лабораториях,  мг/кг
     1   2

(куб. дм); R — предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций,

таблица 1), %.

14. Разработчики

Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана, Роспотребнадзор.