ГОСТ Р 54055-2010. Национальный стандарт Российской Федерации. Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы. Метод определения жирно-кислотного состава

(утв. и введен в действие Приказом Росстандарта от 30.11.2010 № 673-ст)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["ГОСТ Р 54055-2010"]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/gost-r-54055-2010" "ГОСТ Р 54055-2010. Национальный стандарт Российской Федерации. Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы. Метод определения жирно-кислотного состава (утв. и введе"
  n1["ГОСТ 32150-2013"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/gost-32150-2013" "ГОСТ 32150-2013. Межгосударственный стандарт. Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы. Метод определения жирно-кислотного состава (введен в действие Приказом Ро"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

от 30 ноября 2010 г. № 673-ст

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ ПЕРЕРАБОТКИ ЯИЦ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОЙ ПТИЦЫ

МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИРНО-КИСЛОТНОГО СОСТАВА

Food eggs and foodstuffs of processed poultry eggs. Method for determination of fatty acid composition

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения».

Сведения о стандарте

1. Разработан Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом птицеперерабатывающей промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИПП Россельхозакадемии).

2. Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 116 «Продукты переработки птицы, яиц и сублимационной сушки».

3. Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 ноября 2010 г. № 673-ст.

4. Введен впервые.

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет.

1. Область применения

Настоящий стандарт распространяется на пищевые яйца и пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы (жидкие, концентрированные и сухие — яичная масса, яичный меланж, яичный желток) (далее — продукты) и устанавливает газохроматографический метод определения жирно-кислотного состава — массовой доли индивидуальных жирных кислот.

2. Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ Р 51483-99 Масла растительные и жиры животные. Определение методом газовой хроматографии массовой доли метиловых эфиров индивидуальных жирных кислот к их сумме

ГОСТ Р 52121-2003 Яйца куриные пищевые. Технические условия

ГОСТ Р 52943-2008 Птицеперерабатывающая промышленность. Продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы пищевые. Термины и определения

ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ Р 53404-2009 Яйца пищевые (индюшиные, цесариные, перепелиные, страусиновые). Технические условия

ГОСТ Р 53669-2009 Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы. Методы отбора проб и органолептического анализа

ГОСТ Р 53746-2009 Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы. Методы физико-химического анализа

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.010-76 Система стандартов безопасности труда. Взрывобезопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3022-80 Водород технический. Технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 3956-76 Силикагель технический. Технические условия

ГОСТ 4166-76 Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия

ГОСТ 5829-71 Реактивы. Ацетил хлористый. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 6995-77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия

ГОСТ 9293-74 Азот газообразный и жидкий. Технические условия

ГОСТ 11109-90 Марля бытовая хлопчатобумажная. Общие технические условия

ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 17433-80 Промышленная чистота. Сжатый воздух. Классы загрязненности

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26703-93 Хроматографы аналитические газовые. Общие технические условия и методы испытаний

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание. При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3. Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 52943.

4. Метрологические характеристики метода

4.1. Измерение массовой доли индивидуальных жирных кислот по отношению к сумме всех жирных кислот (метод внутренней нормализации)

Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности 0,95 приведены в таблице 1.

4.2. Измерение массовой доли индивидуальных жирных кислот в липидах из экстрагированных продуктов (метод внутреннего стандарта)

Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности 0,95 приведены в таблице 2.

5. Сущность метода

Сущность метода состоит в экстракции липидов из продуктов, получении метиловых эфиров жирных кислот переэтерификацией экстрагированных липидов с помощью кислотного катализатора (хлористый водород) в присутствии избытка метилового спирта, разделении смеси полученных метиловых эфиров методом капиллярной газовой хроматографии и измерении площадей хроматографических пиков.

Массовую долю индивидуальной жирной кислоты относительно суммы масс всех жирных кислот определяют отношением площади пика метилового эфира кислоты к сумме площадей идентифицированных хроматографических пиков всех метиловых эфиров жирных кислот (метод внутренней нормализации), массовую долю содержания индивидуальной жирной кислоты в липидах яичных продуктов определяют отношением площади пика метилового эфира кислоты к площади пика внутреннего стандарта (метод внутреннего стандарта).

6. Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы

Газовый хроматограф с пламенно-ионизационным детектором (ПИД), пределом детектирования не более 5 \cdot 10^{- 12}\text{г}/c по ГОСТ 26703, оснащенный инжектором для капиллярных колонок с делением потока и управляющим вычислительным комплексом с программным обеспечением, позволяющим проводить разметку и определение площадей хроматографических пиков.

Капиллярная хроматографическая колонка с неподвижной фазой из сшитого полиэтиленгликоля длиной 30 м, с внутренним диаметром 0,32 мм и толщиной фазы 0,25 мкм или аналогичная колонка, обеспечивающая разделение пиков и продолжительность хроматографирования в соответствии с рисунком 1. Условия хроматографирования — в соответствии с 7.4.

Микрошприцы МШ-1 вместимостью 1 мм3 или аналогичные.

Ротационный испаритель типа ИР-2.

Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228 с пределом допускаемой погрешности взвешивания не более +/- 0,0002 г.

Плитка электрическая по ГОСТ 14919.

Баня водяная.

Термостат суховоздушный типа ТС-80М или жидкостный термостат, обеспечивающий поддержание заданной температуры при (60 +/- 1) °C.

Термометр ртутный с диапазоном измерения температуры 0 °C — 100 °C и ценой деления шкалы 1 °C по ГОСТ 28498.

Часы.

Сушильный шкаф.

Гомогенизатор или миксер.

Автоклав с фторопластовой реакционной камерой рабочим объемом 25 — 30 см3 (например, аналитический автоклав — модель Т11 НПО «Анкон-АТ») или стеклянная виала вместимостью 25 — 35 см3 с завинчивающейся крышкой и фторопластовой прокладкой.

Колбы конические Кн-1-150-29/32 ТХС по ГОСТ 25336.

Колбы грушевидные Гр-100-14/23 ТХС по ГОСТ 25336.

Колбы мерные 2-25-1 и 2-100-1 по ГОСТ 1770.

Воронки В-36-50 ХС и В-56-80 ХС по ГОСТ 25336.

18 — C23:0 (внутренний стандарт); 19 — C22:5n3; 20 — C22:6n3

липидов куриного яйца (колонка Omegawax 320 (Supelco))

Пипетки 2-2-5, 2-2-25 или 2-2-20 по ГОСТ 29169.

Пипетки 1-1-1 (2)-1 по ГОСТ 29227.

Пробирки П-2-5-14/23ХС, П-2-25-14/23 ХС по ГОСТ 1770 или П4-5-14/23, П4-25-14/23 по ГОСТ 25336.

Стаканы В-1-50 ХС и В-1-100 ХС по ГОСТ 25336.

Холодильник XIII-1-300-29/32 по ГОСТ 25336.

Цилиндры мерные 1-10-2, 1-50-1 и 2-100-1 по ГОСТ 1770.

Ступка фарфоровая с пестиком по ГОСТ 9147.

Палочка стеклянная.

Стекловата.

Марля по ГОСТ 11109.

Воздух класса «0» по ГОСТ 17433. Допускается использовать компрессоры, обеспечивающие необходимые давление и чистоту воздуха согласно инструкции по эксплуатации хроматографа.

Азот газообразный по ГОСТ 9293, ос.ч.

Водород технический марки А по ГОСТ 3022 или электролизный водород от генератора водорода.

Гексан для хроматографии.

Ацетил хлористый (ацетилхлорид) по ГОСТ 5829, ч.д.а.

Метанол по ГОСТ 6995, х.ч.

Бутилокситолуол (2,6-ди-трет-бутил-4-метоксифенол), массовая доля основного вещества не менее 95%.

Метиловый эфир трикозановой кислоты C23:0, массовая доля основного вещества не менее 99,0%.

Раствор в гексане смеси метиловых эфиров жирных кислот (от C10 до C24) для идентификации хроматографических пиков [1], [2].

Толуол, ос.ч.

Натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166, х.ч.

Натрий хлористый по ГОСТ 4233, х.ч., водный раствор массовой долей 10%.

Силикагель марки АСКГ по ГОСТ 3956.

Кислота соляная массовой долей не менее 35% по ГОСТ 3118, ос.ч.

Эфир диэтиловый (эфир этиловый), ос.ч., безводный, содержащий менее 0,05% этилового спирта.

Эфир петролейный перегнанный с температурой кипения не более 60 °C.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также материалов и реактивов, по качеству не ниже указанных.

7. Подготовка к проведению испытаний

7.1. Приготовление смеси для получения метиловых эфиров [раствор хлористого водорода (HCl) в метаноле массовой долей 5,6%]

В высокую пробирку с пришлифованной пробкой вместимостью 25 см3 вносят с помощью пипетки 5 см3 метанола. Осторожно по каплям добавляют с помощью пипетки 0,5 см3 ацетилхлорида с соблюдением мер предосторожности по 13.3 (при добавлении ацетилхлорида происходит бурная реакция с образованием брызг, поэтому необходимо использовать высокую пробирку). Перемешивают, закрывают пробкой и выдерживают перед использованием в течение 10 мин.

Смесь готовят непосредственно перед каждым испытанием.

7.2. Приготовление стандартного раствора метилового эфира трикозановой кислоты C23:0 массовой концентрацией 5 мг/см3 (метод внутреннего стандарта)

В стакане вместимостью 50 см3 взвешивают 250 мг метилового эфира трикозановой кислоты с записью результата взвешивания в миллиграммах до одного десятичного знака, добавляют 25 — 30 мг бутилокситолуола (антиокислитель) и растворяют метиловый эфир трикозановой кислоты и бутилокситолуол в 30 см3 толуола (кристаллы метилового эфира трикозановой кислоты должны полностью раствориться, при необходимости стаканчик с содержимым можно подогреть до температуры 30 °C — 40 °C). Содержимое стакана количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3. Стакан три раза ополаскивают толуолом порциями по 3 см3, которые добавляют в мерную колбу. Колбу выдерживают до достижения температуры раствора (20 +/- 1) °C, доводят объем толуолом до метки, закрывают пробкой и перемешивают.

Срок хранения стандартного раствора — 1 мес в холодильнике при температуре (6 +/- 2) °C.

Перед использованием колбу выдерживают до достижения температуры раствора (20 +/- 1) °C.

7.3 Приготовление раствора бутилокситолуола в толуоле (метод внутренней нормализации)

В стакан вместимостью 100 см3 помещают 25 — 35 мг бутилокситолуола, добавляют с помощью мерного цилиндра 50 см3 толуола и перемешивают до полного растворения бутилокситолуола. Раствор хранят при комнатной температуре в плотно закрытой стеклянной емкости не более 5 мес.

7.4 Приготовление воронки для фильтрования раствора метиловых эфиров жирных кислот

В нижнюю часть носика воронки диаметром 36 мм и высотой 50 мм по ГОСТ Р 25336 вставляют тампон из кусочка обезжиренной стекловаты, насыпают силикагель АСКГ до образования слоя высотой примерно 15 — 20 мм, сверху насыпают слой безводного сернокислого натрия так, чтобы он полностью заполнил носик воронки и нижнюю часть сужения воронки слоем высотой примерно 5 мм.

7.5 Подготовка газового хроматографа и капиллярной колонки

Подготовку хроматографа и капиллярной колонки (кондиционирование колонки) проводят в соответствии с инструкциями по эксплуатации. При работе с капиллярной колонкой Omegawax 320 устанавливают следующий режим работы хроматографа:

• температура детектора 260 °C;
• температура инжектора 250 °C;
• температура термостата колонки 200 °C;
• давление газа-носителя (азота) в испарителе 85 кПа;
• деление потока газа-носителя в испарителе 1:30;
• расходы водорода, воздуха и азота (поддув в детектор) устанавливают в соответствии с инструкцией к эксплуатации хроматографа или подбирают путем хроматографирования тестовых смесей метиловых эфиров для обеспечения максимальной чувствительности пламенно-ионизационного детектора.

Режимы хроматографа при работе с другими типами капиллярных колонок подбирают так, чтобы качество разделения и время регистрации хроматограмм было не хуже показанной на рисунке 1 хроматограммы.

Не реже одного раза в месяц, а также при замене реактивов проводят хроматографирование холостой пробы, приготовленной по 7.6, но без добавления липидов. На хроматограмме холостой пробы не должно быть посторонних пиков, кроме пиков бутилокситолуола и метилового эфира трикозановой кислоты (допускаются посторонние пики непосредственно рядом с пиком растворителя).

7.6 Отбор и подготовка проб

7.6.1. Отбор проб куриных яиц — по ГОСТ Р 52121, индюшиных, цесариных, перепелиных и страусиных — по ГОСТ Р 53404, яичных продуктов — по ГОСТ Р 53669.

7.6.2 Подготовка проб к испытанию

7.6.2.1 Яйца

В стакан вместимостью 500 см3 осторожно разбивают пять — семь куриных или индюшиных яиц или 10 — 12 перепелиных или цесариных яиц, или два — три страусиных яйца, не допуская попадания в стакан частиц скорлупы. Стеклянной палочкой смешивают желтки с белками и полученную массу гомогенизируют с помощью гомогенизатора или миксера при средней скорости, не допуская вспенивания. Для удаления пленок и мембран гомогенат фильтруют через два слоя марли.

7.6.2.2 Яичные продукты

Подготовку лабораторных проб яичных продуктов проводят по ГОСТ Р 53669.

Подготовленные пробы хранят до окончания испытания в плотно закрытой стеклянной емкости в холодильнике при температуре от 4 °C до 8 °C.

7.6.3 Кислотный гидролиз пробы

Навеску подготовленной по 7.6.2 пробы массой:

• 5 г жидкого меланжа или перемешанного яйца (яичной массы);
• 3 г жидкого желтка;
• 2 г яичного сухого меланжа или сухого желтка взвешивают в конической колбе вместимостью 100 см3 с записью результата взвешивания в граммах до третьего десятичного знака и медленно добавляют с постоянным энергичным встряхиванием колбы 10 см3 неразбавленной (жидкие яичные продукты) или разбавленной (сухие яичные продукты) соляной кислоты (смешивают по объему четыре части концентрированной соляной кислоты и одну часть дистиллированной воды), смывая все частицы яичного продукта, приставшие к стенкам колбы, подсоединяют холодильник и помещают в водяную баню, нагретую до температуры (70 +/- 2) °C, доводят до кипения и продолжают кипятить 20 мин, встряхивая колбу через каждые 5 мин. В процессе гидролиза через верхнее отверстие холодильника подают внутрь колбы небольшой поток азота. После окончания гидролиза колбу снимают с водяной бани, добавляют 10 см3 дистиллированной воды и охлаждают до комнатной температуры.

Параллельно из подготовленной по 7.6.2 пробы отбирают навески для определения массовой доли жира по ГОСТ Р 53746.

7.6.4 Экстракция липидов

Содержимое колбы переносят в цилиндр вместимостью 100 см3, смывая остатки пробы с колбы в цилиндр с помощью 10 см3 дистиллированной воды. В колбу добавляют 25 см3 диэтилового эфира, встряхивают, промывая стенки колбы, и добавляют в цилиндр. Цилиндр с гидролизованной пробой закрывают стеклянной пробкой и энергично встряхивают с переворачиванием цилиндра в течение примерно 1 мин, периодически открывая пробку для сброса давления. Затем осторожно вынимают пробку и добавляют в цилиндр 25 см3 петролейного эфира, ополаскивая эфиром пробку и внутреннюю поверхность шлифа. Цилиндр закрывают пробкой и встряхивают с переворачиванием в течение примерно 30 с. Цилиндр оставляют в покое до полного разделения на водную и прозрачную эфирную фазы с четкой границей между ними. Осторожно вынимают пробку, ополаскивают ее и внутреннюю поверхность шлифа с помощью примерно 5 см3 петролейного эфира так, чтобы он стекал в цилиндр. Отбирают как можно больше верхнего эфирного слоя с помощью пипетки вместимостью 20 или 25 см3 и переносят через воронку с безводным сернокислым натрием в грушевидную колбу вместимостью 100 см3, в которую предварительно добавляют несколько кристаллов бутилокситолуола (используют воронку диаметром 56 мм и длиной 80 мм, в нижнюю часть носика которой помещают тампон из обезжиренной стекловаты и насыпают безводный сернокислый натрий слоем высотой примерно 30 мм).

Растворитель из грушевидной колбы отгоняют под вакуумом на ротационном испарителе (перед сбросом давления в кран впуска воздуха подают поток азота) и затем продувают потоком азота до полного исчезновения запаха растворителя. Экстрагированные липиды хранят в плотно закрытой колбе в холодильнике при температуре (6 +/- 2) °C не более 24 ч. При необходимости более длительного хранения колбу с экстрагированным жиром хранят в морозильной камере при температуре не выше минус 12 °C (срок хранения — не более одной недели).

На всех этапах подготовки пробы и экстракции жира необходимо предохранять пробу от прямого попадания солнечных и ультрафиолетовых лучей.

7.7 Получение метиловых эфиров жирных кислот (метод внутреннего стандарта)

7.7.1. С помощью стеклянной палочки отбирают из колбы экстрагированные липиды (7.6.4), помещают их в предварительно взвешенную фторопластовую реакционную камеру автоклава или стеклянную виалу и взвешивают с записью результата взвешивания в миллиграммах до первого десятичного знака (масса жира должна быть в пределах 40 — 50 мг). В реакционную камеру автоклава или виалу с навеской липидов вносят 1 см3 раствора метилового эфира трикозановой кислоты и бутилокситолуола в толуоле (см. 7.2). Перемешивают для растворения липидов и добавляют смесь, приготовленную по 7.1. Реакционную камеру помещают в автоклав и закрывают крышкой (виалу плотно закрывают завинчивающейся крышкой с фторопластовой прокладкой). Перед закрыванием емкостей их внутренний объем продувают азотом. Автоклав (виалу) с пробой и смесью по 7.1 помещают в предварительно нагретый до (60 +/- 1) °C суховоздушный или жидкостной термостат и выдерживают при этой температуре в течение (80 +/- 2) мин, периодически перемешивая содержимое с интервалом примерно 15 мин.

7.7.2. После окончания термостатирования содержимое реакционной камеры или виалы переносят в пробирку вместимостью 25 см3 [можно использовать пробирку, в которой готовилась реакционная смесь (см. 7.1)]. В реакционную камеру или виалу вносят 3 см3 гексана, закрывают крышкой, энергично встряхивают и смыв добавляют в пробирку. В пробирку добавляют 7 см3 водного раствора хлорида натрия массовой долей 10%, закрывают пробкой, энергично встряхивают с переворачиванием в течение 10 с и оставляют до полного разделения фаз. Верхнюю органическую фазу осторожно отбирают с помощью пипетки вместимостью 5 см3 и пропускают через воронку с силикагелем и сернокислым натрием (см. 7.3), предварительно промытой 3 — 4 см3 гексана (слой силикагеля в воронке должен все время быть смоченным растворителем), собирая фильтрат в пробирку вместимостью 5 см3. После стекания раствора метиловых эфиров из воронки в нее добавляют 2 см3 гексана и фильтрат собирают в эту же пробирку. Окончательный объем раствора метиловых эфиров жирных кислот должен быть примерно 5 — 6 см3.

Срок хранения полученного раствора метиловых эфиров жирных кислот — 48 ч в холодильнике при температуре (6 +/- 2) °C.

7.8 Получение метиловых эфиров жирных кислот (метод внутренней нормализации)

Метиловые эфиры жирных кислот получают по 7.7 со следующим изменением в 7.7.1: в реакционную камеру или виалу с навеской липидов вместо раствора метилового эфира трикозановой кислоты и бутилокситолуола в толуоле вносят 1 см3 раствора бутилокситолуола в толуоле, приготовленного по 7.3.

8. Проведение измерений

8.1. В испаритель хроматографа вводят 1 мм3 раствора метиловых эфиров жирных кислот, приготовленных по 7.7 (метод внутреннего стандарта) или по 7.8 (метод внутренней нормализации). Хроматографирование проводят дважды. На полученной хроматограмме размечают все пики (кроме пика бутилокситолуола) и с помощью программного обеспечения определяют значения площадей пиков.

9. Обработка результатов

9.1 Идентификация хроматографических пиков

Идентификацию пиков проводят по времени удерживания хроматографических пиков по ГОСТ Р 51483 или путем сравнения хроматограммы пробы с хроматограммой тестовой смеси метиловых эфиров жирных кислот. На рисунке 1 показана хроматограмма метиловых эфиров жирных кислот, типичная для липидов куриных яиц.

Для интерпретации пиков можно воспользоваться Приложением Б, в котором приведен характерный для куриных яиц перечень жирных кислот, порядок их выхода на хроматограмме (колонка Omega-wax320) и диапазон значений площадей пиков в процентах по отношению к сумме площадей всех пиков метиловых эфиров жирных кислот.

Сумма относительных площадей неидентифицированных пиков не должна превышать 0,5%. Соответствующее значение должно быть указано в протоколе испытаний.

9.2. При определении жирно-кислотного состава методом внутренней нормализации массовую долю индивидуальной жирной кислоты X_{k} , %, по отношению к сумме масс всех жирных кислот вычисляют по формуле

где S_{k} — площадь хроматографического пика метилового эфира определяемой жирной кислоты;

\sum_{i = 1}^{N} (S_{i} \cdot K_{i}) — сумма площадей всех идентифицированных хроматографических пиков метиловых эфиров жирных кислот с учетом соответствующих поправочных коэффициентов K_{i} (см. Приложение А);

K_{k} — поправочные коэффициенты, учитывающие различия в чувствительности детектора ПИД к метиловым эфирам разных жирных кислот и отличия молекулярных масс жирных кислот и их метиловых эфиров (коэффициенты K_{k} приведены в Приложении А);

N — общее количество определяемых жирных кислот.

В качестве результата единичного измерения принимают среднеарифметические значения X_{k} , полученные для двух хроматографирований одной и той же смеси метиловых эфиров жирных кислот.

9.3. Массовую долю жирных кислот Y_{k} , %, в экстрагированных из продуктов липидах вычисляют по методу внутреннего стандарта по формуле

где S_{k} и K_{k} — соответственно абсолютные значения площадей пиков и поправочных коэффициентов для определяемых жирных кислот;

S_{\text{вн}.\text{ст}.} и K_{\text{вн}.\text{ст}.} — соответственно абсолютные значения площадей пиков и поправочных коэффициентов для внутреннего стандарта (метиловый эфир трикозановой кислоты C23:0);

C — массовая концентрация метилового эфира трикозановой кислоты в стандартном растворе в толуоле, мг/см3;

V — объем стандартного раствора метилового эфира трикозановой кислоты, вносимого в реакционную камеру автоклава или виалу, см3;

0,962 — отношение молекулярных масс трикозановой кислоты и ее метилового эфира;

m — масса навески экстрагированных липидов, использованной для получения метиловых эфиров жирных кислот, мг.

В качестве результата единичного измерения принимают среднеарифметические значения Y_{k} , полученные для двух хроматографирований одной и той же смеси метиловых эфиров жирных кислот.

9.4. За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение \overline{X_{k}} (метод внутренней нормализации) или \overline{Y_{k}} (метод внутреннего стандарта) результатов двух определений, выполненных в условиях повторяемости по ГОСТ Р ИСО 5725-1 для двух идентичных проб яиц или яичных продуктов, если выполняется условие приемлемости

где Z_{1} , Z_{2} — результаты единичных определений для двух идентичных проб массовых долей индивидуальных жирных кислот \overline{X_{k}} (см. 9.2) или \overline{Y_{k}} (см. 9.3), %;

r — предел повторяемости при P = 0,95, % (таблицы 1 и 2).

9.5. Расхождение между результатами двух независимых определений, полученных при использовании одного и того же метода, на одной и той же пробе, в разных лабораториях, разными операторами, с использованием различного оборудования, должно удовлетворять следующему условию приемлемости:

где \overline{Z_{1}} , \overline{Z_{2}} — среднеарифметические значения результатов определения массовых долей индивидуальных жирных кислот \overline{X_{k}} (метод внутренней нормализации) или \overline{Y_{k}} (метод внутреннего стандарта), полученных в двух разных лабораториях, %;

CD_{0,95} — значение критической разности при P = 0,95 и двух параллельных определений в каждой лаборатории, % (таблицы 1 и 2).

10. Оформление результатов

10.1 Результат измерений представляют в виде

где \overline{Z_{k}} — среднеарифметические значения результатов определения массовых долей индивидуальных жирных кислот \overline{X_{k}} или \overline{Y_{k}} , %, признанных приемлемыми по 9.4;

\pm \Delta — границы абсолютной погрешности, %, при P = 0,95 (таблицы 1 и 2).

Результат измерения округляют до первого десятичного знака.

10.2. Массовую долю индивидуальных жирных кислот V_{k} в пересчете на исходный продукт, мг/100 г продукта, вычисляют по формуле

где \overline{Y_{k}} — среднеарифметические значения результатов определений по методу внутреннего стандарта массовых долей индивидуальных жирных кислот в экстрагированных липидах (см. 9.3), %;

F — массовая доля жира в подготовленной лабораторной пробе продукта (см. 7.6.2), измеренная по ГОСТ Р 53746, %.

Результат вычислений округляют до целого числа.

11. Требования к условиям измерений

При выполнении измерений температура и относительная влажность в лабораторном помещении, напряжение и частота переменного тока питающей электросети не должны выходить за предельные значения, приведенные в технических инструкциях на средства измерений и оборудование, указанные в разделе 6.

12. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений, обработке и оформлению результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или среднее специальное образование и опыт работы в химической лаборатории, изучившие инструкцию по эксплуатации газового хроматографа и прошедшие соответствующий инструктаж, освоившие газохроматографический метод определения жирно-кислотного состава в процессе обучения и получившие удовлетворительные результаты при оперативном контроле процедуры измерения.

13. Требования безопасности

13.1. При подготовке и проведении испытаний необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами и горючими газами по ГОСТ 12.1.007, правила пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и правила взрывобезопасности по ГОСТ 12.1.010. При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по ГОСТ 12.1.019.

13.2. При работе со сжатыми газами следует соблюдать правила безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением [3]. Запрещается работать с негерметичными газовыми линиями хроматографа.

13.3. Помещение, в котором проводят измерения, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу с концентрированной соляной кислотой, метанолом, диэтиловым и петролейным эфиром необходимо проводить в вытяжном шкафу.

Ацетилхлорид вызывает раздражение кожи и слизистых оболочек, поражает дыхательные пути, поэтому работу с ацетилхлоридом следует проводить только в вытяжном шкафу с применением индивидуальных средств защиты.

А.1. Значения поправочных коэффициентов K_{i} для вычисления массовых долей жирных кислот приведены в таблице А.1.

Б.1. Названия и обозначения жирных кислот, а также диапазон значений относительных площадей хроматографических пиков к сумме площадей всех пиков, характерных для липидов куриных яиц (жирные кислоты перечисляются в порядке выхода соответствующих хроматографических пиков при использовании капиллярной колонки Omegawax 320), приведены в таблице Б.1.

Библиография