МУК 4.1.1731-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение массовых концентраций 1-(4-хлорбензоил)-5-метокси-2-метил-1H-индол-3-этановой кислоты (индометацин) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Методические указания

(утв. Минздравом России 29.06.2003)

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ИЗМЕРЕНИЕ МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ 1-(4-ХЛОРБЕНЗОИЛ)-5-МЕТОКСИ-2-МЕТИЛ-1H-ИНДОЛ-3-ЭТАНОВОЙ КИСЛОТЫ (ИНДОМЕТАЦИН) В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ (ВЭЖХ)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

1. Подготовлены творческим коллективом специалистов Научно-исследовательского института медицины труда РАМН (Департамент Госсанэпиднадзора Минздрава России).

2. Рекомендованы к утверждению на совместном заседании группы Главного эксперта Комиссии по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию по проблеме «Лабораторно-инструментальное дело и метрологическое обеспечение» и методбюро п/секции «Промышленно-санитарная химия» Проблемной комиссии «Научные основы медицины труда».

3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 29 июня 2003 г.

Введение

Методические указания «Измерение концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны» (выпуск 45) разработаны с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочным безопасным уровням воздействия (ОБУВ) и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.

Включенные в данный сборник 23 методики контроля вредных веществ в воздухе рабочей зоны разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 ССБТ «Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования», ГОСТ Р 8.563-96 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений», МИ 2335-95 «Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа», МИ 2336-95 «Характеристики погрешности результатов количественного химического анализа. Алгоритмы оценивания».

Методики выполнены с использованием современных методов исследования, метрологически аттестованы и дают возможность контролировать концентрации химических веществ на уровне и ниже их ПДК и ОБУВ в воздухе рабочей зоны, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны», ГН 2.2.5.1314-03 «Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны» и дополнениями к ним.

Методические указания по измерению массовых концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны предназначены для центров госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий промышленных предприятий при осуществлении контроля за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны, а также научно-исследовательских институтов и других заинтересованных министерств и ведомств.

1. Область применения

Настоящие Методические указания устанавливают количественный анализ воздуха рабочей зоны на содержание индометацина в диапазоне массовых концентраций 0,025 — 0,250 мг/куб. м методом ВЭЖХ.

2. Характеристика вещества

2.1 Структурная формула (не приводится).

2.2 Эмпирическая формула: C H ClNO .

                            19 16    4

2.3 Молекулярная масса: 357,80.

2.4 Регистрационный номер CAS 53-86-1.

2.5 Физико-химические свойства.

Индометацин — мелкокристаллический порошок от почти белого до слегка желтоватого цвета, без запаха или со слабым характерным запахом. Температура плавления — 154 — 157 °С. Растворяется в ацетоне, слабо растворяется в этаноле (0,5 г в 100 куб. см) и хлороформе, практически не растворяется в воде.

Агрегатное состояние в воздухе — аэрозоль.

2.6 Токсикологическая характеристика.

Индометацин обладает средней способностью к кумуляции, проникает через неповрежденную кожу, оказывает токсическое действие на почки, желудочно-кишечный тракт.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) индометацина в воздухе рабочей зоны — 0,05 мг/куб. м.

3. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций индометацина в диапазоне 0,025 — 0,250 мг/куб. м с погрешностью, не превышающей +/- 23%, при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Измерение массовой концентрации индометацина выполняют методом ВЭЖХ с применением ультрафиолетового детектора при длине волны 220 нм.

Нижний предел измерения содержания индометацина в анализируемом объеме пробы — 0,025 мкг.

Нижний предел измерения концентрации в воздухе рабочей зоны при отборе 20 куб. дм воздуха — 0,025 мг/куб. м.

Метод избирателен на стадиях сушки, фасовки.

Метод специфичен для производства индометацина.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Микроколоночный жидкостный хроматограф «Милихром»

Колонка металлическая из нержавеющей стали длиной 62 мм, внутренним диаметром 2 мм

Весы лабораторные ВЛА-200 2-го класса                       ГОСТ 24104-88Е
Аспирационное устройство типа АЭРА                          МРТУ 42-862-64
Фильтродержатели                                            ТУ 95.72.05-77

Колбы мерные вместимостью 100 куб. см ГОСТ 1770-74Е

Пипетки вместимостью 1, 2, 5 куб. см ГОСТ 29227-91

Пробирки колориметрические вместимостью 5 куб. см ГОСТ 1770-74Е

Фильтры АФА-ВП-10 ТУ 95-743-80

Бюксы вместимостью 50 куб. см ГОСТ 25336-82Е

Лупа измерительная ГОСТ 8309-75

Баня водяная ТУ 64-1-2850-76

Компрессор УК-25-1,6М

Трубка из полимерных материалов ТУ 64-1-3014-82

5.2. Реактивы

Индометацин, проект ФСП 42-0173061300, содержание основного вещества 99,0%

Спирт этиловый ГОСТ 5963-67

Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72

Сорбент: Lichrosorb RP-18 (5 мкм) (Метек, Германия)

Гелий в баллонах ТУ 51-689-75

Допускается применение иных средств измерений, вспомогательных устройств, материалов и реактивов, обеспечивающих показатели точности, установленные для данной МВИ.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005.88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-76.

6.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или среднеспециальным образованием, имеющие навыки работы на хроматографе.

8. Условия измерений

8.1. Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 84,0 — 106,0 кПа и влажности воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на микроколоночном жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовку хроматографа, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией индометацина 0,25 мг/куб. см готовят растворением 0,025 г вещества в мерной колбе вместимостью 100 куб. см в этиловом спирте. Раствор устойчив в течение 2 ч.

9.1.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией индометацина 5 мкг/куб. см готовят разбавлением стандартного раствора № 1. Для этого 2 куб. см стандартного раствора № 1 помещают в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доводят объем до метки этиловым спиртом. Раствор устойчив в течение 2 ч.

9.1.3. Элюент: смесь растворителей спирт этиловый — вода дистиллированная в соотношении 60:40.

9.2. Подготовка прибора

Подготовку хроматографа проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (кв. мм) от массы индометацина (мкг), устанавливают по 6 сериям растворов и холостой пробы из 5 параллельных определений для каждой серии согласно табл. 1.

Номер стандарта	Стандартный раствор индометацина № 2, куб. см	Спирт этиловый, куб. см	Содержание индометацина в 5 куб. см раствора, мкг	Содержание индометацина в хроматографируемом объеме раствора, мкг
1	0	5,0	0,0	0,00
2	0,1	4,9	0,5	0,025
3	0,2	4,8	1,0	0,05
4	0,4	4,6	2,0	0,10
5	0,6	4,4	3,0	0,15
6	0,8	4,2	4,0	0,20
7	1,0	4,0	5,0	0,25

Градуировочные растворы устойчивы в течение 2 ч.

Каждый из подготовленных градуировочных растворов упаривают на водяной бане при 60 °С досуха, пропуская над поверхностью несильную струю воздуха (так, чтобы поверхность слегка покрывалась рябью). Воздух подается компрессором через трубку из полимерных материалов, в которую вставлена стеклянная пипетка с коническим концом диаметром 2 мм. Сухой остаток растворяют в 200 куб. мм элюента, 10 куб. мм вводят в колонку хроматографа.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

    скорость потока элюента                            100 куб. мм/мин.;
    длина волны детектора                              220 нм;
    чувствительность детектора                         0,4 ед. опт. плотн.;
    скорость движения диаграммной ленты                10 мм/мин.;
    время удерживания индометацина                     1,6 - 1,8 мин.;
    объем вводимой пробы                               10 куб. мм.

Строят градуировочный график: на ось ординат наносят значения площадей градуировочных растворов, на ось абсцисс — соответствующие им содержания индометацина (мкг). Площадь пика определяют путем умножения высоты пика на его ширину, измеренную на половине высоты.

Проверка градуировочного графика проводится один раз в квартал или в случае использования новой партии реактивов, или изменения условий анализа.

9.4. Отбор проб воздуха

Воздух с объемным расходом 4 куб. дм/мин. аспирируют через фильтр АФА-ВП-10, помещенный в фильтродержатель. Для определения 1/2 ПДК данного вещества необходимо отобрать 20 куб. дм воздуха. Фильтры с отобранными пробами хранят в темном месте в течение месяца.

10. Выполнение измерения

Фильтр с отобранной пробой помещают в бюксу, приливают 5 куб. см этилового спирта и экстрагируют индометацин в течение 3 мин., периодически помешивая стеклянной палочкой. Степень десорбции индометацина с фильтра 98,0%. Затем извлекают фильтр, отжав его палочкой, переносят раствор в пробирку и упаривают на водяной бане при 60 °С досуха, пропуская над поверхностью несильную струю воздуха (так, чтобы поверхность слегка покрывалась рябью). Сухой остаток растворяют в 200 куб. мм элюента, 10 куб. мм вводят в колонку хроматографа. Записывают хроматограмму. Количественное определение содержания анализируемого вещества проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

11. Вычисление результатов измерений

Массовую концентрацию индометацина в воздухе (С, мг/куб. м) вычисляют по формуле:

                                а х в

С = -----, б х V

где:

а — количество вещества, найденное в анализируемом объеме раствора по градуировочному графику, мкг;

в — общий объем пробы, куб. см;

б — объем раствора, взятого для анализа, куб. см;

V — объем воздуха, отобранного для анализа (куб. дм) и приведенного к нормальным условиям (Прилож. 1)

12. Оформление результатов анализа

Результаты количественного анализа представляют в виде: С +/- ДЕЛЬТА (характеристика погрешности), мг/куб. м, Р = 0,95. Значение ДЕЛЬТА = 0,23С, мг/куб. м.

Значения содержания индометацина в отобранной пробе воздуха рабочей зоны и погрешности должны содержать одинаковое число знаков после запятой.

13. Контроль погрешности методики

Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости представлены в табл. 2.

Диапазон определяемых	Наименование метрологической характеристики
концентраций индометацина, мг/куб. м	Характеристика погрешности +/- дельта, % (Р = 0,95)	Норматив оперативного контроля погрешности К, % (Р = 0,90)	Норматив оперативного контроля воспроизводимости D, % (Р = 0,95, m = 2)
0,025 — 0,250	23	19	32

Метрологические характеристики приведены в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе — С.

13.1. Алгоритм проведения оперативного контроля воспроизводимости

    Оперативный   контроль   воспроизводимости  проводят  с  использованием
рабочих  проб,  полученных  при отборе воздуха рабочей зоны на два фильтра.
Контроль   воспроизводимости  проводят  путем  сравнения  расхождения  двух
результатов  измерений (С  и С ) содержания компонента в пробе с нормативом
                         1    2

контроля воспроизводимости D.

Воспроизводимость D признается удовлетворительной, если: отн.

                              |С  - С | <= D,
                                1    2

                _   _
    где D = 0,01С  (С  -   среднее   арифметическое   значение   результата

измерения).

Значение D = 32,5% отн.; отн. _

D = 0,32С, мг/куб. м.

При превышении норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют.

13.2. Алгоритм проведения оперативного контроля погрешности (точности) с использованием образцов для контроля

Образцами для оперативного контроля точности являются аттестованные смеси индометацина точно известного содержания (от 0,5 до 5,0 мкг индометацина), нанесенные на фильтр.

    Алгоритм   проведения  оперативного  контроля  точности  с  применением
образцов  для  контроля  состоит  в  сравнении  разности  между результатом
измерения  содержания  индометацина  в  образце  (С)  и  его  аттестованным

значением (С ). Точность признается удовлетворительной, если: о

|С — С | <= К. о

При внешнем контроле (Р = 0,95) значение К = 0,23С . о

При внутрилабораторном контроле (Р = 0,90) значение К = 0,19С . о

При превышении норматива оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют с использованием другой пробы. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

14. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 5 ч.

Методические указания разработаны Новокузнецким научно-исследовательским химико-фармацевтическим институтом (НИХФИ).

Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура 20 °С и давление 101,33 кПа) проводят по формуле:

                          V  х (273 + 20) х Р
                           1

                        V   = -------------------,
                         20   (273 + t) х 101,33

где:
V  - объем воздуха, отобранного для анализа, куб. дм;
 1
Р - барометрическое давление, кПа (101,33 кПа = 760 мм рт. ст.);
t - температура воздуха в месте отбора пробы, °С.

Для удобства расчета V следует пользоваться таблицей коэффициентов 20 (Прилож. 2). Для приведения воздуха к стандартным условиям надо умножить V 1 на соответствующий коэффициент.

Давление Р, кПа/мм рт. ст.
t, °С	97,33/ 730	97,86/ 734	98,4/ 738	98,93/ 742	99,46/ 746	100/ 750	100,53/ 754	101,06/ 758	101,33/ 760	101,86/ 764
-30	1,1582	1,1646	1,1709	1,1772	1,1836	1,1899	1,1963	1,2026	1,2058	1,2122
-26	1,1393	1,1456	1,1519	1,1581	1,1644	1,1705	1,1768	1,1831	1,1862	1,1925
-22	1,1212	1,1274	1,1336	1,1396	1,1458	1,1519	1,1581	1,1643	1,1673	1,1735
-18	1,1036	1,1097	1,1158	1,1218	1,1278	1,1338	1,1399	1,1460	1,1490	1,1551
-14	1,0866	1,0926	1,0986	1,1045	1,1105	1,1164	1,1224	1,1284	1,1313	1,1373
-10	1,0701	1,0760	1,0819	1,0877	1,0986	1,0994	1,1053	1,1112	1,1141	1,1200
-6	1,0540	1,0599	1,0657	1,0714	1,0772	1,0829	1,0887	1,0945	1,0974	1,1032
-2	1,0385	1,0442	1,0499	1,0556	1,0613	1,0669	1,0726	1,0784	1,0812	1,0869
0	1,0309	1,0366	1,0423	1,0477	1,0535	1,0591	1,0648	1,0705	1,0733	1,0789
+2	1,0234	1,0291	1,0347	1,0402	1,0459	1,0514	1,0571	1,0627	1,0655	1,0712
+6	1,0087	1,0143	1,0198	1,0253	1,0309	1,0363	1,0419	1,0475	1,0502	1,0557
+10	0,9944	0,9999	0,0054	1,0108	1,0162	1,0216	1,0272	1,0326	1,0353	1,0407
+14	0,9806	0,9860	0,9914	0,9967	1,0027	1,0074	1,0128	1,0183	1,0209	1,0263
+18	0,9671	0,9725	0,9778	0,9830	0,9884	0,9936	0,9989	1,0043	1,0069	1,0122
+20	0,9605	0,9658	0,9711	0,9783	0,9816	0,9868	0,9921	0,9974	1,0000	1,0053
+22	0,9539	0,9592	0,9645	0,9696	0,9749	0,9800	0,9853	0,9906	0,9932	0,9985
+24	0,9475	0,9527	0,9579	0,9631	0,9683	0,9735	0,9787	0,9839	0,9865	0,9917
+26	0,9412	0,9464	0,9516	0,9566	0,9618	0,9669	0,9721	0,9773	0,9799	0,9851
+28	0,9349	0,9401	0,9453	0,9503	0,9555	0,9605	0,9657	0,9708	0,9734	0,9785
+30	0,9288	0,9339	0,9391	0,9440	0,9432	0,9542	0,9594	0,9645	0,9670	0,9723
+34	0,9167	0,9218	0,9268	0,9318	0,9368	0,9418	0,9468	0,9519	0,9544	0,9595
+38	0,9049	0,9099	0,9149	0,9199	0,9248	0,9297	0,9347	0,9397	0,9421	0,9471

---