---
title: "\"МР 2.1.10.0077-13. 2.1.10. Гигиена. Коммунальная гигиена. Состояние здоровья населения в связи с состоянием окружающей природной среды и условиями проживания населения. Применение показателей и критериев нарушения биотрансформации бензола в организме детей для задач гигиенических оценок, санитарно-эпидемиологических расследований и экспертиз. Методические рекомендации\""
number: "МР 2.1.10.0077-13"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/mr-2-1-10-0077-13"
---

## "МР 2.1.10.0077-13. 2.1.10. Гигиена. Коммунальная гигиена. Состояние здоровья населения в связи с состоянием окружающей природной среды и условиями проживания населения. Применение показателей и критериев нарушения биотрансформации бензола в организме детей для задач гигиенических оценок, санитарно-эпидемиологических расследований и экспертиз. Методические рекомендации"

# "МР 2.1.10.0077-13. 2.1.10. Гигиена. Коммунальная гигиена. Состояние здоровья населения в связи с состоянием окружающей природной среды и условиями проживания населения. Применение показателей и критериев нарушения биотрансформации бензола в организме детей для задач гигиенических оценок, санитарно-эпидемиологических расследований и экспертиз. Методические рекомендации"

(утв. Роспотребнадзором 20.08.2013)

> [!IMPORTANT]
> Документ [введен](#p100002) в действие с 20 августа 2013 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Руководитель Федеральной<br>
службы по надзору в сфере<br>
защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека,<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**<br>
20 августа 2013 года

</div>



##### <a id="p100003"></a>2.1.10 ГИГИЕНА. КОММУНАЛЬНАЯ ГИГИЕНА.

**СОСТОЯНИЕ ЗДОРОВЬЯ НАСЕЛЕНИЯ В СВЯЗИ С СОСТОЯНИЕМ ОКРУЖАЮЩЕЙ**
**ПРИРОДНОЙ СРЕДЫ И УСЛОВИЯМИ ПРОЖИВАНИЯ НАСЕЛЕНИЯ**

<a id="p100004"></a>**ПРИМЕНЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ И КРИТЕРИЕВ НАРУШЕНИЯ**
**БИОТРАНСФОРМАЦИИ БЕНЗОЛА В ОРГАНИЗМЕ ДЕТЕЙ ДЛЯ ЗАДАЧ**
**ГИГИЕНИЧЕСКИХ ОЦЕНОК, САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИХ**
**РАССЛЕДОВАНИЙ И ЭКСПЕРТИЗ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ**
МР 2.1.10.0077-13

<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения:<br>
с момента утверждения

</div>


1. <a id="p100006"></a>Разработаны Федеральным бюджетным учреждением науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения".
2. <a id="p100007"></a>Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 20 августа 2013 г.
3. <a id="p100008"></a>Введены впервые.


### 1. <a id="p100009"></a>Общие положения


<a id="p100010"></a>1.1. Настоящие методические рекомендации разработаны для повышения эффективности гигиенических оценок, санитарно-эпидемиологических расследований и экспертиз по выявлению нарушений состояния здоровья в связи с воздействием химических факторов. В настоящих методических рекомендациях определены показатели и критерии нарушения биотрансформации бензола в организме детей при хроническом внешнесредовом аэротехногенном воздействии.
<a id="p100011"></a>1.2. Проведение исследований осуществляется по запросу органов и организаций Роспотребнадзора научно-исследовательскими организациями, а также иными научно-исследовательскими или лечебно-профилактическими учреждениями, привлекаемыми в соответствии с п. 6.4 Постановления Правительства Российской Федерации от 30.06.2004 N 322 "Об утверждении Положения о Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека", аккредитованными в установленном порядке для проведения работ по оценке риска для здоровья населения, исследований биологических объектов, материалов и сред, а также имеющих лицензию на осуществление медицинской деятельности.
<a id="p100012"></a>1.3. Все исследования осуществляются в строгом соответствии с требованиями действующих нормативных правовых и методических документов.
<a id="p100013"></a>1.4. Планирование и проведение исследований осуществляется с обязательным соблюдением принципов надлежащей лабораторной практики Principles of Good Laboratory Practice (ENV/MC/CHEM (98) 17) в соответствии с Национальным стандартом Российской Федерации, [ГОСТ Р 53434-09](https://bukva.ai/docs/gost-r-53434-2009) "Принципы надлежащей лабораторной практики".
<a id="p100014"></a>1.5. В настоящих рекомендациях использованы результаты исследования и оценки нарушений биотрансформации бензола и его метаболита - фенола в организме детей, связанных с хроническим внешнесредовым аэротехногенным воздействием бензола и отсутствием аэрогенного поступления фенола, и сравнительно с результатами исследований у детей, проживающих в условиях отсутствия аэрогенного воздействия данных химических соединений.


### 2. <a id="p100015"></a>Область применения


<a id="p100016"></a>2.1. Методические рекомендации предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека при проведении санитарно-гигиенических экспертиз, расследований, исследований в области гигиенической оценки по установлению причинно-следственных связей между факторами среды обитания и здоровьем населения субъектов Российской Федерации.
<a id="p100017"></a>Рекомендации также могут быть использованы научно-исследовательскими, лечебно-профилактическими и другими организациями, занимающимися вопросами гигиенической оценки, предотвращения и снижения неблагоприятных последствий воздействия факторов среды обитания на здоровье человека.


### 3. <a id="p100018"></a>Основная часть



#### <a id="p100019"></a>3.1. Термины и определения


<a id="p100020"></a>Биотрансформация - энзиматическое превращение жирорастворимых экзогенных или эндогенных соединений в полярные водорастворимые метаболиты, легко выводимые из организма.
<a id="p100021"></a>Конъюгация - реакция синтеза чужеродного вещества с эндогенными молекулами или их группировками (аминокислоты, глюкуроновая или серная кислоты и др.), в результате чего образуются конъюгаты - более полярные, гидрофильные соединения, легко выводимые из организма.
<a id="p100022"></a>Элиминация - удаление чужеродного вещества из организма, состоящее из двух процессов: нейтрализации путем биотрансформации и собственно экскреции.
<a id="p100023"></a>Глутатионовая система - многокомпонентная система, включающая в себя комплекс ферментов (глутатионпероксидаза, глутатионредуктаза, глутатион-S-трансфераза, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа), осуществляющих конъюгационно-элиминационную функцию соединений во II фазе биотрансформации веществ.
<a id="p100024"></a>Глутатионпероксидаза - фермент, защищающий от окислительного повреждения восстановительный глутатион, участие которого необходимо в эндогенном связывании чужеродного вещества.
<a id="p100025"></a>Глутатионредуктаза - фермент, катализирующий реакцию восстановления глутатиона из его окисленной формы.
<a id="p100026"></a>Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа - фермент, обеспечивающий образование клеточного НАДФ-Н, необходимого для поддержания восстановленного глутатиона.
<a id="p100027"></a>Глутатион-S-трансфераза - фермент, катализирующий присоединение глутатиона к эндогенному или чужеродному соединению.


#### <a id="p100028"></a>3.2. Перечень сокращений


<a id="p100029"></a>Гл-6-Ф - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа
<a id="p100030"></a>ГлSТр - глутатион-S-трансфераза
<a id="p100031"></a>ГлПО - глутатионпероксидаза
<a id="p100032"></a>ГлР - глутатионредуктаза
<a id="p100033"></a>ИФА - иммуноферментный анализ
<a id="p100034"></a>НАДФ-Н - никотинамиддинуклеотидфосфат восстановленный
<a id="p100035"></a> $Rfc_{chr}$ - референтная концентрация для хронического ингаляционного воздействия.


#### <a id="p100036"></a>3.3. Введение


<a id="p100037"></a>На промышленно развитых территориях с размещением предприятий органического синтеза, химической, нефтеперерабатывающей, нефтехимической отраслей и развитой транспортной инфраструктурой к одним из приоритетных и распространенных загрязнителей атмосферного воздуха относится бензол, являющийся истинным ксенобиотиком и высоко опасным химическим веществом для здоровья человека [[1]](#p100086).
<a id="p100038"></a>При ингаляционном поступлении в организм большая часть бензола (до 84%) подвергается биотрансформации, которая осуществляется в основном в печени [[2]](#p100087). В процессе биотрансформации происходит окисление бензола через промежуточный метаболит - фенол, с образованием конечного продукта - фенилсульфата [[3](#p100088), [4](#p100089)]. Схематическое изображение биотрансформации бензола представлено на рис. 1 [[4]](#p100089).

<a id="p100039"></a> ![3.3. Введение](https://i.bukva.ai/TCdQeG4U/img_0.png) 

<div align="center">

<a id="p100040"></a>Рис. 1. Биотрансформация бензола

</div>


<a id="p100041"></a>Биотрансформацию бензола и его метаболита - фенола в организме осуществляет система цитохромов P-450 и глутатионовая система [[5]](#p100090). В первой фазе биотрансформации система цитохромов P-450 обеспечивает переход бензола в полярное и гидрофильное относительно исходного соединение - фенол, что обусловливает возможность его быстрой экскреции из организма. Во вторую фазу биотрансформации глутатионовая система обеспечивает конъюгацию фенола с эндогенным глутатионом, в результате чего образуется конечный метаболит - фенилсульфат, который в дальнейшем легко подвергается элиминации из организма. При этом фенол, по сравнению с фенилсульфатом, представляет большую опасность для здоровья человека [[6]](#p100091).
<a id="p100042"></a>Хроническое внешнесредовое аэротехногенное воздействие бензола может обусловливать наличие бензола и увеличение концентрации его метаболита - фенола в биосредах (кровь, моча) в результате нарушения процесса биотрансформации. Это может являться следствием дисфункции систем, обеспечивающих процесс биотрансформации бензола. Наличие бензола и повышенное содержание фенола в биосредах может обусловить развитие заболеваний крови и кроветворных органов, центральной нервной, иммунной, сердечно-сосудистой систем, печени, почек [[3]](#p100088).
<a id="p100043"></a>Выявление и оценка нарушений биотрансформации бензола в организме при хроническом ингаляционном поступлении в организм включает поэтапное выполнение следующих процедур:
1) <a id="p100044"></a>исследование и оценку содержания бензола и фенола в крови и моче. Количественное определение бензола в крови и моче осуществляется газохроматографическим методом в соответствии с методическими рекомендациями, действующими в Российской Федерации ([МУК 4.1.764-99](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-764-99) и [4.1.765-99](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-765-99)). Определение массовой концентрации фенола в крови и моче осуществляется газохроматографическим методом в соответствии с методическими рекомендациями, действующими в Российской Федерации ([МУК 4.1.2107-06](https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2107-06) и [4.1.2108-06](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-2108-06));
2) <a id="p100045"></a>исследование и оценку состояния функций систем, обеспечивающих первую и вторую фазы биотрансформации бензола, по комплексу показателей:
<a id="p100046"></a>а) состояние системы цитохрома P-450 (гена CYP1A1), участвующего в первой фазе биотрансформации.
<a id="p100047"></a>Методика основана на принципе полимеразной цепной реакции, в основе которой лежит амплификация и детекция продуктов этой реакции в режиме реального времени с помощью флюоресцентных меток, которыми предварительно помечают используемые для реакции амплификации праймеры в соответствии с инструкцией к тест-системе;
<a id="p100048"></a>б) активность ферментов глутатионовой системы, участвующей во второй фазе биотрансформации:
- <a id="p100049"></a>активность глутатионпероксидазы - фермента, защищающего от окислительного повреждения восстановленный глутатион, необходимый в эндогенном связывании фенола. Активность глутатионпероксидазы в сыворотке крови определяется фотометрическим методом, основанным на принципе "сэндвич" иммуноферментного анализа в соответствии с инструкцией к тест-системе ИФА;
- <a id="p100050"></a>активность глутатионредуктазы - фермента, катализирующего реакцию восстановления глутатиона из его окисленной формы. Активность глутатионредуктазы определяется кинетическим методом по принципу каталитического восстановления глутатиона в присутствии восстановленного НАДФ-Н по степени уменьшения абсорбции этого процесса в соответствии с инструкцией к тест-системе биохимического анализа;
- <a id="p100051"></a>активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы - фермента, обеспечивающего образование клеточного НАДФ-Н, необходимого для поддержания восстановленного глутатиона для эндогенного связывания фенола. Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы определяется кинетическим методом по степени увеличения абсорбции в результате превращения $\text{НАДФ}^{+}$ в соответствии с инструкцией к тест-системе биохимического анализа;
- <a id="p100052"></a>активность глутатион-S-трансферазы - фермента, катализирующего присоединение глутатиона к эндогенно образованному фенолу. Активность глутатион-S-трансферазы в сыворотке крови определяется фотометрическим методом, основанным на принципе твердофазного иммуноферментного анализа в соответствии с инструкцией к тест-системе ИФА.
<a id="p100053"></a>Требования и перечень необходимого оборудования, расходных материалов, реактивов и тест-систем для выполнения исследований представлены в [Прилож. 2](#p100122), [3](#p100155).


#### <a id="p100054"></a>3.4. Специальная часть



##### <a id="p100055"></a>3.4.1 Нарушение биотрансформации бензола возникает:

- <a id="p100056"></a>при наличии патологического аллеля цитохрома P-450, что свидетельствует о наследственной предрасположенности к нарушению процесса биотрансформации;
- <a id="p100057"></a>при дисфункции ферментов глутатионовой системы, обеспечивающих связывание и выведение бензола и его метаболита - фенола из организма, обусловленной ингаляционным поступлением бензола в концентрациях, превышающих референтные уровни хронического ингаляционного воздействия ( $Rfc_{chr}$ ) [(Р 2.1.10.1920-04)](https://bukva.ai/docs/rukovodstvo-r-2-1-10-1920-04).
<a id="p100058"></a>3.4.2. Показателями нарушения биотрансформации бензола в организме является наличие бензола и повышенных концентраций фенола (как метаболита бензола) в крови и моче.
<a id="p100059"></a>3.4.3. Гигиеническими критериями для проведения химико-аналитического исследования биосред у детей на содержание бензола и фенола являются:
- <a id="p100060"></a>наличие бензола в атмосферном воздухе селитебной застройки выше предельно допустимой концентрации (более 1 $\text{ПДК}_{\text{сс}.}$ - 0,1 мг/куб. м) и референтной концентрации при ингаляционном поступлении (более 1 $Rfc_{chr}$ - 0,03 мг/куб. м);
- <a id="p100061"></a>отсутствие фенола в атмосферном воздухе селитебной зоны для исключения его экзогенного поступления в организм.

##### <a id="p100062"></a>3.4.4 Критериями нарушения биотрансформации бензола являются следующие показатели:

- <a id="p100063"></a>идентификация бензола в крови и моче выше предела обнаружения (0,0035 мг/куб. дм);
- <a id="p100064"></a>наличие фенола в крови и моче выше фоновых уровней (в крови - (0,010 +/- 0,005) мг/куб. дм, моче - (0,278 +/- 0,021) мг/куб. дм) в 1,2 раза;
- <a id="p100065"></a>распространенность минорного аллеля по гену цитохрома P-450 CYP1A1 выше 10%;
- <a id="p100066"></a>повышение активности глутатионпероксидазы в сыворотке крови в 1,2 - 1,4 раза относительно контроля и границы чувствительности метода (> 54,7 нг/куб. см);
- <a id="p100067"></a>повышение активности глутатионредуктазы в сыворотке крови в 1,6 - 1,8 раза относительно контроля и границы чувствительности метода (> 80 Е/куб. дм);
- <a id="p100068"></a>повышение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в сыворотке крови в 1,2 - 1,3 раза относительно контроля и границы чувствительности метода (> 4,1 Е/куб. дм);
- <a id="p100069"></a>понижение активности глутатион-S-трансферазы в сыворотке крови в 2,5 - 2,6 раза относительно контроля и границы чувствительности метода (< 110 нг/куб. см).
<a id="p100070"></a>3.4.5. При наличии нарушения связывания и выведения бензола и фенола из организма необходимо контролировать развитие нарушений у детей со стороны:
- <a id="p100071"></a>крови и кроветворных органов (нарушение процессов костно-мозгового кроветворения - анемия неуточненная - D64.9, апластическая анемия, вызванная внешними агентами - D61.2);
- <a id="p100072"></a>центральной нервной системы и сердечно-сосудистой системы (функциональные расстройства нервной системы - астеноневротический синдром - R45.0, астеновегетативные нарушения и другие расстройства вегетативной нервной системы - G90.8);
- <a id="p100073"></a>иммунной системы (супрессия процессов иммунной защиты и неспецифической резистентности - вторичное иммунодефицитное состояние - D83.9).
<a id="p100074"></a>Реализация предложенной методики исследования представлена в [Прилож. 4](#p100176).


### <a id="p100075"></a>Нормативные правовые и методические документы


- <a id="p100076"></a>Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".
- <a id="p100077"></a>Постановление Правительства Российской Федерации от 30.06.2004 N 322 (с изменениями) "Об утверждении Положения о Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека".
- <a id="p100078"></a>Приказ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 19.07.2007 N 224 "О санитарно-эпидемиологических экспертизах, обследованиях, исследованиях, испытаниях и токсикологических, гигиенических и иных видах оценок".
- <a id="p100079"></a>[ГОСТ 8.207-76](https://bukva.ai/docs/gost-8-207-76) "Государственная система обеспечения единства измерений. Прямые измерения с многократными наблюдениями. Методы обработки результатов наблюдений. Основные положения".
- <a id="p100080"></a>[МУК 4.1.765-99](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-765-99) "Газохроматографический метод количественного определения ароматических (бензол, толуол, этилбензол, о-, м-, п-ксилол) углеводородов в биосредах (кровь)".
- <a id="p100081"></a>[МУК 4.1.764-99](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-764-99) "Газохроматографический метод количественного определения предельных (гексан, гептан) и ароматических (бензол, толуол, этилбензол, о-, м-, п-ксилол) углеводородов в биосредах (моча)".
- <a id="p100082"></a>[МУК 4.1.2108-06](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-2108-06) "Определение массовой концентрации фенола в биосредах (кровь) газохроматографическим методом".
- <a id="p100083"></a>[МУК 4.1.2107-06](https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2107-06) "Определение массовой концентрации фенола в биосредах (моча) газохроматографическим методом".
- <a id="p100084"></a>[Р 2.1.10.1920-04](https://bukva.ai/docs/rukovodstvo-r-2-1-10-1920-04) "Руководство по оценке риска здоровью населения при воздействии химических веществ".


### <a id="p100085"></a>Библиографические данные


1. <a id="p100086"></a>Кольдибекова Ю.В. Оценка конъюгационно-элиминационной функции глутатионовой системы у детей при хроническом экзогенном поступлении бензола//Фундаментальные и прикладные аспекты анализа риска здоровью населения: Материалы Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов Роспотребнадзора. В 2 т./Под общ. ред. акад. РАМН Г.Г. Онищенко, акад. РАМН Н.В. Зайцевой. Пермь: Книжный формат, 2012. Т. 1. С. 301 - 304.
2. <a id="p100087"></a>Вредные вещества в промышленности: Справочник в 3 томах. Том I. Органические вещества/Под ред. Н.В. Лазарева, Э.Н. Левиной. Л.: Химия, 1976. 592 с.
3. <a id="p100088"></a>Токсикологическая химия. Аналитическая токсикология: Учебник/Под ред. Р.У. Хабриева, Н.И. Калетиной. М.: ГОЭТАР-Медиа, 2010. 752 с.
4. <a id="p100089"></a>Онищенко Г.Г. Гигиеническая индикация последствий для здоровья при внешнесредовой экспозиции химических факторов/Г.Г. Онищенко, Н.В. Зайцева, М.А. Землянова; под ред. Г.Г. Онищенко. Пермь: Книжный формат, 2011. С. 126 - 130.
5. <a id="p100090"></a>Землянова М.А., Кольдибекова Ю.В. Современные подходы к оценке нарушений метаболизма ксенобиотиков при поступлении в организм из внешней среды//Экология человека. 2012. N 8. С. 8 - 14.
6. <a id="p100091"></a>Зайцева Н.В. Гигиеническая диагностика нарушений метаболизма ароматических углеводородов для эпидемиологических исследований влияния внешнесредовых факторов/Н.В. Зайцева, М.А. Землянова, В.Н. Звездин, Е.Р. Комлева, Д.А. Кирьянов, Т.С. Уланова, В.М. Чигвинцев. М.: ВНТИЦ, N гос. рег. 02201150764.





<div align="right">

<a id="p100092"></a>Приложение 1<br>
(справочное)

</div>


<div align="center">

<a id="p100093"></a>**ПЕРЕЧЕНЬ**<br>
**СРЕДСТВ ИЗМЕРЕНИЙ, ВСПОМОГАТЕЛЬНЫХ УСТРОЙСТВ И РЕАКТИВОВ,**<br>
**НЕОБХОДИМЫХ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕНЗОЛА И ФЕНОЛА**<br>
**В БИОСРЕДАХ (КРОВЬ, МОЧА) ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМ МЕТОДОМ**

</div>


<a id="p100094"></a>При выполнении исследований применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы. Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования и химреактивов с аналогичными метрологическими характеристиками.


### 1. <a id="p100095"></a>Перечень средств измерений



<table>
<colgroup><col width="79%"><col width="21%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100096"></a>Хроматограф газовый с пламенно-ионизационным детектором</td><td></td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100097"></a>Весы лабораторные аналитические<br>ГОСТ 24104-80Е</td></tr>
<tr><td><a id="p100098"></a>Секундомер</td><td></td></tr>
<tr><td></td><td><a id="p100099"></a>2. Вспомогательные устройства</td></tr>
</table>



| <a id="p100100"></a>Хроматографическая колонка стальная длиной 3 м и внутренним диаметром 3 мм |  |
| --- | --- |
| <a id="p100101"></a>Бидистиллятор | ГОСТ 15150-69 |
| <a id="p100102"></a>Редуктор кислородный | ТУ 26-05-235-70 |
| <a id="p100103"></a>Микрошприцы | ТУ 5Е2.833.106 |
| <a id="p100104"></a>Шприцы медицинские стеклянные вместимостью 5 см | ТУ 64-1-378-83 |
| <a id="p100105"></a>Колбы мерные вместимостью 1000 см | [ГОСТ 1770-74Е](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) |
| <a id="p100106"></a>Пипетки вместимостью 1, 5, 10 см | [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74) |
| <a id="p100107"></a>Пробирки с притертыми пробками вместимостью 10 см | [ГОСТ 1770-74Е](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) |



### 3. <a id="p100108"></a>Вспомогательные материалы и реактивы



| <a id="p100109"></a>Гелий в баллоне | ТУ 51-940-80 |
| --- | --- |
| Водород технический | [ГОСТ 3022-80](https://bukva.ai/docs/usloviya-gost-3022-80) |
| <a id="p100111"></a>Воздух в баллоне | ГОСТ 11882-73 |
| <a id="p100112"></a>Apiezon L на хроматоне N-супер фракции 0,16 - 0,20 мм - неподвижная фаза для заполнения хроматографической колонки |  |
| <a id="p100113"></a>Бензол, х.ч. | ТУ 6-09-787-76 |
| <a id="p100114"></a>Толуол, х.ч. | ТУ 6-09-787-76 |
| <a id="p100115"></a>Фенол, х.ч. | ТУ 6-09-787-76 |
| <a id="p100116"></a>Этилбензол, х.ч. | ТУ 6-09-787-76 |
| <a id="p100117"></a>П-, м-ксилол, х.ч. | ТУ 6-09-915-76 |
| <a id="p100118"></a>О-ксилол | ГСО 2913-84 |
| <a id="p100119"></a>Щавелевая кислота, ч. | ГОСТ 22180-76 |
| <a id="p100120"></a>Вода дистиллированная | ГОСТ 6709-72 |






<div align="right">

<a id="p100121"></a>Приложение 2<br>
(справочное)

</div>


<div align="center">

<a id="p100122"></a>**ТРЕБОВАНИЯ И ПЕРЕЧЕНЬ**<br>
**ОБОРУДОВАНИЯ, НЕОБХОДИМОГО ДЛЯ РЕАЛИЗАЦИИ ИССЛЕДОВАНИЯ**<br>
**И ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ ЦИТОХРОМА P-450 И ГЛУТАТИОНОВОЙ СИСТЕМЫ**

</div>


1. <a id="p100123"></a>Оборудование должно иметь государственный сертификат соответствия техническому регламенту, свидетельство о прохождении метрологического контроля аккредитованными для этого организациями в установленном порядке и в установленные сроки.
2. <a id="p100124"></a>Для каждого прибора, используемого в исследованиях, в журнале фиксируются следующие сведения: наименование прибора, наименование производителя, страна-изготовитель, модель прибора, серийный (заводской) номер, дата приобретения и постановки на учет в лаборатории, дата запуска в эксплуатацию, инвентарный номер, дата и номер свидетельства метрологического контроля на момент исследования, место расположения прибора.
3. <a id="p100125"></a>Эксплуатация оборудования проводится в соответствии с техническим паспортом и руководством пользователя. Выполнение исследований проводят при нормальных климатических условиях в соответствии с ГОСТ 15150: температура воздуха (20 +/- 1) °C; атмосферное давление 630 - 800 мм рт. ст.; влажность воздуха не более 80% при температуре 25 °C. Результаты проведения калибровки, поверки и текущего ремонта оборудования фиксируются в специальном журнале, датируются и заверяются подписью сотрудника, эксплуатирующего оборудование. Журнал должен быть доступен для сотрудников, обеспечивающих его обслуживание.
4. <a id="p100126"></a>Средства измерения


| <a id="p100127"></a>Весы лабораторные 2-го класса точности (максимальная нагрузка<br>до 200 г, основная погрешность при измерении не более 0,2 мг)<br>для взвешивания сухих ингредиентов при подготовке рабочих<br>растворов |
| --- |
| <a id="p100128"></a>Ионометр (pH-метр) для определения pH буферных растворов |


5. <a id="p100129"></a>Оборудование


| <a id="p100130"></a>Хроматографическая колонка стальная длиной 3 м и внутренним диаметром 3 мм |  |
| --- | --- |
| <a id="p100131"></a>Анализатор иммуноферментный микропланшетный автоматический |  |
| <a id="p100132"></a>Амплификатор |  |
| <a id="p100133"></a>Центрифуга лабораторная со скоростью вращения ротора до 3000 об./мин. для пробирок вместимостью 15 куб. см |  |
| <a id="p100134"></a>Центрифуга |  |
| <a id="p100135"></a>Термостат твердотельный |  |
| <a id="p100136"></a>Шейкер планшетный термостатируемый |  |
| <a id="p100137"></a>Прибор для промывки планшет |  |
| <a id="p100138"></a>Холодильник лабораторный с морозильной камерой 2 - 14/-(20 - 30) °C или аналогичный | ГОСТ 26678-85 |
| <a id="p100139"></a>Облучатель-рециркулятор медицинский бактерицидный |  |
| <a id="p100140"></a>Дистиллятор |  |


6. <a id="p100141"></a>Вспомогательные материалы и лабораторная посуда


<table>
<colgroup><col width="79%"><col width="21%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100142"></a>Бидистиллятор<br>Редуктор кислородный</td><td>ГОСТ 15150-69<br>ТУ 26-05-235-70</td></tr>
<tr><td><a id="p100144"></a>Регулируемые автоматические дозаторы 1-канальные (10 - 100, 100 - 1000, 500 - 5000 мкл), погрешность +/- 1 мкл</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100145"></a>Регулируемые автоматические дозаторы 8-канальные (5 - 50, 50 - 300 мкл) погрешность +/- 1 мкл</td><td></td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100146"></a>Стаканы стеклянные химические объемом 50, 500 куб. см<br>ГОСТ 10394-72</td></tr>
<tr><td><a id="p100147"></a>Лабораторные штативы</td><td>ТУ 64-1-2669-73</td></tr>
<tr><td><a id="p100148"></a>Наконечники пластиковые для автоматических дозаторов объемом 10 - 300 мкл, 200 - 1000 мкл, 1000 - 5000 мкл</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100149"></a>Перчатки резиновые</td><td><a href="https://bukva.ai/docs/gost-3-88">ГОСТ 3-88</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100150"></a>Пробирки вакуумные пластиковые Improve без коагулянта объемом 9 куб. см</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100151"></a>Зонд урогенитальный, одноразовый, стерильный</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100152"></a>Транспортная среда для хранения и транспортирования респираторных мазков</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100153"></a>Пробирки</td><td>ГОСТ 10515-75</td></tr>
<tr><td colspan="2"></td></tr>
<tr><td></td><td></td></tr>
</table>


<div align="right">

<a id="p100154"></a>Приложение 3<br>
(справочное)

</div>


<div align="center">

<a id="p100155"></a>**ТРЕБОВАНИЯ И ПЕРЕЧЕНЬ**<br>
**ИСПОЛЬЗУЕМЫХ РЕАКТИВОВ И ТЕСТ-СИСТЕМ, НЕОБХОДИМЫХ**<br>
**ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ ЦИТОХРОМА P-450**<br>
**И ГЛУТАТИОНОВОЙ СИСТЕМЫ**

</div>


1. <a id="p100156"></a>Реактивы и тест-системы, используемые в исследованиях, должны иметь государственный сертификат соответствия. Характеристики реактивов и тест-систем должны быть паспортизированы и иметь документированный сертификат гарантированного срока использования. Условия проведения исследований на тест-системах должны выполняться строго по инструкции производителя или специально разработанным стандартным операционным процедурам и исключать воздействие внешних факторов, способных повлиять на качество выполнения исследований.

2. <a id="p100157"></a>Реактивы и тест-системы


| <a id="p100158"></a>Вода бидистиллированная |  |
| --- | --- |
| <a id="p100159"></a>Магния хлорид, х.ч. | [ГОСТ 4165-78](https://bukva.ai/docs/gost-4165-78) |
| <a id="p100160"></a>Натрия хлорид, х.ч. | ГОСТ 4233-77 |
| <a id="p100161"></a>Натрия додецилсульфат |  |
| <a id="p100162"></a>Спирт этиловый (ректификат) | ГОСТ 18300-87 |
| <a id="p100163"></a>Спирт изоамиловый | [ГОСТ 5830-79](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-5830-79) |
| <a id="p100164"></a>Натрия гидроокись | ГОСТ 4328-77 |
| <a id="p100165"></a>Двуокись кремния с размером частиц 0,5 - 10,0 микрон |  |
| <a id="p100166"></a>Фенол |  |
| <a id="p100167"></a>Хлороформ | ГОСТ 1248-72 |
| <a id="p100168"></a>тРНК |  |
| <a id="p100169"></a>Трис-(оксиметил)-аминометан | ТУ 6-09-4292-76 |
| <a id="p100170"></a>Тест-система для проведения полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени или аналогичная |  |
| <a id="p100171"></a>Тест-система ИФА для определения активности глутатион-S-трансферазы |  |
| <a id="p100172"></a>Тест-система ИФА для определения активности глутатионпероксидазы |  |
| <a id="p100173"></a>Тест-система биохимического анализа для определения активности глутатионредуктазы |  |
| <a id="p100174"></a>Тест-система биохимического анализа для определения активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы |  |






<div align="right">

<a id="p100175"></a>Приложение 4<br>
(справочное)

</div>


<div align="center">

<a id="p100176"></a>*ПРИМЕР* АПРОБАЦИИ МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ<br>
**НАРУШЕНИЯ БИОТРАНСФОРМАЦИИ БЕНЗОЛА В ОРГАНИЗМЕ ДЕТЕЙ,**<br>
**ПРОЖИВАЮЩИХ В УСЛОВИЯХ ХРОНИЧЕСКОГО ВНЕШНЕСРЕДОВОГО**<br>
**ВОЗДЕЙСТВИЯ БЕНЗОЛА**

</div>


<a id="p100177"></a>Результаты апробации предложенной методики показали: содержание бензола в атмосферном воздухе селитебной зоны по данным мониторинговых и натурных наблюдений в 2009 - 2010 гг. зафиксировано на уровне до 1,2 $\text{ПДК}_{\text{сс}.}$ или 4 $RfC_{chr.}$ ; отсутствие фенола в атмосферном воздухе, что исключает его экзогенное ингаляционное поступление в организм.
<a id="p100178"></a>В результате химико-аналитического обследования детей, проживающих в условиях хронического внешнесредового воздействия бензола и отсутствия аэрогенного поступления фенола (группа наблюдения, n = 188), установлено, что у детей группы наблюдения, по сравнению с детьми, проживающими вне зоны аэрогенного воздействия исследуемых химических веществ (контрольная группа, n = 93), в крови регистрируется бензол в 55% случаев от числа обследованных детей, в моче - в 64% случаев (табл. 1).

<div align="right">

<a id="p100179"></a>Таблица 1

</div>


<div align="center">

<a id="p100180"></a>**СОДЕРЖАНИЕ БЕНЗОЛА И ФЕНОЛА В БИОСРЕДАХ ДЕТЕЙ, МГ/КУБ. ДМ**

</div>



<table>
<colgroup><col width="12%"><col width="13%"><col width="25%"><col width="30%"><col width="19%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100181"></a>Вещество</td><td>Биосреда</td><td>Группа наблюдения</td><td>Контрольная группа</td><td>Достоверность различий<br>(p &lt;= 0,05)</td></tr>
<tr><td><a id="p100182"></a>Бензол</td><td rowspan="2">кровь</td><td>0,0182 +/- 0,0025</td><td>нпо <a href="#p100186">&lt;*&gt;</a></td><td>0,000</td></tr>
<tr><td><a id="p100183"></a>Фенол</td><td>0,118 +/- 0,031</td><td>0,011 +/- 0,008</td><td>0,004</td></tr>
<tr><td><a id="p100184"></a>Бензол</td><td rowspan="2">моча</td><td>0,0105 +/- 0,0046</td><td>нпо <a href="#p100186">&lt;*&gt;</a></td><td>0,000</td></tr>
<tr><td><a id="p100185"></a>Фенол</td><td>0,291 +/- 0,097</td><td>0,208 +/- 0,069</td><td>0,000</td></tr>
<tr><td colspan="5"><a id="p100186"></a>&lt;*&gt; нпо, ниже предела обнаружения: нпо бензола - 0,0035 мг/куб. дм. При идентификации вещества в крови детей группы наблюдения ниже предела обнаружения в расчете средней концентрации использована 1/2 предела обнаружения.</td></tr>
</table>


<a id="p100187"></a>Кроме этого, у 70% детей группы наблюдения в крови установлена повышенная концентрация фенола, превышающая данный показатель у детей в группе сравнения в 10 раз. У 26% детей группы наблюдения установлено повышенное содержание фенола в моче. При этом средняя концентрация данного соединения достоверно превысила в 1,4 раза аналогичный показатель у детей в группе сравнения.
<a id="p100188"></a>При выполнении исследования состояния гена цитохрома P-450, обеспечивающего первую фазу биотрансформации бензола, подсчитывали процент гомозигот и гетерозигот. Анализ полученных данных выявил наличие патологической гомозиготы у 4% детей исследуемой группы при отсутствии таковой в контроле. При этом распространенность минорного аллеля у детей группы наблюдения превышала его частоту в контроле (10 и 6% соответственно). Распределение частот генов цитохрома P-450 CYP1A1 у детей представлены в табл. 2.

<div align="right">

<a id="p100189"></a>Таблица 2

<a id="p100190"></a>**РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ЧАСТОТ ГЕНОВ ЦИТОХРОМА P-450 CYP1A1 ДЕТЕЙ**

</div>



<table>
<colgroup><col width="38%"><col width="17%"><col width="22%"><col width="22%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100191"></a>Показатель</td><td>Генотип</td><td>Группа наблюдения, %</td><td>Контрольная группа, %</td></tr>
<tr><td rowspan="5"><a id="p100192"></a>Ген цитохрома P-450 CYP1A1</td><td>A/A <a href="#p100197">&lt;*&gt;</a></td><td>4 (3)</td><td>0 (0)</td></tr>
<tr><td><a id="p100193"></a>A/G <a href="#p100198">&lt;**&gt;</a></td><td>17 (32)</td><td>23 (21)</td></tr>
<tr><td><a id="p100194"></a>G/G <a href="#p100199">&lt;***&gt;</a></td><td>81 (153)</td><td>77 (72)</td></tr>
<tr><td><a id="p100195"></a>G <a href="#p100200">&lt;****&gt;</a></td><td>90</td><td>89</td></tr>
<tr><td><a id="p100196"></a>A <a href="#p100201">&lt;*****&gt;</a></td><td>10</td><td>6</td></tr>
<tr><td colspan="4"><a id="p100197"></a>&lt;*&gt; Патологическая гомозигота.</td></tr>
<tr><td colspan="4"><a id="p100198"></a>&lt;**&gt; Гетерозигота.</td></tr>
<tr><td colspan="4"><a id="p100199"></a>&lt;***&gt; Нормальная гомозигота.</td></tr>
<tr><td colspan="4"><a id="p100200"></a>&lt;****&gt; Нормальный аллель.</td></tr>
<tr><td colspan="4"><a id="p100201"></a>&lt;*****&gt; Патологический аллель (минорный, мутантный).</td></tr>
</table>


<a id="p100202"></a>При исследовании и оценке показателей глутатионовой системы, обеспечивающих вторую фазу биотрансформации бензола, анализировали средние значения активности ферментов и частоты регистрации выявленных отклонений показателей в группе наблюдения и контрольной группе. Результаты исследований представлены в табл. 3.

<div align="right">

<a id="p100203"></a>Таблица 3

</div>


<div align="center">

<a id="p100204"></a>**СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ПОКАЗАТЕЛЕЙ**<br>
**ФУНКЦИЙ ГЛУТАТИОНОВОЙ СИСТЕМЫ У ДЕТЕЙ**

</div>



<table>
<colgroup><col width="18%"><col width="14%"><col width="10%"><col width="10%"><col width="14%"><col width="9%"><col width="8%"><col width="15%"></colgroup>
<tr><td rowspan="3"><a id="p100205"></a>Показатель</td><td colspan="3">Группа наблюдения</td><td colspan="3">Контрольная группа</td><td rowspan="3">Достоверность различий по средним значениям показателей (P &lt;= 0,05)</td></tr>
<tr><td rowspan="2">среднее значение в группе (M +/- m)</td><td colspan="2">частота регистрации проб с отклонением от физиологической нормы, %</td><td rowspan="2">среднее значение в группе (M +/- m)</td><td colspan="2">частота регистрации проб с отклонением от физиологической нормы, %</td></tr>
<tr><td>ниже</td><td>выше</td><td>ниже</td><td>выше</td></tr>
<tr><td><a id="p100206"></a>ГлПО, нг/куб. см</td><td>40,84 +/- 4,15</td><td>21,7</td><td>17,4</td><td>30,64 +/- 1,21</td><td>18,9</td><td>4,9</td><td>0,000</td></tr>
<tr><td><a id="p100207"></a>ГлР, Е/куб. дм</td><td>80,55 +/- 3,09</td><td>1,61</td><td>35,48</td><td>47,58 +/- 3,42</td><td>0,0</td><td>48,28</td><td>0,000</td></tr>
<tr><td><a id="p100208"></a>Гл-6-Ф, Е/куб. дм</td><td>3,18 +/- 0,37</td><td>1,43</td><td>60,0</td><td>2,89 +/- 0,43</td><td>18,2</td><td>9,1</td><td>0,308</td></tr>
<tr><td><a id="p100209"></a>ГлSТр, нг/куб. см</td><td>79,04 +/- 15,86</td><td>23,1</td><td>19,2</td><td>200,11 +/- 35,8</td><td>25,4</td><td>5,08</td><td>0,000</td></tr>
</table>


<a id="p100210"></a>При выполнении исследования анализируются средние значения активности ферментов и частота регистрации выявленных отклонений показателей в группе наблюдения и контрольной группе.
<a id="p100211"></a>У детей группы наблюдения среднее значение активности глутатионпероксидазы (40,84 +/- 4,15) нг/куб. см в сыворотке крови достоверно превысило в 1,3 раза значение данного показателя у детей в контроле. При этом частота регистрации проб с повышенной активностью глутатионпероксидазы (17% случаев от общего количества обследованных детей) в 4 раза превысила показатель в контрольной группе, что свидетельствует о реализации функции глутатионпероксидазы - защита глутатиона от окислительного повреждения бензолом.
<a id="p100212"></a>Средняя активность глутатионредуктазы в сыворотке крови детей группы наблюдения составила (80,55 +/- 3,09) Е/куб. дм, что в 1,7 раза выше данного показателя у детей контрольной группы. Доля проб с повышенной активностью глутатионредуктазы у детей группы наблюдения составила 35% от общего количества обследованных, что достоверно в 1,4 раза ниже частоты регистрации повышенной активности данного фермента у детей контрольной группы (p = 0,000). Зарегистрирована повышенная активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в сыворотке крови детей группы наблюдения в 60% случаев, что в 7 раз выше данного показателя в контрольной группе.
<a id="p100213"></a>Отмечается дисфункция глутатион-S-трансферазы в виде снижения ее активности у детей группы наблюдения (79,04 +/- 15,86) нг/куб. см в 2,5 раза относительно аналогичного показателя у детей контрольной группы, что свидетельствует о низкой конъюгации глутатиона с промежуточным метаболитом бензола - фенолом.
<a id="p100214"></a>Полученные результаты свидетельствуют о сохранении функции ферментов глутатионовой системы, обеспечивающих восстановление глутатиона для дальнейшего связывания его с фенолом, и нарушении процесса конъюгации и выведения фенола из организма, что может привести к его накоплению в биосредах.
<a id="p100215"></a>Учитывая выявленную дисфункцию глутатион-S-трансферазы для подтверждения нарушения процесса биотрансформации бензола, необходимо в дальнейшем оценивать состояние гена данного фермента - GSTP1 (A313G, C341G), ответственного за вторую фазу детоксикации бензола. То есть, для определения степени распространенности наследственно-обусловленных генетических изменений у лиц, подвергающихся хроническому внешнесредовому аэротехногенному воздействию бензола (для последующего исключения их из исследований), необходимо оценивать состояние гена цитохрома P-450 CYP1A1 (T6235C-9893A/G), ответственного за первую фазу детоксикации, и гена GSTP1 (A313G, C341G), ответственного за вторую фазу детоксикации.
<a id="p100216"></a>Накопление бензола и фенола в крови и моче может привести к развитию неинфекционных соматических заболеваний критических органов и систем. Выполненная оценка заболеваемости обследованных детей группы наблюдения показала, что частота регистрации анемии (23% случаев от общего числа обследованных) и астеноневротического синдрома (19%) превышает в 1,3 и 1,7 раза соответственно встречаемость аналогичных заболеваний у детей контрольной группы (16 и 10% соответственно). Достоверно установлена причинно-следственная связь между содержанием бензола в атмосферном воздухе и уровнем заболеваемости детей анемией (OR = 1,3; DI = 1,11 - 3,38), астеноневротическим синдромом (OR = 2,40; DI = 1,80 - 4,23).
<a id="p100217"></a>Полученные результаты свидетельствуют о нарушении процесса биотрансформации бензола в организме детей, проживающих в условиях внешнесредового аэрогенного воздействия.



<a id="p100218"></a>

---