МУК 4.1.2019-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств феноксапроп-П-этила по метаболиту феноксапропу-П в капусте, горохе и моркови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.2019-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств феноксапроп-П-этила по метаболиту феноксапропу-П в капусте, горохе и моркови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии". МУК 4.1.2019-05. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2019-05
(утв. Роспотребнадзором 17.10.2005)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 № 01/14262-8-32). Документ введен в действие с 17 октября 2005 года.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека
Г. Г. Онищенко
17 октября 2005 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ФЕНОКСАПРОП-П-ЭТИЛА ПО МЕТАБОЛИТУ ФЕНОКСАПРОПУ-П В КАПУСТЕ, ГОРОХЕ И МОРКОВИ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
с момента утверждения
1. Подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.
1. ВВОДНАЯ ЧАСТЬ
Фирма-производитель: Байер КропСайенс (Германия).
Торговое название: Пума супер, Фуроре Ультра.
Действующее вещество: феноксапроп-П-этил.
Этил(R)-2-[4-[(6-хлор-2-бензоксазолил)окси]фенокси]пропаноат (С.А.).
Структурная формула (не приводится).
Эмпирическая формула: C H ClNO . 18 16 5
Белое твердое вещество без запаха.
Температура плавления: 89 — 91 °С. -4
Давление паров при 20 °С: 5,3 х 10 мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: K log P = 4,58.
ow
Растворимость (г/л) при 20 °С: ацетон — 200, толуол — 200, этилацетат — более 200, этанол — 24; растворимость в воде 0,7 мг/л.
Вещество стабильно в течение 90 дней при 50 °С, не разрушается на свету, нестабильно в нейтральной и особенно щелочной средах: DT = 1000
50
дней (pH 5), 100 дней (pH 7), 2,4 дня (pH 9).
Краткая токсикологическая характеристика:
Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс 3150 — 4000, для мышей — 50 более 5000 мг/кг, острая дермальная токсичность (LD ) для крыс — более 50 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC ) для крыс — более 1,224 50 мг/л воздуха. Феноксапроп-П-этил не вызывает раздражения кожи. LC для рыб 50
- 0,46 — 0,58 мг/л (96 час.).
Феноксапроп-П-этил нетоксичен для пчел, птиц, дождевых червей.
Гигиенические нормативы: ОДК в почве — 0,04 мг/кг; ПДК в воде — 0,0003 мг/куб. дм; МДУ в зерне хлебных злаков, моркови, свекле столовой, подсолнечнике (масло) и луке — 0,01, свекле сахарной, сое — 0,05, капусте — 0,02, рапсе, горохе — 0,2 мг/кг.
Основной метаболит феноксапроп-П-этила: феноксапроп-П
(R)-2-[4-[(6-хлорбензоксазол-2-илокси)]фенокси]пропионовая кислота (ИЮПАК).
(R)-2-[4-[(6-хлор-2-бензоксазолил)окси]фенокси]пропановая кислота (С.А.).
Структурная формула (не приводится).
Эмпирическая формула: C H ClNO . 16 12 5
Светло-бежевый порошок со слабым запахом.
Температура плавления: 155 — 161 °С. -1
Давление паров при 20 °С: 1,8 х 10 мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: K log P = 1,83 - 0,24 (pH 5
ow
- pH 9).
Растворимость (г/л) при 20 °С: толуол — 0,5, метанол — 34, этилацетат — 36, ацетон — 80, вода — 0,27 (pH 5,1) и 61 (pH 7,0).
Другие физико-химические и токсикологические характеристики феноксапроп-П отсутствуют.
Феноксапроп-П-этил — послевсходовый гербицид системного действия из группы ингибиторов синтеза жирных кислот. Вещество быстро поглощается листьями и хорошо передвигается в акропетальном и базипетальном направлении в различные органы растения. Феноксапроп-П-этил эффективно уничтожает однолетние и многолетние злаковые сорняки в посевах свеклы, моркови, сои, льна, арахиса, хлопчатника, капусты, лука и картофеля, а в комбинации с антидотом используется для этих же целей и на посевах пшеницы, ржи и тритикале.
Проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ под торговым названием Пума-супер, КЭ (100 г феноксапроп-П-этила и 27 г антидота мефенпир-диэтила в 1 л препарата) и Фуроре Ультра, ЭМВ (110 г феноксапроп-П-этила в 1 л препарата) на посевах озимой и яровой пшеницы, свеклы, капусты, подсолнечника, гороха и моркови в качестве послевсходового гербицида при норме расхода 0,8 — 1,2 л/га и однократной обработке за сезон.
Феноксапроп-П-этил весьма лабильное вещество и при попадании в воду, почву или растение очень быстро метаболизируется до более устойчивого соединения — (R)-2-[4-[(6-хлорбензоксазол-2-илокси)]фенокси]пропионовой кислоты /феноксапроп-П/. Поэтому контроль за содержанием феноксапроп-П-этила в продукции растительного происхождения ведут по феноксапропу-П.
2. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ФЕНОКСАПРОП-П-ЭТИЛА ПО МЕТАБОЛИТУ ФЕНОКСАПРОПУ-П В КАПУСТЕ, ГОРОХЕ И МОРКОВИ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип методики
Методика основана на определении феноксапропа-П с помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после извлечения метаболита из растительного материала водным ацетонитрилом при ультразвуковой обработке, очистке экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем.
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
2.1.2 Избирательность метода
В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в интенсивной технологии выращивания капусты, гороха и моркови.
2.1.3 Метрологическая характеристика метода
| Анализируемый объект | Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20 | |||||
| Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение, S, % | Относительное отклонение, % | Доверительный интервал среднего, % | |
| Капуста | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 82,9 | 3,9 | 1,7 | +/- 3,6 |
| Горох | 0,05 | 0,05 — 0,5 | 84,1 | 3,7 | 1,6 | +/- 3,4 |
| Морковь | 0,01 | 0,01 — 0,1 | 83,3 | 4,1 | 1,8 | +/- 3,8 |
2.2. Реактивы, растворы, материалы
Феноксапроп-П с содержанием д.в. 99,1% (АгрЭво, Германия)
Ацетонитрил, ч, ТУ 6-09-3534-82
Вода бидистиллированная, ГОСТ 7602-72
Железо (II) сернокислое, хч, ГОСТ 4148-78
Калия перманганат, хч, ГОСТ 20490-75
Калий углекислый, хч, ГОСТ 4221-76
Кальция хлорид, хч, ГОСТ 4161-77
Кислота ортофосфорная, 87%, хч, ГОСТ 6552-80
Кислота серная, хч, ГОСТ 4204-77
Кислота хлористоводородная, хч, ГОСТ 3118-77
Натрия гидроксид, хч, ГОСТ 4328-77
Натрия сульфат безводный, хч, ГОСТ 4166-76
Натрий углекислый, хч, ГОСТ 83-63
Натрия хлорид, хч, ГОСТ 4233-77
Спирт метиловый, хч, ГОСТ 6995-77
Фосфора пентаксид, ч, МРТУ 6-09-5759-69
Этилацетат, ГОСТ 22300-76
Элюент № 1 для колоночной хроматографии: смесь этилацетат — метанол (7:3, по объему)
Элюент № 2 для колоночной хроматографии: смесь этилацетат — метанол (6:4, по объему)
Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрил — вода — ортофосфорная кислота (54:45,9:0,1, по объему)
Силикагель для адсорбционной хроматографии (Вельм, Германия) 1 степени активности или силикагель КСК (60 — 100 меш)
Фильтры бумажные, синяя лента, ТУ 6-09-1678
2.3. Приборы, аппаратура, посуда
Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором фирм Altex (США), Knauer (Германия) или аналогичный
Хроматографическая колонка стальная длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, заполненная Диасфером-110-С18 или Диасорбом 130-С16 Т (ЗАО БиоХимМак, РФ; 119899, Москва, Ленинские горы)
Шприц для ввода образцов в жидкостной хроматограф
Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ 19401-74
Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75
Встряхиватель механический, ТУ 64-1-1081-73
Гомогенизатор, МРТУ 42-1505-63, или аналогичный
Иономер ЭВ-74, ГОСТ 22261-76, или аналогичный
Мельница электрическая лабораторная, ТУ 46-22-236-79, или аналогичная
Ротационный испаритель тип ИР-1М, ТУ 25-11-917-76
Баня ультразвуковая, модель D-50, Branson Instr. Co., США, или аналогичная
Воронки делительные вместимостью 100, 250 мл, ГОСТ 25336-82
Воронки для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 9737-70
Колбы конические с притертыми пробками вместимостью 250 мл, ГОСТ 25336-82
Колбы мерные вместимостью 25, 50, 100 и 1000 мл, ГОСТ 1770-74
Колбы грушевидные вместимостью 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 25336-82
Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292-74Е
Пробирки градуированные с притертыми пробками вместимостью 5 и 10 мл, ГОСТ 10515-75
Цилиндры мерные вместимостью 50, 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 1770-74
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79).
Отобранные пробы зерна гороха подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4 °С не более трех месяцев. Кочаны и корнеплоды хранят в стеклянной посуде в холодильнике при температуре не выше 4 °С не более двух дней; при длительном хранении (не более трех месяцев) пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °С.
Перед анализом зерно размалывают на мельнице, сегменты кочанов и корнеплодов измельчают ножом.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1 Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем гексан последовательно промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего его сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
Этилацетат промывают равным объемом 5%-ного раствора углекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.
Диэтиловый эфир (1 л) предварительно встряхивают с 20 мл свежеприготовленного раствора железного купороса (30 г сульфата железа в 55 мл воды с добавлением 1,5 г концентрированной серной кислоты). Затем диэтиловый эфир последовательно промывают 0,5%-ным раствором перманганата калия, 5%-ным раствором гидроксида натрия и водой, после чего сушат над хлористым кальцием и перегоняют.
Ацетонитрил сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием.
2.5.2 Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ
При подготовке подвижной фазы для ВЭЖХ отмеряют 540 мл ацетонитрила, переносят в колбу на 1000 мл, добавляют 459 мл бидистиллированной воды и 1 мл ортофосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют и дегазируют.
2.5.3 Кондиционирование колонки
Промыть колонку для ВЭЖХ смесью ацетонитрил — вода — ортофосфорная кислота (54:45,9:0,1, по объему) в течение 30 минут при скорости подачи растворителя 1 мл/мин. Включить детектор и подождать стабилизации базовой линии (15 — 30 минут).
2.5.4 Приготовление стандартных растворов
Основной стандартный раствор феноксапропа-П с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,1% д.в., в ацетонитриле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике при температуре -12 °С не более месяца.
Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,01; 0,02; 0,05 и 0,10 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора метаболита соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для ВЭЖХ (п. 2.5.2) непосредственно в день проведения анализа.
При изучении полноты открывания феноксапропа-П в модельных матрицах используются ацетонитрильные растворы вещества.
2.5.5 Построение калибровочного графика
Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 20 мкл рабочего стандартного раствора феноксапропа-П с концентрацией 0,01; 0,02; 0,05; 0,10 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации метаболита в растворе в мкг/мл.
2.5.6 Подготовка колонки с силикагелем
В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 0,8 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию: 5 г силикагеля в 20 мл этилацетата. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 30 мл смеси этилацетат — метанол (1:1, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в секунду и затем 20 мл этилацетата.
2.5.7 Проверка хроматографического поведения феноксапропа-П на колонке с силикагелем
В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора феноксапропа-П с концентрацией 10 мкг/мл, отдувают растворитель потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 2 — 3 мл этилацетата и наносят на подготовленную колонку. Промывают колонку 40 мл элюента № 1 (смесь этилацетат — метанол, 7:3) и затем 60 мл элюента № 2 (смесь этилацетат — метанол, 6:4) со скоростью 1 — 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 5 мл каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 2,5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.2) и анализируют на содержание феноксапропа-П по п. 2.7.
Фракции, содержащие феноксапроп-П, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 10 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по п. 2.7.
Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.
Примечание: Профиль вымывания феноксапропа-П может меняться при использовании новых партий сорбента и растворителей.
2.6. Описание определения
2.6.1 Экстракция феноксапропа-П
2.6.1.1. Зерно. Навеску размолотого зерна (10 г) помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 100 мл 80%-ного ацетонитрила и помещают в ультразвуковую баню на 5 минут. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Растительный материал повторно экстрагируют 50 мл 80%-ного ацетонитрила в ультразвуковой бане в течение 3 минут и суспензию фильтруют. Из объединенного экстракта муки отбирают аликвоту (около 70 мл) раствора, эквивалентную 5 г зерна. Дальнейшую очистку проводят по пп. 2.6.2 и 2.6.3.
2.6.1.2. Корнеплоды, кочаны. К навеске (25 г) измельченного материала добавляют 125 мл 80%-ного ацетонитрила и гомогенизируют 3 минуты при 10000 об/мин., после чего суспензию помещают в ультразвуковую баню на 5 минут. К суспензии добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу на 250 мл. Осадок на фильтре промывают 50 мл 80%-ного ацетонитрила. Из объединенного экстракта отбирают пятую часть объема (около 35 мл) раствора, эквивалентную 5 г растительной ткани. Дальнейшую очистку проводят по пп. 2.6.2 и 2.6.3.
2.6.2 Очистка экстрактов
Отобранные аликвоты растительных (из пп. 2.6.1.1 и 2.6.1.2) экстрактов упаривают до объема 5 — 10 мл на роторном испарителе при температуре 40 °С. Водный остаток переносят в делительную воронку вместимостью 100 мл, приливают 15 мл бидистиллированной воды, 20 мл гексана и смесь встряхивают в течение 1 минуты. Органический слой отбрасывают. Водную фазу подкисляют 1 н HCl до pH 2, переносят в делительную воронку, прибавляют 20 мл диэтилового эфира и смесь встряхивают 1 минуту. Собирают органическую фазу и экстракцию водной фракции диэтиловым эфиром повторяют еще два раза (по 10 мл). Объединенную органическую фазу пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С.
2.6.3 Очистка на колонке с силикагелем
Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п. 2.6.2 экстрактов зерна, корнеплодов и кочанов, растворяют в 5 мл этилацетата и 3 мл полученного экстракта моркови и капусты или 1 мл экстракта зерна гороха вносят в подготовленную хроматографическую колонку (п. 2.5.6). Колонку промывают 20 мл смеси этилацетат-метанол (7:3, по объему), которые отбрасывают. Метаболит элюируют 40 мл смеси этилацетат — метанол (6:4, по объему) и собирают элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток экстрактов кочанов и корнеплодов растворяют в 3 мл, а экстракта зерна в 5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.2) и анализируют на содержание феноксапропа-П по п. 2.7.
2.7. Условия хроматографирования
Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Knauer (Германия)
Колонка стальная длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, заполненная Диасфером 110-С18, зернением 5 мкм
Температура колонки: комнатная
Подвижная фаза: ацетонитрил — вода — ортофосфорная кислота (54:45,9:0,1, по объему)
Скорость потока элюента: 0,7 мл/мин.
Чувствительность: 0,01 ед. абсорбции на шкалу
Время выхода метаболита: 9,5 мин.
Линейный диапазон детектирования: 0,2 — 2,5 нг.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,1 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.
2.8. Обработка результатов анализа
Содержание феноксапропа-П рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
H х A х V
1
где:
X - содержание феноксапропа-П в пробе, мг/кг;
H - высота пика образца, мм;
1
H - высота пика стандарта, мм;
0
A - концентрация стандартного раствора феноксапропа-П, мкг/мл;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
m - масса анализируемой части образца, г (для зерна - 1 г, для
корнеплодов и кочанов — 3 г).
При расчете содержания феноксапропа-П в эквивалентах феноксапроп-П-этила полученное значение X умножают на 1,08.
3. ТРЕБОВАНИЯ ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.
4. КОНТРОЛЬ ПОГРЕШНОСТИ ИЗМЕРЕНИЙ
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.