CAC/GL 40-1993. Кодекс Алиментариус. Руководство по надлежащей лабораторной практике по анализу остатков пестицидов
Актуально на 04.11.2026.
Как цитировать: "CAC/GL 40-1993. Кодекс Алиментариус. Руководство по надлежащей лабораторной практике по анализу остатков пестицидов". CAC/GL 40-1993. https://bukva.ai/docs/kodeks-cacgl-40-1993
(Принят в 1993 году)
(с изм. от 2010 года)
[неофициальный перевод] <*>
РУКОВОДСТВО ПО НАДЛЕЖАЩЕЙ ЛАБОРАТОРНОЙ ПРАКТИКЕ ПО АНАЛИЗУ ОСТАТКОВ ПЕСТИЦИДОВ
(CAC/GL 40-1993) <**>
<**> Guidelines on Good Laboratory Practice in Pesticide Residue Analysis (CAC/GL 40-1993). Пересмотрено в 2003 г. Изменено в 2010 г.
ПРЕДИСЛОВИЕ
Настоящее Руководство направлено на содействие в обеспечении достоверности аналитических результатов определения максимальных уровней остатков пищевых продуктов, поступающих в международную торговлю. Достоверные аналитические результаты необходимы для охраны здоровья потребителей и облегчения международной торговли.
В дополнение к настоящему Руководству ниже представлены другие относящиеся к данному вопросу Рекомендации, разработанные Комитетом по остаткам пестицидов (CCPR) в области требований соблюдения максимальных уровней остатков пестицидов:
1. Рекомендованные методы по отбору проб для определения остатков пестицидов в целях соответствия максимальным уровням остатков (CAC/GL 33-1999);
2. Части продукции, в отношении которых устанавливаются максимальные уровни остатков и в отношении которых проводится анализ (CAC/GL 41-1993);
3. Перечень максимальных уровней остатков пестицидов (Максимальные уровни остатков пестицидов, одобренные Комиссией Кодекса Алиментариус, доступны на сайте: http://www.codexalimentarius.net);
4. Рекомендованные методы определения остатков пестицидов (CODEX STAN 229-1993);
5. Классификация пищевых продуктов и кормов (CAC/MISC 4-1993).
1. ВВЕДЕНИЕ
Принято считать, что конечная цель надлежащей практики в международной торговле зависит, кроме всего прочего, от достоверности аналитических результатов. А это, в свою очередь, особенно в анализе остатков пестицидов, зависит не только от применения достоверных аналитических методов, но также от опыта работы химика-аналитика и соблюдения «надлежащей практики, касающейся анализов пестицидов».
Настоящее Руководство устанавливает надлежащую аналитическую практику и может быть рассмотрено в трех взаимосвязанных частях:
Химик-аналитик (Раздел 2);
Основные ресурсы (Раздел 3);
Анализ (Раздел 4).
Требования к оборудованию, управлению, персоналу, обеспечению и контролю качества, документальному оформлению результатов и исходных данных, а также других значимых факторов, являющихся необходимыми условиями для получения достоверных и прослеживаемых результатов, в целом описаны в ISO/IEC 17025 (1999) и в серии руководств OECD по Надлежащей лабораторной практике в соответствии с национальным законодательством и регулированием. Настоящее Руководство, не являющееся полным, характеризует наиболее существенные принципы и правила, которым необходимо следовать при анализе остатков пестицидов.
2. ХИМИК-АНАЛИТИК
2.1. Анализ остатков состоит из последовательности процедур, большинство из которых известны или полностью понятны квалифицированному химику-аналитику, но поскольку концентрации анализируемого вещества находятся в пределах от \mu g/\text{кг} до мг/кг и анализы могут быть сложными, важным является обращение внимания на детали. Исполняющий обязанности химика-аналитика должен иметь соответствующую профессиональную квалификацию и опыт работы, а также должен быть компетентным в проведении анализов остатков пестицидов. Персонал должен быть полностью обученным и опытным в отношении правильного использования аппаратуры и должен обладать соответствующими лабораторными навыками. Кроме того, до выполнения анализа образцов проб каждый химик-аналитик, применяющий метод впервые, должен пройти контрольные тесты, описанные в разделе 4.4.5 Таблицы 4, чтобы показать, что он может применять метод в рамках предполагаемых физико-химических свойств пробы, установленных при валидации метода. Они должны обладать необходимыми знаниями принципов анализа остатков пестицидов и требований системы контроля качества аналитических измерений (AQA). Они должны понимать цель каждой стадии метода анализа, важность соблюдения точного следования описанным методикам и регистрации всех неизбежных отклонений. Они также должны быть обучены оценке и интерпретации полученных данных. Для всего персонала лаборатории необходимо вести запись проведения обучения и опыта работы.
2.2. Когда лаборатория для определения остатков подготовлена к работе, часть времени обучения персонал должен проводить в хорошо оборудованной лаборатории, где есть возможность получения квалифицированных советов и знаний. Может возникнуть необходимость приобретения опыта персоналом более чем в одной лаборатории в том случае, если в лаборатории проводится определение остатков широкого спектра пестицидов.
3. ОСНОВНЫЕ РЕСУРСЫ
3.1. Лаборатория
3.1.1. Лаборатория и оборудование в ней должны быть спроектированы таким образом, чтобы соответствующие задания могли быть выполнены в четко определенных местах для достижения максимального уровня безопасности и минимальной вероятности контаминации проб. Конструктивные элементы лаборатории и применяемые в ней материалы должны быть устойчивы к используемым в них химическим реактивам. Идеальными условиями следует признать проектирование отдельных помещений, предназначенных для получения, хранения и подготовки проб, получения экстрактов и их очистки, а также для приборов, используемых на конечной стадии определения. Область, где проводятся экстрагирование и очистка экстрактов, должна соответствовать техническим требованиям к лабораториям, работающим с органическими растворителями, и все вытяжное оборудование должно быть высокого качества. Прием, хранение и подготовку проб необходимо выполнять в тех местах, которые предназначены для работы с остатками веществ. Приоритетными требованиями являются сохранение чистоты проб и соблюдение соответствующих мер техники безопасности персонала.
3.1.2. Безопасность лаборатории должна быть рассмотрена в отношении того, что необходимо и что предпочтительно, поскольку вполне возможно, что обязательные условия работы, применяемые в лабораториях по определению остатков в одних частях мира, совершенно неприменимы в других. В рабочей области лаборатории не разрешено курение, принятие пищи, употребление напитков или применение косметических средств. В рабочей области лаборатории следует хранить только небольшие объемы растворителей, а основной объем растворителей должен храниться отдельно, далеко от главной рабочей области. Использование высокотоксичных растворителей и реагентов должно быть сведено к минимуму там, где это возможно. По возможности все отработанные растворители необходимо хранить и утилизировать безопасным способом, не оказывающим отрицательного воздействия на окружающую среду, принимая во внимание соответствующие национальные требования.
3.1.3. Основная рабочая область лаборатории должна быть спроектирована и оборудована для применения соответствующего набора аналитических растворителей. Все оборудование, а именно осветители, измельчители и холодильные устройства, должно быть «искробезопасным» или «взрывобезопасным». Стадии экстрагирования, очистки и концентрирования необходимо выполнять в хорошо проветриваемом помещении, предпочтительно в вытяжных шкафах.
3.1.4. При использовании стеклянной посуды под действием вакуума или избыточного давления должны применяться защитные экраны. Необходимо иметь достаточный запас открытых защитных очков, перчаток и другой защитной спецодежды, аварийных умывальников и набор средств для оказания помощи при разливе реактивов. Должно быть доступно соответствующее противопожарное оборудование. Персонал должен быть осведомлен о том, что многие пестициды обладают острыми или хроническими токсическими свойствами, и, следовательно, необходима повышенная степень осторожности при обращении со стандартными эталонными соединениями.
3.2. Оборудование и материалы
3.2.1. Для работы лаборатории необходимы бесперебойная и достаточная подача электроэнергии и воды. Необходимо достаточное обеспечение реагентами, растворителями, топливом, стеклянной посудой, хроматографическими материалами и т.п.
3.2.2. Необходимо регулярное обслуживание и калибровка хроматографического оборудования, весов, спектрофотометров и т.д., при этом необходимо вести запись всего технического обслуживания/ремонта каждой единицы оборудования. Калибровка необходима для оборудования, на котором выполняются измерения. Может быть достаточно сравнения калибровочных кривых со стандартными.
3.2.3. Регулярная калибровка и перекалибровка измерительного оборудования должна проводиться там, где возможное изменение номинального значения может способствовать увеличению неопределенности измерения. Необходимо регулярно проводить калибровку весов, автоматических пипеток/дозаторов и подобного оборудования. Необходимо постоянно контролировать температурный режим работы холодильных установок и морозильных камер и проверять их работу через установленные интервалы времени. Все записи необходимо пополнять последними данными и сохранять.
3.2.4. Используемое оборудование должно соответствовать целевому назначению.
3.2.5. Всем лабораториям требуются стандартные образцы пестицидов известной и приемлемо высокой степени чистоты. Должны быть в наличии аналитические стандарты всех исходных соединений, мониторинг проб которых проводится в данной лаборатории, а также их метаболитов, включенных в перечень максимальных уровней остатков пестицидов.
3.2.6. Все аналитические стандарты, исходные растворы и реагенты необходимо должным образом маркировать, включая дату приготовления, идентификационные данные химика-аналитика, используемый растворитель и применяемые условия хранения, при этом соединения, на чью сохранность могут оказать влияние процессы разложения, должны быть четко маркированы датой окончания срока действия и должны храниться в соответствующих условиях. Стандартные образцы должны храниться в условиях, сводящих к минимуму степень разложения, например, низкая температура, защита от влажности и света. Такие же меры должны быть приняты для того, чтобы стандартные растворы пестицидов не разложились под влиянием света или тепла при хранении или не стали концентрированными при испарении растворителя.
4. АНАЛИЗ
Методы, применяемые для определения остатков пестицидов, должны в целом удовлетворять критериям, приведенным в Таблице 3.
4.1. Предотвращение контаминации
4.1.1. Одними из важных сфер, в которых анализ остатков пестицидов существенно отличается от макроанализа, являются контаминация и помехи. Следовые количества контаминации в конечных образцах, используемых на стадии определения, могут привести к появлению ошибок, таких как ложноположительные или ложноотрицательные результаты, или к потере чувствительности, что может препятствовать обнаружению остатков. Контаминация может возникнуть в результате всех операций, которые связаны с отбором проб, транспортировкой проб и их хранением, а также с самими анализами. Вся стеклянная посуда, реагенты, органические растворители и вода до их применения должны быть проверены в отношении возможных мешающих контаминантов анализом холостой пробы.
4.1.2. Лаки, защитные кремы, мыла, содержащие гермициды, аэрозоли против насекомых, парфюмерно-косметические изделия могут привести к увеличению помех, что имеет особое значение при использовании детектора электронного захвата. Единственным решением данной проблемы является запрет на их использование персоналом во время работы в лаборатории.
4.1.3. Смазочные и изоляционные материалы, изделия из пластмассы, природные и синтетические каучуки, защитные перчатки, масло из обычных трубопроводов сжатого воздуха и во втулках в местах соединений, фильтровальная бумага и хлопковая вата также могут привести к контаминации.
4.1.4. Химические реагенты, адсорбенты и основные лабораторные растворители могут содержать, адсорбировать или абсорбировать соединения, которые влияют на результаты анализа. Может возникнуть необходимость очистки реагентов или адсорбентов, и во всех случаях необходимо применять растворитель, очищенный двойной перегонкой. Часто вызывает сомнения деионизированная вода, и предпочтение отдается воде, очищенной двойной перегонкой, несмотря на то, что во многих случаях может быть достаточно водопроводной воды или воды из скважины.
4.1.5. Контаминация стеклянной посуды, шприцев и газохроматографических колонок может быть следствием контакта с предыдущими пробами или экстрактами. Вся стеклянная посуда должна быть очищена раствором детергента, должна быть тщательно промыта дистиллированной (или другой чистой) водой и затем должна быть промыта используемым растворителем. Стеклянная посуда, применяемая для анализа следов вещества, должна храниться отдельно и не должна применяться для других целей.
4.1.6. Стандартные образцы пестицидов всегда должны храниться при необходимой температуре в помещении, отделенном от основной лаборатории по определению остатков. Концентрированные аналитические стандартные растворы и экстракты не должны храниться в том же помещении.
4.1.7. Аппарат, содержащий поливинилхлорид (PVC), должен рассматриваться как сомнительный и, если установлено, что он является источником контаминации, не следует допускать его наличия в лаборатории по анализу остатков. Другие материалы, содержащие пластификаторы, также должны рассматриваться как сомнительные, но обычно допустимы тефлон (PTFE) и силиконовые каучуки, при определенных условиях могут быть приемлемы и другие. Контейнеры для хранения проб могут быть источником контаминации, и для этих целей могут потребоваться стеклянные колбы с притертой стеклянной пробкой. В идеале аналитические приборы должны находиться в отдельном помещении. Характер и выраженность контаминации могут изменяться в зависимости от вида применяемой для определения техники и уровня остатков определяемых пестицидов. Например, проблемы контаминации, которые важны в методах, основанных на газовой хроматографии или высокоэффективной жидкостной хроматографии, могут иметь меньшее значение при применении спектрофотометрического определения, и наоборот. Для относительно высоких уровней пестицидов фоновые помехи от растворителей и других материалов могут быть малозначимы по сравнению с величиной имеющихся остатков. Многие проблемы могут быть преодолены использованием альтернативных детекторов. Наличие контаминанта может быть приемлемо в том случае, если оно не влияет на определение остатков.
4.1.8. Для определения остатков и разработки методов их определения необходимо иметь полностью отдельное лабораторное оборудование. Пробы и их подготовка должны быть отделены от всех операций, проводимых в лаборатории, для предотвращения перекрестной контаминации.
4.2. Прием и хранение проб
4.2.1. Каждая проба, поступающая в лабораторию, должна сопровождаться полной информацией о месте взятия пробы, о необходимом анализе и о потенциальных угрозах, связанных с обращением с данной пробой.
4.2.2. При получении пробы сразу же присваивается индивидуальный идентификационный код, который должен сопровождать ее при выполнении всех стадий анализа до получения результатов. Пробы должны быть проверены на предмет обезвреживания, при этом необходимо сохранение всех записей.
4.2.3. Все операции подготовки проб и подвыборки должны выполняться с применением процедур, продемонстрировавших обеспечение репрезентативности и отсутствие влияния на концентрацию присутствующих остатков.
4.2.4. Если пробы не могут быть проанализированы сразу, но анализ должен быть выполнен быстро, их следует хранить при температуре 1 — 5 °C, без доступа прямого солнечного света, и анализ необходимо выполнить в течение нескольких дней. Однако пробы, полученные в замороженном состоянии, до выполнения анализа необходимо хранить при <= — 16 °C. В некоторых случаях может быть необходимо более длительное хранение проб до выполнения анализа. В указанных случаях температура хранения должна быть приблизительно — 20 °C, при данной температуре ферментное разложение остатков пестицидов обычно чрезвычайно медленное. Если длительное хранение неизбежно, влияние хранения должно быть проверено анализом концентрированных проб, которые хранились в тех же условиях на протяжении аналогичного периода времени. Полезная информация в отношении стабильности свойств остатков пестицидов при хранении может быть найдена в ежегодных изданиях ФАО «Остатки пестицидов — Оценки», подготовленных на Объединенном заседании ФАО/ВОЗ по остаткам пестицидов (JMPR), и в информации, предоставленной производителями пестицидов при регистрации их продукции.
4.2.5. Если пробы подлежат замораживанию, рекомендуется осуществлять отбор аналитической пробы до замораживания для того, чтобы минимизировать возможное влияние отделения воды в виде кристаллов льда во время хранения. Необходимо соблюдать осторожность для обеспечения того, чтобы вся проба использовалась при анализе.
4.2.6. Контейнеры должны быть герметичными. Ни контейнеры, используемые для хранения, ни их пробки или колпачки не должны допускать протекания анализируемых веществ в камеру хранения.
4.3. Стандартные операционные процедуры (SOPs)
4.3.1. SOPs необходимо использовать для всех производственных процессов. Описания SOPs должны содержать полные рабочие инструкции, а также информацию по применению, ожидаемое выполнение, внутренний контроль качества (проверка рабочих характеристик) требований и подсчет результатов. В описание должна быть включена информация обо всех рисках, возникающих при применении метода, стандартов или реагентов.
4.3.2. Все отклонения от SOP должны быть зарегистрированы и должны быть разрешены ответственным химиком-аналитиком.
4.4 Валидация методов <*>
<*> Данный раздел основан на рекомендациях, разработанных на заседании AOAC/FAO/IAEA, проходившем в Мишкольце, Венгрия, в 1999 г. Полный текст документа доступен на сайте www.iaea.org/trc и в книге A. Fajgelj & A. Ambrus «Principles and Practices of Method Validation», Royal Society of Chemistry, 2000.
4.4.1. Опубликованы Руководства по валидации аналитических методов для различных целей. Принципы, описанные в данном разделе, являются практически применимыми и предназначенными для валидации аналитических методов по определению остатков пестицидов. Руководство не является нормативным. Химик-аналитик должен выбрать уровень требуемой валидации, необходимой для демонстрации соответствия метода предполагаемой цели, и, исходя из этого, должен предъявить необходимые для валидации данные. Например, требования, касающиеся методов контроля по соблюдению максимальных уровней остатков, могут совершенно отличаться от требований по предоставлению данных для оценки абсорбции.
4.4.2. Аналитический метод представляет собой ряд последовательных процедур от приема пробы до получения конечного результата. Валидация — это процесс, подтверждающий, что метод соответствует предполагаемой цели. Метод может быть разработан в данном учреждении, взят из литературы или получен из иного источника. В указанном случае метод может быть переработан или модифицирован для удовлетворения требований и технических возможностей данной лаборатории и/или цели, для которой данный метод будет использован. Как правило, валидация следует после завершения разработки метода, и принимается, что такие требования, как калибровка, пригодность системы, стабильность анализируемого вещества и т.д., — установлены удовлетворительно. При валидации и применении метода анализа измерения должны выполняться в диапазоне калибровки используемой системы обнаружения. В целом валидация будет предшествовать практическому применению метода анализа проб, но последующая проверка его рабочих характеристик является важным непрерывным аспектом процесса. Требования к данным проверки рабочих характеристик являются сокращенным вариантом требований, необходимых для валидации метода.
Квалификационные испытания (или другие межлабораторные технологии проведения испытаний) там, где это осуществимо, предоставляют необходимые средства для проверки общей точности результатов, полученных при применении метода, а также предоставляют информацию о межлабораторной вариабельности результатов. Однако квалификационные испытания обычно не связаны с установлением стабильности анализируемого вещества, его гомогенности, а также его извлечением из анализируемой пробы.
Там, где требуются данные по неопределенности результатов, указанная информация должна включать данные проверки рабочих характеристик и не должна основываться исключительно на данных валидации метода.
4.4.3. Всякий раз, когда лаборатория выполняет разработку метода и/или его модификацию, влияние лабораторных показателей метода должно быть до валидации обоснованно, например, применением испытаний на устойчивость. Необходим тщательный контроль в отношении всех аспектов метода, которые могут оказать влияние на результаты, таких как: размер пробы; изменение объемов; изменение рабочих характеристик применяемых систем очистки; стабильность реагентов или приготовленных производных; влияние света, температуры, растворителя и хранения на анализируемое вещество в экстрактах; влияние растворителя, инжектора и разделительной колонки, характеристик подвижной фазы (состав и скорость потока), температуры, системы обнаружения, коэкстрактивных веществ и др. на систему обнаружения. Наиболее важным является то, чтобы качественное и количественное соотношение между измеренным сигналом и искомым анализируемым веществом было обоснованно точно.
4.4.4. Предпочтение должно быть отдано методам, применяющимся для анализа остатков многих пестицидов или сложных матриц. При валидации методов важно использование репрезентативных анализируемых веществ или матриц. С этой целью продукты должны быть достаточно, но не чрезмерно, разделены по группам. Например, некоторые пищевые продукты представлены в широком ассортименте небольших произведенных партий, или культурных сортов, или выведенных сортов и т.д. В целом, хотя и не всегда, отдельный вид определенного продукта может быть рассмотрен для представления других таких же продуктов, но, например, отдельные виды фруктов или овощей не должны быть взяты для представления всех фруктов или овощей (Таблица 5). Каждый случай должен быть рассмотрен по существу, но там, где известно, что определенные варианты продукта отличаются от других по их влиянию на характеристики метода, анализы указанных вариантов необходимы. От вида к виду могут возникать значительные различия в точности и аккуратности методов, особенно на стадии определения.
4.4.4.1. Если опыт показывает сходную характеристику экстрагирования и очистки среди приблизительно похожих продуктов (матриц), может быть принят упрощенный подход для проверки рабочих характеристик. Из Таблицы 5 может быть выбран репрезентативный продукт для представления группы продуктов, имеющей общие свойства, и может быть использован для валидации процедуры или метода. В Таблице 5 классификация продуктов произведена в соответствии с Классификацией <*>.
<*> Классификация пищевых продуктов и кормов (CAC/MISC 4-1993).
Следующие примеры демонстрируют, насколько широко данные по валидации могут быть распространены на другие продукты:
- злаковые растения, валидация для всех зерновых не может быть применена для отрубей или хлеба, но валидация для пшеничного зерна может быть применена для ячменного зерна или пшеничной муки;
- продукты животноводства, валидация для мышечной ткани не применяется к жиру или субпродуктам, но валидация для куриного жира может быть применена для жира крупного рогатого скота;
- фрукты и овощи, валидация для всех свежих продуктов не может быть применена для сухофруктов, но валидация для капусты кочанной может быть применена для капусты брюссельской.
4.4.4.2. Подобным образом репрезентативные анализируемые вещества могут быть использованы для определения рабочих характеристик метода. Могут быть выбраны соединения, обладающие такими физико-химическими свойствами анализируемого вещества, которые ориентированы на определение данным методом. Выбор репрезентативного анализируемого вещества должен быть основан на цели и области метода анализа при соблюдении следующих условий.
(a) Выбранные репрезентативные анализируемые вещества должны:
(i) обладать достаточно широким диапазоном тех физико-химических свойств, которые присущи анализируемому веществу;
(ii) быть такими, которые, вероятно, будут определяться регулярно, или для которых принципиально важные решения будут приниматься на основании результатов анализа.
(b) По мере возможности все аналитические вещества, включаемые в первоначальный процесс валидации, должны быть такими, которые будут определяться регулярно и которые могут быть одновременно определены применяемой системой обнаружения.
(c) Концентрация аналитических веществ, применяемых для характеристики метода, должна покрывать допустимые пределы (ALs, см. Глоссарий терминов) всех анализируемых веществ, планируемых для исследования во всех продуктах. Следовательно, выбранные репрезентативные аналитические вещества должны включать, кроме всего прочего, вещества с высоким и низким AL. Таким образом, расширенные пределы, используемые при испытании рабочих характеристик с помощью аналитических веществ/репрезентативных продуктов, необязательно должны соответствовать действующим ALs.
4.4.5. Если соответствующие данные уже имеются, химик-аналитик необязательно должен выполнять все испытания. Однако вся необходимая информация должна быть включена или указана в записях о валидации. В Таблице 1 представлен обзор параметров, предназначенных для валидации метода в соответствии со статусом метода, для которого будет проводиться валидация. Специфические параметры и критерии, которые будут оцениваться, представлены в Таблице 2. Оцениваемые параметры должны быть ограничены только теми, которые соответствуют методу и цели, для которой определенный метод будет применяться. Во многих случаях рабочие характеристики в отношении нескольких параметров могут быть получены одновременно в одном эксперименте. Проекты испытаний, в которых различные факторы изменены в одно и то же время (проекты факторного эксперимента), могут помочь минимизировать необходимые средства. Рабочие характеристики аналитического метода должны быть проверены во время его разработки и при последующем применении, как указано в разделе 4.5, в соответствии с критериями, приведенными в Таблице 3.
4.4.6. Методы, которые предназначены для определения отдельных остатков, необходимо полностью проверить со всеми анализируемыми веществами и материалами проб, специфичными для целевого назначения, или должны быть использованы матрицы проб, репрезентативных для анализируемых данной лабораторией.
4.4.7. Методы определения группы остатков (GSMs) должны быть изначально проверены с одним или более репрезентативными продуктами и как минимум двумя репрезентативными анализируемыми веществами, отобранными из группы.
4.4.8. Методы множественных остатков (MRMs) должны быть проверены с применением репрезентативных продуктов и репрезентативных анализируемых веществ.
4.5. Проверка рабочих характеристик
4.5.1 Основные цели проверки рабочих характеристик:
- мониторинг выполнимости метода в реальных условиях, преобладающих при его использовании;
- учет влияния неизбежных изменений, вызванных, например, составом проб, техническими характеристиками инструментов, качеством химических препаратов, сменой химика-аналитика, выполнявшего анализ, и условиями окружающей среды лаборатории;
- демонстрация того, что рабочие характеристики метода в целом аналогичны обоснованным при его валидации, показывающая, что данный метод «статистически контролируем» и точность и неопределенность результатов сопоставимы с ожидаемыми. С этой целью данные, полученные во время валидации метода, могут быть обновлены данными, полученными при проверке рабочих характеристик во время регулярного применения метода.
Результаты внутреннего контроля качества предоставляют существенную информацию в отношении долгосрочной воспроизводимости и других рабочих характеристик метода, включая сведения о тех анализируемых веществах и продуктах, которые были включены в область применения метода анализа во время его усовершенствования.
В Таблице 2 описаны основные рабочие характеристики, которые должны подвергаться испытаниям, и соответствующие процедуры испытаний.
Для эффективной проверки рабочих характеристик анализ проб выполняется одновременно с соответствующим контролем качества анализа (анализ холостых проб и определение извлечения, анализ эталонных материалов и т.д.). Могут быть использованы контрольные карты для проверки на наличие отклонений при выполнении метода и для подтверждения того, что осуществляется статистический контроль.
4.5.2 Построение и применение контрольных карт
4.5.2.1. Контрольные карты могут быть полезным инструментом для демонстрации выполнения метода и повторяемости выбранного параметра. Примером является контрольная карта извлечений. Ее применение зависит от задач лаборатории. Если анализируется большое число однотипных проб для одних и тех же действующих веществ, контрольная карта основана на среднем извлечении и его стандартном отклонении, полученном при регулярном применении метода. Если анализируются небольшие количества каждой из большого набора проб для большого числа анализируемых веществ с процедурой анализа, предназначенной для определения множественных остатков, контрольные карты не могут быть применены обычным способом. В таких случаях первоначально контрольная карта строится со средним показателем извлечения (Q) репрезентативных анализируемых веществ в репрезентативных матрицах и типичным воспроизводимым внутрилабораторным коэффициентом вариации (CVAtyp), полученным описанным ниже способом. Если данные среднего показателя извлечения и их коэффициенты вариации, полученные при валидации метода для отдельного анализируемого вещества/матриц пробы, статистически не различны, они могут быть рассмотрены как оценка истинного извлечения и точности метода, и их соответствующая комбинация среднего извлечения (Qtyp) и коэффициента вариации (CVAtyp) метода может быть установлена и применена для построения первоначальной контрольной карты. Предупредительной границей и пределом, при выходе за который необходимо вмешательство в процесс анализа, являются
Qtyp +/- 2 * CVAtyp * Q и Qtyp +/- 3 * CVAtyp * Q, соответственно.
4.5.2.2. Если метод применяется для регулярного анализа различных комбинаций анализируемых веществ/матриц, представленных при валидации метода, индивидуальные извлечения наносятся на карту. Воспроизводимость метода при его обычном использовании может быть в некоторой степени выше, чем полученная при валидации. В этой связи, если значения извлечений лежат выше предупредительных границ или иногда вне предела на контрольной карте, но в диапазонах, полученных из значений CVA, приведенных в Таблице 3, специальных действий не требуется.
4.5.2.3. Основываясь на дополнительных 15 — 20 испытаниях извлечения, выполненных при регулярном применении метода, как части проверки рабочих характеристик, среднее или типичное извлечение и CVA должны быть пересчитаны, на основании чего будет построена новая контрольная карта, отражающая воспроизводимость метода при его продолжительном применении. Установленные новые параметры должны быть в приемлемом диапазоне, определенном в Таблице 3.
4.5.2.4. Если это недостижимо, например, в случае особенно проблемных анализируемых веществ, результаты проб должны быть зарегистрированы как имеющие меньшие точность и погрешность, чем обычно наблюдаемые при определении остатков пестицидов.
4.5.2.5. При регулярном применении метода, если среднее значение извлечения первых 10 или более испытаний для определенного анализируемого вещества/матрицы пробы существенно отличается (P = 0,05) от среднего значения извлечения, полученного для репрезентативных анализируемого вещества/матриц пробы, Qtyp и CVtyp неприменимы. Необходимо рассчитать новые предупредительные границы и пределы на контрольной карте, при выходе за которые необходимо вмешательство в процесс анализа, для определенного анализируемого вещества/матрицы пробы, используя новое значение среднего извлечения, и измерить значения CV.
4.5.2.6. Если данные проверки рабочих характеристик неоднократно выходят за предупредительные границы (превышение предупредительной границы одного из двадцати измерений приемлемо), должны быть проверены условия применения метода, установлены источники ошибки (ошибок), и до продолжения применения метода должны быть проведены необходимые корректирующие действия.
4.5.2.7. Если данные проверки рабочих характеристик находятся за границами уточненных пределов на контрольной карте, установленных согласно разделам 4.5.2.1 - 4.5.2.3, партия продуктов, которая подвергалась анализу (или по крайней мере пробы, в которых обнаружены остатки на уровне >= 0,7 AL или 0,5 AL для регулярно и периодически определяемых анализируемых веществ соответственно), должна быть проверена повторно.
4.5.2.8. Другим эффективным способом проверки рабочих характеристик является повторный анализ аналитических частей положительных проб. Их результаты могут быть использованы для подсчета суммарной внутрилабораторной воспроизводимости метода (CVLtyp) в целом или для определенного анализируемого вещества/матрицы пробы. В данном случае CVLtyp будет также включать неопределенность подготовки пробы, но не покажет возможные потери во время указанного процесса.
4.6. Подтверждающие испытания
4.6.1. В тех случаях, когда анализы были выполнены для мониторинга или для принятия принудительных мер, особенно важно, чтобы подтверждающие данные были получены до официального объявления результатов анализа относительно тех пищевых продуктов, которые обычно не связывают с остатками пестицида, или если полученные результаты свидетельствуют о превышении MRLs. Анализируемые пробы могут содержать мешающие вещества, которые могут быть ложно идентифицированы как пестициды. Например, для газовой хроматографии с детектированием по электронному захвату такими веществами могут быть эфиры фталевой кислоты, а для фосфор-селективных детекторов — это соединения, содержащие серу и азот. Первым шагом в данном случае будет повторный анализ тем же методом, если первоначальный вывод был основан на анализе только отобранной части. Если наличие остатков будет подтверждено, это будет служить доказательством воспроизводимости результатов определения. Следует заметить, что лишь доказательство, подтверждающее отсутствие определяемых в пробе остатков, обеспечивается данными проверки рабочих характеристик.
4.6.2. Подтверждающие испытания могут быть количественными и/или качественными, но в большинстве случаев будут необходимы оба типа информации. Определенные проблемы возникают, когда остатки должны быть подтверждены на уровне или около предела определения, но, хотя на этом уровне сложно выполнить количественное определение, необходимо обеспечить адекватное подтверждение уровня и идентификации.
4.6.3. Необходимость в подтверждающих испытаниях может зависеть от типа пробы или ее известной истории. В некоторых сельскохозяйственных культурах или продуктах часто находят определенные остатки. Для серий проб близкого происхождения, которые содержат остатки одних и тех же пестицидов, этого может быть достаточно для подтверждения их идентификации в небольшой части произвольно отобранных проб. Подобным образом, если известно, что определенный пестицид применялся при производстве анализируемого материала пробы, в подтверждении идентификации практически нет необходимости, хотя произвольно выбранные результаты должны быть подтверждены. Если имеются «холостые» пробы, они должны быть применены для проверки присутствия возможных мешающих веществ.
4.6.4. В зависимости от первоначальной технологии определения для проверки результатов количественного анализа может потребоваться альтернативная процедура, которая может быть другим методом определения. Для качественного подтверждения (идентификации) желательно применение масс-спектрометрических данных или комбинации технологий, основанных на различии физико-химических свойств (см. Таблицу 6).
4.6.5. Необходимыми шагами для положительной идентификации являются вопрос о роли химика-аналитика, а также определенное внимание необходимо уделить выбору метода, который минимизирует влияние мешающих соединений. Выбор технологии(ий) осуществляется в зависимости от наличия надлежащей аппаратуры и практического опыта в лаборатории, проводящей испытание. В Таблице 6 приведены некоторые альтернативные процедуры для подтверждения.
4.7. Масс-спектрометрия
4.7.1. Данные по остаткам, полученные с помощью масс-спектрометрии, могут представлять собой наиболее точные сведения, и там, где имеется соответствующее оборудование, масс-спектрометрия является наилучшей подтверждающей технологией. Указанная технология может быть использована и в целях скрининга остатков. Определение остатков масс-спектрометрией обычно выполняется в сочетании с технологией хроматографического разделения для определения времени удерживания, отношения массы иона к заряду и относительного содержания ионов одновременно. Технология разделения и масс-спектрометр, метод их соединения и диапазон концентрация определяемых пестицидов обычно взаимосвязаны, и нет единой комбинации, подходящей для анализа всех соединений. Прохождение без количественных потерь неустойчивых веществ через хроматографическую систему и систему взаимодействия относятся к проблемам, сходным с теми, что имеются при применении других детекторов. Наиболее точным подтверждением присутствия остатков является получение «полного» масс-спектра при ионизации электронным ударом (в практике обычно от m/z50 и выше диапазона молекулярного иона). Концентрация ионов в спектре и отсутствие мешающих ионов являются наиболее важными факторами в доказательстве идентификации. Указанный метод анализа является наименее селективным, и мешающие влияния загрязняющих веществ, которые могут быть введены при изготовлении или хранении экстрактов, должны быть исключены. Системы данных масс-спектрометра позволяют исключить исходные мешающие сигналы (например, фон колонки) «исключением фона», но данная технология должна использоваться с осторожностью. Повышение чувствительности обычно достигается посредством ограничения массы исследуемого образца или селективным мониторингом ионов, но при этом будет осуществлен мониторинг меньшего количества ионов (особенно если они имеют низкую массу) и будут получены менее точные данные. Дополнительное подтверждение идентификации может быть получено (i) при использовании альтернативной хроматографической колонки; (ii) при использовании альтернативной технологии ионизации (например, химическая ионизация); (iii) при мониторинге продуктов дальнейших реакций выбранных ионов при тандемной масс-спектрометрии (MS/MS или MSn); или (iv) при мониторинге выбранных ионов при увеличении разрешающей способности масс-спектрометра. Для количественного определения ионы, подвергаемые мониторингу, должны быть такими, которые в наибольшей степени специфичны для анализируемого вещества, не должны вносить много помех и должны обеспечивать хорошее соотношение сигнала к помехам. Масс-спектрометрический анализ должен удовлетворять тем же критериям аналитического контроля качества, которые применяются к другим системам.
4.7.2. Определение остатков после их разделения методом HPLC в целом более сложно, чем при применении газовой хроматографии. Если идентификация осуществляется методом ультрафиолетового поглощения, то результирующий полный спектр поглощения обеспечит надежные доказательства идентификации. Однако ультрафиолетовый спектр некоторых пестицидов недостаточно подходит для идентификации, так как обладает сходством со спектрами многих других веществ, имеющих сходные функциональные группы или состав, а присутствие мешающих соединений может привести к возникновению дополнительных сложностей. Данные ультрафиолетового поглощения, полученные при применении разных длин волн, могут подтвердить или опровергнуть идентификацию, но в целом они недостаточно специфичны. Могут быть использованы данные флуоресценции для подтверждения информации, полученной при ультрафиолетовом поглощении. Система LC-MS могла бы предоставить подтверждающие данные, но, поскольку полученные спектры в основном очень простые, показывающие неспецифичную фрагментацию, маловероятно, что полученные при анализе указанным методом результаты будут определенными. Более мощной технологией является система «жидкостная хроматография — тандемная масс-спектрометрия (LC-MS/MS)», сочетающая селективность и специфичность, с помощью которой часто можно получить надежные доказательства идентификации. Метод LC-MS обычно сильно зависит от влияния матрицы, в особенности в отношении подавления образования анализируемых ионов, в связи с чем для подтверждения количественного определения может потребоваться добавка стандартных веществ или добавка стандартных веществ, меченных изотопами. Получение производных также можно применять для подтверждения результатов определения остаточных содержаний, полученных методом HPLC (пункт 4.6.5.4).
4.7.3. В некоторых случаях подтверждение данных газовой хроматографии наиболее удобно осуществимо методом тонкослойной хроматографии (TLC). Идентификация основывается на двух критериях — значении коэффициента удерживания Rf и реакциях визуализации. Методы обнаружения, основанные на биологических анализах (например, фермент -, рост грибков или ингибирование хлоропласта), особенно подходят для качественного подтверждения, поскольку они специфичны к определенным типам соединений, чувствительны и обычно мало подвержены влиянию коэкстрактов. Научная литература содержит многочисленные ссылки на технологию, Доклад IUPAC о пестицидах (13) ( Bátora,V., Vitorovic, S.Y., Thier, H.-P. and Klisenko, M.A.; Pure & Appl. Chem., 53, 1039 — 1049 (1981)) содержит обзор технологии и служит удобным введением в проблему. Однако количественные характеристики тонкослойной хроматографии ограничены. Дальнейшие процедуры указанного метода включают отбор сорбента из той области на пластине, которая соответствует коэффициенту удерживания исследуемого соединения, последующие извлечение (экстракцию) этого вещества из сорбента и подтверждение результата определения химическим и физическим анализом. Раствор стандартного пестицида всегда должен присутствовать на пластине вместе с экстрактом пробы во избежание невоспроизводимости величины коэффициента удерживания Rf. Чрезмерная проба стандартного пестицида также может предоставить полезную информацию. Преимуществами тонкослойной хроматографии являются скорость, низкая стоимость и применимость к нетермостойким веществам; к недостаткам следует отнести (обычно) более низкую чувствительность и степень разделения по сравнению с технологиями, основанными на инструментальном хроматографическом детектировании, и необходимость эффективной очистки в случае методов обнаружения, основанных на окрашенных химических реакциях.
4.8. Получение производных
Эта область подтверждения может быть рассмотрена в трех основных направлениях.
Часто используются микроколичественные химические реакции с пестицидами, приводящие к их распаду, присоединению или образованию продуктов конденсации, которые затем снова подвергаются хроматографическому анализу. В результате этих реакций получают производные, обладающие различными временами удерживания и/или откликами детектора, отличными от исходного соединения. Параллельно с пробой предполагаемого пестицида аналогичным образом должна проводиться обработка пробы со стандартным пестицидом, таким образом, чтобы результаты можно было сравнивать непосредственно. В процедуру следует также включить обогащенный экстракт для подтверждения того, что реакция выполнена в присутствии материала образца. Помехи могут возникнуть в тех случаях, когда обнаружение производных веществ основано на свойствах исходных реагентов. Обзор химических реакций, применяемых в целях идентификации, был опубликован Cochrane, W.P. (Chemical derivatisation in pesticide analysis, Plenum Press, NY (1981)). Преимуществами химических реакций являются быстрота и легкость выполнения, но могут потребоваться приобретение и/или очистка специализированных реагентов.
Полезной технологией является фотохимическое преобразование остатков пестицидов для получения одного или более веществ с воспроизводимыми хроматографическими характеристиками. Пробу стандартного пестицида и обогащенного экстракта всегда необходимо обрабатывать аналогично. Если пробы содержат более одного остатка пестицида, могут возникнуть затруднения при интерпретации результатов. В этих случаях до реакции может быть выполнено предварительное разделение остатков пестицидов с использованием TLC, HPLC или хроматографических колонок.
Многие пестициды чувствительны к разложению/трансформации ферментами. В отличие от обычных химических реакций эти процессы очень специфичны и в основном состоят из окисления, гидролиза или деалкилирования. Продукты переработки обладают отличающимися от исходного соединения хроматографическими характеристиками и могут быть использованы в целях подтверждения при сравнении с продуктами реакции, полученными со стандартными пестицидами.
4.9. Концепция нижнего предела калибровки (LCL)
4.9.1. Когда целью анализа является контроль и проверка соблюдения максимальных уровней остатков MRLs или других ALs, методы определения остатков должны быть достаточно чувствительны для достоверного определения остатков, которые, вероятно, присутствуют в сельскохозяйственной культуре или пробе окружающей среды на уровне или около максимального уровня остатков или AL. Однако для этой цели нет необходимости применять методы определения остатков с такой высокой чувствительностью, которая позволяла бы определять указанные вещества на уровне двух или более порядков ниже указанной величины. Методы, разработанные для измерения остатков на очень низких уровнях, как правило, очень дороги и сложны в применении. Применение нижнего предела калибровки (LCL) (см. Глоссарий терминов) будет иметь преимущество в снижении технической трудности получения данных и более низкой стоимости. Могут быть полезны следующие предложения для LCLs при выполнении различных проб в предоставлении возможности специалисту по остаткам пестицидов применять соответствующие методы.
4.9.2. Для активных ингредиентов с установленными MRLs, LCL может быть определен как доля MRL. Для удобства расчета указанная доля будет изменяться и может быть представлена в следующем виде:
| MRL (мг/кг) | LCL (мг/кг) |
|---|---|
| 5 или больше | 0,5 |
| от 0,5 до 5 | от 0,1 до 0,5 для высоких MRLs |
| от 0,05 до 0,5 | от 0,02 до 0,1 для высоких MRLs |
| менее 0,05 | 0,5 x MRL |
Когда MRL находится в пределе определения аналитическим методом, LCL также будет на этом уровне.
4.10. Представление результатов
Для регулятивных целей должны предоставляться только подтвержденные данные, выраженные, как определено по MRL. Нулевые значения должны быть описаны как меньшие, чем нижний предел калибровки, а не меньшие, чем уровень, вычисленный экстраполяцией. Основные результаты не корректируются по известному извлечению, они могут быть скорректированы только тогда, когда известно, что процент извлечения существенно отличается от 100%. Если сообщаемые результаты скорректированы по проценту извлечения, то должны быть предоставлены измеренные и скорректированные значения. Обоснования коррекции также должны быть сообщены. Когда положительные результаты получены в результате повторного анализа (например, на другой колонке газовой хроматографии, с другими детекторами или основаны на других ионах масс-спектра) единичной аналитической части образца (из отобранной выборки), должно быть указано самое низкое обоснованное значение. Если положительные результаты получены при анализе многих аналитических частей проб, должно быть сообщено среднеарифметическое значение наиболее низких обоснованных значений, полученное для каждой аналитической части. Необходимо учесть 20 — 30% относительную погрешность, результаты должны быть выражены только двумя имеющими значение цифрами (например, 0,11; 1,1; 11 и 1,1 x 102). Поскольку при более низких концентрациях достоверность может быть в диапазоне 50%, значения остатков ниже 0,1 должны быть выражены только одной имеющей значение цифрой.
Рисунок II.1. Обзор методов валидации
┌─────────────┐
│АНАЛИТИЧЕСКАЯ│
└─────┬───────┘
┌──────────────────────┴────────────────────┐
<pre class="legal-pre"> ┌──────┴───────┐ ┌────────┴───────┐
│Подтверждаемое│ │Неподтверждаемое│
│предназначение│ │ предназначение │
└──────┬───────┘ └────────┬───────┘
│ \/
\/ ┌───────────────┐
┌──────────────┐ Нет │ Параметры │</pre>
┌──┤Подтверждение ├─────────────────────────>│ идентификации,│
<pre class="legal-pre"> │ │выполняемости │ │ Таблица 1 │
│ └──────────────┘ └────────┬──────┘
│ /\ │
│ │ \/
│Да Да│ Да ┌───────────────┐
│ │ <────────────────────────────────┤Метод валидации│<───┐
│ │ └────────┬──────┘ │
│ │ │ │
│ │ │ ┌─────┴─────┐
│ │ │ │Модификация│
\/ │ ├────>│ метода │
┌──────────┴───────────────────┐ ┌──────────┐ │ └───────────┘
│В настоящее время пригоден для│ │Непригоден│<───┘
│ цели (решение подтверждается │ │для целей │
│ при контроле качества) │ └──────────┘</pre>
└──────────────────────────────┘
Рисунок II.2. Проверка аналитической стабильности
┌────────────────────────────────────┐
│СТАБИЛЬНОСТЬ АНАЛИЗИРУЕМОГО ВЕЩЕСТВА│
│ В РАСТВОРИТЕЛЕ │
└──────────────────┬─────────────────┘
┌──────────────────────┴──────────────────┐
<pre class="legal-pre"> ┌────┴───┐ ┌────┴─────┐
│Известна│ │Неизвестна│
└────┬───┘ └────┬─────┘
│ │
│ \/
Да │ Да ┌────────────────────────┐
│ <────────────────│Определение стабильности│<─────┐
│ └────────────────────────┘ │
│ Нет│ ┌──────┴────┐
│ │ │ Состояние │
\/ ├───────────>│модификации│
│ └───────────┘
┌────────────────────────────────────┐ │
│СТАБИЛЬНОСТЬ АНАЛИТИЧЕСКОГО ВЕЩЕСТВА│ │ ┌────────────────────┐
│ В ЭКСТРАКТАХ И ОБРАЗЦАХ │ └───────>│Непригоден для целей│
└──────────────────┬─────────────────┘ └────────────────────┘</pre>
┌────────┴──────────────┐
<pre class="legal-pre"> ┌────┴───┐ ┌────┴─────┐
│Известна│ │Неизвестна│
└────┬───┘ └────┬─────┘
│ │
│Да \/
│ ┌────────────────────────┐
│ ┌─┤Определение стабильности│<────────┐
│ │ └────────────────────────┘ │
│ │ │ ┌──────┴────┐
\/ │Да Нет│ │ Состояние │
┌───────────────┐ │ ├───────────>│модификации│
│ Проверка │ │ │ └───────────┘
│ выполнимости │<──┘ │
│ или полный │ │ ┌────────────────────┐
│метод валидации│ └────────────>│Непригоден для целей│
└───────────────┘ └────────────────────┘</pre>
Обзор подлежащих проверке параметров при валидации методов
| Проверяемые параметры | Существующие аналитические методы, для которых ранее выполненные испытания параметров показали, что они применимы для комбинаций одного или более анализируемых веществ/матриц | Модификация существующего метода | Новый, непроверенный метод | Возможные объединения видов проб | ||||
| Проверка рабочих характеристик* <1> | Дополнительная матрица | Дополнительное анализируемое вещество | Низкая концентрация анализируемого вещества | Другая лаборатория | ||||
| Специфичность (показывает, что определяемый сигнал обусловлен анализируемым веществом, а не другим соединением) | Нет (если холостые матрицы соответствуют критериям и выполнены подтверждения для анализируемого вещества) | Да, если мешающее влияние матрицы очевидно при качественном контроле | Да | Да, если мешающее влияние матрицы очевидно при качественном контроле | Строгие проверки, не являющиеся необходимыми, если метод определения подобен или лучше | Да или нет. Строгие проверки могут быть необходимы, если система обнаружения существенно отличается или степень мешающего влияния матрицы не определена | Да. Строгие проверки могут быть необходимы, если система обнаружения различна или степень мешающего влияния матриц, по сравнению с существующими методами, не определена | |
| Аналитический диапазон, Определение извлечения, включающее экстрагирование, очистку экстракта, получение производных и измерение | Да | Да | Да | Да | Да | Да | Да | Диапазон калибровки Аналитический диапазон LOD/LOQ Влияние матрицы |
| Диапазон калибровки для определения анализируемого вещества | Нет | Нет | Да | Да | Да, для репрезентативного анализируемого вещества | Да, для репрезентативного анализируемого вещества | Да, для репрезентативного анализируемого вещества | Линейность, воспроизводимость и отношение сигнал/шум |
| Предел обнаружения и предел количественного определения | Нет | Да (частично, если матрица представляет класс) | Да, частично для репрезентативного анализируемого вещества | Да | Да | Да | Да | Нижний предел калибровки и нижний уровень извлечения |
| Заявленный нижний предел калибровки | Да | Нет | Нет | Нет | Нет | Нет | Нет | |
| Стабильность анализируемого вещества в экстрактах \Xi <2> = <3> | Нет | Да, если матрица не из репрезентативного класса | Да, если анализируемое вещество не репрезентативное | Да | Нет | Нет, если экстрагент или растворитель на последней стадии определения (финальный) другой или менее очищенный | Да, если экстрагент или финальный растворитель другой, чем используемый в существующей методике, или менее очищен | |
| Стабильность анализируемого вещества при хранении \Xi <2> J <4> | Да | Да | Да | Идеальная | Нет | Нет | Нет | |
| Эффективность экстракции \Xi <2> \upsilon <5> | Нет | Идеальная | Идеальная | Идеальная | Нет | Нет, если не применяются другие условия экстракции | Да, если не используют предварительно проверенную экстракционную процедуру | |
| Гомогенность \Xi <2> аналитической пробы | Да  <6> | Нет, если матрица другой структуры | Нет | Нет | Нет, если не изменилось оборудование | Нет, если не изменилось оборудование | Да, если не используют предварительно проверенную процедуру подготовки проб | См. ниже |
| Стабильность анализируемого вещества в процессе подготовки проб \Xi <2> | Нет | Да, если матрица не репрезентативна | Да, если анализируемое вещество не репрезентативно | Идеальная | Нет | Нет, если процедура не включает более высокотемпературную обработку, более длительное время, более грубое измельчение и т.д. | Нет, если процедура не включает более высокотемпературную обработку, более длительное время, более тонкое измельчение и т.д., чем в утвержденных методах | Сходимость, воспроизводимость |
<1> * Непрерывный контроль качества анализа.
<2> \Xi Если отсутствует необходимая информация.
<3> = Репрезентативное анализируемое вещество может быть выбрано на основе способности вещества к гидролизу, окислению, фотохимическому разложению.
<4> J Данные о стабильности в репрезентативных товарных группах должны содержать достаточную информацию. Дополнительные испытания требуются, например, если:
(a) пробы хранили больше положенного периода времени (например, испытания на стабильность проводились в течение до 4 недель, и установлены небольшие потери анализируемого вещества в это время, но пробы хранились более 6 недель);
(b) испытания стабильности были выполнены при <= — 18 °C, но пробы хранились в лаборатории при <= 5 °C;
(c) пробы обычно хранятся при <= — 15 °C, но температура поднялась до <= + 5 °C.
<5> \upsilon Информация относительно эффективности экстрагирования может быть получена от производителя или компании, которая регистрирует состав.
<6> 
Иногда с повторным анализом аналитической части проб, давших положительные результаты.
Параметры, оцениваемые при валидации метода в различных условиях
| Параметр | Уровень(вни) | Номер анализа или тип необходимого испытания | Критерий | Примечания | |
| Количественный метод | Скрининговый метод | ||||
| 1. Внутрилабораторное (одна лаборатория) выполнение оптимизированного метода | |||||
| 1.1. Стабильность анализируемого вещества в экстракте или в стандартном растворе | При <= AL или при хорошо детектируемых остатках | >= 5 повторений в каждой соответствующей точке времени (включая ноль) и для каждого репрезентативного анализируемого вещества/продукта. Добавление экстрактов холостой пробы для испытания стабильности остатков. Сравнение концентрации анализируемого вещества при хранении со свежеприготовленными стандартными растворами | Нет существенных изменений в концентрации анализируемых веществ при хранении экстрактов и аналитических стандартов (P = 0,05) | В конце периода хранения остатки, добавленные при LCL, детектируемы | Необходимо испытание стабильности экстрактов, если аналитический метод вызывает сомнения во время определения, и материал, возможно, будет храниться дольше, чем при определении точности, или если извлечение, полученное при оптимизации метода, было ниже. При оптимизации метода извлечение должно быть измерено по отношению к «старым» и «свежеприготовленным» стандартам калибровки, если извлеченные экстракты сохранены. Время хранения должно охватывать наибольший период, который может потребоваться для выполнения анализа |
| 1.2. Калибровочная функция Влияние матрицы | LCL до 2 (3) раз AL | Испытание функций отклика всех анализируемых веществ включено в метод при >= 2 повторениях при >= 3 уровнях анализируемых веществ плюс холостая проба. Для нелинейного отклика определение кривой отклика при >= 7 уровнях и >= 3 повторениях. Испытание матричного эффекта со всеми репрезентативными анализируемыми веществами и матрицами. Использование стандартов, добавленных в растворитель и экстрактов пробы методом рандомизации. | Для линейной калибровки: коэффициент регрессии для стандартных аналитических растворов (r) >= 0,99, SD остатков (Sy / x) <= 0,1 Для полиноминальной функции (r) >= 0,98. Влияние матрицы подтверждено, если различие имеет значение при P = 0,05 | Для линейной калибровки: коэффициент регрессии (r) >= 0,98, SD остатков <= 0,2. Для полиноминальной функции (r) >= 0,95 | Параметры калибровки могут быть установлены при оптимизации процедуры, определении точности или способности обнаружения. Приготовление калибровочных растворов различной концентрации. Для MRM калибровка производится со смесями анализируемых веществ («стандартная смесь»), которые будут должным образом разделены хроматографической системой. Применение матрицы, согласованной с аналитическими стандартами, для дальнейших испытаний, если влияние матрицы значительно. Валидация метода может не дать точную информацию о влиянии матрицы, поскольку влияние матрицы изменяется в зависимости от времени, пробы, колонки и т.д. |
| 1.3. Аналитический диапазон, точность, правильность, достоверность, нижний предел определения (LOD), предел количественного определения (LOQ) | LCL до 2 (3) раз AL <*> | Анализ комбинаций репрезентативных аналитических матриц: >= 5 меченых на нуле, LCL, AL и >= 3 повторений при 2 — 3 AL уровне. Тесты извлечения должны быть распределены между химиками-аналитиками, которые будут использовать метод и инструменты, применяемые при анализе. | LOQ должен соответствовать целевому назначению. Среднее извлечения и CVA см. в Таблице 3. Среднее значение остатков <*>, измеренное в эталонном материале, несущественно отличается от согласованного значения (P = 0,05). | Все извлечения определяемы при LCL | Химик-аналитик должен продемонстрировать, что данный метод подходит для определения присутствия анализируемого вещества на определенном AL с предусмотренными максимальными (ложно отрицательными и ложно положительными) ошибками. Для MRM высокий уровень холостых проб должен покрывать AL представленных анализируемых веществ. Следовательно, они могут не соответствовать действующему уровню AL представленных анализируемых веществ. Добавление в аналитические части стандартных смесей. Степени точности и сходимости, определяемые для репрезентативных анализируемого вещества/комбинаций матриц, могут быть рассмотрены как типичные для данного метода и применяться в качестве критериев при усовершенствовании для новых анализируемых веществ и продуктов, а также в качестве исходного руководства для внутреннего контроля качества метода. Регистрация неисправленных результатов, среднего извлечения и воспроизведение CVA. В пределах лаборатории CVA эквивалентен воспроизводимости результатов анализа проб. |
| <*> Исправляют результаты для среднего извлечения, если оно достоверно отличается от 100%. Если метод не позволяет оценить извлечение, точность и сходимость по калибровке. | |||||
| 1.4. Специфичность и селективность определения анализируемого вещества | На нижнем пределе калибровки (LCL) | Идентификация методом масс-спектрометрии, аналогичной специальной технологией или надлежащей комбинацией имеющихся технологий разделения и определения. Анализ >= 5 холостых проб каждого репрезентативного продукта, предпочтительно полученных из различных источников, регистрация холостого отклика эквивалента анализируемого вещества. Определение и регистрация селективности (\delta) детектора и фактора чувствительности детектора (RRF) репрезентативного анализируемого вещества при применении определенных детекторов. | Измеренный ответ обусловлен лишь анализируемым веществом. Остатки, измеренные на двух разных колонках, должны быть в пределах критической области повторений хроматографического определения. | Частота ошибки ложноотрицательных проб (ошибки второго рода \beta ) в AL должна в норме быть < 5% | Применяется только для определенной комбинации технологии разделения и определения. Пробы с известными данными об обработке могут быть использованы вместо необработанных проб, для других анализируемых веществ, чем применяемых при обработке. Зрелость матрицы проб может существенно влиять на отклик холостой пробы. Значения сигнала от холостых проб необходимо регулярно проверять при проверке технических характеристик (см. ниже Раздел 4). Описание типичных пиков, присутствующих в экстракте холостой пробы. LCL предпочтительно должен быть <= 0,3 AL, если AL не находится на уровне или около предела количественного определения. Испытание может быть выполнено в комбинации с определением предела и возможности обнаружения, а также предоставлением информации для относительных RRts и RRFs соединений. Изменение условий хроматографирования, если отклик холостой пробы накладывается на отклик анализируемого вещества или использование альтернативной системы обнаружения. Подходящая комбинация селективных детекторов повышает специфичность, поскольку увеличивается количество информации об анализируемом веществе. |
| 1.5. Селективность разделения | На AL | Определение значений относительных объемов удерживания RRt для всех анализируемых веществ, которые будут испытаны данным методом (не только эталонные соединения). Если хроматографическая технология применяется без спектрометрического определения, используются различные принципы разделения и/или определение RRt на колонках с различной полярностью. Определение и регистрация разрешения (Rs) и фактора асимметрии (Tf) критических пиков. | Максимум ближайшего пика должен быть отделен от пика установленного анализируемого вещества по меньшей мере одной полной шириной на 10% высоты пика или необходимо более селективное определение всех анализируемых веществ. | Предварительная идентификация всех испытуемых анализируемых веществ. (Не все анализируемые вещества нуждаются в разделении). | Если не применяется комбинация хроматографического разделения и спектрофотометрического определения, регистрируется RRt на колонках с различной полярностью, которые разделяют (R >= 1,2 минимум) испытуемые анализируемые вещества. Испытания могут быть совместимы с определением калибровочной функции и влияния матрицы (см. 1.7). |
| 1.6. Гомогенность анализируемого вещества в аналитической пробе | Около AL или хорошо определяемые остатки | Анализ >= 5 повторений аналитических частей пробы одного репрезентативного продукта из каждой группы (Таблица 5), последующая обработка. Определение CVSp анализом расхождений. Гомогенность анализируемого вещества должна быть проверена с помощью анализируемых веществ с известной стабильностью. | CVSp <= 10%. | CVSp <= 15%. Для скрининговых методов желательно взять часть, в которой предполагается высокий уровень остатков (например, кожура плодов цитрусовых) и в достижении гомогенности нет необходимости. | Использовать преимущественно продукты со стабильным поверхностным загрязнением остатками или же обрабатывать лишь малую часть поверхности лабораторной пробы (< 20%) перед тем, как разрезать или измельчить ее, чтобы представить худший вариант развития ситуации при работе с пробой. Это правило следует использовать для любых последующих процедур, а полученный результат следует учитывать при работе с другими пробами образцами со сходными физическими характеристиками вне зависимости от анализируемого вещества. Испытание может сочетаться с испытанием стабильности анализируемого вещества (см. Раздел 1.7 настоящей Таблицы). Необходимо определение постоянной отбора проб <1> <2> для расчета размера аналитической части для удовлетворения критерия качества, обусловленного CVSp <= 10%. Может отсутствовать необходимость в отдельном определении CVSp, если CVL привнесенных остатков находится в пределах ограничений, определенных в Таблице 2. |
| 1.7. Стабильность анализируемого вещества при обработке пробы | Около AL | Добавка известного количества анализируемых веществ в анализируемые продукты до обработки пробы. Анализ >= 5 повторений каждого продукта, последующая обработка. Применение устойчивого маркера соединения вместе с надежными анализируемыми веществами. Для MRM и групп специфичных методов, GSM можно испытывать несколько анализируемых веществ, которые могут быть хорошо разделены. | Нет необходимости уточнять стабильность анализируемого вещества, если суммарное среднее извлечение анализируемого вещества, добавленного до обработки пробы (включая производственное извлечение) и CVA в пределах диапазонов, обозначенных в таблице 3. Определение стабильности, если суммарное извлечение и процедурное извлечение существенно отличаются (P = 0,05). | Анализируемое вещество, добавленное на LCL, продолжает оставаться определяемым после обработки. | Температура пробы во время обработки может быть критической. Процесс валидации применяют с любой последующей процедурой. Валидация может быть специфичной для определенного анализируемого вещества и/или матрицы пробы. Определения среднего значения извлечения и CVL лабильного и стабильного маркерных соединений для испытания стабильности. Применение этих соединений для испытания внутреннего контроля качества (см. Раздел 4). Выражение соотношения средней концентрации лабильных и стабильных соединений, чтобы показать устойчивость остатков. CV стабильных соединений также покажет внутрилабораторную воспроизводимость. |
| 1.8. Эффективность экстрагирования | Около AL или полностью измеряемые остатки | Анализ >= 5 повторений частей проб или эталонного материала с добавленными остатками. Сравнение эталонной (или другой) процедуры с результатами испытаний. Для MRM испытуемые анализируемые вещества предпочтительно должны иметь широкий диапазон значений коэффициентов распределения. Это определение необходимо проводить, используя только продукты, загрязненные остатками. | Для проб продуктов, загрязненных остатками, средний результат, полученный в эталонной процедуре и испытуемой процедуре, не должен существенно отличаться при применении расчета CVL при уровне P = 0,05. Или согласованное значение эталонного материала и среднего остатка не должно существенно отличаться от уровня P = 0,05 при расчете с CVA испытуемого метода. Если CVA метода больше 10%, число повторений анализов должно быть увеличено для сохранения относительной стандартной средней ошибки < 5%. В остальных случаях определить количество и зарегистрировать эффективность экстрагирования (исключая извлечение аналитической фазы, следующей за экстрагированием) | Среднее значение остатков, о которых известно, что они будут присутствовать на уровне или около LOQ или LCL, фактически определяемо в пробах. | Температура экстракта, скорость измельчителя или диспергатора Ultra Turrax, время извлечения и соотношение растворитель/вода/матрица могут существенно повлиять на эффективность экстрагирования. Эффект этих параметров может быть проверен с помощью испытания устойчивости результатов. Оптимизированные условия необходимо сохранять постоянными, насколько это возможно. Валидация в целом применима к продуктам одной группы и представленным анализируемым веществам со сходными физико-химическими свойствами. Валидация независима от последующих процедур метода. Среднее извлечение для каждого метода будет определено из аналитических частей с привнесенными добавками. Поправка результатов со средним значением извлечения, если оно существенно отличается от 100%. В соответствии с некоторыми нормативами скрининговые наборы должны быть протестированы на положительное определение с 95% достоверностью |
| 1.9. Стабильность анализируемого вещества при хранении пробы | Около AL | Анализ свежегомогенизированных проб, содержащих остатки, или гомогенизированных и холостых проб с добавками (время 0), и затем анализ проб, хранимых в соответствии со стандартными процедурами лаборатории (обычно при <= — 18 °C). Время хранения должно быть больше или равно, чем наибольший интервал, предусмотренный между взятием проб и анализом. >= 5 повторений в каждой временной точке. Если сохраненные части анализируются >= 4 раз, испытывают >= 2 частей с добавками и >= 1 холостой части, в которую добавка введена во время анализа. Аналитические части должны быть разморожены только непосредственно перед экстрагированием или во время экстрагирования. | Нет существенных потерь анализируемого вещества при хранении (P = 0,05). | Анализируемое вещество, добавленное на нижнем пределе калибровки, LCL, остается определяемым после хранения. | Хранение оценивается для применения с любыми последующими процедурами. Валидация применима для испытуемого анализируемого вещества. Однако в целом данные о стабильности при хранении, полученные с использованием репрезентативных матриц пробы могут быть рассмотрены как обоснованные для сходных матриц. Матрицы отбираются с учетом химической стабильности (например, гидролиз) анализируемого вещества и предполагаемого использования вещества. Полезная информация может быть получена из оценок JMPR <3> или из данных, представленных при регистрации. Регистрация исходной и конечной концентрации остатков и извлечения анализируемого вещества. Предотвратить не являющееся необходимым хранение можно при тщательном планировании отбора проб и последующего анализа посредством административного устройства, что не является частью аналитического метода. |
| 2. Усовершенствование утвержденного метода | |||||
| 2.1. Стабильность анализируемого вещества при хранении проб, производственных процессах, в экстрактах и стандартных растворах | См. 1.1, 1.2 и 1.9 | Только если информация о стабильности в условиях обработки и о репрезентативной матрице недоступна. | |||
| 2.2. Калибровочная функция, влияние матрицы | LCL до 2 (3) AL | Три точки калибровки, охватывающие AL с аналитическими стандартами, согласованными и не согласованными с матрицей. | Для линейной калибровки: коэффициент регрессии стандартного аналитического раствора (r) >= 0,99. Относительное стандартное отклонение остатков (Sy/x) <= 0,1. Для полиноминальной функции (r) >= 0,98 | Для линейной калибровки: коэффициент регрессии (r) >= 0,98. Относительное стандартное отклонение остатков (Sy/x) <= 0,2. Для полиноминальной функции (r) >= 0,95 | Валидация метода может не предоставлять определенной информации о влиянии матрицы, потому что влияние матрицы меняется в зависимости от времени, образца (иногда), колонки, т.д. |
| 2.3. Точность, сходимость, LD, LOQ | На AL | Предварительное планирование: a) Анализ 3 аналитических частей репрезентативных проб матрицы при интересующем увеличении уровня AL. Непредвиденно найдены: Введите 2, предпочтительно 3, дополнительные части аналитической пробы приблизительно на уровне нового анализируемого вещества. Расчет извлечения добавленного анализируемого вещества. Применение сходных матриц пробы для испытания извлечения, если недоступно соответствующее количество аналитической пробы. | Извлечение остатков должно быть в пределах повторяемости метода: 3 части: Cmax — Cmin <= 3,3 CVAtyp Q 2 части: Cmax — Cmin <= 2,8 CVAtyp Q CVAtyp — типичный воспроизводимый коэффициент вариации адаптируемого метода. Q — среднее извлечение нового анализируемого вещества; должно соответствовать Таблице 3. | Анализируемые вещества, добавленные к холостым пробам на целевом сообщаемом уровне, должны быть измеримы во всех испытаниях. | Применять CVAtyp, установленное при валидации метода. Метод должен быть испытан только с продуктами, которые предполагают использование (возможно, неправильное) анализируемого вещества. |
| 2.4. Специфичность и селективность определения анализируемого вещества | На LCL | Идентификация с помощью масс-спектрометрии или соответствующей доступной комбинацией технологии разделения и определения. Предварительное планирование: (a) Анализ одной репрезентативной холостой пробы из каждой интересующей группы продуктов (в которой анализируемое вещество, вероятно, присутствует). Анализ новой матрицы с репрезентативными соединениями. Непредвиденно найдены: (b) Проверка отклика холостой пробы (если возможно) или демонстрация, что измеренный отклик соответствует только анализируемому веществу, применение наиболее качественной технологии, доступной в данной лаборатории. Проверка \delta и RRF определения и RRts репрезентативного анализируемого вещества. Сравнение RRt и отклика нового анализируемого вещества с другими анализируемыми веществам, испытанными при валидации метода, и с холостыми откликами, полученными при усовершенствовании метода и при предыдущей валидации метода. | Измеренный отклик обусловлен исключительно анализируемым веществом. Применяемая система определения должна иметь детектор с аналогичными или лучшего качества рабочими характеристиками, чем при валидации метода. Остаточные содержания, измеренные на двух различных колонках, должны быть в пределах критического диапазона повторных хроматографических определений. Относительные величины удерживания репрезентативных анализируемых веществ, полученные при валидации метода, и измеренные должны быть в пределах 2% для GLC и 5% для HPLC-определений. | Частота ложноотрицательных ошибок образцов (ошибка второго рода \beta ) при AL должна быть < 5%. | Если планируется усовершенствование для нового анализируемого вещества, применимость метода должна быть проверена для всех репрезентативных матриц пробы, в которых может быть анализируемое вещество. Если анализируемое вещество определяется неожиданно, проверка рабочих характеристик должна быть выполнена только для действующей матрицы. См. также 1.4. Отклики холостой пробы (проб) не должны накладываться на отклики анализируемого вещества, которые, вероятно, будут измерены в пробе. Регистрация стандартных пиков, присутствующих в холостых экстрактах. Фоновый шум нового экстракта матрицы должен быть в пределах диапазона, полученного для репрезентативных продуктов/матриц проб. Если селективность определения не устраняет отклик матрицы, используется соответствующая комбинация хроматографических колонок, что позволяет разделить анализируемые вещества и пики матрицы. См. другие варианты в Таблице 6. |
| 2.5. Селективность разделения | См. 1.5 | См. 1.5 | См. 1.5 | См. 1.5 | См. 1.5, только если информация недоступна |
| 2.6. Эффективность экстрагирования | См. 1.8 | См. 1.8 | См. 1.8 | См. 1.8 | См. 1.8, только если информация недоступна |
| 3. Адаптация метода валидации в других лабораториях | |||||
| 3.1. Чистота и пригодность химических веществ, реагентов и ад(аб)сорбентов | Испытание холостого реагента, применимость ад(аб)сорбентов и реагентов. Выполнение получения производных с пробы и без пробы. | Отсутствие мешающего отклика выше 0,3 LCL | Отсутствие мешающего отклика выше 0,5 AL | Некоторые из наиболее распространенных проблем при перенесении метода включают различия в использовании реагентов, растворителей, хроматографического оборудования или в характеристиках оборудования. Во всех возможных случаях пытаются подтвердить используемые материалы и оборудование, применяемое разработчиком метода, если эта информация не предоставляется с методом или публикацией при получении. Можно попробовать заменить некоторые параметры после начала работы метода в вашей лаборатории. | |
| 3.2. Стабильность анализируемых веществ в экстрактах и стандартных растворах | См. 1.10 | См. 1.1 | См. 1.1 | См. 1.1 | Данное испытание можно исключить, если с методом предоставляется полная информация о стабильности анализируемого вещества или если метод замещает применяемый ранее метод для этого анализируемого вещества и информация о стабильности уже существует для предыдущего метода |
| 3.3. Калибровочная функция, эффект матрицы | LCL до 2 (3) раз AL | Испытание функций отклика репрезентативных анализируемых веществ включено в метод при >= 3 уровнях анализируемых веществ плюс холостая проба. Для нелинейного отклика определение кривой отклика при >= 7 уровнях и >= 3 повторений. Испытание влияния матрицы с репрезентативными анализируемыми веществами и матрицами. | Для линейной калибровки: коэффициент регрессии для стандартного аналитического раствора (r) >= 0,99. Относительное стандартное отклонение остатков (Sy/x) <= 0,1. Для полиноминальной функции (r) >= 0,98 | Для линейной калибровки: коэффициент регрессии (r) >= 0,98. Относительное стандартное отклонение остатков (Sy/x) <= 0,2. Для полиноминальной функции (r) >= 0,95 | См. 1.2 |
| 3.4. Аналитический диапазон точности и сходимости определения, предел количественного определения | Контрольный экстракт и /или AL | Анализ комбинаций репрезентативных анализируемых веществ/матриц: >= 5 аналитических частей каждой холостой пробы, с добавками анализируемых веществ до 0 и AL, а также 3 части, с добавками до 2 AL. Испытания извлечений должны быть разделены среди химиков-аналитиков, которые будут работать с данным методом, так же как и инструменты, используемые при анализе. | Среднее извлечение и CVA должны быть в пределах диапазонов, представленных в Таблице 3 | Все извлечения определяемы на LCL. Эталонные материалы на AL: анализируемое вещество определяемо. | См. комментарии в 1.3. |
| 3.5. Специфичность и селективность определения анализируемого вещества | На AL | Проверка рабочих характеристик применяемых детекторов и сравнение их с теми, что определены для данного метода. Проверка отклика одной холостой пробы каждого репрезентативного продукта, в остальных случаях выполнение испытаний, как описано в разделе 1.4. | Измеренные отклики относятся только к анализируемому веществу. Рабочие характеристики детектора (чувствительность и селективность) должны быть аналогичны или лучше, чем определены для данного метода. См. раздел 1.4. | Частота ошибок ложноопределенных (ошибка второго рода \beta ) при AL должна быть обычно < 5%. | Относительная чувствительность специфических детекторов может существенно изменяться в зависимости от модели. Надлежащая проверка специфичности определения необходима для получения надежных результатов. Сравнение холостого отклика, наблюдаемого при стандартных пиках, зарегистрированных в холостых экстрактах. См. другие комментарии в разделе 1.4. |
| 3.6. «Гомогенность» анализируемого вещества | На уровне AL или хорошо определяемые остатки | Тестируют два репрезентативных продукта различного происхождения | CVSp < 10% | CVSp < 15% Для скрининговых методов желательно взять часть, в которой ожидается наиболее высокий уровень остатков (например, кожура цитрусовых) и необходимости в достижении гомогенности не будет | Испытания выполняются для подтверждения подобия условий эксплуатации и использования параметров, полученных лабораторией, подтверждающей достоверность метода. Если результаты испытания аналогичны зарегистрированным CVSp, условия обработки пробы могут считаться подобными и нет необходимости в дальнейших испытаниях для валидации метода. |
| 3.7. Стабильность анализируемого вещества в экстрактах и стандартных растворах | См. 1.1 | См. 1.1 | См. 1.1 | См. 1.1 | Данное испытание можно исключить, если с методом предоставляется полная информация о стабильности анализируемого вещества или если метод замещает применяемый ранее метод для этого анализируемого вещества и информация о стабильности уже существует для предыдущего метода. |
<1> Wallace, D. and Kratochvil, B., Analytical Chemistry, 59, 1987, 226.
<2> Ambrus, A., Solymosné,E.M. and Korsós,I.J. Environ. Sci. and Health, B31, 1996, 443.
<3> ФАО, Остатки пестицидов в пище — Оценка; публикуется ежегодно в выпусках Докладов ФАО о производстве и защите растениеводства.
Внутрилабораторные критерии валидации метода для анализа остатков пестицидов
| Концентрация | Сходимость | Воспроизводимость | Правильность <2> | ||
| CVA% <3> | CVL% <4> | CVA% <3> | CVL% <4> | Диапазон среднего % извлечения | |
| \leq 1\mu g/\text{кг} | 35 | 36 | 53 | 54 | 50 — 120 |
| >1\mu g/\text{кг} \leq 0,01\text{мг}/\text{кг} | 30 | 32 | 45 | 46 | 60 — 120 |
| > 0,01 мг/кг <= 0,1 мг/кг | 20 | 22 | 32 | 34 | 70 — 120 |
| > 0,1 мг/кг <= 1 мг/кг | 15 | 18 | 23 | 25 | 70 — 110 |
| > 1 мг/кг | 10 | 14 | 16 | 19 | 70 — 110 |
<1> Для методов определения множественных остатков могут быть определенные анализируемые вещества, где указанные количественные критерии выполнения не могут быть точно соблюдены. Приемлемость данных, полученных в данных условиях, будет зависеть от цели анализов, например, при проверке на соблюдение MRL указанные критерии должны быть выполнены, насколько это технически осуществимо, в то время как любые данные существенно ниже MRL могут быть приемлемы с более высокой неопределенностью.
<2> Данные диапазоны извлечения подходят для методов определения множественных остатков. Более строгие критерии могут быть необходимы для некоторых целей, например, методов для отдельных анализируемых веществ или остатков ветеринарных лекарственных препаратов (см. том 3 Кодекса, 1996).
<3> CVA: коэффициент изменения анализа, за исключением обработки пробы. Данный параметр может быть оценен по тестам, выполненным с эталонными материалами или аналитическими частями, меченными до экстракции. Приготовленный в лаборатории эталонный материал может быть использован при отсутствии сертифицированного эталонного материала.
<4> CVL: суммарный коэффициент изменчивости лабораторных результатов, включающий до 10% изменчивости остатков между аналитическими частями (CVSp). Примечание: изменчивость остатков между аналитическими частями может быть подсчитана из неопределенности измерения повторных частей проб (CVL), содержащих остатки; CVL2 = CVSp2 + CVA2.
Требования к выполнению поверки
| Параметр | Уровень(вни) | Номер анализа или тип требуемого испытания | Критерий | Примечания | |
| Количественный анализ | Скрининговый метод | ||||
| 4. Качественный контроль (выполнение поверки) | |||||
| 4.1. Постоянно используемые методы | |||||
| 4.1.1. Соответствие химических веществ, адсорбентов и реагентов | Для каждой новой партии: тестирование холостого реагента, пригодность ад(аб)сорбентов и реагентов. Получение производных (без пробы) | Нет мешающего отклика >= 0,3 LCL. | Нет мешающего отклика >= 0,5 AL | Поочередно, если холостая проба, калибровка и извлечение удовлетворительны, то пригодность реагентов и т.д. подтверждена. | |
| 4.1.2. Калибровка и аналитический диапазон | Может быть использована одноточечная калибровка со стандартными смесями, если калибровочная функция пересекает оси координат около нуля. Применение многоточечной калибровки (3 x 2) для количественного подтверждения. | Аналитическая партия может быть подвергнута статистическому контролю, если аналитические стандарты и экстракты проб введены поочередно и вычисленное относительное стандартное отклонение остатков <= 0,1 | Анализируемое вещество определяется при LCL. | Стандартные раствор и пробы следует вводить поочередно. Это может обеспечить времясберегающую альтернативу многоточечной калибровке, особенно при отсутствии автоматического прибора для отбора проб. Поскольку реакция системы часто изменяется, регулярно должна выполняться многоточечная калибровка для подтверждения, что калибровочная функция пересекает оси координат около нуля. Необходимость в многоточечной калибровке отсутствует, если концентрация стандартного вещества в калибровочном растворе очень близка к концентрации анализируемого вещества в пробе. | |
| 4.1.3. Точность и сходимость | В пределах аналитического диапазона | Включает в каждой аналитической партии >= 1 пробы с добавкой стандартной смеси либо повторный анализ положительной пробы. | Рабочие характеристики детектора и хроматографической колонки должны быть аналогичными или лучше, чем определено для данного метода. Предпочтительно, чтобы все извлечения были в пределах предупредительной границы контрольной карты, построенной согласно описанию в разделе 4.5.2. В большой партии одна из каждых 20 или 100 проб могут быть вне предупредительных границ и пределов, соответственно. Аналитическая партия должна быть проанализирована повторно, если любое из извлечений выходит за пределы, или результаты повторных анализов положительной пробы превышают критический интервал. Cmax — Cmin > 2,8 * CVLtyp Q Q — средний остаток, полученный при повторных измерениях, CVLtyp — оценка внутрилабораторной воспроизводимости, которая включает суммарную неопределенность подготовки проб и анализа. | Добавка к аналитической части стандартной(ых) смеси(ей). Изменение стандартных смесей в различных партиях для получения извлечений для всех интересующих анализируемых веществ через регулярные промежутки времени. Выполнение поочередных исследований извлечений при AL, а также при LCL и 2-кратном AL соответствующим образом для подтверждения применимости метода в пределах аналитического диапазона. Частота исследований извлечений при AL должна быть в 2 — 3 раза выше, чем при других уровнях. Повторный анализ положительных проб может заменить испытание извлечения в определенной партии. Для MRM готовят стандартные специальные смеси из продуктов и/или анализируемых веществ, которые могут быть в какой-либо специфичной пробе. Выбранные для одной смеси анализируемые вещества должны быть, безусловно, качественно и селективно разделимы и определимы. Для предварительной идентификации: подготовка аналитических партий, содержащих соответствующие смеси для испытания определения и образцов проб. Для количественного определения/подтверждения в аналитическую партию включают стандартную смесь для определения, соответствующее количество калибровочных смесей, концентрированных холостых проб или одну повторную положительную пробу и новые положительные пробы. Поочередно вводят стандарты и пробы. | |
| 4.1.4. Селективность разделения, Специфичность обнаружения Рабочие характеристики детекторов | Включают соответствующую стандартную смесь для определения в каждой хроматографической партии. Включают необработанный продукт (если доступен) в аналитическую партию. Применяют добавку стандартов, если нет необработанной пробы (сходной с теми, которые анализируют в партии). Подтверждают идентификацию и количество каждого присутствующего анализируемого вещества на уровне >= 0,7 AL. | Rs, Tf испытуемых соединений и RRF и \delta определения должны быть в нормативном пределе. Относительная величина удерживания должна быть до 2% для GLC- и 5% для HPLC-определений. Рабочие характеристики детектора должны быть в нормативном пределе. Коэкстрактивные вещества пробы, мешающие анализируемые вещества, не должны быть >= 0,3 LCL. Извлечение добавленного стандарта должно быть в пределе приемлемого диапазона извлечения анализируемого вещества. | Рабочие характеристики детектора должны быть в нормативном пределе. Анализируемое вещество должно быть видимо выше LCL или \text{СС}\alpha для запрещенных соединений. | Это также иногда называется тестом на «пригодность системы». Подготавливают аттестованную смесь для каждого метода определения. Отбирают соединения смеси для того, чтобы установить характерные параметры хроматографического разделения и определения. Корректируют базы данных RRt для соединений аттестованной смеси определения и анализируемых веществ, применяемых для калибровки. Установление RRf заданного для системы обнаружения. Выполнение количественного подтверждения с аналитическими стандартами, добавленными в экстракт холостой матрицы, если влияние матрицы существенно. | |
| 4.1.5. Гомогенность анализируемого вещества в приготовленной пробе | При хорошо определяемой концентрации анализируемого вещества | Отбор положительной пробы произвольно. Повторить анализ другой одной или двух аналитических частей. | Результаты определения остаточных содержаний, выполненных в два различных дня, должны соответствовать пределу воспроизводимости для повторяемых аналитических частей: Cmax — Cmin <= 2,8 * CVLtyp Q Q — среднее остаточное содержание, полученное при повторных измерениях, CVLtyp — суммарная неопределенность подготовки и анализа пробы, полученные при валидации метода. | Выполнение испытания поочередно для проверки каждого анализируемого продукта. Испытание гомогенности в начале периода вегетации или в начале анализа данного типа проб. Приемлемые результаты теста также подтверждают, что воспроизводимость анализов (CVA) была соответствующей. | |
| 4.1.6. Эффективность экстрагирования | Эффективность экстрагирования не может быть проконтролирована во время анализа. Для обеспечения соответствующей эффективности утвержденная процедура экстрагирования должна выполняться без изменений | ||||
| 4.1.7. Продолжительность анализа | Время хранения проб, экстрактов и т.д. не должно превосходить то, для которого стабильность анализируемых веществ при хранении была установлена во время валидации метода. Необходим регулярный контроль и ведение записей об условиях хранения. | В таблице 1 приведены примеры тех случаев, когда при хранении необходимы дополнительные испытания стабильности анализируемых веществ. | |||
| 4.2. Изредка обнаруживаемое анализируемое вещество | |||||
| Следовать тестам, описанным в 4.1, со следующими исключениями | |||||
| 4.2.1. Точность и достоверность | Около AL | Повторный анализ другой аналитической части. Добавление стандартного образца на измеренном уровне анализируемого вещества. | Результаты определения остатков, выполненных в различные дни, должны соответствовать пределу воспроизводимости для повторяемых аналитических частей: Cmax — Cmin <= 2,8 * CVLtyp Q Q — среднее значение остаточного содержания, полученное при повторных определениях, CVLtyp — суммарная неопределенность подготовки и анализа проб, полученные при валидации метода. Извлечение после добавки стандартного образца не должно быть больше предела на контрольной карте. | Проверить точность, если остаток обнаружен при >= 0,5 AL. | |
| 4.3. Методы, применяемые при нерегулярных интервалах | |||||
| Следовать тестам, описанным в 4.1, со следующими исключениями | |||||
| 4.3.1. Точность и сходимость (воспроизводимость) | На AL и LCL | Включает одну концентрированную на уровне LCL пробу и две пробы на уровне AL в каждой аналитической партии. Используют добавки стандартных образцов, если нет необработанной пробы (сходной с анализируемыми в партии). Выполняют анализ c >= 2 аналитическими частями. | Минимум два извлечения не должны превышать предупредительной границы, одно может быть менее предела на контрольной карте. Остатки, измеренные в повторных частях, должны быть в критическом пределе: Cmax — Cmin <= 2,8 * CVLtypQ или Cmax — Cmin <= f(n) * CVLtypQ Q — среднее остаточное содержание, полученное при повторных измерениях, CVLtyp — получен при валидации метода, f(n) — фактор для расчета крайнего предела, зависящий от количества повторных проб. | Приемлемые результаты также доказывают пригодность применяемых химических веществ, адсорбентов и реагентов. Подтверждение результатов выше 0,5 AL. Если критерии выполнения были неудовлетворительными, метод должен быть перепроверен, его рабочие характеристики (Q, CVAtyp, CVLtyp) должны быть обоснованы еще раз во время частичной повторной валидации метода. | |
| 4.4. Изменения при реализации метода | |||||
| Изменение | Тестируемые параметры | Для методов испытания и приемлемости критериев см. соответствующие разделы Дополнения 1 | |||
| 4.4.1. Хроматографическая колонка | Испытывают селективность разделения, разрешение, инерционность, значения RRt. | Нельзя менять рабочие характеристики. | Применение соответствующих аттестованных смесей для получения информации о рабочих характеристиках колонки | ||
| 4.4.2. Оборудование для подготовки проб | Гомогенность подготовленной пробы; Стабильность анализируемых веществ | Должно быть выполнено испытание, описанное в 1.6 и 1.7, и должны быть получены результаты, подтверждающие соответствующие критерии. | Испытание на определение гомогенности необходимо, если степень измельчения и/или смешивания хуже, чем на исходном оборудовании. Необходимо испытание стабильности анализируемого вещества, если время подготовки проб и температура существенно выше. | ||
| 4.4.3. Оборудование для экстрагирования | Сравнение совокупности продуктов, загрязненных остатками на детектируемых уровнях, которые были определены на старом и новом оборудовании в >= 5 повторениях. | Средние результаты определения остатков не должны существенно отличаться при P = 0,05. | Испытание необходимо, если применяется новый тип оборудования. | ||
| 4.4.4. Определение | Тестирование селективности разделения и селективности и чувствительности определения. | Рабочие характеристики должны быть аналогичными или лучше, чем уточненные в описании метода. | Тестируют также возможность обнаружения раздельно с новыми реагентами определения. | ||
| 4.4.5. Химик-аналитик | >= 5 испытаний извлечения на каждом уровне (LCL AL и 2(3)AL), повторный анализ холостых проб и двух положительных проб (неизвестных химику-аналитику) | Все результаты должны быть в предупредительных границах, определенных для данного метода в лаборатории. Повторный анализ проб должен быть в критическом пределе. | Это минимальное требование. Лаборатории в некоторых областях работы с остаточными содержаниями используют более детальные протоколы, которые включают: (1) построение калибровочной кривой в пределах приемлемых критериев; (2) минимум две аналитические пробы для каждой матрицы, содержащей репрезентативные анализируемые вещества, с введенными химиком-аналитиком добавками как минимум на трех уровнях в двух параллельных; (3) минимум одна аналитическая проба, содержащая концентрированную пробу или пробу с заведомым загрязнением остаточными содержаниями, три уровня повторений, представленные химику-аналитику как неизвестные. Все результаты должны соответствовать приемлемым критериям или быть повторены. | ||
| 4.4.6. Лаборатория | Точность и сходимость >= 3 испытаний извлечения на каждом уровне ((LCL AL и 2(3)AL), определенные (разными) химиками-аналитиками в различные дни. | Все результаты должны быть в предупредительных границах, определенных для данного метода в лаборатории. | Воспроизводимость метода в новых условиях должна быть обоснована и должна быть выполнена более чем одним химиком-аналитиком, если это возможно. | ||
Репрезентативные продукты/пробы для валидации аналитических процедур по остаткам пестицидов
| Группа продукта | Общие свойства | Класс продукта <*> | Репрезентативные виды |
| Продукты растительного происхождения | |||
| I. | Высокое содержание воды и хлорофилла | Листовые овощи рода Brassica Листовые овощи Бобовые овощи | шпинат или салат-латук брокколи, капуста кочанная, капуста кормовая, зеленая фасоль |
| II. | Высокое содержание воды и низкое содержание или отсутствие хлорофилла | Семечковые культуры Косточковые культуры Ягоды Кустовая ягодная культура Плодоносящие овощи Корнеплоды | яблоко, груша персик, вишня клубника виноград помидор, перец стручковый, арбуз грибы, картофель, морковь, петрушка |
| III. | Высокое содержание кислоты | Плоды цитрусовых культур | апельсин, лимон |
| IV. | Высокое содержание сахара | изюм, финики | |
| V. | Высокий уровень масла или жира | Семя масличных культур Плоды орехов | авокадо, зерно подсолнечника орех грецкий, орех пекан, фисташка |
| VI. | Сухие материалы | Зерновые злаки | пшеница, рис, кукурузные зерна |
| Зерновые продукты | пшеничные отруби, пшеничная мука | ||
| Продукты, для которых необходимы индивидуальные испытания | например, чеснок, хмель, чай, специи, клюква | ||
| Продукты животного происхождения | |||
| Мясо | Мясо рогатого скота, куриное мясо | ||
| Пищевые субпродукты | Печень, почка | ||
| Жир | Мясной жир | ||
| Молоко | Коровье молоко | ||
| Яйца | Яйцо куриное | ||
<*> Классификация пищевых продуктов и кормов (CAC/MISC 4-1993).
Примечание: Валидация метода должна быть проведена с применением репрезентативных пестицидов для каждой группы продуктов. Для продуктов, которые сложны для анализа, требуется проведение индивидуальных испытаний.
Примеры методов определения, подходящих для подтверждающего анализа веществ
| Метод определения | Критерий |
|---|---|
| LC или GC и масс-спектрометрия | если наблюдается достаточное число необходимых для определения ионов |
| LC-DAD или сканирование УФ | если УФ-спектр является характерным |
| LC-флуоресценция | в комбинации с другими технологиями |
| 2-мерная TLC-(спектрофотометрия) | в комбинации с другими технологиями |
| GC-ECD, NPD, FPD | только если комбинируются с двумя или более технологиями разделения <*> |
| Получение производных | если он не был методом первого выбора |
| LC-иммунография | в комбинации с другими технологиями |
| LC-UV/VIS (одночастный) | в комбинации с другими технологиями |
<*> Другие хроматографические системы (применение неподвижной и/или подвижной фаз различной селективности) или другие технологии.
ГЛОССАРИЙ ТЕРМИНОВ
| Допустимый предел (AL) | Концентрация анализируемого вещества, соответствующая нормативному пределу или нормативному значению, которому соответствует цель анализа, например, MRL, MPL; торговый стандарт, заданное ограничение концентрации (оценка воздействия режима питания), допустимый предел (окружающая среда) и т.д. Для веществ без MRL или для запрещенного к применению вещества может не быть AL (фактически это может быть ноль или предела может не быть) или это может быть предельная концентрация, превышение которой должно быть установлено (предел воздействия или административный предел). |
|---|---|
| Точность | Степень соответствия между результатом определения и принятым эталонным значением. |
| Ошибка первого рода (\alpha) | Вероятность, что истинная концентрация анализируемого вещества в лабораторной пробе ниже определенной величины (например, AL), в то время как измерения, выполненные на одной или более аналитических/испытуемых частях пробы, показывают, что концентрация превышает данное значение (ложноположительная). Допустимые значения указанной вероятности обычно в диапазоне от 1 до 5%. |
| Анализируемое вещество | Искомое или определяемое в пробе химическое вещество. |
| Гомогенность анализируемого вещества (в пробе) | Однородность распределения анализируемого вещества в матрице. Вариабельность аналитических результатов, возникающая при подготовке проб, зависит от размера аналитической части. Постоянная <*> отбора проб описывает зависимость между размером аналитической части и ожидаемым изменением в хорошо перемешанной аналитической пробе: KS = w (CVSp) <**>, где w — это масса аналитической части и CVSp — коэффициент изменения концентрации анализируемого вещества в параллельных аналитических частях w [r], которые извлекают из аналитической пробы. |
| Аналитическая часть | Репрезентативное количество материала, извлекаемого из аналитической пробы достаточной величины для измерения остатка анализируемого вещества. |
| Аналитическая проба | Материал, подготовленный для анализа из лабораторной пробы разделением части анализируемого продукта и затем смешиванием, диспергированием, тонким дроблением и др. для извлечения аналитической части с минимальной ошибкой отбора проб. |
| Условия применения | Анализируемые вещества, матрицы и концентрации, для которых была установлена применимость данного метода анализа. |
| Ошибка второго рода (\beta) | Вероятность, что истинная концентрация анализируемого вещества в лабораторной пробе выше определенной величины (например, AL), в то время как измерения, выполненные на одной или более аналитических частях, показывают, что определяемая концентрация ниже этого значения (ложноотрицательная). Допустимые значения указанной вероятности обычно в диапазоне от 1 до 5%. |
| Систематическая погрешность | Разница между средним значением результата определения, полученным для анализируемого вещества и принятым эталонным значением для пробы. Систематическая погрешность является совокупной систематической ошибкой в противоположность случайной ошибке. В составе систематической погрешности может быть одна или более причин. Чем больше систематическое расхождение от принятого эталонного значения, тем больше значение систематической погрешности. |
| Товарная группа | Пищевые продукты или корма для животных, имеющие частично похожие химические свойства, которые позволяют объединять их в группу для применения к ним определенного метода анализа. Свойства могут быть основаны на основных компонентах (например, вода, жир, сахар и содержание кислоты) или биологической связи и могут быть определены регламентами. |
| Подтверждающий метод | Методы, которые обеспечивают полную или дополнительную информацию, позволяющие идентифицировать анализируемое вещество с приемлемой степенью достоверности (в допустимом пределе или на уровне, представляющем интерес). Насколько это возможно, подтверждающие методы дают информацию о химических свойствах анализируемого вещества, используя предпочтительно спектрометрию. Если единственный способ идентификации недостаточен, то подтверждение может быть достигнуто дополнительными процедурами, состоящими из подходящих комбинаций очистки экстракта, хроматографического разделения и селективного обнаружения. Определения биологической активности также могут предоставить подтверждающие данные. В дополнение к подтверждению идентификации анализируемого вещества должно быть подтверждено его количественное определение. Это может быть выполнено анализом второй испытательной части и/или повторным анализом исходной пробы соответствующим альтернативным методом (например, другая хроматографическая колонка и/или детектор). Качественное и количественное подтверждение может быть выполнено в том же порядке, если это необходимо. |
| Предел разрешения (\text{СС}\alpha) | Предельное значение концентрации анализируемого вещества, выше которой можно утверждать, что анализируемое вещество присутствует в пробе с вероятностью ошибки первого рода \alpha (ложноположительная). Если допустимый предел содержания вещества в пробе равен нулю, \text{СС}\alpha — это низший уровень концентрации, выше которого метод определения может различить со статистической вероятностью 1 - \alpha , присутствует ли анализируемое вещество в пробе. При некоторых оценках (обычно для \alpha = 1% ) \text{СС}\alpha является эквивалентом Нижнего предела обнаружения (LOD). В случае веществ с установленным AL, \text{СС}\alpha является измеренной концентрацией, выше которой может быть решено со статистической вероятностью 1 - \alpha , что содержание идентифицируемого вещества действительно выше AL. |
| Возможность обнаружения (\text{СС}\beta) | Наименьшая достоверная концентрация анализируемого вещества, которая может быть обнаружена, идентифицирована и определена количественно в пробе с ошибкой второго рода (ложноотрицательной). В случае запрещенных веществ \text{СС}\beta является самой низкой концентрацией анализируемого вещества, которую можно определить в загрязненных пробах со статистической вероятностью 1 - \beta . В случае веществ с установленным MRL, \text{СС}\beta является концентрацией, при которой можно определить пробы, превышающие указанный MRL со статистической вероятностью 1 - \beta . Если он применяется при наименьшей определяемой концентрации, указанный параметр направлен на обеспечение аналогичной информации для Предела количественного определения (LOQ), но \text{СС}\beta всегда связан с установленной статистической вероятностью обнаружения и, соответственно, предпочтительнее LOQ. Когда это применяется на самой низкой обнаруживаемой концентрации, указанный параметр предназначен для того, чтобы обеспечить эквивалентность информации о Пределе количественного определения, но так как он всегда связан с указанной статистической вероятностью обнаружения, то он более предпочтителен, чем LOQ. |
| Стандартная смесь | Смесь аналитических стандартов, используемая для контроля состояний хроматографического разделения и обнаружения. Стандартная смесь должна включать анализируемые вещества, предоставляющие информацию о селективности и факторах отклика детекторов, инерционности (характеризующейся, например, фактором асимметрии Tf) и эффективности разделения (например, разрешение Rs) колонки и повторяемости значений RRt. Стандартная смесь может быть специфической для колонки и детектора. |
| Ложноотрицательный результат | См. Ошибка второго рода |
| Ложноположительный результат | См. Ошибка первого рода |
| Групповой метод определения | Метод, используемый для определения веществ, молекулярная структура которых имеет одинаковые фрагменты или обладающие сходной химической структурой. Например, феноксиуксусные кислоты, дитиокарбаматы, метилкарбаматы и т.д. |
| Привнесенные остатки | Остатки анализируемых веществ в матрице, попадающие туда в результате прохождения продуктом пути, на котором следовые уровни анализируемых веществ должны быть обычно ожидаемы в противоположность остаткам лабораторных образцов. Так же выветренные остатки. |
| Индивидуальный метод | Метод, подходящий для идентификации и определения одного или более специфических веществ. Отдельный индивидуальный метод может быть необходим, например, для контроля некоторых метаболитов, включенных в дефиницию остатков некоторых пестицидов или ветеринарного препарата. |
| Исходная проба | Проба, непосредственно полученная лабораторией (не включая упаковку). |
| Предел обнаружения (LD) | Наименьшее содержание, при котором может быть идентифицировано анализируемое вещество. Обычно определяемо как минимальная концентрация анализируемого вещества в испытуемой пробе, которая может быть измерена с заданной вероятностью, что анализируемое вещество присутствует в более высокой концентрации, чем в холостой пробе. IUPAC и ISO рекомендуют аббревиатуру LD. См. также Предел разрешения. |
| Предел количественного определения (LOQ) | Наименьшее содержание анализируемого вещества, которое может быть определено количественно. Обычный синоним — минимальная концентрация анализируемого вещества в испытуемой пробе, которая может быть определена с приемлемой сходимостью (воспроизводимостью) и точностью при установленных условиях испытания. См. также Возможность обнаружения. |
| Нижний предел калибровки (LCL) | Самая низкая концентрация анализируемого вещества, определяемая и измеряемая при калибровке системы определения. Может быть выражена в виде концентрации раствора испытуемой пробы или в виде массы и не должна включать вклад от холостой пробы. |
| Матрица | Материал или компонент, отобранный для аналитических исследований, за исключением анализируемого вещества. |
| Холостая матрица | Материал пробы, содержащий неопределяемый уровень интересующих анализируемых веществ. |
| Калибровка, согласованная с матрицей | Калибровка, использующая растворы, приготовленные из экстрактов анализируемого продукта (или репрезентативного продукта). Целью является компенсация эффектов совместно экстрагируемых веществ на систему обнаружения. Подобные эффекты часто непредсказуемы, но необходимость в согласовании с матрицей может отсутствовать там, где доказано, что коэкстракты оказывают незначительное воздействие. |
| Метод | Определенная последовательность операций от поступления пробы для анализа до получения конечного результата. |
| Валидация метода | Совокупность поверочных операций, доказывающая соответствие метода целевому назначению. |
| Метод множественных остатков (MRM) | Метод, позволяющий идентифицировать и определять одновременно остатки группы анализируемых веществ, обычно в ряду различных матриц. |
| Отрицательный результат | Результат, показывающий, что содержание анализируемого вещества меньше нижнего предела калибровки. См. также Предел обнаружения. |
| Поверка рабочих характеристик | Совокупность данных технического контроля, получаемых во время анализа партии проб для подтверждения юридической силы периодических анализов. Данные могут быть использованы для оптимизации рабочих параметров метода. |
| Положительный результат | Результат, показывающий присутствие анализируемого вещества в концентрации на уровне или выше нижнего предела калибровки. |
| Сходимость | Степень близости друг к другу независимых результатов анализа, полученных в конкретных регламентированных условиях. |
| Количественный метод | Метод, дающий результаты, выражаемые в виде числовых значений в соответствующих единицах измерения, со сходимостью и правильностью, соответствующими целевому назначению. Степени сходимости и точности должны удовлетворять критериям, указанным в Таблице 3. |
| Извлечение | Доля или процент извлеченного анализируемого вещества после экстрагирования и анализа холостой пробы, к которой было добавлено анализируемое вещество известной концентрации (проба с известным содержанием анализируемого вещества или эталонный материал). |
| Холостой реактив | Полный анализ, выполненный без введения материалов пробы в целях надзора за качеством. |
| Эталонный материал | Материал с одной концентраций анализируемых веществ или более, значения которых достаточно гомогенны, сами анализируемые вещества равномерно распределены в материале и стабильны. Его используют для оценки метода измерения других материалов. В контексте данного документа термин «эталонный материал» не относится к материалам, применяемым для калибровки аппаратуры. |
| Эталонный метод | Количественный аналитический метод доказанной надежности, характеризуемый известной правильностью, специфичностью, сходимостью и чувствительностью обнаружения. Обычно разработка указанных методов происходит комплексно и, как правило, на основе молекулярной спектроскопии. Статус эталонного метода действует только тогда, когда указанный метод применяется в рамках соответствующего режима контроля качества. |
| Эталонная процедура | Процедура с установленной эффективностью. Если это недостижимо, эталонная процедура может быть такой, которая теоретически должна быть высокоэффективной и коренным образом должна отличаться от проверяемой. |
| Повторяемость | Сходимость результатов анализа на основе повторяющихся условий, т.е. когда независимые результаты испытаний получены по одной и той же методике анализа одной и той же пробы, в одной и той же лаборатории, одним и тем же оператором, с использованием одного и того же экземпляра оборудования в течение короткого промежутка времени (ISO 3534-1). |
| Репрезентативное анализируемое вещество | Анализируемое вещество, выбранное для представления группы анализируемых веществ, которые, вероятно, будут иметь сходные характеристики при их изменениях, происходящих в процессе осуществления метода анализа множественных остатков, исходя из их физико-химических свойств, например, структура, водорастворимость, коэффициент распределения (Kow), полярность, летучесть, негидролизуемость, константа диссоциации (pKa) и др. |
| Представляемое анализируемое вещество | Анализируемое вещество, физико-химические свойства которого находятся в диапазоне свойств репрезентативного анализируемого вещества. |
| Воспроизводимость | Близость результатов анализа одной и той же пробы, выполненной по одной и той же методике анализа, с применением различных экземпляров оборудования, разными операторами (в пределах лабораторной воспроизводимости). Аналогичным образом при выполнении анализов в других лабораториях получают межлабораторную воспроизводимость. |
| Репрезентативный продукт | Определенный пищевой продукт или корм, используемый для представления группы продуктов в целях валидации метода. Продукт может быть рассмотрен в качестве репрезентативного на основе приближенного состава пробы, а именно содержание воды, жира/масла, кислоты, сахара и хлорофилла, или сходные биологические элементы тканей и др. |
| Устойчивость | Свойство химических процессов, лежащих в основе измерения, сохранять стабильность результатов при незначительных изменениях в окружающей среде и изменениях процедур метода, лабораторий, персонала и т.д. |
| Подготовка пробы | Процедура, применяемая, если это необходимо, для преобразования лабораторной пробы в аналитическую пробу выемкой частей (грунт, камни, кости и т.д.), которые не включаются в анализ. |
| Обработка пробы | Процедура(-ы) (например, фракционирование, диспергирование, смешивание), применяемые для получения гомогенного анализируемого вещества с целью распределения до выемки аналитической части. Обработка части продукта должна быть спланирована таким образом, чтобы предотвратить изменения концентрации анализируемого вещества. |
| Скрининговый метод | Метод, применяемый для определения присутствия анализируемого вещества или класса анализируемых веществ на уровне или выше минимальной представляющей интерес концентрации. Метод должен быть спланирован таким образом, чтобы предотвратить ложноотрицательные результаты на уровне заданной вероятности (как правило \beta = 5% ). Могут потребоваться подтверждения качественных положительных результатов подтверждающими или эталонным методами. См. Предел разрешения и Возможность обнаружения. |
| Селективность | Мера, в какой степени анализируемое вещество, вероятно, будет отличаться от других компонентов пробы при разделении (например, хроматографическом) или при относительной чувствительности системы обнаружения. |
| Специфичность | Характеристика, показывающая, что отклики от системы обнаружения, полученные при применении метода, могут быть обоснованными свойствами исключительно анализируемого вещества. |
| Стандартное добавление (добавка) | Процедура, при которой известные количества анализируемого вещества добавляют к аликвоте экстракта пробы, содержащей анализируемое вещество (его первоначально измеренная концентрация обозначается X), для получения условных концентраций (например, 1,5X и 2X). Измеряют отклики, произведенные анализируемым веществом из аликвот с добавками, и концентрации анализируемого вещества в первоначальном экстракте (нулевое добавление анализируемого вещества) определяют из наклона калибровочной функции и отрезка, отсекаемого ей на координатной оси. Если полученная кривая отклика нелинейная, значение для X должно быть интерпретировано с осторожностью. |
| Фактор асимметрии | Величина асимметрии хроматографического пика; при максимальной высоте пика 10% соотношение переднего и заднего сегментов ширины пика при разделении вертикальной линией, проведенной через максимум пика. |
| Испытуемая часть | См. Аналитическая часть. |
| Испытуемая проба | См. Аналитическая часть. |
| Правильность | Степень соответствия между средним значением, полученным при большой серии результатов определений, и принятым эталонным значением. |
| Неопределенность измерения | Объединенный параметр (обычно стандартное отклонение или доверительный интервал) выражающий возможный диапазон значений вокруг измеряемого результата, в пределах которого правильное значение ожидается с заявленной степенью вероятности. Следует принять во внимание все признанные эффекты, влияющие на результат, включая: суммарную долговременную сходимость (в пределах лабораторной воспроизводимости) выполняемого метода; систематическую погрешность метода; неопределенность подвыборки и калибровки и другие известные источники изменения в результатах. |
<*> Wallace, D. and Kratochvil, B., Analytical Chemistry, 59, 226 — 232, 1987.
<**> Ambrus, A., Solymosné,E and Korsós,I.J. Environ. Sci. Health, B31, (3) 1996.