МУК 4.1.1953-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств хизалофоп-П-этила в репках лука, корнеплодах моркови и кочанах капусты по основному метаболиту хизалофоп-П кислоте методом капиллярной газожидкостной хроматографии
(утв. Роспотребнадзором 18.01.2005)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 № 01/14262-8-32). Документ введен в действие с 18 апреля 2005 года.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека
Г. Г. Онищенко
18 января 2005 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ХИЗАЛОФОП-П-ЭТИЛА В РЕПКАХ ЛУКА, КОРНЕПЛОДАХ МОРКОВИ И КОЧАНАХ КАПУСТЫ ПО ОСНОВНОМУ МЕТАБОЛИТУ ХИЗАЛОФОП-П КИСЛОТЕ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
18 апреля 2005 года
1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.
1. Вводная часть
1.1. Краткая характеристика препарата
Фирма-производитель: ЗАО Фирма «Август».
Действующее вещество (д.в.): хизалофоп-П-этил.
Название д.в. по номенклатуре ИЮПАК: (R)-2-[6-хлорхиноксалин-2-илокси)фенокси] пропионовой кислоты этиловый эфир.
Структурная формула д.в. (не приводится).
Эмпирическая формула д.в.: C H ClN O . 19 17 2 4
Молекулярная масса д.в.: 372,8.
Химически чистое вещество: светло-коричневые кристаллы.
Температура плавления д.в.: 76 — 77 °С.
Давление паров д.в. при 20 °С: 0,011 мПа.
Растворимость д.в. (г/л) при 20 °С: в воде — 0,0004, в гексане — 5,0, этаноле — 22, ксилоле — 360, ацетоне — 650.
Стабильность д.в.: устойчив к действию света, разлагается до хизалофоп-П кислоты под действием разбавленных кислот и щелочей.
1.2 Краткая токсикологическая характеристика д.в.
Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс — 1180 — 1210 мг/кг, 50 для мышей — 1750 — 1800 мг/кг. Не оказывает раздражающего действия на кожу.
Гигиенические нормативы: ПДК в воде водоемов санитарно-бытового пользования — 0,0001 мг/куб. дм, ОДК в почве — 0,8 мг/кг, МДУ в свекле сахарной, моркови, луке и капусте — 0,05 мг/кг, МДУ в свекле столовой — 0,01 мг/кг, ВМДУ в картофеле, томатах, сое (семена, масло) — 0,05 мг/кг.
1.3. Область применения препарата
Миура, КЭ — гербицид для борьбы с однолетними и многолетними злаковыми сорными растениями.
2. Метод определения хизалофоп-П-этила в репках лука, корнеплодах моркови и кочанах капусты по основному метаболиту хизалофоп-П кислоте с применением капиллярной газожидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на количественном определении хизалофоп-П кислоты, основного метаболита хизалофоп-П-этила и включает извлечение остаточных количеств хизалофоп-П кислоты из анализируемого объекта органическими растворителями, очистку экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и метилирование хизалофоп-П кислоты диазометаном. Количественное определение проводят методом внешнего стандарта с применением капиллярной газожидкостной хроматографии и термоионного детектора (ТИД).
2.1.2 Избирательность метода
Метод специфичен в присутствии других применяемых в сельском хозяйстве пестицидов. Способ очистки экстрактов, а также применение селективного детектора позволяет устранять влияние коэкстрактивных веществ на результаты анализа.
2.1.3 Метрологическая характеристика метода
Диапазоны измеряемых концентраций, пределы обнаружения и другие метрологические параметры метода представлены в таблицах 1 и 2.
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА
| Анализируемые объекты | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение S, % | Доверительный интервал среднего, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Репки лука Корнеплоды моркови Кочаны капусты | 0,025 0,025 0,025 | 0,025 — 0,2 0,025 — 0,2 0,025 — 0,2 | 85,7 84,1 86,1 | 4,5 4,3 3,9 | 4,9 5,5 4,7 |
ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХИЗАЛОФОП-П КИСЛОТЫ В МОДЕЛЬНЫХ ПРОБАХ (n = 6)
| Анализируемые объекты | Внесено, мг/кг | Извлечено, % | Доверительный интервал среднего результата, % |
|---|---|---|---|
| Репки лука | 0,025 0,05 0,1 0,2 | 79,7 84,5 87,6 90,8 | +/- 5,8 +/- 5,1 +/- 4,6 +/- 4,1 |
| Корнеплоды моркови | 0,025 0,05 0,1 0,2 | 78,8 82,3 85,7 89,5 | +/- 6,3 +/- 5,8 +/- 5,2 +/- 4,7 |
| Кочаны капусты | 0,025 0,05 0,1 0,2 | 80,3 84,6 87,8 91,5 | +/- 5,4 +/- 4,9 +/- 4,5 +/- 3,9 |
2.2. Реактивы, растворы, материалы
Аналитический стандарт хизалофоп-П кислоты.
Азот газообразный высокой чистоты, ТУ 301-07-25-89.
Ацетон, осч, ТУ 2633-004-11291058-94.
Вата медицинская, ТУ 9393-001-00302238-97.
Вода дистиллированная и перегнанная над KMnO и щелочью. 4
Водород газообразный высокой чистоты, ТУ 301-07-27-90.
н-Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.
Гелий газообразный (сжатый) очищенный марки «А», ТУ 51-940-80.
Дихлорметан, хч, ТУ 6-09-2662-77.
Изооктан эталонный, ГОСТ 12433-83.
Калия гидроокись, чда, ГОСТ 24363-80.
Натрий сернокислый б/в (сульфат), чда, ГОСТ 4166-76.
Натрий хлористый, чда, ГОСТ 4233-77.
N-Нитрозометилмочевина, хч, ТУ 6-09-11-1643-82.
Серная кислота, осч, ГОСТ 14262-78.
Смесь н-гексан:этиловый эфир, 70:30, по объему.
Спирт этиловый ректификат (этанол), ГОСТ 17299-78.
Фильтры бумажные, белая лента, ТУ 2642-001-42624157-98.
Фильтры бумажные, синяя лента, ТУ 2642-001-42624157-98.
Эфир этиловый (серный), ОСТ 84-2006-88.
2.3. Приборы, аппаратура, посуда
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая длиной 15 м, внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой SE-52, толщина слоя — 0,45 мкм.
Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73, или аналогичный.
Весы аналитические типа ВЛА-200, ГОСТ 34104-80.
Весы лабораторные типа ВЛКТ-500, ГОСТ 24104-80.
Воронки делительные емкостью 500 мл, ГОСТ 25336-82.
Воронки химические конусные, ГОСТ 25336-82.
Индикаторная бумага универсальная, ТУ 6-09-1181-76.
Колбы-концентраторы емкостью 150 и 250 мл, ГОСТ 25336-82.
Колбы плоскодонные емкостью 250 мл, ГОСТ 25336-82.
Колбы мерные со шлифом емкостью 25, 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Колпачки алюминиевые для герметизации флаконов, ГОСТ Р 51314-99.
Микрошприц МШ-10, ТУ 2-833-106.
Насос водоструйный, ГОСТ 10696-75.
Ротационный вакуумный испаритель типа ИР-1 или аналогичный.
Пипетки мерные емкостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292-74.
Приспособление для обжима колпачков на флаконах, ТУ 42-2-2442-73.
Пробирки мерные со шлифом емкостью 5,0 мл, ГОСТ 1770-74.
Установка для перегонки растворителей при атмосферном давлении.
Установка для упаривания растворителей в токе азота.
Установка ультразвуковая «Серьга» УЗМ002 или аналогичная.
Флаконы стеклянные (типа пенициллиновых) емкостью 5,0 мл, ТУ 64-2-10-87.
2.4. Подготовка к определению
2.4.1 Подготовка и очистка растворителей
Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С до объема 1,0 мл и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.
2.4.2 Приготовление стандартных растворов
Основной раствор хизалофоп-П кислоты с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением в смеси ацетон:этанол (80:20) 0,01 г аналитического стандарта в мерной колбе емкостью 100 мл. Раствор хранят в холодильнике при температуре +4 — 6 °С не более трех месяцев.
Рабочие стандартные растворы с концентрациями 4,0; 2,0; 1,0 и 0,5 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора хизалофоп-П кислоты соответствующим последовательным разбавлением ацетоном.
Для приготовления калибровочных растворов в пробирки мерные со шлифом емкостью 5,0 мл вносят по 1,0 мл рабочих растворов хизалофоп-П кислоты с концентрациями 0,5; 1,0; 2,0 и 4,0 мкг/мл. Растворители в пробирках упаривают в токе азота досуха и проводят метилирование хизалофоп-П кислоты.
В пробирки с сухим остатком добавляют по 2,0 мл свежеприготовленного (п. 2.4.4) эфирного раствора диазометана. Пробирки закрывают притертыми пробками и ставят на 12 — 14 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4 — 6 °С. После этого этиловый эфир в пробирках упаривают досуха в токе азота при комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в 1,0 мл изооктана и хроматографируют по п. 2.6.3.
2.4.3 Построение калибровочного графика
Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 2 мкл приготовленных по п. 2.4.2 растворов, содержащих хизалофоп-П кислоты (в виде хизалофоп-П-метила) в концентрациях 0,5; 1,0; 2,0 и 4,0 мкг/мл. Осуществляют не менее трех параллельных измерений и находят среднее значение высоты (площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика в мм (кв. мм) от концентрации хизалофоп-П кислоты в рабочих растворах в мкг/мл.
2.4.4 Приготовление эфирного раствора диазометана (из расчета метилирования хизалофоп-П кислоты в экстрактах 2-х проб)
N-Нитрозометилмочевину массой 0,5 г помещают во флакон емкостью 2,0 — 3,0 мл и герметизируют резиновой пробкой и колпачком с помощью приспособления для обжима колпачков на флаконах. Этиловый эфир объемом 4,0 мл вносят в другой флакон емкостью 5,0 мл, герметизируют резиновой пробкой и колпачком и охлаждают в морозильной камере холодильника в течение 30 минут.
После этого флаконы через предварительно проколотые пробки соединяют гибкой тефлоновой трубкой (внутр. диам. ~ 1,5 — 2,0 мм), одним концом погружая ее в этиловый эфир на всю глубину (флакон с охлажденным этиловым эфиром обязательно должен еще иметь свободный выход в атмосферу). Во флакон с нитрозометилмочевиной, используя шприц с тонкой иглой и прокалывая пробку, добавляют по каплям по стенке 50%-ный водный раствор гидроокиси калия (~ 0,3 мл) до прекращения реакции. Этиловый эфир при насыщении диазометаном окрашивается в ярко-желтый цвет.
Внимание! Приготовление эфирного раствора диазометана и процедуру метилирования необходимо обязательно проводить в работающем вытяжном шкафу.
2.5. Отбор, первичная обработка и хранение проб
Отбор проб для анализа проводят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979, № 2051-79.
Репки лука после отбора проб моют, обсушивают фильтровальной бумагой, удаляют шелуху и из каждой репки по осевой линии вырезают 1/4 часть. Корнеплоды моркови после отбора проб моют, обсушивают фильтровальной бумагой и из каждого корнеплода по осевой линии вырезают 1/2 часть. Полученные усредненные пробы измельчают, перемешивают и выделяют аналитические пробы.
Для длительного хранения аналитические пробы репок лука и корнеплодов моркови помещают в морозильную камеру с температурой -18 °С и хранят в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре.
В пробах капусты из каждого кочана по осевой линии вырезают 1/8 часть. Полученную среднюю пробу измельчают, перемешивают и выделяют аналитические пробы. Для длительного хранения аналитические пробы кочанов капусты помещают в морозильную камеру с температурой -18 °С и хранят в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре.
2.6. Проведение определения
2.6.1 Экстрагирование и очистка экстракта
Аналитическую пробу массой 10,0 +/- 0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, добавляют 150 мл смеси ацетон:этанол (80:20), слегка встряхивают и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане в течение 10 минут. После этого экстракт фильтруют через бумажный фильтр белая лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Содержимое колбы с пробой промывают 50 мл ацетона, который также фильтруют в колбу-концентратор.
При использовании аппарата для встряхивания в колбу с аналитической пробой вносят 150 мл смеси ацетон:этанол (80:20) и встряхивают в течение 60 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр белая лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Содержимое колбы с пробой промывают 50 мл ацетона, который также фильтруют в колбу-концентратор.
Колбу-концентратор с объединенным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворитель до объема 10 — 20 мл при температуре +40 °С. В колбу-концентратор добавляют 200 мл бидистиллированной воды и 5,0 мл 10%-ного водного раствора гидроокиси калия. Содержимое колбы перемешивают встряхиванием и выдерживают в холодильнике при температуре +4 — 6 °С в течение 4 — 5 часов. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр белая лента в делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку добавляют 20 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия и после перемешивания 75 мл дихлорметана. Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2-х минут. После 15-минутного отстаивания нижний дихлорметановый слой сливают и отбрасывают. Процедуру очистки экстракта с использованием 50 мл дихлорметана повторяют. Далее в воронку добавляют 30 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия и после перемешивания — 75 мл н-гексана. Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2-х минут. После 5-минутного отстаивания нижний водный слой сливают в химический стакан емкостью 500 мл, а верхний гексановый слой сливают и отбрасывают.
Водный раствор пробы, находящийся в химическом стакане, подкисляют концентрированной серной кислотой до pH 2,0 и переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку добавляют 100 мл смеси гексан:этиловый эфир (70:30) и встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают и отбрасывают. В делительную воронку добавляют 200 мл бидистиллированной воды, 1,0 мл 5,0%-ного водного раствора серной кислоты и 10 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия. Содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают и отбрасывают. Данную процедуру очистки экстракта повторяют еще один раз. После этого верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр синяя лента со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя — 1,0 — 1,5 см) в колбу-концентратор емкостью 150 мл.
Колбу-концентратор с объединенным гексано-эфирным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители при температуре +40 °С до объема 3 — 5 мл. Остаток экстракта переносят в мерную пробирку со шлифом емкостью 5,0 мл и упаривают растворители в токе азота досуха при температуре +40 °С.
2.6.2 Метилирование хизалофоп-П кислоты
В пробирку с сухим остатком добавляют 2,0 мл свежеприготовленного по п. 2.4.4 эфирного раствора диазометана. Пробирку закрывают притертой пробкой и ставят на 12 — 14 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4 — 6 °С. После этого эфир в пробирке упаривают досуха в токе азота и сухой остаток растворяют в 0,5 мл изооктана. Газохроматографический анализ на содержание хизалофоп-П-этила проводят по п. 2.6.3.
2.6.3 Условия хроматографирования
Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая длиной 15 м, внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой SE-52, толщина слоя — 0,45 мкм.
Температура колонки: программирование от 180 °С (1 мин.) до 280 °С (15 мин.) со скоростью 10 °С/мин.
Температура испарителя: 250 °С.
Температура детектора: 290 °С.
Расход газов: газа-носителя (гелий марки «А») — 2,0 куб. см/мин., водорода и воздуха к ТИД — 30 и 250 куб. см/мин. соответственно, дополнительного газа (гелий марки «А») к ТИД — 35 куб. см/мин.
Количество вводимой пробы: 2 мкл.
Время удерживания хизалофоп-П-метила: 13,7 +/- 0,1 мин.
Предел детектирования: 0,5 нг.
Линейный диапазон детектирования: 1,0 — 8,0 нг.
2.6.4 Обработка результатов анализа
Содержание хизалофоп-П кислоты рассчитывают методом внешнего стандарта по формуле:
H х A х V
X = ---------, H х m
ст
где:
X - содержание хизалофоп-П кислоты в пробе, мг/кг;
H - высота (площадь) пика анализируемого вещества, мм (кв. мм);
H - высота (площадь) пика стандартного вещества, мм (кв. мм);
ст
A - концентрация стандартного рабочего раствора хизалофоп-П кислоты,
мкг/мл; V — количество экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл; m — масса (г) аналитической пробы.
1
1
3. Требования техники безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами, а также требования, изложенные в документации к приборам.
4. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 «Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа».