МУК 4.1.1851-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств клопиралида в семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.1851-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств клопиралида в семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии". МУК 4.1.1851-04. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-1851-04
(утв. Минздравом России 05.03.2004)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 1 июля 2004 года.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
5 марта 2004 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ КЛОПИРАЛИДА В СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.
1. Вводная часть
1.1 Краткая характеристика препарата
Фирма-изготовитель: Дау АгроСаенсес.
Торговое название: Лонтрел Гранд, Лонтрел-300.
Действующее вещество (д.в.): клопиралид.
Название д.в. по номенклатуре ИЮПАК: 3,6-=dichloropyridine-2-carboxylic acid.
Структурная формула д.в. (не приводится).
Эмпирическая формула д.в.: C H Cl NO . 6 3 2 2
Молекулярная масса д.в.: 192,0.
Химически чистое вещество: кристаллы белого цвета.
Температура плавления д.в.: 151 — 152 °С.
Растворимость д.в. (г/кг) при 20 °С: в воде — 1,0, циклогексаноне — 387, ацетоне — 153, ксилоле — 6,5.
В обычных условиях устойчив, с органическими и неорганическими основаниями образует хорошо растворимые в воде соли.
1.2 Краткая токсикологическая характеристика д.в.
LD для крыс - 4300 - 5000 мг/кг, LC (96 ч), для рыб - 103,5 мг/л. 50 50
Нетоксичен для пчел и других насекомых.
Гигиенические нормативы: ПДК в воде водоемов — 0,04 мг/л, ОДК в почве — 0,1 мг/кг, МДУ в зерне хлебных злаков — 0,2 мг/кг, ВМДУ в кукурузе и сахарной свекле — 0,1 мг/кг, капусте — 0,05 мг/кг.
1.3 Область применения препарата
Гербицид для борьбы с некоторыми однолетними и многолетними двудольными сорными растениями (в том числе сложноцветными и видами горца).
2. Метод определения клопиралида в семенах и масле рапса с применением капиллярной газожидкостной хроматографии
2.1 Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на извлечении остаточных количеств клопиралида из анализируемого объекта органическими растворителями и проведении очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.
Количественное определение проводят методом внешнего стандарта с применением капиллярной газожидкостной хроматографии и использованием детектора электронного захвата (ДЭЗ).
2.1.2 Избирательность метода
Метод специфичен в присутствии других применяемых пестицидов. Проведение очистки экстрактов, а также использование капиллярной колонки и селективного детектора позволяет устранять влияние коэкстрактивных веществ на результаты анализа.
2.1.3 Метрологическая характеристика метода
Диапазоны измеряемых концентраций, пределы обнаружения и другие метрологические параметры метода представлены в таблицах 1 и 2.
| Метрологические параметры | Анализируемые объекты: | |
| Семена рапса | Масло рапса | |
| Предел обнаружения, мг/кг | 0,01 | 0,02 |
| Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | 0,01 — 0,08 | 0,02 — 0,16 |
| Среднее значение определения, % | 80,2 | 77,8 |
| Стандартное отклонение, % | 5,5 | 6,2 |
| Относительное стандартное отклонение, % | 3,1 | 3,5 |
| Анализируемые объекты | Внесено, мг/кг | Извлечено, % | Доверительный интервал среднего результата, % |
|---|---|---|---|
| Семена рапса | 0,01 0,02 0,04 0,08 | 73,5 78,1 83,7 85,4 | +/- 7,6 +/- 5,5 +/- 4,8 +/- 4,3 |
| Масло рапса | 0,02 0,04 0,08 0,16 | 74,3 76,5 78,8 81,7 | +/- 7,1 +/- 6,7 +/- 5,8 +/- 5,2 |
2.2 Реактивы, растворы, материалы
Аналитический стандарт клопиралида.
Азот газообразный высокой чистоты, ТУ 301-07-25-89.
Ацетон, осч, ТУ 2633-004-11291058-94.
Ацетонитрил для хроматографии, хч, ТУ 6-09-4326-76.
Вата медицинская, ТУ 9393-001-00302238-97.
Вода дистиллированная и перегнанная над KMnO и щелочью. 4
н-Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.
Дихлорметан, хч, ТУ 6-09-2662-77.
Изооктан эталонный, ГОСТ 12433-83.
Калия гидроокись, чда, ГОСТ 24363-80.
Натрий сернокислый б/в (сульфат), чда, ГОСТ 4166-76.
Натрий хлористый, чда, ГОСТ 4233-77.
N-Нитрозометилмочевина, хч, ТУ 6-09-11-1643-82.
Серная кислота, осч, ГОСТ 14262-78.
Смесь н-гексан:этиловый эфир, 50:50, по объему.
Фильтры бумажные красная лента, ТУ 2642-001-42624157-98.
Фильтры бумажные белая лента, ТУ 2642-001-42624157-98.
Фильтры бумажные синяя лента, ТУ 2642-001-42624157-98.
Эфир этиловый (серный), ОСТ 84-2006-88.
2.3 Приборы, аппаратура, посуда
Колонка хроматографическая кварцевая капиллярная длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой ВР-50 (типа OV-17), толщина пленки — 0,5 мкм.
Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73, или аналогичный.
Весы аналитические типа ВЛА-200, ГОСТ 34104-80.
Весы лабораторные типа ВЛКТ-500, ГОСТ 24104-80.
Воронки делительные емкостью 250 и 500 мл, ГОСТ 25336-82.
Воронки для фильтрования стеклянные, ГОСТ 25336-82.
Индикаторная бумага универсальная, ТУ 6-09-1181-76.
Колбы-концентраторы емкостью 100 и 250 мл, ГОСТ 25336-82.
Колбы плоскодонные емкостью 100 и 300 мл, ГОСТ 25336-82.
Колбы мерные со шлифом емкостью 25, 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Колпачки алюминиевые для герметизации флаконов, ГОСТ Р 51314-99.
Мельница электрическая лабораторная, ТУ 46-22-236-79, или аналогичная.
Микрошприц МШ-10, ТУ 2-833-106.
Насос водоструйный, ГОСТ 10696-75.
Ротационный вакуумный испаритель типа ИР-1 или аналогичный.
Пипетки мерные емкостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292-74.
Приспособление для обжима колпачков на флаконах, ТУ 42-2-2442-73.
Пробирки мерные со шлифом емкостью 5,0 мл, ГОСТ 1770-74.
Стаканы химические на 100, 200 и 500 мл, ГОСТ 25336-82.
Установка для перегонки растворителей при атмосферном давлении.
Установка для упаривания растворителей в токе азота.
Установка ультразвуковая «Серьга» УЗМ002 или аналогичная.
Флаконы стеклянные (типа пенициллиновых) емкостью 5,0 мл, ТУ 64-2-10-87.
Шкаф сушильный, ТУ 64-1-1411-76.
2.4 Подготовка к определению
2.4.1 Подготовка и очистка растворителей
Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре +40 °С до объема 1,0 мл и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.
2.4.2 Приготовление стандартных растворов
Основной раствор клопиралида с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением в ацетоне 0,01 г аналитического стандарта в мерной колбе емкостью 100 мл. Раствор хранят в холодильнике при температуре +4 — 6 °С не более трех месяцев.
Рабочие стандартные растворы с концентрациями 1,6, 0,8, 0,4 и 0,2 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора клопиралида последовательным разбавлением ацетоном. Рабочие растворы хранят в холодильнике при температуре +4 — 6 °С не более месяца.
В модельных опытах при изучении полноты извлечения клопиралида используют ацетоновые растворы стандартного вещества.
Для приготовления калибровочных растворов в мерные пробирки со шлифом емкостью 5,0 мл вносят по 1,0 мл рабочих растворов клопиралида с концентрациями 0,2, 0,4, 0,8 и 1,6 мкг/мл. Растворитель в пробирках упаривают в токе азота досуха и проводят метилирование клопиралида по п. 2.4.3.
2.4.3 Метилирование клопиралида
В пробирки с сухим остатком добавляют по 2,0 мл свежеприготовленного по п. 2.4.5 эфирного раствора диазометана. Пробирки закрывают пробками и ставят на 12 — 14 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4 — 6 °С. После этого в пробирки добавляют по 1,0 мл изооктана и упаривают растворители в токе азота до 1,0 мл.
2.4.4 Построение калибровочного графика
Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа (п. 2.7.3) вводят по 1 мкл приготовленных по п. 2.4.3 растворов, содержащих клопиралид (в виде производного) в концентрациях 0,2, 0,4, 0,8 и 1,6 мкг/мл. Осуществляют не менее трех параллельных измерений и находят среднее значение высоты (площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика в мм (кв. мм) от концентрации клопиралида в рабочем растворе в мкг/мл.
2.4.5. Приготовление эфирного раствора диазометана (из расчета метилирования экстрактов 2-х проб).
N-Нитрозометилмочевину массой 0,5 г помещают во флакон емкостью 2,0 — 3,0 мл и герметизируют резиновой пробкой и колпачком с помощью приспособления для обжима колпачков на флаконах. Этиловый эфир объемом 4,0 мл вносят в другой флакон емкостью 5,0 мл, герметизируют резиновой пробкой и колпачком и охлаждают в морозильной камере холодильника в течение 30 минут.
После этого флаконы через предварительно проколотые пробки соединяют гибкой тефлоновой трубкой (внутр. диам. ~ 1,5 — 2,0 мм), одним концом погружая ее в этиловый эфир на всю глубину (флакон с охлажденным этиловым эфиром обязательно должен еще иметь свободный выход в атмосферу). Во флакон с нитрозометилмочевиной, используя шприц с тонкой иглой и прокалывая пробку, добавляют по каплям по стенке 50%-ный водный раствор гидроокиси калия (~ 0,3 мл) до прекращения реакции. Этиловый эфир при насыщении диазометаном окрашивается в ярко-желтый цвет.
Внимание! Приготовление эфирного раствора диазометана и процедуру метилирования необходимо обязательно проводить в работающем вытяжном шкафу.
2.5 Отбор, первичная обработка и хранение проб
Отбор проб для анализа проводят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными 21.08.1979, № 2051-79.
Пробы семян рапса просушивают до стандартной влажности и хранят в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре.
Пробы масла рапса хранят при +4 — 6 °С в закрытой стеклянной таре.
2.6 Подготовка проб к определению
Пробы семян рапса перед анализом рассыпают на бумаге или кальке и пинцетом удаляют включения. Семена измельчают на лабораторной мельнице и после перемешивания измельченной массы отбирают усредненную аналитическую пробу.
2.7 Проведение определения
2.7.1 Семена рапса
2.7.1.1 Экстракция клопиралида
Аналитическую пробу семян массой 20 +/- 0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 300 мл, добавляют 150 мл смеси ацетон:дистиллированная вода (90:10), слегка встряхивают и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане в течение 10 мин. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр красная лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Содержимое колбы с пробой промывают 50 мл смеси ацетон:дистиллированная вода (90:10), которую также фильтруют в колбу-концентратор.
При использовании аппарата для встряхивания в плоскодонную колбу с аналитической пробой вносят 150 мл смеси ацетон:дистиллированная вода (90:10) и встряхивают в течение 60 минут. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр «красная лента» в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Содержимое колбы с пробой промывают 50 мл смеси ацетон:дистиллированная вода (90:10), которую также фильтруют в колбу-концентратор.
Колбу-концентратор с объединенным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворитель до объема 10 — 20 мл при температуре +40 °С. В колбу-концентратор добавляют 200 мл бидистиллированной воды, 2,0 мл 5,0%-ного водного раствора серной кислоты и содержимое колбы перемешивают встряхиванием. Колбу-концентратор помещают в холодильник и выдерживают при температуре +4 — 6 °С в течение 4 — 5 часов. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр «белая лента» в делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку добавляют 10%-ный водный раствор гидроокиси калия до pH 9 — 10, 10 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия и после перемешивания 75 мл дихлорметана. Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2-х минут. После 15-минутного отстаивания нижний дихлорметановый слой сливают и отбрасывают. Процедуру очистки экстракта с использованием 50 мл дихлорметана повторяют. Далее в воронку добавляют 40 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия и после перемешивания 75 мл н-гексана. Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2-х минут. После 5-минутного отстаивания нижний ацетоно-водный слой сливают в химический стакан емкостью 500 мл, а верхний гексановый слой сливают и отбрасывают.
Водный раствор пробы, находящийся в химическом стакане, подкисляют концентрированной серной кислотой до pH 2,0 и переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку добавляют 75 мл смеси гексан:этиловый эфир (50:50) и встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают в химический стакан, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр «синяя лента» со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя ~ 1,0 — 1,5 см) в колбу-концентратор емкостью 150 мл. Экстрагирование и фильтрование повторяют с использованием 50 мл смеси гексан:этиловый эфир (50:50). Нижний водный слой отбрасывают.
Колбу-концентратор с объединенным гексано-эфирным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители при температуре +40 °С до объема 3 — 5 мл. Остаток экстракта количественно переносят в мерную пробирку со шлифом емкостью 10 мл и упаривают растворители в токе азота досуха при температуре +40 °С.
2.7.1.2 Метилирование клопиралида
В пробирку с сухим остатком добавляют 2,0 мл свежеприготовленного по п. 2.4.5 эфирного раствора диазометана. Пробирку закрывают пробкой и ставят на 12 — 14 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4 — 6 °С. После этого в пробирку добавляют 1,0 мл изооктана и упаривают растворители в токе азота до 1,0 мл.
Газохроматографический анализ на содержание клопиралида проводят по п. 2.7.3.
2.7.2 Масло рапса
2.7.2.1 Экстракция клопиралида
Аналитическую пробу масла массой 10,0 +/- 0,1 г растворяют в 50 мл н-гексана (насыщенного ацетонитрилом) в плоскодонной колбе емкостью 100 мл и после этого гексановый раствор масла переносят в делительную воронку емкостью 250 мл. Колбу промывают 50 мл ацетонитрила (насыщенного н-гексаном) и переносят его в воронку. Содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут. После 5-минутного отстаивания нижний ацетонитрильный слой сливают в колбу-концентратор емкостью 100 мл. Колбу промывают еще 25 мл ацетонитрила (насыщенного н-гексаном) и также переносят в воронку (250 мл). Содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут, отстаивают 5 минут и нижний ацетонитрильный слой объединяют с предыдущим. Верхний гексановый слой отбрасывают.
Колбу-концентратор с объединенным ацетонитрильным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворитель досуха при температуре +50 °С. Сухой остаток растворяют в 20 мл ацетона. К раствору добавляют 200 мл бидистиллированной воды, 2,0 мл 5,0%-ного водного раствора серной кислоты и содержимое колбы перемешивают встряхиванием. Колбу-концентратор помещают в холодильник и выдерживают при температуре +4 — 6 °С в течение 4 — 5 часов. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр «белая лента» в делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку добавляют 10%-ный водный раствор гидроокиси калия до pH 9 — 10, 10 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия и после перемешивания 75 мл дихлорметана. Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2-х минут. После 15-минутного отстаивания нижний дихлорметановый слой сливают и отбрасывают. Процедуру очистки экстракта с использованием 50 мл дихлорметана повторяют. Далее в воронку добавляют 40 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия и после перемешивания 75 мл н-гексана. Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2-х минут. После 5-минутного отстаивания нижний ацетоно-водный слой сливают в химический стакан емкостью 500 мл, а верхний гексановый слой сливают и отбрасывают.
Водный раствор пробы, находящийся в химическом стакане, подкисляют концентрированной серной кислотой до pH 2,0 и переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку добавляют 75 мл смеси гексан:этиловый эфир (50:50) и встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают в химический стакан, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр «синяя лента» со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя ~ 1,0 — 1,5 см) в колбу-концентратор емкостью 150 мл. Экстрагирование и фильтрование повторяют с использованием 50 мл смеси гексан:этиловый эфир (50:50). Нижний водный слой отбрасывают.
Колбу-концентратор с объединенным гексано-эфирным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители при температуре +40 °С до объема 3 — 5 мл. Остаток экстракта количественно переносят в мерную пробирку со шлифом емкостью 10 мл и упаривают растворители в токе азота досуха при температуре +40 °С.
2.7.2.2 Метилирование клопиралида
В пробирку с сухим остатком добавляют 2,0 мл свежеприготовленного по п. 2.4.5 эфирного раствора диазометана. Пробирку закрывают пробкой и ставят на 12 — 14 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4 — 6 °С. После этого в пробирку добавляют 1,0 мл изооктана и упаривают растворители в токе азота до 1,0 мл.
Газохроматографический анализ на содержание клопиралида проводят по п. 2.7.3.
2.7.3 Условия хроматографирования
Колонка хроматографическая капиллярная длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой ВР-50 (типа OV-17), толщина слоя — 0,5 мкм.
Температура колонки: программирование от 100 °С (3 мин.) до 280 °С (25 мин.) со скоростью 8,0 °С/мин.
Температура испарителя: 240 °С.
Температура детектора: 300 °С.
Расход газов: газа-носителя (азот в/ч) — 1,5 куб. см/мин., дополнительного газа (азот в/ч) к ДЭЗ — 40 куб. см/мин.
Время удерживания клопиралида (в виде производного): 14,18 +/- 0,05 мин.
Предел детектирования: 0,1 нг.
Линейный диапазон детектирования: 0,2 — 2,0 нг.
2.7.4 Обработка результатов анализа
Содержание клопиралида рассчитывают методом внешнего стандарта по формуле:
H х A х V
1
где:
X - содержание клопиралида в пробе, мг/кг;
H - высота (площадь) пика анализируемого вещества, мм (кв. мм);
1
H - высота (площадь) пика стандартного вещества, мм (кв. мм);
0
A - концентрация стандартного раствора клопиралида, мкг/мл;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
m - масса (г) аналитической пробы.
3. Требования техники безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами, а также требования, изложенные в документации к приборам.
4. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 «Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа».