МУК 4.1.0.510-96. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентраций 4-нитробензамидина хлоргидрата методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоны

(утв. Госкомсанэпиднадзором России 08.06.1996)

Утверждено И.о. Председателя Госкомсанэпиднадзора России,

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ

МУК 4.1.0.510-96

М. м. 201,62.

4-Нитробензамидина хлоргидрат — белое кристаллическое вещество с кремовым цветом. Нерастворим в воде. Растворим в ацетонитриле, метиловом, этиловом и изопропиловом спиртах.

В воздухе находится в виде аэрозоля.

Обладает общетоксическим и раздражающим действием.

ОБУВ в воздухе — 1 мг/м3.

Характеристика метода

Метод основан на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением УФ-детектора.

Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения 4-нитробензамидина хлоргидрата в хроматографируемом объеме пробы (60 мкл) — 0,06 мкг.

Нижний предел измерения концентрации 4-нитробензамидина хлоргидрата в воздухе — 0,5 мг/м3 (при отборе 10 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций 4-нитробензамидина хлоргидрата в воздухе — от 0,5 до 10 мг/м3.

Определению не мешает присутствие никотиновой кислоты, а также п- и м-нитробензойных кислот.

Суммарная погрешность измерения не превышает +/- 25%.

Время выполнения анализа, включая отбор пробы, — около 50 мин.

Приборы, аппаратура, посуда

Микроколоночный жидкостной хроматограф «Милихром» или другие модели с УФ-детектором
Хроматографическая колонка длиной 120 мм, внутренним диаметром 2 мм, заполненная сорбентом «Сепарон SGX C_{18} » с размером зерен 8,0 мкм (Чехия)
Весы аналитические ВЛР-200 или другие такого же класса	ГОСТ 19491-74
Микроскоп отсчетный типа МПБ-2	ТУ 3-3.824-78
Электроаспиратор ЭА-1	ОСТ 95.10052-84
Фильтродержатель	ТУ 95:7205-77
Колбы мерные, вместимостью 100 мл	ГОСТ 1770-74
Пипетки, вместимостью 2 мл	ГОСТ 20292-74
Градуированные пробирки с пришлифованными пробками, вместимостью 10 мл	ГОСТ 10515-75

Реактивы, растворы и материалы

4-Нитробензамидина хлоргидрат, содержание основного вещества не менее 92%	ПР 64-0105-18-88
Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный, Na_{2}HPO_{4} \cdot H_{2}O (динатрийфосфат)	ТУ 4172-76
Калий фосфорнокислый однозамещенный KH_{2}PO_{4} (калий дифосфат)	ТУ 4198-75
0,067 М раствор динатрийфосфата готовят растворением 23,877 натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водного в воде в мерной колбе вместимостью 1 л. 0,067 М раствор калийфосфата готовят растворением 9,078 калия фосфорнокислого однозамещенного в воде в мерной колбе вместимостью 1 л.
0,067 М фосфатный буфер (pH 7,4) готовят, смешивая 808 мл 0,067 М раствора динатрийфосфата и 192 мл 0,067 М раствор калийфосфата. Фосфатный буфер устойчив при хранении в холодильнике в течение месяца Метанол (спирт метиловый), очищенный
Метанол очищенный получают из метанола путем ректификации. Ректификационная колонна длиной 550 мм и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое число 5.	ТУ 2222-78Е
Насадка — спиральки Левина из нержавеющей стали (2 x 2 x 0,2 мм). Основную фракцию отбирают при температуре 64,5 °C (атмосферное давление) в пределах колебаний +/- 0,1 °C
Элюент: 0,02 М фосфатный буфер (pH 7,4) — метанол (1:4). Элюент используют свежеприготовленным
Стандартный раствор № 1 с концентрацией 4-нитробензамидина хлоргидрата 500 мкг/мл готовят растворением 0,05 г вещества в воде в мерной колбе вместимостью 100 мл.	Стандартный раствор № 2 с концентрацией 4-нитробензамидина хлоргидрата 20 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора № 1 водой.

Фильтры АФА-ВП-10	ТУ 85-743-80

Отбор пробы воздуха

Воздух с объемным расходом 10 л/мин аспирируют через фильтр АФА-ВП-10. Для определения 1/2 ОБУВ достаточно отобрать 10 л воздуха. Пробы можно хранить в закрытых сосудах в холодильнике в течение месяца.

Подготовка к измерению

Хроматографические колонки промышленного изготовления.

Количественный анализ проводят методом абсолютной калибровки с использованием градуировочных растворов, которые готовят с концентрацией от 0,001 до 0,02 мкг/мкл путем соответствующего разбавления стандартного раствора № 2 водой.

Растворы используют в день приготовления.

Последовательно набирают в капилляр микродозатора по 60 мкл каждого из градуировочных растворов и инжектируют в хроматограф от 0,06 до 1,2 мкг 4-нитробензамидина.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

Скорость подачи элюента (0,02 М фосфатный буфер, pH 7,4 — метанол, 1:4)	100 мкл/мин
Длина волны УФ-детектора	254 нм
Скорость движения диаграммной ленты	0,6 мм/мин
Диапазон измерения детектора	0,4
Диапазон измерения самопишущего потенциометра	100 мВ
Максимальный объем вводимой пробы	60 мкл
Время удерживания 4-нитробензамидина хлоргидрата	16 мин
Элюирующий объем	1500 мкл
Эффективность колонки по 4-нитробензамидина хлоргидрату	600 тт

На полученной хроматограмме измеряют площади пиков, относящихся к 4-нитробензамидин хлоргидрату и строят градуировочную кривую, выражающую зависимость площади пиков (мм2) от содержания 4-нитробензамидина хлоргидрата в хроматографируемом объеме пробы (мкг).

Построение градуировочных графиков необходимо проводить не менее чем по 6 точкам, выполняя по 5 параллельных измерений для каждого инжектируемого объема. Проверку градуировочного графика следует проводить при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.

Проведение измерения

Фильтр с отобранной пробой помещают в пробирку с пришлифованной пробкой, добавляют 5 мл воды и оставляют на 15 мин при комнатной температуре и периодическом перемешивании. Степень десорбции с фильтра — 97,5%.

Инжектируют в хроматограф 60 мкл полученного раствора.

Хроматографирование анализируемого раствора проводят в тех же условиях по отношению к тому же элюенту, что и при построении градуировочного графика.

Количественное определение содержания 4-нитробензамидина хлоргидрата в хроматографируемом объеме проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Расчет концентрации

Концентрацию п-нитрозобензамидина хлоргидрата C в воздухе (в мг/м3) вычисляют по формуле:

---