МУК 4.1.1951-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по измерению концентраций пирипроксифена в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

(утв. Роспотребнадзором 18.01.2005)

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ ПИРИПРОКСИФЕНА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей зоны массовой концентрации пирипроксифена в диапазоне 0,1 — 1 мг/куб. м.

Пирипроксифен — действующее вещество препарата АДМИРАЛ, 10% КЭ,

фирма-производитель Кромптон, Англия.

4-феноксифенил (RS)-2-(2-пиридилокси)пропиловый эфир (IUPAC).

Структурная формула (не приводится).

    C  H  NO .
     20 19  3

Мол. масса 321,5.

    Бесцветное  кристаллическое  вещество  (технический  продукт -  бледно-
желтое  воскообразное вещество со слабым запахом). Температура плавления 47
°С.   Давление  паров  при  23  °С  -  менее  0,013  мПа.  Растворимость  в
органических  растворителях  при 20 - 25 °С (г/кг): гексан - 400; метанол -
200;  ксилол  - 500; метанол - 140. Растворимость в воде при 25 °С - 0,3679
мг/куб.  дм. Коэффициент распределения н-октанол/вода: К   log Р = 5,37 (25

                                                    ow

°С).

Пирипроксифен устойчив к гидролизу: DT — более 367 дней (20 °С, pH 4 50

• 9).

Агрегатное состояние в воздухе — аэрозоль.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс > 5000 мг/кг; острая 50 дермальная токсичность (LD ) для крыс > 2000 мг/кг; острая ингаляционная 50 токсичность (LC ) для крыс > 1300 мг/куб. м. Не раздражает кожу и 50 слизистую глаз (кроликов).

Область применения препарата

Пирипроксифен — инсектицид контактного и кишечного действия из группы аналогов ювенильного гормона, подавляющий эмбриогенез и процесс метаморфоза насекомых. Активно подавляет развитие мух, жуков, комаров и других насекомых.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) пирипроксифена в воздухе рабочей зоны — 1,0 мг/куб. м.

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью (дельта), не превышающей +/- 25%, при доверительной вероятности 0,95.

Измерения концентраций пирипроксифена выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование пирипроксифена из воздуха осуществляют на бумажные фильтры «синяя лента», экстракцию с фильтра проводят этанолом.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы — 4 нг.

Определению не мешают компоненты препаративной формы.

3.1 Средства измерений

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым Номер Госреестра 15945-97 детектором с переменной длиной волны (фирмы Perkin-Elmer, США)

Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104

Пробоотборное устройство ОП-442ТЦ ТУ 25-11-1414-78 (ЗАО «ОПТЭК», г. Санкт-Петербург) или аспирационное устройство ЭА-1

Барометр-анероид М-67                             ТУ 2504-1797-75
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена        ТУ 215-73Е

деления 1 °С, пределы измерения 0 — 55 °С

Колбы мерные вместимостью 100 и 1000 куб. см ГОСТ 1770

Пипетки градуированные 2-го класса точности ГОСТ 29227 вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 куб. см

Цилиндры мерные 2-го класса точности ГОСТ 1770 вместимостью 250 и 1000 куб. см

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2 Реактивы

Пирипроксифен с содержанием действующего вещества не менее 99,9% (Кромптон, Англия)

Вода бидистиллированная деионизированная или перегнанная над KMnO 4

Ацетонитрил для хроматографии, хч ТУ 6-09-4326-76

Спирт этиловый ректификованный ГОСТ Р 51652 или

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3 Вспомогательные устройства, материалы

Бумажные фильтры «синяя лента» обеззоленные ТУ 6-09-2678-77

Воронки конусные диаметром 30 — 37 мм ГОСТ 25336

Груша резиновая

Колбы грушевидные на шлифе вместимостью ГОСТ 10394 100 куб. см

Мембранные фильтры капроновые диаметром 47 мм

Насос водоструйный                                ГОСТ 10696
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или        ТУ 25-11-917-74

ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi, Швейцария

Стаканы химические вместимостью 100 куб. см ГОСТ 25336

Стекловата

Стеклянные палочки

Набор для фильтрации растворителей через мембрану

Хроматографическая колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая

Кромасил 100 С18, зернением 7 мкм

Хроматографическая колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 2 мм, содержащая Spherisorb S5 ODS 2, зернением 5 мкм

Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50 — 100 куб. мм

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005.

4.2. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

• процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;
• выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Перед выполнением измерений проводят очистку ацетонитрила (при необходимости), подготовку подвижной фазы для ВЭЖХ, приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

7.1 Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.2 Подготовка подвижной фазы № 1 для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 150 куб. см воды, добавляют 850 куб. см ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.3 Подготовка подвижной фазы № 2 для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 250 куб. см воды, добавляют 750 куб. см ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.3 Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой № 1 (приготовленной по п. 7.2) при скорости подачи растворителя 1 куб. см/мин. или подвижной фазой № 2 (приготовленной по п. 7.3) при скорости подачи растворителя 0,3 куб. см/мин. до установления стабильной базовой линии.

7.4 Приготовление градуировочных растворов

7.4.1 Исходный раствор пирипроксифена для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г пирипроксифена, доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

Растворы № 1 — 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.

7.4.2 Раствор № 1 пирипроксифена для градуировки (концентрация 10 мкг/куб. см)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора пирипроксифена с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.4.1), разбавляют подвижной фазой (п. 7.2 или 7.3) до метки. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х суток.

7.4.3. Рабочие растворы № 2 — 5 пирипроксифена для градуировки (концентрация 0,2 — 2,0 мкг/куб. см)

В 3 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 2,0; 5,0 и 10,0 куб. см градуировочного раствора № 1 с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.4.2), доводят до метки подвижной фазой (п. 7.2 или 7.3), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2 — 4 с концентрацией пирипроксифена 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/куб. см соответственно. Для приготовления рабочего градуировочного раствора № 5 с концентрацией пирипроксифена 2,0 мкг/куб. см используют 10 куб. см градуировочного раствора № 1, разбавление проводят в мерной колбе вместимостью 50 куб. см.

Растворы хранятся в холодильнике в течение суток.

7.5 Отбор проб

Отбор проб воздуха проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны».

В течение 15 минут последовательно отбирают 3 пробы, для чего воздух аспирируют в течение 5 минут с объемным расходом 2 — 5 куб. дм/мин. через бумажный фильтр «синяя лента», помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации пирипроксифена на уровне 0,5 ОБУВ для воздуха рабочей зоны необходимо отобрать 2 куб. дм воздуха. Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильной камере при +4 °С — 5 дней.

7.6 Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации пирипроксифена в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки № 2 — 5.

В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. п. 7.6.1.1 или 7.6.1.2. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площадь пика пирипроксифена.

7.6.1 Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором Perkin-Elmer (США)

Рабочая длина волны: 272 нм

Температура колонки: комнатная

Объем вводимой пробы: 20 куб. мм

7.6.1.1. Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Кромасил 100 С18, зернением 7 мкм

Подвижная фаза: ацетонитрил — вода (85:15, по объему)

Скорость потока элюента: 1 куб. см/мин.

Чувствительность: 0,01 ед. абсорбции на шкалу

Ориентировочное время выхода пирипроксифена: 6,0 — 6,33 мин.

7.6.1.2. Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 2 мм, содержащая Spherisorb S5 ODS 2, зернением 5 мкм

Подвижная фаза: ацетонитрил — вода (75:25, по объему)

Скорость потока элюента: 0,3 куб. см/мин.

Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу

Ориентировочное время выхода пирипроксифена: 6,8 — 7,0 мин.

Линейный диапазон детектирования: 4 — 40 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор пирипроксифена с концентрацией 2,0 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой (п. 7.2 или 7.3).

Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 2-х стандартных растворов различной концентрации. Если значения площади отличаются более чем на 5% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие стандартные растворы.

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 куб. см, заливают 10 куб. см этанола, оставляют на 4 — 5 минут, периодически перемешивая. Растворитель сливают, фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями этанола объемом 10 куб. см.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 5 куб. см подвижной фазы № 1 или 2 и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.6.1.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию пирипроксифена в хроматографируемом растворе.

Перед анализом опытной пробы проводят хроматографирование холостой (контрольной) пробы — экстракта неэкспонированного фильтра.

Массовую концентрацию пирипроксифена в пробе воздуха рабочей зоны (Х, мг/куб. м) рассчитывают по формуле:

Х = С х W / V , 20

где:

    С   -   концентрация   пирипроксифена  в  хроматографируемом  растворе,
найденная  по  градуировочному  графику  в соответствии с величиной площади

хроматографического пика, мкг/куб. см; W — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см; V — объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к 20 стандартным (давление 760 мм рт. ст., температура 20 °С) условиям, куб. дм.

V = 0,386 х Р х u t / (273 + Т), 20

где:

Т — температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), град. С;

Р — атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;

u — расход воздуха при отборе пробы, куб. дм/мин.;

t — длительность отбора пробы, мин.

Примечание: Идентификация и расчет концентрации пирипроксифена в пробах могут быть проведены с помощью программ обработки хроматографических данных с применением компьютера, включенного в аналитическую систему.

                      _

За результат анализа (Х) принимается среднее арифметическое результатов _

двух  параллельных  определений  Х   и  Х  (Х = (Х  + Х ) / 2), расхождение
                                  1      2        1    2
между  которыми  не  превышает  значений  норматива  оперативного  контроля
сходимости (d): |Х  - Х | <= d.
                  1    2

                              _

d = d х Х / 100, мг/куб. м, отн.

где:
d - норматив оперативного контроля сходимости, мг/куб. м;
d     - норматив оперативного контроля сходимости, % (равен 10%).
 отн.

Результат количественного анализа представляют в виде: _ - результат анализа Х (мг/куб. м), характеристика погрешности дельта, _ %, Р = 0,95 или Х +/- ДЕЛЬТА, мг/куб. м, Р = 0,95, где:

                                    _
                           дельта х Х

ДЕЛЬТА = ----------, мг/куб. м. 100

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана, г. Мытищи Московской обл.

---