МУК 4.1.1815-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств хизалофоп-П-этила в воде, почве, клубнях картофеля, корнеплодах и ботве сахарной, столовой и кормовой свеклы, семенах и масле сои, семенах и соломке льна по основному метаболиту хизалофоп-П кислоте с применением капиллярной газожидкостной хроматографии

(утв. Минздравом России 18.12.2003)

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ХИЗАЛОФОП-П-ЭТИЛА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, КЛУБНЯХ КАРТОФЕЛЯ, КОРНЕПЛОДАХ И БОТВЕ САХАРНОЙ, СТОЛОВОЙ И КОРМОВОЙ СВЕКЛЫ, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ СОИ, СЕМЕНАХ И СОЛОМКЕ ЛЬНА ПО ОСНОВНОМУ МЕТАБОЛИТУ ХИЗАЛОФОП-П КИСЛОТЕ С ПРИМЕНЕНИЕМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (проф. Т.В. Юдина), Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин) при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (гл. специалист А.П. Веселов), под редакцией член-корр. РАМН В.В. Ракитского.

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Минздраве России (прот. № 20 от 2 декабря 2003 г.).

3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 18 декабря 2003 г.

4. Введены впервые.

1. Вводная часть

1.1. Краткая характеристика препарата

Фирма-производитель: ЗАО Фирма «Август».

Торговое название: МИУРА, КЭ.

Действующее вещество (д.в.): хизалофоп-П-этил.

Название д.в. по номенклатуре ИЮПАК: (R)-2-[6-хлорхиноксалин-2-илокси)фенокси]пропионовой кислоты этиловый эфир.

Структурная формула д.в. (не приводится).

    Эмпирическая формула д.в.: C  H  ClN O .
                                19 17   2 4

Молекулярная масса д.в.: 372,8.

Химически чистое вещество: светло-коричневые кристаллы.

Температура плавления д.в.: 76 — 77 °С.

Давление паров д.в. при 20 °С: 0,011 мПа.

Растворимость д.в. (г/л) при 20 °С: в воде — 0,0004, в гексане — 5,0, этаноле — 22, ксилоле — 360, ацетоне — 650.

Стабильность д.в.: устойчив к действию света, разлагается до хизалофоп-П кислоты под действием разбавленных кислот и щелочей.

1.2. Краткая токсикологическая характеристика д.в.

Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс — 1180 — 1210 50 мг/кг, для мышей — 1750 — 1800 мг/кг. Не оказывает раздражающего действия на кожу.

Гигиенические нормативы: ПДК в воде водоемов санитарно-бытового пользования — 0,0001 мг/куб. дм, ОДК в почве — 0,8 мг/кг, МДУ в свекле сахарной, моркови, луке и капусте — 0,05 мг/кг, МДУ в свекле столовой — 0,01 мг/кг, ВМДУ в картофеле, томатах, сое (семена, масло) — 0,05 мг/кг.

1.3. Область применения препарата

МИУРА, КЭ — послевсходовый гербицид для борьбы с однолетними и многолетними злаковыми сорными растениями.

2. Метод определения хизалофоп-П-этила в воде, почве, клубнях картофеля, корнеплодах и ботве сахарной, столовой и кормовой свеклы, семенах и масле сои, семенах и соломке льна по основному метаболиту хизалофоп-П кислоте с применением капиллярной газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Метод основан на количественном определении хизалофоп-П кислоты, основного метаболита хизалофоп-П-этила, и включает извлечение остаточных количеств хизалофоп-П кислоты из анализируемого объекта органическими растворителями, очистку экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и метилирование хизалофоп-П кислоты диазометаном. Количественное определение проводят методом внешнего стандарта с применением капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора (ТИД).

2.1.2 Избирательность метода

Метод специфичен в присутствии других применяемых в сельском хозяйстве пестицидов. Способ очистки экстрактов, а также применение селективного детектора позволяет устранять влияние коэкстрактивных веществ на результаты анализа.

2.1.3 Метрологическая характеристика метода

Диапазоны измеряемых концентраций, пределы обнаружения и другие метрологические параметры метода представлены в таблицах 1 и 2.

Анализируемые объекты	Предел обнаружения, мг/куб. дм, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций, мг/куб. дм, мг/кг	Среднее значение определения, %	Стандартное отклонение S, %	Доверительный интервал среднего, %
Вода	0,0001	0,0001 — 0,0008	76,2	9,5	8,8
Почва	0,01	0,01 — 0,08	81,2	4,7	4,2
Клубни картофеля	0,01	0,01 — 0,08	82,6	4,5	3,9
Корнеплоды свеклы	0,01	0,01 — 0,08	79,7	5,8	5,1
Ботва свеклы	0,01	0,01 — 0,08	75,8	4,6	3,7
Семена сои, льна	0,01	0,01 — 0,08	74,8	6,3	5,2
Соломка льна	0,05	0,05 — 0,4	81,5	4,5	3,2
Масло сои	0,025	0,025 — 0,2	79,8	7,3	6,0

Анализируемые объекты	Внесено, мг/куб. дм, мг/кг	Извлечено, %	Доверительный интервал среднего результата, %
Вода	0,0001 0,0002 0,0004 0,0008	71,2 74,3 76,6 82,5	+/- 11,4 +/- 9,6 +/- 7,5 +/- 6,7
Почва	0,01 0,02 0,04 0,08	74,1 81,3 83,5 85,7	+/- 5,3 +/- 4,5 +/- 3,7 +/- 3,4
Клубни картофеля	0,01 0,02 0,04 0,08	76,3 82,7 83,8 87,4	+/- 4,8 +/- 4,1 +/- 3,7 +/- 3,1
Корнеплоды свеклы	0,01 0,02 0,04 0,08	73,3 78,5 81,5 85,7	+/- 5,8 +/- 5,3 +/- 4,9 +/- 4,4
Ботва свеклы	0,01 0,02 0,04 0,08	71,8 73,4 76,7 81,3	+/- 4,3 +/- 3,8 +/- 3,5 +/- 3,1
Семена сои, льна	0,01 0,02 0,04 0,08	69,3 73,8 76,6 79,4	+/- 6,3 +/- 5,4 +/- 4,7 +/- 4,2
Соломка льна	0,05 0,1 0,2 0,4	76,1 80,7 83,8 85,4	+/- 3,7 +/- 3,3 +/- 3,1 +/- 2,8
Масло сои	0,025 0,05 0,1 0,2	74,3 77,6 81,8 85,7	+/- 6,8 +/- 6,3 +/- 5,7 +/- 5,2

2.2. Реактивы, растворы, материалы

Аналитический стандарт хизалофоп-П кислоты.

Азот газообразный высокой чистоты, ТУ 301-07-25-89.

Ацетон, осч, ТУ 2633-004-11291058-94.

Ацетонитрил для хроматографии, хч, ТУ 6-09-4326-76.

Вата медицинская, ТУ 9393-001-00302238-97.

Вода дистиллированная и перегнанная над KMgO и щелочью. 4

Водород газообразный высокой чистоты, ТУ 301-07-27-90.

н-Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.

Гелий газообразный (сжатый) очищенный марки «А», ТУ 51-940-80.

Дихлорметан, хч, ТУ 6-09-2662-77.

Изооктан эталонный, ГОСТ 12433-83.

Калия гидроокись, чда, ГОСТ 24363-80.

Кислота хлористоводородная (соляная), хч, ГОСТ 3118-77.

Натрий сернокислый б/в (сульфат), чда, ГОСТ 4166-76.

Натрий хлористый, чда, ГОСТ 4233-77.

N-Нитрозометилмочевина, хч, ТУ 6-09-11-1643-82.

Спирт этиловый ректификат (этанол), ГОСТ 17299-78.

Фильтры бумажные, красная лента, ТУ 2642-001-42624157-98.

Фильтры бумажные, белая лента, ТУ 2642-001-42624157-98.

Фильтры бумажные, синяя лента, ТУ 2642-001-42624157-98.

Эфир этиловый (серный), ОСТ 84-2006-88.

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Хроматограф газовый с ТИД.

Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая длиной 10 м, внутренним диаметром 0,53 мм с неподвижной фазой НР-1 (типа SE-30), толщина слоя — 2,65 мкм.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73, или аналогичный.

Весы аналитические типа ВЛА-200, ГОСТ 34104-80.

Весы лабораторные типа ВЛКТ-500, ГОСТ 24104-80.

Воронки делительные емкостью 2000, 500 и 250 мл, ГОСТ 25336-82.

Воронки для фильтрования стеклянные, ГОСТ 25336-82.

Индикаторная бумага универсальная, ТУ 6-09-1181-76.

Инструментарий для подготовки проб (пинцет анатомический, скальпель, ножницы и др.).

Колбы-концентраторы емкостью 250 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы плоскодонные емкостью 100, 300 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы мерные со шлифом емкостью 25, 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Колпачки алюминиевые для герметизации флаконов, ГОСТ Р 51314-99.

Мельница электрическая лабораторная, ТУ 46-22-236-79, или аналогичная.

Микрошприц МШ-10, ТУ 2-833-106.

Насос водоструйный, ГОСТ 10696-75.

Ротационный вакуумный испаритель типа ИР-1 или аналогичный.

Пипетки мерные емкостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292-74.

Приспособление для обжима колпачков на флаконах, ТУ 42-2-2442-73.

Сито с диаметром отверстий 1,0 мм.

Стаканы химические емкостью 300, 1500 мл, ГОСТ 25336-82.

Флаконы стеклянные (типа пенициллиновых) емкостью 5,0 мл, ТУ 64-2-10-87.

Установка для перегонки растворителей при атмосферном давлении.

Установка для упаривания растворителей в токе азота.

Установка ультразвуковая «Серьга» УЗМ002 или аналогичная.

Электроплитка, ГОСТ 14919-83 Е.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1 Подготовка и очистка растворителей

Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С до объема 1,0 мл и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.

2.4.2 Приготовление стандартных растворов

Основной раствор хизалофоп-П кислоты с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением в смеси ацетон:этанол (80:20) 0,01 г аналитического стандарта в мерной колбе емкостью 100 мл. Раствор хранят в холодильнике при температуре +4 — 6 °С не более трех месяцев.

Рабочие стандартные растворы с концентрациями 4,0, 2,0, 1,0 и 0,5 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора хизалофоп-П кислоты соответствующим последовательным разбавлением ацетоном.

Для приготовления калибровочных растворов во флаконы (типа пенициллиновых) емкостью 5,0 мл вносят по 1,0 мл рабочих растворов хизалофоп-П кислоты с концентрациями 0,5, 1,0, 2,0 и 4,0 мкг/мл. Растворители во флаконах упаривают в токе азота досуха и проводят метилирование хизалофоп-П кислоты.

Во флаконы добавляют по 2,0 мл свежеприготовленного эфирного раствора диазометана (п. 2.4.4), закрывают пробками и ставят на 6 — 8 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4 — 6 °С. После этого этиловый эфир во флаконах упаривают досуха в токе азота при комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в 1,0 мл изооктана и хроматографируют по п. 2.7.6.

2.4.3 Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 1 мкл приготовленных по п. 2.4.2 растворов, содержащих хизалофоп-П кислоту (в виде хизалофоп-П-метила) в концентрациях 0,5, 1,0, 2,0 и 4,0 мкг/мл. Осуществляют не менее трех параллельных измерений и находят среднее значение высоты (площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика в мм (кв. мм) от концентрации хизалофоп-П кислоты в рабочем растворе в мкг/мл.

2.4.4 Приготовление эфирного раствора диазометана (из расчета метилирования экстрактов 2-х проб)

N-Нитрозометилмочевину массой 0,5 г помещают во флакон емкостью 2,0 — 3,0 мл и герметизируют резиновой пробкой и колпачком с помощью приспособления для обжима колпачков на флаконах. Этиловый эфир объемом 4,0 мл вносят в другой флакон емкостью 5,0 мл, герметизируют резиновой пробкой и колпачком и охлаждают в морозильной камере холодильника в течение 30 минут.

После этого флаконы через предварительно проколотые пробки соединяют гибкой тефлоновой трубкой (внутр. диам. ~ 1,5 — 2,0 мм), одним концом погружая ее в этиловый эфир на всю глубину (флакон с охлажденным этиловым эфиром обязательно должен еще иметь свободный выход в атмосферу). Во флакон с нитрозометилмочевиной, используя шприц с тонкой иглой и прокалывая пробку, добавляют по каплям по стенке 50% водный раствор гидроокиси калия (~ 0,3 мл) до прекращения реакции. Этиловый эфир при насыщении диазометаном окрашивается в ярко-желтый цвет.

Внимание! Приготовление эфирного раствора диазометана и процедуру метилирования необходимо обязательно проводить в работающем вытяжном шкафу.

2.5. Отбор, первичная обработка и хранение проб

Отбор проб для анализа проводят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными 21.08.1979, № 2051-79.

Пробы воды при наличии взвеси фильтруют через бумажный фильтр красная лента, подщелачивают 50% водным раствором гидроокиси калия до рН 9 — 10 и хранят в закрытой стеклянной таре при температуре +4 — 6 °С не более 3 дней.

Пробы почвы просушивают до воздушно-сухого состояния при комнатной температуре в отсутствии прямого солнечного света и хранят при комнатной температуре в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре.

Клубни картофеля после отбора проб моют, обсушивают фильтровальной бумагой и из каждого клубня по осевой линии вырезают 1/4 часть. Полученную среднюю пробу измельчают, перемешивают и выделяют аналитические пробы. Для длительного хранения аналитические пробы клубней картофеля помещают в морозильную камеру с температурой -18 °С и хранят в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре.

Корнеплоды свеклы после отбора проб моют, обсушивают фильтровальной бумагой и из каждого корнеплода по осевой линии вырезают 1/8 часть. Полученную среднюю пробу измельчают, перемешивают и выделяют аналитические пробы. Ботву свеклы измельчают, перемешивают и выделяют аналитические пробы. Для длительного хранения аналитические пробы корнеплодов и ботвы свеклы помещают в морозильную камеру с температурой -18 °С и хранят в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре.

Пробы семян сои и льна просушивают до стандартной влажности и хранят в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре.

Пробы соломки льна просушивают до воздушно-сухого состояния при комнатной температуре в отсутствии прямого солнечного света и хранят в закрытой полиэтиленовой таре.

Пробы масла сои хранят при +4 — 6 °С в закрытой стеклянной таре.

2.6. Подготовка проб к определению

Пробы почвы перед анализом рассыпают на бумаге или кальке и пестиком разминают крупные комки, из проб пинцетом удаляют включения: корни растений, насекомых, камни, стекло, кости, уголь и другие. После этого пробы почвы растирают в ступке пестиком, просеивают через сито с диаметром отверстий 1,0 мм и после перемешивания отбирают усредненную аналитическую пробу.

Пробы семян сои и льна перед анализом рассыпают на бумаге или кальке и пинцетом удаляют включения. Семена измельчают на лабораторной мельнице и после перемешивания измельченной массы отбирают усредненную аналитическую пробу.

Пробы соломки льна перед анализом измельчают ножницами и на лабораторной мельнице и после перемешивания измельченной массы отбирают усредненную аналитическую пробу.

2.7. Проведение определения

2.7.1 Вода

2.7.1.1 Экстрагирование и очистка экстракта

Аналитическую пробу воды, подготовленную по п. 2.5 (рН 9 — 10), объемом 1,0 куб. дм помещают в делительную воронку емкостью 2,0 л, добавляют 50 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, 100 мл дихлорметана и встряхивают содержимое воронки в течение 2-х минут. После 5-минутного отстаивания, нижний дихлорметановый слой сливают и отбрасывают. В воронку добавляют 50 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, приливают 100 мл н-гексана и встряхивают содержимое воронки в течение 2-х минут. После 5-минутного отстаивания нижний водный слой собирают в химический стакан емкостью 1,5 л, а верхний гексановый слой сливают и отбрасывают.

Водную пробу, находящуюся в химическом стакане, подкисляют концентрированной соляной кислотой до рН 2,0 и переносят в чистую делительную воронку емкостью 2,0 л. В воронку добавляют 100 мл смеси гексан:этиловый эфир (80:20) и встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают в химический стакан, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр синяя лента со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя ~ 1,0 — 1,5 см) в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Экстрагирование и фильтрование повторяют с использованием 100 мл смеси гексан:этиловый эфир (80:20). Нижний водный слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объединенным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители до объема 3 — 5 мл при температуре +40 °С. Остаток экстракта количественно переносят из колбы-концентратора во флакон (типа пенициллинового) емкостью 5,0 мл и упаривают растворители досуха в токе азота при температуре +50 °С.

2.7.1.2 Метилирование

После охлаждения до комнатной температуры во флакон с сухим остатком добавляют 2,0 мл свежеприготовленного эфирного раствора диазометана (по п. 2.4.4). Флакон закрывают пробкой и ставят на 6 — 8 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4 — 6 °С. После этого этиловый эфир во флаконе упаривают досуха в токе азота при комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в 0,2 мл изооктана и проводят количественное определение хизалофоп-П кислоты по п. 2.7.6.

2.7.2 Почва и растительный материал (клубни картофеля, корнеплоды и ботва свеклы)

2.7.2.1 Экстрагирование и очистка экстракта

Аналитическую пробу массой 25,0 +/- 0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 300 мл, добавляют 150 мл смеси ацетон:этанол (80:20), слегка встряхивают и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане в течение 10 минут. После этого экстракт фильтруют через бумажный фильтр белая лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Содержимое колбы с пробой промывают 50 мл ацетона, который также фильтруют в колбу-концентратор.

При использовании аппарата для встряхивания в колбу с аналитической пробой вносят 150 мл смеси ацетон:этанол (80:20) и встряхивают в течение 60 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр белая лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Содержимое колбы с пробой промывают 50 мл ацетона, который также фильтруют в колбу-концентратор.

Колбу-концентратор с объединенным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители экстракта почвы досуха, а экстрактов растительного материала до объема 10 — 20 мл при температуре +40 °С. В колбу-концентратор добавляют 200 мл бидистиллированной воды и 5,0 мл 10% водного раствора гидроокиси калия. Содержимое колбы перемешивают встряхиванием и выдерживают при температуре +4 — 6 °С в течение 2-х часов. После этого раствор фильтруют через бумажный фильтр красная лента в делительную воронку емкостью 500 мл. К содержимому воронки добавляют 10 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, 75 мл дихлорметана и встряхивают воронку в течение 2-х минут. После 5-минутного отстаивания нижний дихлорметановый слой сливают и отбрасывают. В воронку добавляют 40 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, приливают 75 мл н-гексана и встряхивают содержимое воронки в течение 2-х минут. После 5-минутного отстаивания нижний водный слой собирают в химический стакан емкостью 300 мл, а верхний гексановый слой сливают и отбрасывают.

Водный раствор пробы, находящийся в химическом стакане, подкисляют концентрированной соляной кислотой до рН 2,0 и переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку добавляют 75 мл смеси гексан:этиловый эфир (80:20) и встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают в химический стакан, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр синяя лента со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя ~ 1,0 — 1,5 см) в колбу-концентратор емкостью 150 мл. Экстрагирование и фильтрование повторяют с использованием 50 мл смеси гексан:этиловый эфир (80:20). Нижний водный слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объединенным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители до объема 3 — 5 мл при температуре +40 °С. Остаток экстракта количественно переносят из колбы-концентратора во флакон (типа пенициллинового) емкостью 5,0 мл и упаривают растворители досуха в токе азота при температуре +50 °С.

2.7.2.2 Метилирование

После охлаждения до комнатной температуры во флакон с сухим остатком добавляют 2,0 мл свежеприготовленного эфирного раствора диазометана (по п. 2.4.4). Флакон закрывают пробкой и ставят на 6 — 8 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4 — 6 °С. После этого этиловый эфир во флаконе упаривают досуха в токе азота при комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл изооктана и проводят количественное определение хизалофоп-П кислоты по п. 2.7.6.

2.7.3 Семена сои, льна

2.7.3.1 Экстрагирование и очистка экстракта

Аналитическую пробу семян массой 25,0 +/- 0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 300 мл, добавляют 150 мл смеси ацетон:этанол:бидистиллированная вода (70:20:10), слегка встряхивают и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане в течение 10 минут. После этого экстракт фильтруют через бумажный фильтр белая лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Содержимое колбы с пробой промывают 50 мл ацетона, который также фильтруют в колбу-концентратор.

При использовании аппарата для встряхивания в колбу с аналитической пробой вносят 150 мл смеси ацетон:этанол:бидистиллированная вода (70:20:10) и встряхивают в течение 60 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр белая лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Содержимое колбы с пробой промывают 50 мл ацетона, который также фильтруют в колбу-концентратор.

Колбу-концентратор с объединенным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители до объема 10 — 20 мл при температуре +40 °С. В колбу-концентратор добавляют 200 мл бидистиллированной воды, 5,0 мл 10% водного раствора гидроокиси калия, перемешивают встряхиванием и помещают в холодильник с температурой +4 — 6 °С на 2 часа. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр красная лента в делительную воронку емкостью 500 мл. К содержимому воронки добавляют 10 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, 75 мл дихлорметана и воронку встряхивают в течение 2-х минут. После 5-минутного отстаивания нижний дихлорметановый слой сливают и отбрасывают. Эту процедуру очистки экстракта повторяют с использованием 50 мл дихлорметана. Далее в воронку добавляют 40 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, приливают 75 мл н-гексана и встряхивают содержимое воронки в течение 2-х минут. После 5-минутного отстаивания нижний водный слой собирают в химический стакан емкостью 300 мл, а верхний гексановый слой сливают и отбрасывают.

Водный раствор пробы, находящийся в химическом стакане, подкисляют концентрированной соляной кислотой до рН 2,0 и переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку добавляют 75 мл смеси гексан:этиловый эфир (80:20) и встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают в химический стакан, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр синяя лента со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя ~ 1,0 — 1,5 см) в колбу-концентратор емкостью 150 мл. Экстрагирование и фильтрование повторяют с использованием 50 мл смеси гексан:этиловый эфир (80:20). Нижний водный слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объединенным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители до объема 3 — 5 мл при температуре +40 °С. Остаток экстракта количественно переносят из колбы-концентратора во флакон (типа пенициллинового) емкостью 5,0 мл и упаривают растворители досуха в токе азота при температуре +50 °С.

2.7.3.2 Метилирование

После охлаждения до комнатной температуры во флакон с сухим остатком добавляют 2,0 мл свежеприготовленного эфирного раствора диазометана (по п. 2.4.4). Флакон закрывают пробкой и ставят на 6 — 8 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4 — 6 °С. После этого этиловый эфир во флаконе упаривают досуха в токе азота при комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл изооктана и проводят количественное определение хизалофоп-П кислоты по п. 2.7.6.

2.7.4 Соломка льна

2.7.4.1 Экстрагирование и очистка экстракта

Аналитическую пробу соломки массой 5,0 +/- 0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 300 мл, добавляют 150 мл смеси ацетон:этанол:бидистиллированная вода (70:10:20), слегка встряхивают и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане в течение 10 минут. После этого экстракт фильтруют через бумажный фильтр белая лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Содержимое колбы с пробой промывают 50 мл ацетона, который также фильтруют в колбу-концентратор.

При использовании аппарата для встряхивания в колбу с аналитической пробой вносят 150 мл смеси ацетон:этанол:бидистиллированная вода (70:10:20) и встряхивают в течение 60 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр белая лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Содержимое колбы с пробой промывают 50 мл ацетона, который также фильтруют в колбу-концентратор.

Колбу-концентратор с объединенным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители до объема 10 — 20 мл при температуре +40 °С. В колбу-концентратор добавляют 200 мл бидистиллированной воды, 5,0 мл 10% водного раствора гидроокиси калия, перемешивают встряхиванием и помещают в холодильник с температурой +4 — 6 °С на 2 часа. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр красная лента в делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку добавляют 10 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, 75 мл дихлорметана и встряхивают в течение 2-х минут. После 5-минутного отстаивания нижний дихлорметановый слой сливают и отбрасывают. В воронку добавляют 40 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, приливают 75 мл н-гексана и встряхивают содержимое воронки в течение 2-х минут. После 5-минутного отстаивания нижний водный слой собирают в химический стакан емкостью 300 мл, а верхний гексановый слой сливают и отбрасывают.

Водный раствор пробы, находящийся в химическом стакане, подкисляют концентрированной соляной кислотой до рН 2,0 и переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку добавляют 75 мл смеси гексан:этиловый эфир (80:20) и встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают в химический стакан, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр синяя лента со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя ~ 1,0 — 1,5 см) в колбу-концентратор емкостью 150 мл. Экстрагирование и фильтрование повторяют с использованием 50 мл смеси гексан:этиловый эфир (80:20). Нижний водный слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объединенным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители до объема 3 — 5 мл при температуре +40 °С. Остаток экстракта количественно переносят из колбы-концентратора во флакон (типа пенициллинового) емкостью 5,0 мл и упаривают растворители досуха в токе азота при температуре +50 °С.

2.7.4.2 Метилирование

После охлаждения до комнатной температуры во флакон с сухим остатком добавляют 2,0 мл свежеприготовленного эфирного раствора диазометана (по п. 2.4.4). Флакон закрывают пробкой и ставят на 6 — 8 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4 — 6 °С. После этого этиловый эфир во флаконе упаривают досуха в токе азота при комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл изооктана и проводят количественное определение хизалофоп-П кислоты по п. 2.7.6.

2.7.5 Масло сои

2.7.5.1 Экстрагирование и очистка экстракта

Аналитическую пробу масла массой 10,0 +/- 0,1 г растворяют в 50 мл гексана (насыщенного ацетонитрилом) в плоскодонной колбе емкостью 100 мл и после этого гексановый раствор масла переносят в делительную воронку емкостью 250 мл. Колбу промывают 50 мл ацетонитрила (насыщенного гексаном) и также переносят его в воронку. Содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут. После 5-ти минутного отстаивания нижний ацетонитрильный слой сливают в колбу-концентратор емкостью 250 мл. В делительную воронку добавляют еще 50 мл ацетонитрила (насыщенного гексаном). Содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут, отстаивают и нижний ацетонитрильный слой объединяют в колбе-концентраторе с предыдущим. Верхний гексановый слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объединенным ацетонитрильным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворитель до объема 10 — 20 мл при температуре +50 °С. В колбу-концентратор добавляют 200 мл дистиллированной воды, 5,0 мл 10% водного раствора гидроокиси калия, раствор перемешивают встряхиванием и выдерживают 2 часа в холодильнике с температурой +4 — 6 °С. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр белая лента в делительную воронку емкостью 500 мл. К содержимому воронки добавляют 10 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, 75 мл дихлорметана и воронку встряхивают в течение 2-х минут. После 5-минутного отстаивания нижний дихлорметановый слой сливают и отбрасывают. Эту процедуру очистки экстракта повторяют с использованием 50 мл дихлорметана. Далее в воронку добавляют 40 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, приливают 75 мл н-гексана и встряхивают содержимое воронки в течение 2-х минут. После 5-минутного отстаивания нижний водный слой собирают в химический стакан емкостью 300 мл, а верхний гексановый слой сливают и отбрасывают.

Водный раствор пробы, находящийся в химическом стакане, подкисляют концентрированной соляной кислотой до рН 2,0 и переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку добавляют 75 мл смеси гексан:этиловый эфир (80:20) и встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают в химический стакан, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр синяя лента со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя ~ 1,0 — 1,5 см) в колбу-концентратор емкостью 150 мл. Экстрагирование и фильтрование повторяют с использованием 50 мл смеси гексан:этиловый эфир (80:20). Нижний водный слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объединенным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители до объема 3 — 5 мл при температуре +40 °С. Остаток экстракта количественно переносят из колбы-концентратора во флакон (типа пенициллинового) емкостью 5,0 мл и упаривают растворители досуха в токе азота при температуре +50 °С.

2.7.5.2 Метилирование

После охлаждения до комнатной температуры во флакон с сухим остатком добавляют 2,0 мл свежеприготовленного эфирного раствора диазометана (по п. 2.4.4). Флакон закрывают пробкой и ставят на 6 — 8 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4 — 6 °С. После этого этиловый эфир во флаконе упаривают досуха в токе азота при комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл изооктана и проводят количественное определение хизалофоп-П кислоты по п. 2.7.6.

2.7.6 Условия хроматографирования

Газовый хроматограф с ТИД.

Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая длиной 10 м, внутренним диаметром 0,53 мм с неподвижной фазой НР-1 (типа SE -30), толщина слоя — 2,65 мкм.

Температура колонки: программирование от 180 °С (1 мин.) до 280 °С (15 мин.) со скоростью 10 °С/мин.

Температура испарителя: 250 °С.

Температура детектора: 290 °С.

Расход газов: газа-носителя (гелий марки «А») — 5,0 куб. см/мин., водорода и воздуха к ТИД — 30 и 300 куб. см/мин. соответственно, дополнительного газа (гелий марки «А») к ТИД — 30 куб. см/мин.

Объем вводимой пробы: 2 мкл.

Время удерживания хизалофоп-П кислоты (в виде производного): 10,2 +/- 0,1 мин.

Предел детектирования: 0,5 нг.

Линейный диапазон детектирования: 1,0 — 8,0 нг.

2.7.7 Обработка результатов анализа

Содержание хизалофоп-П кислоты рассчитывают методом внешнего стандарта по формуле:

                          Н  х А х V
                           1

Х = ----------, Н х m 0

где:
Х  - содержание хизалофоп-П кислоты в пробе, мг/кг или мг/куб.

дм; Н — высота (площадь) пика анализируемого вещества, мм (кв. 1 мм); Н — высота (площадь) пика стандартного вещества, мм (кв. мм); 0 А — концентрация стандартного рабочего раствора хизалофоп-П кислоты, мкг/мл; V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл; m — объем (куб. см) или масса (г) аналитической пробы.

Пересчет на содержание хизалофоп-П-этила (Х ) проводят по I формуле:

Х = 1,08 х Х. I

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами, а также требования, изложенные в документации к приборам.

4. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 «Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа».

5. Разработчики

В.И. Долженко, П.А. Тарарин, Т.А. Маханькова, Л.В. Григорьева, Е.И. Кожемякова (ВНИИ защиты растений).

---