Инструкция по проведению ветеринарно-токсикологических, медико-биологических исследований стимуляторов роста сельскохозяйственных животных и гигиенической оценки продуктов животноводства

(утв. Минсельхозом СССР 04.10.1985 № 115-6а, Минздравом СССР 09.01.1985 № 3202-85)

9 января 1985 г. № 3202-85

ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРОВЕДЕНИЮ ВЕТЕРИНАРНО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИХ, МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ СТИМУЛЯТОРОВ РОСТА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ И ГИГИЕНИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ ПРОДУКТОВ ЖИВОТНОВОДСТВА

Инструкция предназначена для организаций Минздрава СССР и Минсельхоза СССР — исполнителей ветеринарно-токсикологических, медико-биологических исследований стимуляторов роста сельскохозяйственных животных и гигиенической оценки продуктов животноводства.

Инструкция разработана: Главным санитарно-эпидемиологическим управлением Минздрава СССР, Институтом питания АМН СССР, Московской ветеринарной академией им. К.И. Скрябина, Всесоюзным государственным научно-контрольным институтом ветеринарных препаратов.

Инструкция рассмотрена и одобрена Ветеринарным фармакологическим советом при Главном управлении ветеринарии Минсельхоза СССР (N 29, 26 июля 1985 г., протокол № 2).

1. Вводная часть

В Продовольственной программе СССР поставлена задача дальнейшего роста производства продуктов животноводства и повышения их качества. Повышение производства наиболее полноценного животного белка в определенной степени может быть достигнуто за счет применения биологически активных веществ — стимуляторов роста сельскохозяйственных животных. Вместе с тем использование таких препаратов должно гарантировать отсутствие отрицательных последствий употребления в пищу полученных при этом продуктов животноводства. Пищевые продукты должны соответствовать требованиям гигиены и биохимии питания.

В соответствии со сложившейся в нашей стране и за рубежом практикой изучения возможности использования стимулирующих рост веществ в животноводстве настоящая Инструкция устанавливает единый обязательный для всех предприятий и организаций Минсельхоза СССР и Минздрава СССР, порядок и объем проведения исследований в области:

• медико-биологической характеристики препаратов — гормональных и негормональных стимуляторов роста сельскохозяйственных животных;
• ветеринарно-токсикологических исследований;
• гигиенической оценки продуктов животноводства, полученных в условиях применения стимуляторов роста.

Учитывая широкую международную торговлю, в нашей стране организована сеть СЭС, призванных осуществлять контроль за импортируемыми в СССР пищевым

сырьем  и  продуктами питания. В связи с этим необходимо отметить следующие
применяемые  за  рубежом  основные  стимуляторы  роста,  анализ  остаточных
количеств   которых   обязателен  при  проведении  гигиенического  контроля
продуктов   животноводства,   импортируемых   в   нашу  страну:  стероидные
соединения    андростанового   ряда    (Implix-W  -  тестостерон-пропионат,
Nandrolon   -   19-нортестостерон,        Finimplix   -   тренболон-ацетат,

                                   5

Methandriol   -   17 альфа-метил-ДЕЛЬТА -андростен-3 бета,    17 бета-диол,
1-дегидрометилтестостерон),    стероидные   препараты   группы   эстрогенов
(Esmapol - эстрадиол-17 бета-монопальмитат,  Synovex-S - эстрадиол-17 бета-
бензоат,    Rivalor   -   эстрадиол-17 бета/тренболон-ацетат),     стероиды
прегнанового ряда (Synovex-M - прогестерон),  синтетические  препараты,  не
имеющие  природных  аналогов с анаболическим  действием  (Ralgro - зеранол,
Maximen - диэтилстильбэстрол),  антибиотики.  При проведении гигиенического
контроля продуктов животноводства,  поступающих  из-за  рубежа,  необходимо
руководствоваться   разработанными   в   Институте   питания   АМН  СССР  и
утвержденными   Минздравом  СССР  гигиеническими  регламентами  и  методами
определения  содержания  стимуляторов  роста  в  пищевом  сырье и продуктах

питания (1 - 9).

В материалах XXV сессии Комитета экспертов ФАО/ВОЗ (10) и 2-го международного совещания по контролю ветеринарных препаратов (11) отмечено, что законодательства ряда стран предусматривают запрещение применения в качестве стимуляторов роста в животноводстве диэтилстильбэстрола, природных эстрогенов, антибиотиков медицинского назначения и препаратов, обладающих резко выраженным тиреостатическим действием.

Разработки, связанные с исследованием возможности использования в животноводстве перечисленных групп стимуляторов роста, запрещенных за рубежом, следует считать нецелесообразными.

В инструкции изложены также общие токсиколого-гигиенические требования и специфические показатели при проведении ветеринарно-токсикологических, медико-биологических исследований стимуляторов роста и гигиенической оценки продуктов животноводства. Специфические показатели основаны на механизме действия различных классов соединений, их влиянии на органы-мишени и представляют собой комплекс химических, биохимических, иммунологических и морфометрических методов исследования, необходимых для решения вопроса о возможности использования стимуляторов роста в животноводстве.

Рекомендации и предложения по ветеринарно-токсикологическим и медико-биологическим аспектам исследований стимуляторов откорма сельскохозяйственных животных следует представлять в Минсельхоз СССР и Минздрав СССР через головные организации по данной проблеме.

2. Порядок выполнения и объем исследований при проведении ветеринарно-токсикологических, медико-биологических исследований стимуляторов роста и гигиенической оценки продуктов животноводства

2.1 Химическая характеристика препарата.

2.1.1. Количественное содержание основного анаболического вещества в препарате.

2.1.2 Содержание основных примесей.

2.1.3. Данные о наличии гормонально активных примесей и биологически активных соединений.

2.1.4. Характеристика технологической формы препарата и способа его введения — для обеспечения строго дозированного поступления стимулятора в организм сельскохозяйственных животных.

2.1.5. Разработка химического метода определения остаточных количеств стимулятора в продуктах животноводства.

Исполнители: организации-разработчики.

2.2. Определение степени и характера анаболического действия препарата.

2.2.1. Оценка выраженности анаболического действия на организм сельскохозяйственных (и лабораторных) животных (8) - по степени увеличения белковой массы мышечной ткани.

2.2.2. Исследование степени накопления жира, воды в различных тканях животных; сравнительная оценка роста внутренних органов по сравнению с мышечной тканью.

2.2.3. Сравнительная характеристика ростстимулирующего эффекта предлагаемого препарата и известных групп анаболиков.

2.2.4. Определение в опытах на сельскохозяйственных животных и птице экономической эффективности использования предлагаемого стимулятора роста.

Исполнители: организации Минсельхоза СССР.

2.3. Изучение биологического действия стимулятора, его метаболизма в опытах на сельскохозяйственных (и лабораторных) животных; ветеринарно-токсикологические исследования.

2.3.1. Проведение субхронического опыта на экспериментальных животных; определение обменных процессов, зависимых от введения стимулятора; проведение хронического опыта.

2.3.2. Характер действия препарата в зависимости от пола, возраста, физиологического состояния сельскохозяйственных животных, особенностей кормления, содержания и др. условий.

2.3.3. Отработка активно действующих доз, сроков воздействия, диапазона действующих доз.

2.3.4. Определение оптимального способа стимуляции в зависимости от анаболического эффекта, физиологического состояния животных, степени элиминации препарата, его остаточных количеств (и биологически активных метаболитов) в тканях сельскохозяйственных животных.

2.3.5. Ветеринарно-токсикологические исследования на различных видах сельскохозяйственных животных.

Исполнители: организации Минсельхоза СССР.

2.4 Токсикологическая характеристика препарата.

2.4.1. Определение параметров токсичности в острых опытах на лабораторных животных.

2.4.2. Оценка гонадотропного, аллергенного, эмбриотоксического, тератогенного действия препарата, его кумулятивных свойств.

2.4.3 Исследование возможных канцерогенного и мутагенного действий.

Исполнители: организации Минздрава СССР.

2.5. Исследование качества мяса и субпродуктов, полученных от животных в условиях применения стимулятора роста.

2.5.1 Химический состав мяса.

2.5.1.1 Содержание белков, жиров и углеводов.

2.5.1.2 Аминокислотный состав мяса.

2.5.1.3 Содержание воды (общей, внутриклеточной).

2.5.1.4 Содержание минеральных веществ.

2.5.2 Биологическая и пищевая ценность продукта.

2.5.3 Технологические показатели качества мяса.

Исполнители: организации Минсельхоза СССР.

2.6. Гигиеническая оценка продуктов, полученных в условиях применения стимуляторов роста.

2.6.1. Исследование остаточных количеств стимулятора роста в продуктах животноводства (с применением химического метода).

2.6.2. Химический анализ высокоактивных или токсических веществ, образование или накопление которых в тканях сельскохозяйственных животных может быть связано с введением анаболического препарата.

2.6.3. Гигиенические исследования продуктов животноводства в условиях субхронического и хронического опытов.

Исполнители: организации Минздрава СССР.

2.7. Производственные испытания предлагаемого способа стимуляции роста сельскохозяйственных животных.

2.7.1. Представление в Минсельхоз СССР материалов по результатам завершенных исследований по п. п. 2.1 - 2.6, научно-технической документации (НТД), технологического регламента на опытное производство препарата, программ проведения производственных испытаний.

Исполнители: организации Министерств-разработчиков — Минсельхоза СССР, Минздрава СССР.

2.7.2. Рассмотрение представленных материалов, утверждение программ проведения производственных испытаний, временного наставления на применение стимулятора и способа стимуляции, согласование технологических условий.

Исполнители: Минсельхоз СССР и Минздрав СССР.

2.7.3. Согласование с Минсельхозом СССР и Минздравом СССР НТД на опытно-промышленную партию стимулятора откорма животных.

Исполнители: организации-разработчики.

2.8. Проведение предварительных (ведомственных) и государственных (приемочных) испытаний стимулятора роста и способа стимуляции. Выдача разрешения на поставку препарата на массовое производство.

2.8.1 Проведение ведомственных испытаний.

Исполнители: Минсельхоз СССР.

2.8.2 Проведение государственных (приемочных) испытаний.

Исполнители: Комиссия Минсельхоза СССР и Минздрава СССР.

2.8.3. Разработка и утверждение регламента по применению стимулятора роста для сельскохозяйственных животных и птицы.

Исполнители: Минсельхоз СССР, Минздрав СССР.

3. Общие токсиколого-гигиенические требования

Общие токсиколого-гигиенические требования при проведении ветеринарно-токсикологических, медико-биологических исследований стимуляторов роста и гигиенической оценки продуктов животноводства включают неспецифические показатели, единые для различных классов соединений химического и биологического синтеза, используемых в животноводстве в качестве стимуляторов роста, консервантов, кормовых добавок. Эти общепринятые показатели состояния различных видов обмена, тератогенного, эмбриотоксического, мутагенного действия и возможного канцерогенного влияния изложены в Инструкции Минздрава СССР (9).

Ветеринарно-токсикологические и медико-биологические исследования следует проводить с препаратом, полученным по окончательно отработанной технологии, которая будет использована при его синтезе в производственных условиях. Ветеринарно-токсикологические исследования в соответствии с международной практикой проводят не только на сельскохозяйственных, но и на лабораторных животных.

В субхроническом опыте, продолжительностью 4 месяца, изучаемый препарат вводят крысам в количествах, рекомендованных для стимуляции роста сельскохозяйственных животных, а также в 10 и 100 раз превышающие таковые (в пересчете на живую массу). В результате субхронического эксперимента определяют состояние обменных процессов, зависимых от введенного препарата. Полученные результаты используют для более детальных исследований обменных процессов в условиях хронического опыта.

Хронический опыт на крысах проводят в течение 2 лет; биоматериал от отдельных групп животных для периодических исследований получают через 1, 3, 6, 12, 18, 24 месяца.

Опыт на 3-х поколениях лабораторных животных позволяет выявить влияние стимуляторов роста на генеративную функцию (эмбриотоксическое, тератогенное, гонадотоксическое действие и др. показатели). Продолжительность опыта на каждом поколении — 4 месяца; в конце 4-месячного периода получают потомство для нового поколения.

Гигиеническая оценка продуктов животноводства, полученных при использовании препаратов анаболического действия, на первых этапах включает исследование их органолептических свойств, качества, пищевой и биологической ценности и химического состава. В дальнейшем проводят определение остаточных количеств препарата в мясе и субпродуктах и гигиенические исследования продуктов животноводства в условиях субхронических и хронического опытов на экспериментальных животных (крысах).

Продолжительность хронического опыта по скармливанию мяса экспериментальным животным составляет 18 месяцев. Для проведения исследований пробы биологических жидкостей и тканей получают от отдельных групп крыс через 1, 3, 6, 9, 12 и 18 месяцев.

В хроническом двухлетнем эксперименте, завершающем ветеринарно-токсикологические исследования, и хроническом 18-месячном опыте по гигиенической оценке продуктов животноводства, полученных в условиях применения стимулятора роста, необходимо исследовать специфические показатели (по п. 4) и неспецифические тесты (9).

В соответствии с международной практикой (10, 11) стимуляторы роста могут быть применены только на сельскохозяйственных животных, предназначенных для откорма на мясо; основным способом введения стимулятора, обеспечивающим строго дозированное его поступление в организм сельскохозяйственных животных, является подкожная имплантация таблетированных или других форм препарата (10, 11).

4. Специфические показатели ветеринарно-токсикологических, медико-биологических исследований стимуляторов роста и гигиенической оценки продуктов животноводства

Рекомендуемые для комплексной оценки различных групп стимуляторов роста необходимые (обязательные) специфические показатели приведены в таблице 1, дополнительные (желательные) тесты в таблице 2.

Таблица 1

РАЗЛИЧНЫХ ГРУПП СТИМУЛЯТОРОВ РОСТА С.-Х. ЖИВОТНЫХ

Группы стимуляторов роста с.-х. животных	Химический анализ содержания природных гормонов и анаболических препаратов в продуктах животноводства	Биохимические и иммунологические показатели при исследовании биологических жидкостей (преимущественно сыворотки или плазмы крови)	Биохимические показатели при исследовании органов-мишеней	Гистохимические, морфометрические и электронмикроскопические исследования органов-мишеней
1	2	3	4	5
Стероидные	Андрогенные	Тестостерон, андростендион,	Семенники:	Семенники,
соединения андростанового ряда	гормоны (тестостерон и др.); остаточные количества анаболического препарата	5 альфа-дигидротестостерон (или суммарно с тестостероном), эстрадиол-17 бета, прогестерон, 11-оксикортикостероиды, лютеинизирующий гормон	тестостерон, андростендион. Яичники: эстрадиол-17 бета, прогестерон	яичники, гипофиз
Стероидные	Прогестерон;	Прогестерон,	Надпочечники:	Надпочечники,
соединения прегнанового ряда	остаточные количества анаболического препарата	17 альфа-оксипрогестерон, эстрадиол-17 бета, эстрон, тестостерон, андростендион, альдостерон, 11-оксикортикостероиды	11-оксикортикостероиды. Яичники: эстрадиол-17 бета, прогестерон. Семенники: тестостерон, андростендион	яичники, семенники
Пептиднобелковые препараты,	В связи с лабильностью пептидно-белковых	Пролактин, соматотропин, эстрадиол-17 бета, инсулин, прогестерон, тестостерон,	Гипофиз: пролактин, соматотропин.	Гипофиз, молочные железы, яичники
действующие через соматотропиновую и пролактиновую системы	препаратов нет необходимости в исследовании их остаточных количеств в продуктах животноводства	11-оксикортикостероиды	Яичники: эстрадиол-17 бета, прогестерон
Простагландины	Остаточные	Тестостерон (или суммарно с	Семенники:	Семенники,
и их синтетические аналоги	количества препарата	5 альфа-дигидротестостероном), эстрадиол-17 бета, прогестерон, 11-оксикортикостероиды, альдостерон, ренин, окситоцин	тестостерон, андростендион. Яичники: прогестерон, эстрадиол-17 бета. Надпочечники: 11-оксикортикостероиды	яичники, гипофиз
Биологически активные вещества, обладающие анаболическим действием	Остаточные количества анаболического препарата	Основные показатели функционального состояния анаболических гормональных регуляторных систем и обменных процессов, изменяющихся при воздействии стимулятора роста	Основные биохимические показатели функционального состояния органовмишеней	Основные органымишени

Таблица 2

РАЗЛИЧНЫХ ГРУПП СТИМУЛЯТОРОВ РОСТА С.-Х. ЖИВОТНЫХ

Группы стимуляторов роста	Химический анализ остаточных количеств препарата в продуктах животноводства	Биохимические и иммунологические показатели при исследовании биологических жидкостей (в основном сыворотки или плазмы крови)	Биохимические показатели при исследовании органовмишеней	Морфометрические и электронмикроскопические исследования
1	2	3	4	5
Стероидные	Биологически	Эстрон, эстриол, тироксин,	Семенники:	Простата,
соединения андростанового ряда	активные метаболиты анаболического препарата	трийодтиронин, фолликулостимулирующий гормон, люлиберин	17 бета-оксистероиддегидрогеназа-17- кеторедуктаза микросом. Надпочечники: 11 бета-гидроксилаза	надпочечники
Стероидные	Биологически	Лютеинизирующий,	Надпочечники:	Гипофиз,
соединения прегнанового ряда	активные метаболиты	фолликулостимулирующий гормоны, пролактин, люлиберин	11 бета-гидроксилаза митохондрий. Семенники: 17 бета-оксистероиддегидрогеназа-17- кеторедуктаза	молочные, вилочковая железы
Пептиднобелковые препараты, действующие через соматотропиновую и пролактиновую системы	-	Соматомедины, соматостатин, тироксин, трийодтиронин, альдостерон	Семенники: тестостерон, андростендион	Поджелудочная железа, семенники
Простагландины	Стабильные	Эстрон, эстриол, тироксин,	Семенники:	Надпочеч-
и их синтетические аналоги	метаболиты простагландинов и их синтетических аналогов	трийодтиронин, андростендион, 17 альфаоксипрогестерон, лютеинизирующий, фолликулостимулирующий, соматотропный гормоны, пролактин	17 бета-оксистероиддегидрогеназа-17- кеторедуктаза. Надпочечники: 11 бета-гидроксилаза митохондрий	ники, щитовидная железа
Биологически активные вещества, обладающие анаболическим действием	Биологически активные метаболиты анаболического препарата	Дополнительные показатели функционального состояния тех анаболических гормональных регуляторных систем, через которые реализуется ростстимулирующее действие	Дополнительные биохимические показатели функционального состояния органовмишеней	Органымишени

Изложенные специфические критерии применимы к гормональным (стероидам андростанового, прегнанового ряда и др.), гормоноподобным (простагландины) и негормональным стимуляторам роста (пептидные препараты). Следует отметить, что большая часть известных негормональных стимуляторов роста реализует свое действие через различные анаболические гормональные регуляторные системы; при оценке препаратов этой группы также следует использовать приведенные в таблицах 1 и 2 показатели функционального состояния различных эндокринных желез.

Необходимые показатели включают определение, прежде всего, тех эндогенных гормонов, уровень которых в биологических жидкостях и органах-мишенях может быть изменен в результате прямого влияния анаболических препаратов на их синтез, секрецию, связывание с рецепторами и транспорт.

К числу дополнительных тестов отнесены критерии оценки систем организма, которые могут подвергаться вторичному воздействию. Дополнительные тесты в ряде случаев рассчитаны на применение сложных, трудоемких методов, отработка которых возможна только в хорошо оборудованных специализированных лабораториях.

Комплекс специфических показателей для отдельных групп стимуляторов роста основан на гормон-рецепторных взаимоотношениях в органах-мишенях, в которых происходит избирательное накопление анаболических препаратов и где они в основном осуществляют присущее им влияние. Природные и синтетические стероиды, а также низкомолекулярные вещества других групп свободно проникают через клеточную мембрану в цитоплазму, где они связываются с соответствующими белковыми рецепторами, специфичными для каждого вида соединений: высокомолекулярные вещества, не проникая в клетку, взаимодействуют с рецепторами клеточных мембран.

При изучении синтетических препаратов с гормональной активностью, относящихся к новым ранее не известным классам анаболических веществ (особенно к низкомолекулярным циклическим соединениями), — должны быть детально исследованы их андрогенная, антиандрогенная, эстрогенная, антиэстрогенная, гестогенная, антигестогенная, глюкокортикоидная активности, а также гонадотропинактивирующее и гонадотропинингибирующее действие.

Изложенный комплекс специфических показателей основан на представлениях о механизме действия различных групп препаратов и рассчитан на использование при проведении ветеринарно-токсикологических медико-биологических исследований стимуляторов роста животных и гигиенической оценки продуктов животноводства.

Инструкция предназначена для организаций Минздрава СССР и Минсельхоза СССР.

Литература

1. Адигамов Л.Ф., Методические рекомендации по определению химическим методом остаточных количеств эстрадиола-17 бета в продуктах животноводства, № 3208-85 от 17.01.85.

2. Селиванова Л.В., Майорова Л.Н. с соавт., Методические указания по определению остаточных количеств антибиотиков в продуктах животноводства, № 3049-84 от 29.06.84.

3. Нестерин М.Ф., Адигамов Л.Ф., Черников М.П., Методические рекомендации по определению химическим методом остаточных количеств диэтилстильбэстрола в продуктах животноводства, № 2944-83 от 09.12.83.

---